專利名稱：含有鏈球菌菌株和乳桿菌菌株的組合的藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于葡萄球菌Staphylococcus)引起的感染和疾患的預(yù)防和治療的藥物制劑，有關(guān)所述藥物制劑的藥盒，用于葡萄球菌引起的感染和疾患的預(yù)防和治療的方法，和所述藥物制劑或藥盒的用途。
背景技術(shù)：
葡萄球菌感染一直以來為全世界廣泛散布的問題，且由于對用于治療葡萄球菌感染的不同抗生素藥物的抗性的發(fā)展而逐漸加劇。葡萄球菌是我們?nèi)粘－h(huán)境中常見的球形革蘭氏陽性細菌。在顯微鏡下它們呈圓形且形成葡萄樣群集。葡萄球菌屬包括三十個以上的種，例如，金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)禾口腐生葡萄球菌 (Staphylococcus saprophyticus)。金黃色葡萄球菌屬于正常人類細菌菌群并存在于皮膚上、粘膜上和鼻孔(nostrils/nares)中。表皮葡萄球菌存在于皮膚上、鼻孔中和口腔中，而腐生葡萄球菌存在于尿道中。當(dāng)這些菌株被允許在儲存不當(dāng)?shù)氖澄镏猩L時產(chǎn)生的葡萄球菌腸毒素是導(dǎo)致嘔吐和腹瀉的食物中毒的常見原因。表皮葡萄球菌主要存在于人類的皮膚上且可引起伴有皮膚下膿液形成的感染，尤其對于具有降低的免疫抵抗力的人。這些菌株還可引起膿毒，尤其是對于嚴重患病的患者， 例如，接受長期靜脈導(dǎo)管術(shù)的患者。腐生葡萄球菌很少引起疾病，但在某些情形下可引起尿道感染。特別地，金黃色葡萄球菌通過毒素產(chǎn)生或侵入在人類和動物中引起多種疾病。金黃色葡萄球菌，簡稱為S. aureus，也稱作golden staph，是葡萄球菌感染的最常見原因，并能夠?qū)е聫妮p微皮膚感染到威脅生命的疾病的一系列疾病，所述輕微皮膚感染比如丘疹、 膿皰瘡、瘡、蜂窩組織炎毛囊炎、癤、癰、燙傷樣皮膚綜合征和膿腫，所述威脅生命的疾病比如肺炎、腦膜炎、骨髓炎心內(nèi)膜炎、中毒性休克綜合征(TSS)和敗血病。其發(fā)生范圍從皮膚、 軟組織、呼吸道、骨、關(guān)節(jié)和血管內(nèi)到創(chuàng)傷感染。其還是經(jīng)常導(dǎo)致外科手術(shù)后創(chuàng)傷感染的醫(yī)院感染的四種最常見原因之一。S. aureus可在人類皮膚上作為共生體而存在，且在大約三分之一的人群中，其還常常存在于鼻中，但較少存在于咽喉中。這些環(huán)境下S. aureus的存在并不一定表示感染且因此并不一定需要治療。其可在諸如狗、貓、豬和馬的家畜上生存。其可在干燥環(huán)境表面生存幾個小時。當(dāng)諸如皮膚或粘膜內(nèi)層的正常屏障被破壞時，S. aureus能夠感染其它組織。 這導(dǎo)致了癤(瘡)和癰(癤的集合)。在嬰兒中S. aureus感染能夠?qū)е路Q為葡萄球菌燙傷樣皮膚綜合征(SSSQ的嚴重疾病。S. aureus感染可經(jīng)與來自感染創(chuàng)傷的膿液相接觸、通過產(chǎn)生破壞組織的透明質(zhì)酸酶而與感染者的皮膚-皮膚相接觸、和與感染者所使用的諸如毛巾、褥單、衣服或體育器材的物體相接觸而被傳播。深位S. aureus感染可能是非常嚴重的。 假關(guān)節(jié)使人處于膿毒性關(guān)節(jié)炎的特定風(fēng)險中，且表皮葡萄球菌(心臟瓣膜的感染)使人處于快速傳播的肺炎的風(fēng)險中。S. aureus在遺傳過敏性皮炎患者中非常流行，該患者比其他人對S. aureus具有較少抗性。其常導(dǎo)致并發(fā)癥。該疾病最有可能發(fā)現(xiàn)于人體的增殖活躍的部位，以及腋窩、毛發(fā)和頭皮中。當(dāng)這些區(qū)域中的大型丘疹爆發(fā)時，將導(dǎo)致最嚴重的感染。 S. aureus的一些菌株產(chǎn)生中毒性休克綜合征毒素，其為中毒性休克綜合征的病原體。以上也提到，一些產(chǎn)生腸毒素的S. aureus菌株是葡萄球菌食物中毒的原因。此外，S. aureus是乳牛中乳腺炎的致病因子之一。葡萄球菌菌株具有對抗生素產(chǎn)生抗性的超常能力。葡萄球菌對青霉素的抗性由青霉素酶(β_內(nèi)酰胺酶的一種形式)產(chǎn)生所介導(dǎo)，該酶分解青霉素分子的內(nèi)酰胺環(huán)?？骨嗝顾孛傅那嗝顾乇热缂籽跷髁?methicillin)、苯唑西林(oxacillin)、5-甲基-3-鄰氯苯基-4-異噁唑青霉素(cloxacillin)、雙氯西林(dicloxacillin)和萘夫西林 (nafcillin)，能夠抵抗葡萄球菌青霉素酶的降解。目前，S. aureus已對多種常用抗生素產(chǎn)生抗性。在英國，所有S. aureus分離株中僅有2%對青霉素敏感，與世界上其它地方的情形相似，這是由青霉素酶所導(dǎo)致的，該酶是 β -內(nèi)酰胺酶的一種類型。已開發(fā)了抗β -內(nèi)酰胺酶的青霉素(甲氧西林、苯唑西林、5-甲基-3-鄰氯苯基-4-異噁唑青霉素和氟氯西林)來治療抗青霉素的S. aureus并且仍用作一線治療。甲氧西林是該種類中首次使用的抗生素。其在1959年被引入，但僅兩年后在英格蘭報道了首例抗甲氧西林的S. aureus (以下簡稱為MRSA)。盡管如此，甚至在醫(yī)院環(huán)境下，MRSA—般仍罕見，直到20世紀90年代醫(yī)院中MRSA 流行爆發(fā)時，目前是地方性流行的。醫(yī)院環(huán)境和社區(qū)環(huán)境中的MRSA感染常用非β-內(nèi)酰胺抗生素諸如克林霉素 (clindamycin)(一禾中林可胺(Iincosamine))禾口復(fù)方磺胺甲口,惡唑(co-trimoxazole)(也常稱作三甲氧芐氨嘧啶/磺胺甲噁唑)進行治療。對這些抗生素的抗性也已導(dǎo)致了新型廣譜抗革蘭氏陽性抗生素的使用，比如利奈唑胺(linezolid)，因為其作為口服藥物的可用性。目前用于MRSA導(dǎo)致的嚴重侵入性感染的一線治療包括糖肽抗生素(萬古霉素 (vancomycin)和替考拉寧(teicoplanin))。這些抗生素具有許多問題，主要集中于對靜脈內(nèi)施用的需要(沒有可用的口服制劑)、毒性和通過血液測試定期監(jiān)測藥物水平的需要。還注意到糖肽抗生素并不良好滲透到感染的組織中。這對于腦和腦膜的感染和心內(nèi)膜炎特別重要。由于治療結(jié)果差，糖肽不能用來治療甲氧西林敏感的S. aureus。由于對青霉素的高水平抗性，且由于MRSA對萬古霉素產(chǎn)生抗性的可能性，疾病控制和預(yù)防中心已出版了適當(dāng)使用萬古霉素的指南。在已知MRSA感染的發(fā)生率高的狀況下， 主治醫(yī)師可選擇使用糖肽抗生素，直到知道感染有機體的身份。當(dāng)證實感染由S. aureus的甲氧西林敏感的菌株引起時，則適當(dāng)?shù)貙⒅委煾淖優(yōu)榉任髁只蛏踔燎嗝顾?。然而，一些新發(fā)現(xiàn)的MRSA菌株甚至對萬古霉素和替考拉寧表現(xiàn)出抗生素抗性?？谷f古霉素的S. aureus (VRSA)是對糖肽產(chǎn)生抗性的一種S. aureus菌株。1996 年在日本報道了首例萬古霉素中度耐藥S. aureus (VISA)，但首例真正抗糖肽抗生素的 S. aureus僅在2002年被報道。2005年在美國報道了三例VRSA感染。葡萄球菌感染，包括MRSA，最常在醫(yī)院和衛(wèi)生機構(gòu)的人群中發(fā)生。發(fā)生于其他最近未住院或未經(jīng)受任何醫(yī)療程序的健康人中的MRSA感染也稱為社區(qū)相關(guān)(CA)MRSA感染。 MRSA的定植可以是長期靜止的，有時為多年。
MRSA可定植于人體中的不同部位，比如耳中、鼻咽區(qū)域中、胃腸區(qū)域中、尿中和皮膚上。皮膚感染的例子為瘡、膿腫、瞼腺炎(眼瞼線的感染)、癰、蜂窩組織炎和膿皰瘡。如果定植在血液中或體內(nèi)其它器官或部分中，則發(fā)生感染，例如敗血病(血中毒)、膿毒性休克、膿毒性關(guān)節(jié)炎、骨髓炎、內(nèi)部膿腫、腦膜炎、肺炎和心內(nèi)膜炎。長期攜帶者具有較高的感染風(fēng)險并還可將MRSA傳播至其他人。葡萄球菌感染的預(yù)防是困難的，接種疫苗不是非常有效的途徑。對葡萄球菌菌株顯示出抗生素抗性的人通常在感染診所或相應(yīng)的機構(gòu)被隔離以避免感染的傳播。因此，尤其是MRSA，在許多國家中已成為主要的問題并且不得不預(yù)防MRSA傳播。如上所述，MRSA的治療取決于人是被感染金黃色葡萄球菌還是僅被定植。大多數(shù) MRSA感染將需要在醫(yī)院治療并且抗生素治療可能需要持續(xù)數(shù)周。如果人被MRSA定植且需要進入醫(yī)院進行手術(shù)，他需要除去MRSA的治療，例如，在皮膚上或在鼻內(nèi)使用特殊的抗生素乳劑以除去細菌?？赡苓€需要用殺菌洗發(fā)劑和洗劑洗滌皮膚和頭發(fā)。還需要醫(yī)院中的單間來阻止MRSA傳播。如上所述，需要葡萄球菌引起的感染的改進的治療和預(yù)防，且需要預(yù)防葡萄球菌從攜帶葡萄球菌、特別是抗性葡萄球菌菌株的個體(無論是否發(fā)生感染)進一步傳播。發(fā)明_既述本發(fā)明的目的是減少或消除以上公開的與葡萄球菌引起的感染和疾患有關(guān)的問題。根據(jù)本發(fā)明，該目的通過在人類和動物中用于葡萄球菌引起的感染或疾患的預(yù)防和治療的藥物制劑來實現(xiàn)，其中，其包括以下的組合a) 一種或多種活的α -鏈球菌(α -Streptococcus)菌株，所述α -鏈球菌菌株選自由登錄號為 NCIMB 40104、NCIMB 40105、NCIMB 40106 和 NCIMB 40873 的血鏈球菌 lKStreptococcus sanguis II)菌株、登錄號為 NCIMB 40107 和 NCIMB 40874 的緩癥鏈球菌菌株(Sti^ptococcus mitis)、登錄號為NCIMB 40875和NCIMB 40876的口腔鏈球菌菌株(Str印tococcusoralis)、登錄號為 NCIMB 40157 的乳鏈球菌菌株(Streptococcus lactis)LlA，和一種或多種具有相同的或基本相似的作用的它們的變體組成的組；和b) 一種或多種活的乳桿菌菌株(LactcAacillus)，所述乳桿菌菌株選自由登錄號為NCIMB 40564的鼠李糖乳桿菌菌株(Lactobacillus rhamnosus)LB21、登錄號為DSM 17852的植物乳桿菌菌株(Lactobacillus plantarum) LB3和登錄號為DSM 17853的植物乳桿菌菌株LB7和一種或多種具有相同的或基本相似的作用的它們的變體組成的組；在其中所述菌株維持其存活力的至少一種藥學(xué)上可接受的介質(zhì)中。并且，本發(fā)明涉及用于葡萄球菌引起的感染和疾患的預(yù)防和治療的藥盒，其中，其包括兩種或多種獨立的制劑，所述兩種或多種獨立的制劑預(yù)期同時或在預(yù)定的時間段內(nèi)依次施用給需要其的人或動物，其中所述藥盒包括以上的a)和b)的組合且藥盒中的每種制劑包括至少一種根據(jù)以上的a)的菌株和/或至少一個根據(jù)以上的b)的菌株。本發(fā)明還涉及用于葡萄球菌引發(fā)的感染或疾患的預(yù)防和/或治療的方法，其中根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑或藥盒被施用給需要其的人或動物。在另一方面，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑或藥盒在用于制備人和動物中葡萄球菌引起的感染或疾患的預(yù)防和/或治療的藥物的用途。
根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑或藥盒還可用于制備用于上呼吸道中的病毒感染的預(yù)防和/或治療的藥物，所述病毒諸如鼻病毒、冠狀病毒、副流感病毒和腺病毒。根據(jù)以下包括實驗的本發(fā)明的詳細描述和所附權(quán)利要求書，本發(fā)明的目的、問題、 解決方法和特征的進一步公開將是明顯的。優(yōu)選實施方案的詳細描述本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)多種已知的微生物菌株的新組合在葡萄球菌引起的感染和疾患的預(yù)防和治療過程中產(chǎn)生了不可預(yù)見的有利作用，即，其對諸如金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌的葡萄球菌菌株具有抑制作用、阻遏作用、競爭作用和/或殺滅作用。組合的菌株來源于兩種主要的微生物組，更確切地為α-鏈球菌菌株和乳桿菌菌株。雖然在體外試驗中在腸中LB21對金黃色葡萄球菌已大致顯示出輕微的有益作用，但是這兩種主要的微生物組中沒有一組先前獨立地顯示出對葡萄球菌的任何相似的良好作用。這些菌株的組合產(chǎn)生了令人驚奇地有利的協(xié)同作用。根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑中的鏈球菌菌株中的一些先前在W090/09186 (Essum AB)中被公開。在該文獻中公開了這些鏈球菌菌株可用于β-鏈球菌性扁桃體炎的預(yù)防和/或治療的藥物制劑。所述的血鏈球菌II 菌株和緩癥鏈球菌菌株于1989年2月3日保藏于iTorry Research Station, POBox 31,135 Abbey Road,Aberdeen AB9 8DG,Great Britain的英國食品工業(yè)與海洋細菌菌種保藏中心 (NCIMB)，且登錄號分別為 NCIMB 40104,NCIMB 40105,NCIMB 40106 和 NCIMB 40107。這四種菌株的通用交叉名稱為α 89a、α 502、α 505和α 7213。WO 90/09186中詳細公開了這些鏈球菌菌株的分離、分型和醫(yī)學(xué)功能。已證明這些α-鏈球菌菌株對由β-鏈球菌引起的扁桃體炎的抑制作用高度取決于由α-鏈球菌所產(chǎn)生的細菌素的存在。WO 99/53932 (Bacterum AB)中公開了用于急性中耳炎(耳的炎癥)和中耳炎(中耳的炎癥)的預(yù)防和/或治療的藥物制劑。所述制劑包含根據(jù)本發(fā)明的組合的藥物制劑中存在的鏈球菌菌株中的一些，即，登錄號為NCIMB 40104的微生物菌株血鏈球菌、登錄號為 NCIMB 40873的血鏈球菌、登錄號為NCIMB 40875的口腔鏈球菌(也稱作α 4)、登錄號為 NCIMB40876的口腔鏈球菌(也稱作α 6)和登錄號為NCIMB 40107和NCIMB40874的緩癥鏈球菌菌株，以及，任選地，其它具有基本相同的能力的α-鏈球菌菌株，所述能力即，抑制流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)、月市炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)禾口卡他莫拉菌(Moraxellacatarrhalis)的能力。菌株 NCIMB 40873、40874、40875 和 40876 于 1997 年 3 月 19 日保藏于 23 St. Machar Drive, Aberdeen, AB2 1RY,Great Britain 的英國食品工業(yè)與海洋細菌菌種保藏中心(NCMB)。登錄號為NCIB40104的菌株于1989年2月3 日保藏(參見以上的WO 90/09186)，且從此指定為NCIMB 40104。WO 99/53932中詳細公開了這些菌株的分離、分型和醫(yī)學(xué)功能。還參見α-鏈球菌作為復(fù)發(fā)的鏈球菌性扁桃體炎的補充治療——一項隨機的安慰劑-對照研究。Roos K. Holm SE, Grahn E, Lind L. Scand J Infect Dis25 31-35,1993 ；用于復(fù)發(fā)的鏈球菌性咽扁桃體炎的預(yù)防的選定的α-鏈球菌的再定植
(Recolonization)-一項隨機的安慰劑-對照多中心研究。RoosK，Holm SE, Grahn Ε,
Lagergren L. Scand J Infect Dis沘459_462，1996 ；在鏈球菌性咽炎的復(fù)發(fā)中干擾 α-鏈球菌的耐受性和效力——一項安慰劑-對照研究。Falck G，Grahn Hakansson Ε， Holm SEjRoos K, Lagergren L. ActaOto-Laryngologica，119 :944_948，1999 ；在兒童中“干擾” α-鏈球菌的再定植對急性和分泌性中耳炎的復(fù)發(fā)的作用隨機安慰劑對照試驗。Roos K, GrahnHakansson E, Holm SE. BMJ,322 :210-212,2001 W090/00850公開了 α -乳鏈球菌菌株LlA且登錄號為NCIMB 40157。該菌株當(dāng)時被分類為α-鏈球菌菌株，為α-溶血性鏈球菌，但此后被重新分類為乳酸乳球菌菌株。按照原始分類，該菌株被歸于根據(jù)本發(fā)明的組合中的鏈球菌菌株a)。WO 98/55131 (Essum AB)公開了用于人和動物中的胃腸疾患的預(yù)防和/或治療的藥物制劑，其中所述制劑包含以登錄號為NCIMB 40564的干酪鼠李糖乳桿菌 (Lactobacillus casei rhamnosus)菌株LB21和/或一種或多種具有基本相似功能的其變體的形式的活的微生物菌株。以上所述的LB21菌株于1993年6月11日保藏于23 St. Machar Drive, Aberdeen, AB2 1RY，Great Britain的英國食品工業(yè)與海洋細菌菌種保藏中心(NCIMB)。WO 98/55131詳細公開了該LB21菌株的分離、分型和醫(yī)學(xué)功能。干酪鼠李糖乳桿菌LB21，以替代術(shù)語鼠李糖乳桿菌LB21被包括在根據(jù)本發(fā)明的組合的藥物制劑的b)部分中，其分離自嬰兒的糞便中并且已證明對于對人類中不同類型的腸道感染重要的大多數(shù)細菌中具有特別顯著的抑制作用，比如常見的金黃色葡萄球菌，但不是MRSA，但大體上涉及不同的菌種，比如沙門氏菌(Salmonella)、志賀氏菌(Siigella)、 假單胞桿菌(Pseudomonas)、克雷白桿菌-腸桿菌(Klebsiella-Enterobacter)、彎曲桿菌(Campylobacter)、艱難梭菌(Clostridium difficile)、幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)等。LB21對腸病原菌的明確地強烈抑制作用可能由于其產(chǎn)生特定的酸和特定的低分子蛋白或特定的低分子肽的事實引起的，所述低分子量的蛋白或肽是熱穩(wěn)定的，具有低于5000道爾頓的分子量，并以獨特形式對腸病原菌產(chǎn)生有害影響。登錄號為DSM 17852的植物乳桿菌菌株LB3和登錄號為DSM 17853的植物乳桿菌菌株 LB7 于 2006 年 1 月 6 日保藏于 Mascheroder Weg lb, D-38124 Braunschweig 的德國微生物菌禾中保藏中心(Deutsche Sammlungvon Mikroorganismen und Zellkulturen)，并還有效作為根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑中的乳桿菌菌株。以下實施例中所提到的其它乳桿菌菌株，例如，LB45、LB64、LB66、LB87、LB99、LB931和LB hs_l，在根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑中也是有用的。LB45、LB64、LB66、LB87 和 LB99 還未保藏，但可購自 Essum AB, Box 3160,903 04 Umea, Sweden。胚芽乳桿菌(Lactobacillusplantarum)菌株 LB931 的登錄號為 DSM 11918 且發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)菌株 LB Ess-I 的登錄號為 DSM 17851。 其分別于1998年1月9日和2006年1月6日保藏于Deutsche Mascheroder Weg lb, D_38124Braunschweig0根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑中的細菌菌株的獨特組合發(fā)揮了有利的協(xié)同作用，這是由于，首先，鏈球菌菌株占據(jù)表皮細胞、基質(zhì)和粘膜，且皮膚創(chuàng)造了一種物理屏障并防止葡萄球菌粘附于這些細胞。因此，機體患處的菌群被平衡且增強。另一方面，根據(jù)本發(fā)明的乳桿菌菌株產(chǎn)生抑制諸如MRSA的葡萄球菌生長的物質(zhì)，但主要通過由這些乳桿菌菌株的細菌細胞壁而非這些乳桿菌菌株產(chǎn)生的代謝物調(diào)節(jié)天然免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)來增強天然防御。對三位供血者進行實驗，在mRNA水平上進行測量，顯示LB21沒有增高靜息T細胞的INF-Y水平或IL-4水平，但對于激活的T細胞LB21增高了或降低了細胞因子反應(yīng)。在體內(nèi)通過在鼻中噴霧LB21并隨后取樣鼻咽液體來測量細胞因子而進行的研究顯示了噴霧治療后IL-8顯著增高。IL-8是天然免疫系統(tǒng)反應(yīng)中免疫反應(yīng)的重要中介體。α-鏈球菌
8和乳桿菌的特定菌株的體內(nèi)協(xié)同作用可能取決于抗微生物成分，例如，來自α-鏈球菌的細菌素和其在粘膜上的物理屏障，連同由乳桿菌菌株和免疫系統(tǒng)的刺激產(chǎn)生的特定的酸。根據(jù)本發(fā)明的細菌菌株的組合在以減少或消除粘膜上和皮膚上的有害葡萄球菌菌株為目的的體外和體內(nèi)實驗中都顯示出良好的結(jié)果。如果僅單獨使用根據(jù)本發(fā)明的菌株 a)和菌株b)中的任何一個，則不會獲得這樣的良好效果。雖然LB21菌株在體外試驗過程中僅對腸中一般的金黃色葡萄球菌表現(xiàn)出有利的作用，LB21和組a)中鏈球菌菌株中的一種或多種的組合表現(xiàn)了大為改善的體外作用。該組合對所有類型的葡萄球菌菌株表現(xiàn)出良好的作用，特別是金黃色葡萄球菌菌株，例如MRSA，即作為世界性大問題的抗甲氧西林的金黃色葡萄球菌。根據(jù)本發(fā)明，可使用權(quán)利要求1中所界定的根據(jù)本發(fā)明的a)組和b)組的每組中的多于一種的菌株。在一個實施方案中，使用血鏈球菌菌株α 89a、α 502和α 505作為鏈球菌菌株。在另一個實施方案中，在b)組中使用了鼠李糖乳桿菌LB21和，任選地，植物乳桿菌菌株LB3、LB7和LB931中的一種或多種作為乳桿菌菌株。在另一個有用的實施方案中，使用了血鏈球菌08如和鼠李糖乳桿菌1^21的組合。a)組和b)組中的菌株的其它組合也是有效的。此外，具有相同或基本相似作用的其它鏈球菌菌株和乳桿菌菌株在根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑中的菌株的組合中也是有用的。本文所用的表達“具有相同或基本相似作用的其它鏈球菌菌株和乳桿菌菌株”意指以組合的形式在體內(nèi)消除或殺傷葡萄球菌的這些菌株。在體內(nèi)獲得了最佳效果。在體外，PBS濾液結(jié)果已顯示利用根據(jù)本發(fā)明的組合在6 小時內(nèi)徹底殺滅了 MRSA，更確切地為利用菌株α 89a和LB21的組合。在相同的治療條件下僅利用LB21，在16小時內(nèi)殺滅了 MRSA，且僅利用α -鏈球菌，MRSA不被殺滅而僅是減少了數(shù)量。表達“葡萄球菌引起的感染和疾患”意指導(dǎo)致伴隨組織疼痛腫脹的感染的不希望的葡萄球菌菌株繁殖，以及由于葡萄球菌感染導(dǎo)致的由其它微生物引起的任何其它疾病或感染。該表達還意在包括個體被葡萄球菌定植的疾患，即，葡萄球菌的攜帶者，例如，MRSA攜帶者，但還未發(fā)展為感染，即，未患有任何疾病。然而，這樣的個體具有在長期過程中將葡萄球菌傳播至其他個體的能力。這樣的個體也處于發(fā)生MRSA感染的高風(fēng)險中。肺炎、軟組織感染和中心靜脈導(dǎo)管感染是最常見的感染。如上所述，其它感染和疾患的實例為諸如丘疹、 膿皰瘡、瘡、蜂窩組織炎毛囊炎、癤、癰、燙傷樣皮膚綜合征和膿腫的輕微皮膚感染以及諸如腦膜炎、骨髓炎心內(nèi)膜炎、中毒性休克綜合征(TSS)和敗血病的威脅生命的疾病。表達“預(yù)防葡萄球菌引起的感染和疾患”意指預(yù)防非葡萄球菌的攜帶者的個體和葡萄球菌的攜帶者的個體免于發(fā)生感染或發(fā)生另外的葡萄球菌引起的疾患，并阻止攜帶者將其傳播至其他人。本文所用的表達“即用型(ready-to-use)制劑”意指待施用給人或動物的最終制劑。本文所用的表達“預(yù)定的時間段”意指藥盒中的兩種或更多種不同制劑可被施用， 同時還保持對葡萄球菌菌株的可接受的殺傷或抑制作用的最大時間段。在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑的菌株組合中的a)組中限定的菌株和b)組中限定的菌株必須要求不存在于同一個制劑中。雖然同一個制劑中的組合具有一些更有利的理由，例如有利于生產(chǎn)和施用，但a)組中的菌株和b)組中的菌株可存在于獨立的制劑中并可同時或在預(yù)定的時間段內(nèi)獨立地被施用。在這樣的實施方案中，取決于a)組和b)組中的每組分別將包括多少種不同菌株，本發(fā)明構(gòu)成含有兩種或更多種不同制劑的藥盒，每種制劑含有來自a)組的至少一種菌株和/或來自b)組的至少一種菌株。該藥盒還可包含含有屬于a)組的兩種或更多種菌株的一種制劑或每種都含有屬于a)組的一種菌株的多種制劑。該藥盒還可包含含有屬于b)組的兩種或更多種菌株的一種制劑或每種都含有屬于b)組的一種菌株的多種制劑。關(guān)于協(xié)同作用，應(yīng)該在盡可能小的時間段內(nèi)，優(yōu)選地同時將藥盒中所述含有屬于a)組的菌株的一種或多種制劑和所述含有屬于b)組的菌株的一種或多種制劑施用給需要其的人或動物。所述含有屬于a)組的菌株的一種或多種制劑和所述含有屬于b)組的菌株一種或多種制劑之間的預(yù)定時間段可以長達M小時，更優(yōu)選地為12小時，且最優(yōu)選為同時。藥盒中這樣的一種或多種制劑的施用順序并不重要。根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑或藥盒可期望用于口服制劑、口腔粘膜制劑、咽劑型、鼻制劑、牙科制劑、皮膚(cutaneous/skin)制劑、陰道制劑、直腸制劑、耳制劑或透析制劑。如上所述，本發(fā)明的藥盒實施方案中的不同制劑施用之間的預(yù)定時間段不可太長，以致無法獲得協(xié)同作用，例如，由于非最佳的定植或不希望的與其它菌株的相互作用，并且如上所述， 至多為24小時。藥學(xué)上可接受的介質(zhì)可以是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域常規(guī)使用的任何介質(zhì)，還包含常規(guī)使用的輔助劑和賦形劑，或可以是變酸或發(fā)酵的乳制品、優(yōu)選地為酸奶、酸乳酪和牛奶，或果汁、冰淇淋、糖和水果飲料。當(dāng)將根據(jù)本發(fā)明的制劑施用給動物時，藥學(xué)上可接受的介質(zhì)還可以是 NaCl溶液，葡萄糖溶液或脫脂乳，或是動物飼料，優(yōu)選地為乳清、干飼料或濃縮懸液。根據(jù)本發(fā)明的藥品和藥盒中的菌株可以即用型產(chǎn)品的凍干形式存在。為治療葡萄球菌在口腔或咽喉中引起的感染或疾患，可將藥物制劑以例如噴霧劑 (例如咽噴霧劑或頰面噴霧劑)、粉末、片劑、扁囊劑、顆粒、膠囊、優(yōu)選的介質(zhì)中的懸液、漱口劑或飲料、糖漿或溶液的形式來施用。為治療葡萄球菌在皮膚上或皮膚中引起的感染和疾患，將藥物制劑以凝膠、藥膏、 軟膏、泡沫、糊劑、洗液、乳劑、貼片、棒劑、乳膏(例如，洗滌膏)或油懸浮液的形式來施用。為治療葡萄球菌在胃腸道中引起的感染和疾患，將根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑以片劑 (任選持續(xù)釋放的片劑)、膠囊(優(yōu)選腸溶衣和/或結(jié)腸衣膠囊)、懸浮液、溶液、飲料、糖漿或湯的形式來施用。根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑還令人驚奇地被證實防止病毒在上呼吸道中引起的感染和疾患，例如由諸如鼻病毒、冠狀病毒、副流感病毒和腺病毒的這些病毒菌株所引起的。更確切地，僅利用乳桿菌菌株LB21進行的先前實驗已顯示，在130位兒童中與未被施用LB21 的兒童相比在上呼吸道和腸道中發(fā)生的病毒感染減少。根據(jù)本發(fā)明的組合似乎進一步降低了病毒感染的數(shù)量。因此，在一個實施方案中，乳桿菌菌株LB21可用于生產(chǎn)用來治療病毒在上呼吸道引起的感染和疾患的藥物。在另一個實施方案中，乳桿菌菌株LB21和α -血鏈球菌II菌株α 89a的組合可用于相同的目的。對M位患有SOM(分泌性中耳炎)的兒童進行臨床研究，所述兒童在SOM前經(jīng)常發(fā)生病毒感染。將LB21和α 89a的組合作為鼻噴霧劑來施用，且活性劑組中的37位兒童中的 18位(48%)病情有很大好轉(zhuǎn)或痊愈，相比之下安慰劑組中的17位兒童中有3位(17%)。表達“病毒誘導(dǎo)的感染和疾患”意指導(dǎo)致感染的不希望的病毒增殖，比如感冒、咽喉痛、流鼻涕、鼻塞、打噴嚏和咳嗽。在根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑中，可選地在根據(jù)本發(fā)明的藥盒中，所述一種或多種鏈球菌菌株以IO4-IO11Cfu (菌落形成單位)/ml，優(yōu)選105-101QCfu/ml，最優(yōu)選106-109cfu/ml的即用型制劑的總量存在。相應(yīng)地，在根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑中，可選地在根據(jù)本發(fā)明的藥盒中，所述一種或多種乳桿菌菌株以1(^-10^(^11(菌落形成單位)/ml，優(yōu)選IO5-IOiciCfVml,最優(yōu)選 106-109CfU/ml即用型制劑的總量存在。
實施例實施例1體外試驗乳桿菌PBS濾液的生產(chǎn)將乳桿菌LB21在5ml的MRS肉湯中培養(yǎng)(37°C,5% C02，8小時)。將(450 μ 1) 的LB21培養(yǎng)物再接種到含45ml新鮮預(yù)熱的MRS肉湯的6個管中并在37°C和5% CO2下孵育16小時。然后管在20°C下以3800rpm離心20分鐘。棄去上清液并將沉淀重懸于5ml預(yù)熱的PBS中并在37°C，5% CO2下培養(yǎng)5小時。每小時一次輕輕混合管。孵育之后，管在8°C 下以3800rpm離心20分鐘。將所有上清液收集到新管中，并測量p!K4. 0-4. 3)。然后將上清液通過0.22 μ m過濾器無菌過濾。濾液以IOml管中Iml的等分試樣在_20°C貯存待用。對照PBS濾液的生產(chǎn)將25ml PBS溶液的pH值調(diào)節(jié)至4. 3。然后將溶液通過0. 22 μ m過濾器無菌過濾并以IOml管中Iml的等分試樣在_20°C貯存待用。干擾試驗將5種不同的MRSA菌株02、沈、28、四和33 ；分離自MRSA定植的患者)于5ml的 TH肉湯中在37°C下培養(yǎng)6小時。然后，將1 % (50 μ 1)的MRSA培養(yǎng)物再接種到5ml新鮮預(yù)熱的TH肉湯中，且在37°C下孵育17小時。然后將菌株在PBS中稀釋，并添加到LB21PBS濾液中，添加到LB21/鏈球菌(a89a)濾液的混合物中，并添加到PBS中的對照中，終濃度為 104-105cfu/ml的。還將5% TH肉湯添加到所有PBS濾液中。將管在37°C下孵育并在O小時和M小時后取樣。將樣品在適當(dāng)稀釋后培養(yǎng)于大豆胰蛋白胨瓊脂板和血瓊脂培養(yǎng)板上。 單獨的LB21上清液抑制所有MRSA的生長并還殺滅其中的一種(MRSA^)，而LB21和α 89a 的組合在M小時內(nèi)殺滅所有的被試驗的MRSA，如表格中標(biāo)題為“活性劑上清液”一列所示。 在對照組中，MRSA生長至約107-108cfu/ml。LB21上清液，和LB21上清液+ α 89a上清液混合物的干擾；pH 4. 權(quán)利要求
1.一種在人類和動物中用于葡萄球菌引起的感染或疾患的預(yù)防和治療的藥物制劑，其中，所述藥物制劑包括以下的組合a)一種或多種活的α-鏈球菌菌株，所述α-鏈球菌菌株選自由登錄號為NCIMB 40104、NCIMB 40105、NCIMB 40106 和 NCIMB 40873 的血鏈球菌 II 菌株、登錄號為 NCIMB 40107和NCIMB 40874的緩癥鏈球菌菌株、登錄號為NCIMB 40875和NCIMB 40876的口腔鏈球菌菌株、登錄號為NCIMB 40157的乳鏈球菌菌株L1A，和一種或多種具有相同的或基本相似的作用的它們的變體組成的組；和b)一種或多種活的乳桿菌菌株，所述乳桿菌菌株選自由登錄號為NCIMB 40564的鼠李糖乳桿菌菌株LB21、登錄號為DSM 17852的植物乳桿菌菌株LB3和登錄號為DSM 17853的植物乳桿菌菌株LB7和一種或多種具有相同的或基本相似的作用的它們的變體組成的組；在其中所述菌株維持其存活力的至少一種藥學(xué)上可接受的介質(zhì)中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其中所述藥物制劑包括以下的組合a)登錄號為 NCIMB 40104和NCIMB 40106的血鏈球菌菌株，和登錄號為NCIMB 40876的口腔鏈球菌菌株，和b)登錄號為NCIMB 40564的鼠李糖乳桿菌菌株LB21。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物制劑，其中所述藥物制劑包括以下的組合登錄號為 NCIMB 40104的血鏈球菌II菌株和登錄號為NCIMB 40564的鼠李糖乳桿菌菌株LB21。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的藥物制劑，其中所述一種或多種鏈球菌菌株以 104-10"、優(yōu)選105-101(1、最優(yōu)選IO6-IO9菌落形成單位/毫升即用型制劑的總量存在，且其中所述一種或多種乳桿菌菌株以104-10"、優(yōu)選105-101(1、最優(yōu)選IO6-IO9菌落形成單位/毫升即用型制劑的總量存在。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的藥物制劑，其中所述一種或多種具有相同或基本相同作用的乳桿菌菌株的變體是LB45、LB64、LB66、LB87、LB99、LB931和LB Ess-I。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的藥物制劑，其中所述藥物制劑為口服制劑、口腔粘膜制劑、牙齦制劑、鼻制劑、牙科制劑、皮膚制劑、陰道制劑、直腸制劑或耳制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物制劑，其中所述藥物制劑具有以下形式粉末、顆粒、扁囊齊 、膠囊、片齊 、糊齊 、乳膏、凝膠、軟膏、藥膏、泡沫、糊齊 、洗液、乳膏、油懸浮液、噴霧齊U、 懸浮液、溶液、乳液、貼片、棒劑、噴霧劑，優(yōu)選鼻噴霧劑或口腔噴霧劑、漱口劑、或飲料或溶液。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的藥物制劑，其中所述藥學(xué)上可接受的介質(zhì)是變酸或發(fā)酵的乳制品、優(yōu)選酸奶、酸乳酪和牛奶，或果汁、冰淇淋、湯和水果飲料。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的藥物制劑，其中當(dāng)將根據(jù)本發(fā)明的制劑施用給動物時，所述藥學(xué)上可接受的介質(zhì)是動物飼料，優(yōu)選地為乳清、干飼料或濃縮懸液。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的藥物制劑，其中所述藥物制劑中的所述菌株是凍干的。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的藥物制劑，其中所述藥物制劑存在于NaCl溶液、葡萄糖溶液或脫脂乳中。
12.一種用于葡萄球菌引起的感染和疾患的預(yù)防和治療的藥盒，其中所述藥盒包括兩種或多種獨立制劑，所述兩種或更多種獨立制劑預(yù)期被同時或在預(yù)定的時間段內(nèi)，優(yōu)選24小時內(nèi)依次被施用給需要其的人或動物，其中所述藥盒包括根據(jù)權(quán)利要求la)的菌株和根據(jù)權(quán)利要求lb)的菌株的組合，其中所述藥盒中的每種制劑包括至少一種根據(jù)權(quán)利要求 la)的菌株和/或至少一種根據(jù)權(quán)利要求lb)的菌株。
13.一種用于葡萄球菌引起的感染或疾患的預(yù)防和/或治療的方法，其中將根據(jù)權(quán)利要求1-11所述的藥物制劑或根據(jù)權(quán)利要求12的藥盒施用給需要其的人或動物，優(yōu)選MRSA攜帶者。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述葡萄球菌引起的感染或疾患是由金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和/或腐生葡萄球菌菌株引起的，尤其是多重抗性的金黃色葡萄球菌(MRSA)菌株引起的。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述葡萄球菌引起的感染或疾患存在于口腔區(qū)域、耳區(qū)域、鼻區(qū)域和/或咽區(qū)域中、胃腸道中、皮膚上、或體內(nèi)的其它部位或器官。
16.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述葡萄球菌引起的感染或疾患是輕微皮膚感染以及威脅生命的疾病，所述輕微皮膚感染優(yōu)選丘疹、膿皰瘡、瘡、蜂窩組織炎毛囊炎、癤、 癰、燙傷樣皮膚綜合征和膿腫，所述威脅生命的疾病優(yōu)選肺炎、腦膜炎、骨髓炎、心內(nèi)膜炎、 中毒性休克綜合征(TSQ和敗血病。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項所述的藥物制劑或根據(jù)權(quán)利要求12的藥盒制備用于預(yù)防和/或治療在人和動物中葡萄球菌引起的感染或疾患的藥物的用途。
18.根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項所述的藥物制劑或根據(jù)權(quán)利要求12的藥盒制備用于預(yù)防和/或治療上呼吸道病毒感染的藥物的用途，所述上呼吸道病毒感染優(yōu)選地為鼻病毒、冠狀病毒、副流感病毒和腺病毒。
全文摘要
公開了在人類和動物中用于葡萄球菌引起的感染或疾患的預(yù)防和治療的藥物制劑，以及用于葡萄球菌引起的感染和疾患的預(yù)防和治療的藥盒和葡萄球菌引起的感染和疾患的預(yù)防和治療的方法，及用途，其中該藥物制劑包含以下的組合a)一種或多種活的α-鏈球菌菌株，所述α-鏈球菌菌株選自由登錄號為NCIMB 40104、NCIMB 40105、NCIMB 40106和NCIMB 40873的血鏈球菌II菌株、登錄號為NCIMB 40107和NCIMB40874的緩癥鏈球菌菌株、登錄號為NCIMB 40875和NCIMB 40876的口腔鏈球菌菌株、登錄號為NCIMB 40157的乳鏈球菌菌株L1A，和具有相同的或基本相似的作用的它們的一種或多種變體組成的組；和b)一種或多種活的乳桿菌菌株，所述乳桿菌菌株選自由登錄號為NCIMB 40564的鼠李糖乳桿菌菌株LB21、登錄號為DSM 17852的植物乳桿菌菌株LB3和登錄號為DSM 17853的植物乳桿菌菌株LB7和一種或多種具有相同的或基本相似的作用的它們的變體組成的組；在其中所述菌株維持它們的存活力的至少一種藥學(xué)上可接受的介質(zhì)中。
文檔編號A61P11/00GK102215849SQ200980145762
公開日2011年10月12日 申請日期2009年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月17日
發(fā)明者克里斯蒂安·魯斯, 艾瓦·格蘭哈肯森 申請人:埃索姆股份公司