專利名稱：由多糖和hbp構(gòu)成的復(fù)合物的制作方法
由多糖和HBP構(gòu)成的復(fù)合物本發(fā)明涉及治療性蛋白質(zhì)的制劑，和更特別地涉及與肝素相結(jié)合的蛋白質(zhì)(稱為肝素結(jié)合蛋白(HBP))的制劑，所述肝素結(jié)合蛋白在體內(nèi)以復(fù)合物的形式與肝素相聯(lián)合，這允許其穩(wěn)定化和其體內(nèi)活性的維持。肝素是攜帶羧酸根和硫酸根官能團(tuán)的天然多糖，其總電荷為陰離子的。但是，該多糖因其抗凝活性而知名，因?yàn)樗鼌⑴c凝血酶和抗凝血酶III之間的復(fù)合物的形成，并且該抗凝活性與治療用途，例如在瘢痕形成、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)、骨重構(gòu)的治療中的治療用途不相容。這些HBP中的一些已成為藥物開發(fā)的目標(biāo)。然而，已知這些蛋白質(zhì)是在物理上(聚集)和在化學(xué)上(酶促或化學(xué)降解)不穩(wěn)定的。該不穩(wěn)定性可以在制劑中和/或在施用部位處表現(xiàn)出來(lái)。它可以引起免疫反應(yīng)或效力喪失。為了補(bǔ)償活性的喪失，采用諸如增加施用的劑量或頻率的解決辦法。這些解決辦法不是令人滿意的，尤其是由于這些蛋白質(zhì)的高價(jià)格。例如，Genentech公司開發(fā)了 VEGF制劑，其用于糖尿病性足潰瘍的瘢痕形成。進(jìn)行了第一個(gè)臨床研究，其中每?jī)商爝M(jìn)行治療施用。第二個(gè)研究以每天施用來(lái)進(jìn)行，這毫無(wú)疑問(wèn)地是為了答復(fù)對(duì)于每?jī)商爝M(jìn)行應(yīng)用而言太短的VEGF作用持續(xù)時(shí)間的問(wèn)題。此外，已證實(shí)，可能在生長(zhǎng)因子和聚合物之間形成復(fù)合物，以便使其穩(wěn)定、增加其溶解度和/或增加其活性。因此，在申請(qǐng)者的專利FR0509803中，可以證實(shí)，在以其短形式的PDGF-BB和聚合物之間的復(fù)合物的形成尤其使得能夠增加非常疏水的該蛋白質(zhì)的溶解度。然而，以其短形式的PDGF-BB與肝素的結(jié)合為PDGF-AA的1/100 (Lustig F等人， Journal of Molecular Recognition，1999，12，112-120)，因此，不可以將其認(rèn)為是屬于 HBP家族的生長(zhǎng)因子。在已知相對(duì)親水的FGF的情況下，可以證實(shí)，形成與聚合物的復(fù)合物可以有助于其細(xì)胞活性(Rouet 等人，Journal of BiomedicalMaterials research, 2006, 78A, 792-797)，但所使用的聚合物是硫酸化的，因?yàn)樗鼈兺ㄟ^(guò)硫酸芐胺進(jìn)行官能化并因此具有與藥物制劑不相容的抗凝活性。Logeart-Avramoglou D ^A^t Biomedical Pharmacology 2002,63,129-137 ^ 文章中還描述了通過(guò)芐胺和/或硫酸鹽進(jìn)行修飾的右旋糖酐。處于溶液中的這些聚合物與 TGF β 1形成復(fù)合物，如在通過(guò)凝膠電泳的相互作用測(cè)試中所顯示的。然而，非硫酸化的聚合物即使在大于2000的比率下也不表現(xiàn)出真正的相互作用。在硫酸化的聚合物的情況下，對(duì)于具有抗凝特性的高度硫酸化的聚合物，可以證明相互作用。此外，還已知，芐胺可以具有某種毒性，并且可以損害在前面提及的兩個(gè)專利中所描述的聚合物的生物相容性。治療目的的蛋白質(zhì)的蓋侖氏制劑應(yīng)當(dāng)必須滿足賦形劑的無(wú)害的要求，并且為了達(dá)到這些要求，必要的是，使用生物相容的化合物，但還限制其相對(duì)于活性成分而言的量。HBP屬于八個(gè)蛋白質(zhì)家族，它們具有非常不同的大小、生物化學(xué)特性和活性，然而它們都能夠以復(fù)合物的形式與肝素相聯(lián)合(Bernfield Μ.等人，Armu. Rev. Biochem.，1999，68,729-777)。在這些蛋白質(zhì)中，包括尤其屬于下列家族的蛋白質(zhì)-激素，-生長(zhǎng)因子?？梢詫⑦@些不同的家族定義如下“激素”意指由內(nèi)分泌系統(tǒng)產(chǎn)生的信使蛋白質(zhì)。在通過(guò)血液或淋巴液運(yùn)送遍及整個(gè)生物體或者運(yùn)送到生物體外部后，這些蛋白質(zhì)隨后遠(yuǎn)距離地起作用。在激素之中，包括生長(zhǎng)激素(hGH 人生長(zhǎng)激素)和甲狀旁腺激素(PTH)?！吧L(zhǎng)因子”意指通常在生物體中產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，其刺激細(xì)胞的增殖或其分化。在生長(zhǎng)因子之中，包括諸如下列的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 和i3 2(TGF-i3)、胰島素樣生長(zhǎng)因子2 (IGF-2)、肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子樣生長(zhǎng)因子(HB-EGF 肝素結(jié)合性EGF-樣生長(zhǎng)因子)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1至H(FGF)、角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子 β (NGF-β)、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)、胎盤生長(zhǎng)因子(PIGF).R-spondin 1至4、和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A和B(VEGF)。所描述的所有復(fù)合物均用與肝素具有結(jié)構(gòu)或生物學(xué)相似性的聚合物來(lái)制備。通過(guò)本發(fā)明所解決的問(wèn)題是，鑒定出了非常有限的生物相容性多糖家族，這些生物相容性多糖能夠與HBP形成復(fù)合物，以便尤其是，使其穩(wěn)定并增加其溶解度，而該聚合物不具有肝素的抗凝生物學(xué)活性。此外，觀察到，為了增加該多糖對(duì)于所述蛋白質(zhì)的親和力和其對(duì)于HBP的選擇性， 不需要進(jìn)一步增加聚合物的兩親性，這與在申請(qǐng)F(tuán)R0509803中所敘述的解決辦法相反。此外，為了抵消過(guò)大的疏水性，在上面所提及的申請(qǐng)中所敘述的解決辦法在于，除了疏水基團(tuán)之外，還在多糖鏈上嫁接親水基團(tuán)X或Y。這些結(jié)果是更加令人驚訝的，因?yàn)橥ㄟ^(guò)嫁接可成鹽的或成鹽的疏水基團(tuán)例如具有酸官能團(tuán)的色氨酸殘基，增加了該多糖對(duì)于該蛋白質(zhì)的親和力和對(duì)于HBP的選擇性，而不減少起始多糖的羧基官能團(tuán)的數(shù)目。通過(guò)選擇這些取代基，大大地增加了對(duì)于HBP的選擇性。因此，本發(fā)明涉及被色氨酸或色氨酸衍生物取代的多糖用于穩(wěn)定HBP的用途，其中所述色氨酸或色氨酸衍生物是可成鹽的或成鹽的。更特別地，本發(fā)明涉及所述多糖在制備穩(wěn)定的HBP的藥物制劑中的用途。本發(fā)明還涉及由多糖和HBP構(gòu)成的復(fù)合物。根據(jù)本發(fā)明的多糖由(1，6)和/或(1，4)和/或(1，3)和/或(1，2)類型的糖苷鍵構(gòu)成。它們可以是中性的，即不攜帶酸官能團(tuán)，或者是陰離子的，即攜帶酸官能團(tuán)。它們通過(guò)至少一個(gè)色氨酸或色氨酸衍生物的殘基進(jìn)行官能化，所述色氨酸或色氨酸衍生物的殘基標(biāo)注為Trp -所述色氨酸衍生物通過(guò)與酸官能團(tuán)的偶聯(lián)而嫁接或連接至所述多糖，所述酸官能團(tuán)可以是陰離子多糖的酸官能團(tuán)和/或由連接臂R所攜帶的酸官能團(tuán)，所述連接臂R通過(guò)官能團(tuán)F而與該多糖相連接，所述官能團(tuán)F由于連接臂R和該中性或陰離子多糖的-OH 官能團(tuán)之間的偶聯(lián)而產(chǎn)生，-F為酯官能團(tuán)、硫酯官能團(tuán)、酰胺官能團(tuán)、碳酸酯官能團(tuán)、氨基甲酸酯官能團(tuán)、醚官能團(tuán)、硫醚官能團(tuán)或胺官能團(tuán)，-R為包含1-18個(gè)碳的鏈，其任選地是支化的和/或不飽和的，包含一個(gè)或多個(gè)雜原子，例如0、N或/和S，并且具有至少一個(gè)酸官能團(tuán)，-Trp為L(zhǎng)-或D-色氨酸或L-或D-色氨酸衍生物的殘基，其從該色氨酸的胺和至少一個(gè)由基團(tuán)R所攜帶的酸和/或由該陰離子多糖所攜帶的酸之間的偶聯(lián)而產(chǎn)生，所述色氨酸或色氨酸衍生物是可成鹽的或成鹽的。在一個(gè)實(shí)施方案中，Trp為D構(gòu)型的色氨酸或色氨酸衍生物的殘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，Trp為L(zhǎng)構(gòu)型的色氨酸或色氨酸衍生物的殘基。所述HBP選自-激素，例如生長(zhǎng)激素(hGH:人生長(zhǎng)激素)或甲狀旁腺激素(PTH)，-生長(zhǎng)因子，例如諸如下列的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1和i3 2(TGF_i3)、胰島素樣生長(zhǎng)因子2 (IGF-2)、肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子樣生長(zhǎng)因子(HB-EGF 肝素結(jié)合性EGF-樣生長(zhǎng)因子)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1至14 (FGF)、角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子 β (NGF-β)、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)、胎盤生長(zhǎng)因子(PIGF)、R-spondinl至4、和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A和B(VEGF)。根據(jù)本發(fā)明，所述官能化的多糖可以符合下述通式
權(quán)利要求
1.由被色氨酸或色氨酸衍生物取代的多糖和HBP構(gòu)成的復(fù)合物，其特征在于，所述多糖選自占多數(shù)地由(1，6)和/或(1，4)和/或(1，3)和/或(1，2)類型的糖苷鍵構(gòu)成的、 中性或陰離子的、至少通過(guò)色氨酸或色氨酸衍生物進(jìn)行官能化的多糖，所述色氨酸或色氨酸衍生物標(biāo)注為Trp -所述色氨酸或色氨酸衍生物通過(guò)與酸官能團(tuán)的偶聯(lián)而嫁接或連接至所述多糖，所述酸官能團(tuán)可以是陰離子多糖的酸官能團(tuán)和/或由連接臂R所攜帶的酸官能團(tuán)，所述連接臂R 通過(guò)官能團(tuán)F而與該多糖相連接，所述官能團(tuán)F由于連接臂R和該中性或陰離子多糖的-OH 官能團(tuán)之間的偶聯(lián)而產(chǎn)生，-F為酯官能團(tuán)、硫酯官能團(tuán)、酰胺官能團(tuán)、碳酸酯官能團(tuán)、氨基甲酸酯官能團(tuán)、醚官能團(tuán)、硫醚官能團(tuán)或胺官能團(tuán)，-R為包含1-18個(gè)碳的鏈，其任選地是支化的和/或不飽和的，包含一個(gè)或多個(gè)雜原子， 例如0、N或/和S，并且具有至少一個(gè)酸官能團(tuán)，-Trp為L(zhǎng)-或D-色氨酸或L-或D-色氨酸衍生物的殘基，其從該色氨酸的胺和至少一個(gè)由基團(tuán)R所攜帶的酸和/或由該陰離子多糖所攜帶的酸之間的偶聯(lián)而產(chǎn)生，-所述色氨酸或色氨酸衍生物是可成鹽的或成鹽的，并且選自色氨酸、色氨醇、色氨酰胺、2-吲哚乙胺以及其鹽， -所述HBP選自-激素，例如生長(zhǎng)激素(hGH:人生長(zhǎng)激素)或甲狀旁腺激素(PTH)， -生長(zhǎng)因子，例如諸如下列的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 和0 2(TGF-i3)、胰島素樣生長(zhǎng)因子2 (IGF-2)、肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子樣生長(zhǎng)因子(HB-EGF 肝素結(jié)合性EGF-樣生長(zhǎng)因子)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1至H(FGF)、角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子 β (NGF-β)、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)、胎盤生長(zhǎng)因子(PIGF)、R-spondinl至4、和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A和B(VEGF)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的復(fù)合物，其特征在于，所述多糖選自通式I的多糖
3.根據(jù)前一項(xiàng)權(quán)利要求的復(fù)合物，其特征在于，F(xiàn)為酯、碳酸酯、氨基甲酸酯或醚。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的復(fù)合物，其特征在于，所述多糖占多數(shù)地由(1，6)類型的糖苷鍵構(gòu)成。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的復(fù)合物，其特征在于，所述占多數(shù)地由(1，6)類型的糖苷鍵構(gòu)成的多糖為右旋糖酐。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的復(fù)合物，其特征在于，所述多糖占多數(shù)地由(1，4)類型的糖苷鍵構(gòu)成。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的復(fù)合物，其特征在于，所述占多數(shù)地由(1，4)類型的糖苷鍵構(gòu)成的多糖選自出芽短梗霉聚糖、藻酸鹽、乙酰透明質(zhì)酸、木聚糖、聚半乳糖醛酸或水溶性纖維素。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的復(fù)合物，其特征在于，所述多糖占多數(shù)地由(1，3)類型的糖苷鍵構(gòu)成。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的復(fù)合物，其特征在于，所述占多數(shù)地由(1，3)類型的糖苷鍵構(gòu)成的多糖為凝乳聚糖。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的復(fù)合物，其特征在于，所述多糖占多數(shù)地由(1，2) 類型的糖苷鍵構(gòu)成。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的復(fù)合物，其特征在于，所述占多數(shù)地由(1，2)類型的糖苷鍵構(gòu)成的多糖為菊粉。
12.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的復(fù)合物，其特征在于，所述多糖占多數(shù)地由(1，4) 和(1，3)類型的糖苷鍵構(gòu)成。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的復(fù)合物，其特征在于，所述占多數(shù)地由(1，4)和(1，；3)類型的糖苷鍵構(gòu)成的多糖為葡聚糖。
14.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的復(fù)合物，其特征在于，所述多糖占多數(shù)地由(1，4) 和(1，3)和(1，2)類型的糖苷鍵構(gòu)成。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的復(fù)合物，其特征在于，所述占多數(shù)地由(1，4)和(1，3)和(1，2) 類型的糖苷鍵構(gòu)成的多糖為甘露聚糖。
16.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的復(fù)合物，其特征在于，基團(tuán)R選自下列基團(tuán)
17.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的復(fù)合物，其特征在于，比率“多糖/HBP”為0.5至500， 優(yōu)選地1至300。
18.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的復(fù)合物，其特征在于，比率“多糖/HBP”為0.5至100， 優(yōu)選地1至10。
19.根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一項(xiàng)的復(fù)合物，其特征在于，所述HBP選自激素，例如生長(zhǎng)激素(hGH 人生長(zhǎng)激素)或甲狀旁腺激素(PTH)。
20.根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一項(xiàng)的復(fù)合物，其特征在于，所述HBP選自生長(zhǎng)因子，例如諸如下列的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 和日2 0^^-0)、胰島素樣生長(zhǎng)因子2(16 -2)、肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子樣生長(zhǎng)因子(HB-EGF 肝素結(jié)合性EGF-樣生長(zhǎng)因子)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1至14 (FGF)、角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子β (NGF-β )、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)、胎盤生長(zhǎng)因子(PIGF)、R-sp0ndinl至4、和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A和B(VEGF)。
21.包含根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的復(fù)合物的藥物組合物。
22.根據(jù)前一項(xiàng)權(quán)利要求的藥物組合物，其特征在于，它通過(guò)干燥和/或凍干而獲得。
23.被色氨酸或色氨酸衍生物取代的多糖用于穩(wěn)定HBP的用途，所述多糖選自占多數(shù)地由(1，6)和/或(1，4)和/或(1，3)和/或(1，2)類型的糖苷鍵構(gòu)成的、中性或陰離子的、至少通過(guò)色氨酸或色氨酸衍生物進(jìn)行官能化的多糖，所述色氨酸或色氨酸衍生物標(biāo)注為 Trp -所述色氨酸或色氨酸衍生物通過(guò)與酸官能團(tuán)的偶聯(lián)而嫁接或連接至所述多糖，所述酸官能團(tuán)可以是陰離子多糖的酸官能團(tuán)和/或由連接臂R所攜帶的酸官能團(tuán)，所述連接臂R 通過(guò)官能團(tuán)F而與該多糖相連接，所述官能團(tuán)F由于連接臂R和該中性或陰離子多糖的-OH 官能團(tuán)之間的偶聯(lián)而產(chǎn)生，-F為酯官能團(tuán)、硫酯官能團(tuán)、酰胺官能團(tuán)、碳酸酯官能團(tuán)、氨基甲酸酯官能團(tuán)、醚官能團(tuán)、硫醚官能團(tuán)或胺官能團(tuán)，-R為包含1-18個(gè)碳的鏈，其任選地是支化的和/或不飽和的，包含一個(gè)或多個(gè)雜原子， 例如0、N或/和S，并且具有至少一個(gè)酸官能團(tuán)，-Trp為L(zhǎng)-或D-色氨酸或L-或D-色氨酸衍生物的殘基，其從該色氨酸的胺和至少一個(gè)由基團(tuán)R所攜帶的酸和/或由該陰離子多糖所攜帶的酸之間的偶聯(lián)而產(chǎn)生，-所述色氨酸或色氨酸衍生物是可成鹽的或成鹽的，并且選自色氨酸、色氨醇、色氨酰胺、2-吲哚乙胺以及其鹽。
24.多糖在制備穩(wěn)定的HBP的藥物制劑中的用途，所述多糖被色氨酸或色氨酸衍生物取代，其特征在于，所述多糖選自占多數(shù)地由(1，6)和/或(1，4)和/或(1，3)和/或(1， 2)類型的糖苷鍵構(gòu)成的、中性或陰離子的、至少通過(guò)色氨酸或色氨酸衍生物進(jìn)行官能化的多糖，所述色氨酸或色氨酸衍生物標(biāo)注為Trp -所述色氨酸或色氨酸衍生物通過(guò)與酸官能團(tuán)的偶聯(lián)而嫁接或連接至所述多糖，所述酸官能團(tuán)可以是陰離子多糖的酸官能團(tuán)和/或由連接臂R所攜帶的酸官能團(tuán)，所述連接臂R 通過(guò)官能團(tuán)F而與該多糖相連接，所述官能團(tuán)F由于連接臂R和該中性或陰離子多糖的-OH 官能團(tuán)之間的偶聯(lián)而產(chǎn)生，-F為酯官能團(tuán)、硫酯官能團(tuán)、酰胺官能團(tuán)、碳酸酯官能團(tuán)、氨基甲酸酯官能團(tuán)、醚官能團(tuán)、硫醚官能團(tuán)或胺官能團(tuán)，-R為包含1-18個(gè)碳的鏈，其任選地是支化的和/或不飽和的，包含一個(gè)或多個(gè)雜原子， 例如0、N或/和S，并且具有至少一個(gè)酸官能團(tuán)，-Trp為L(zhǎng)-或D-色氨酸或L-或D-色氨酸衍生物的殘基，其從該色氨酸的胺和至少一個(gè)由基團(tuán)R所攜帶的酸和/或由該陰離子多糖所攜帶的酸之間的偶聯(lián)而產(chǎn)生，-所述色氨酸或色氨酸衍生物是可成鹽的或成鹽的，并且選自色氨酸、色氨醇、色氨酰胺、2-吲哚乙胺以及其鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及由多糖和HBP構(gòu)成的復(fù)合物，所述多糖由(1，6)和/或(1，4)和/或(1，3)和/或(1，2)類型的糖苷鍵構(gòu)成并且通過(guò)至少一個(gè)可成鹽的或成鹽的色氨酸衍生物進(jìn)行官能化。本發(fā)明還涉及包含根據(jù)本發(fā)明的復(fù)合物的藥物組合物，以及由(1，6)和/或(1，4)和/或(1，3)和/或(1，2)類型的糖苷鍵構(gòu)成并且通過(guò)至少一個(gè)可成鹽的或成鹽的色氨酸衍生物進(jìn)行官能化的多糖在制備穩(wěn)定的HBP的藥物制劑中的用途。
文檔編號(hào)A61K47/36GK102196822SQ200980141699
公開日2011年9月21日 申請(qǐng)日期2009年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月26日
發(fā)明者G·蘇拉, M·高蒂亞, O·蘇拉, R·蘇拉 申請(qǐng)人:阿道恰公司