專(zhuān)利名稱(chēng)：用于調(diào)節(jié)慢性炎癥反應(yīng)和治療自身免疫性疾病的源自il-4的肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及能夠與IL-4受體結(jié)合并且抑制巨噬細(xì)胞活化，并由此防止炎癥反應(yīng)發(fā)生的源自細(xì)胞因子白介素-4(IL-4)的小肽。本發(fā)明還涉及所述肽用于生產(chǎn)用于治療不同病理狀況的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
與炎癥有關(guān)的異常包括一大組不相關(guān)的病變組，這些病變是多種人類(lèi)疾病的基礎(chǔ)。與炎癥有關(guān)的病變的實(shí)例包括哮喘、慢性炎癥和包括類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎在內(nèi)的自身免疫性疾病。慢性炎癥是以同時(shí)發(fā)生的活動(dòng)性炎癥、組織受損和修復(fù)嘗試(attempts at repair)為特征的病理狀況。類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是慢性全身性自身免疫性病變，其使免疫系統(tǒng)攻擊關(guān)節(jié)，在關(guān)節(jié)處引起炎癥(關(guān)節(jié)炎)和損傷。類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎還可以破壞諸如肺和皮膚的一些器官，其可能是致殘且疼痛的病癥，可能導(dǎo)致機(jī)能和運(yùn)動(dòng)的基本喪失。利用血液檢測(cè)(尤其是被稱(chēng)為類(lèi)風(fēng)濕因子的測(cè)試)和χ-射線診斷類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。在自身免疫性疾病中觀察到的炎癥反應(yīng)涉及細(xì)胞和可溶性作用子(cellular and soluble players)兩者。RA的原因并不知曉。RA涉及多種細(xì)胞、細(xì)胞因子和酶的復(fù)雜的相互作用。當(dāng)刺激性抗原獲得進(jìn)入關(guān)節(jié)的入口時(shí)觸發(fā)免疫應(yīng)答，產(chǎn)生RA疾病。所述抗原性刺激激活⑶4+淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)。一旦⑶4+細(xì)胞被活化，則發(fā)生包括巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的刺激在內(nèi)的復(fù)雜的系列生物學(xué)事件?；罨木奘杉?xì)胞分泌細(xì)胞因子，例如白介素-I(IL-I)、IL-6、IL-8、IL-15和腫瘤壞死因子-α (TNF- α ) (Martinez et al. ,2008)。白介素-4(IL_4)由⑶4+T(Th2細(xì)胞)細(xì)胞分泌，其是作用于多種細(xì)胞類(lèi)型和組織的多向性細(xì)胞因子。IL-4對(duì)免疫細(xì)胞的作用引起B(yǎng)細(xì)胞的活化和生長(zhǎng)、IgG和IgE的產(chǎn)生、II型MHC的誘導(dǎo)、T細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活、Th2分化、肥大細(xì)胞生長(zhǎng)的增強(qiáng)、NK細(xì)胞中IL-2 和IL-12誘導(dǎo)的干擾素-Y (INF- y )分泌的增強(qiáng)、單核細(xì)胞和Mo-衍生的樹(shù)突細(xì)胞中Cfe 和C3a的下調(diào)以及巨噬細(xì)胞活化的抑制(Agnello et al. ,2003 ；Szehedi et al. ,2003 ； Roland,2003)。一些實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)通過(guò)NMR和X-射線衍射法兩者測(cè)定了重組人IL-4的結(jié)構(gòu)，其具有典型的4螺旋束狀細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)(Muller et al.，1995)。與其它細(xì)胞因子類(lèi)似，IL-4通過(guò)與細(xì)胞表面的受體結(jié)合而發(fā)揮其生物學(xué)作用。一個(gè)受體復(fù)合體由兩個(gè)組分IL-4Ra鏈 (IL-4R α )和 IL-2R Y 鏈(Y c，細(xì)胞因子 IL-2、IL-7、IL-9、IL-15 和 IL-21 共有)構(gòu)成，被稱(chēng)為I型IL-4R，而另一個(gè)受體復(fù)合體由IL-4Ra和IL13 α鏈(IL_13Ra 1)構(gòu)成，被稱(chēng)為II 型IL-4R。由于Y c在多數(shù)造血細(xì)胞和免疫細(xì)胞上均有表達(dá)，IL-4被認(rèn)為是通過(guò)I型IL-4R 作用于這些細(xì)胞的。相比之下，IL-13Ra 1的表達(dá)限于在造血細(xì)胞和免疫細(xì)胞中諸如B細(xì)胞的一些譜系細(xì)胞，但在非免疫細(xì)胞上普遍檢測(cè)得到(Izuhara et al.，2002)。因此，IL4 在非免疫細(xì)胞上通過(guò)II型IL-4R/IL-13R發(fā)揮作用。
IL-4與其受體a鏈(IL_4Ra)的結(jié)合是用于產(chǎn)生Th2_控制的早期免疫反應(yīng)的重要事件。在人分辨率(PDB ID =IIAR)測(cè)定人IL-4和IL4-BP間的中間復(fù)合體的晶體結(jié)構(gòu)。結(jié)果揭示了所述兩個(gè)蛋白的新的空間方位，在結(jié)合受體的IL-4中小而意料外的構(gòu)象變化以及反式相互作用殘基的三個(gè)獨(dú)立簇的界面(Hage et al.，1999)。I14_I14r_共有的γ 三元復(fù)合體的晶體結(jié)構(gòu)最近得到解決(PDB ID :3BPL ；LaPorte et al.，2008)。重組IL-4已經(jīng)通過(guò)了一些臨床試驗(yàn)。已經(jīng)證明IL-4有益于牛皮癬患者，其可有效糾正免疫功能的失衡(Martin 2003)。已經(jīng)在具有多種惡性病的人患者中在I期和II 期研究中對(duì)源自大腸桿菌的重組人白介素-4(rhuIL-4)的安全性和耐受性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。臨床試驗(yàn)已經(jīng)證明，在高達(dá)5 μ g/kg/天和高達(dá)10 μ g/kg每周3次的劑量下，皮下施用后， rhuIL-4是安全的且被很好地耐受。雖然在獼猴中的臨床前安全性研究中證明在重復(fù)每日施用rhuIL-4后具有一些不利的作用，但整體上在人患者中沒(méi)有觀察到類(lèi)似作用(Leach et al.，1997)。對(duì)最常見(jiàn)的毒性進(jìn)行了評(píng)價(jià)肝功能測(cè)試、惡心/嘔吐/腹瀉、不舒服/疲勞、 水腫、頭痛、肌痛/關(guān)節(jié)痛和發(fā)熱/發(fā)冷。盡管具有有前景的臨床前生長(zhǎng)抑制和免疫調(diào)節(jié)作用，但該劑量和時(shí)間表的IL-4僅顯示低的抗腫瘤活性。一些人自身免疫性疾病和炎癥性疾病仍通過(guò)皮質(zhì)類(lèi)固醇和常規(guī)免疫抑制的組合進(jìn)行治療。對(duì)這些疾病的發(fā)病機(jī)理的更好理解導(dǎo)致了更特異的療法。在這些療法中，重組人源化蛋白被認(rèn)為是有希望的療法。然而，基于重組蛋白的藥物具有一些缺點(diǎn)，包括生產(chǎn)成本高、批次間的變異度高和儲(chǔ)存過(guò)程中的變性。發(fā)明概述本發(fā)明涉及能夠化學(xué)合成并且用作IL-4的功能性模擬物的IL-4的片段。本發(fā)明涉及包含由源自IL-4或具有至少75%同一性的變體的最多35個(gè)連續(xù)氨基酸殘基組成的分離肽的化合物。根據(jù)本發(fā)明，包含此氨基酸序列的化合物能夠i)結(jié)合IL-4 受體；ii)抑制炎癥反應(yīng)；iii)抑制巨噬細(xì)胞的活化；iii)活化B細(xì)胞；iv)活化T細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活；ν)下調(diào)單核細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞中的Cfe和C3a ；vi)調(diào)節(jié)IL-4受體的活性。因此，本發(fā)明另一方面涉及本發(fā)明的化合物用作藥物的用途以及用于制備治療病癥或疾病的藥物的用途，其中i)結(jié)合IL-4受體；ii)抑制炎癥反應(yīng)；iii)抑制巨噬細(xì)胞的活化；iii)活化B細(xì)胞；iv)活化T細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活；ν)下調(diào)單核細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞中的 C5a和C3a ；vi)調(diào)節(jié)IL-4受體的活性是所述治療的一部分。再一方面，本發(fā)明的肽或包含所述肽的化合物可用于生產(chǎn)抗體。此類(lèi)抗體將與本發(fā)明的肽中的表位結(jié)合。本發(fā)明進(jìn)一步涉及藥物組合物，其包含本發(fā)明的肽或能夠識(shí)別本發(fā)明肽中的表位的抗體。本發(fā)明還涉及病癥的治療方法，其中i)結(jié)合IL-4受體；ii)抑制炎癥反應(yīng)；iii) 抑制巨噬細(xì)胞的活化；iii)活化B細(xì)胞；iv)活化T細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活；ν)下調(diào)單核細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞中的Cfe和C3a ；vi)調(diào)節(jié)IL-4受體的活性是有益的，所述方法包括向有此需要的個(gè)體施用本發(fā)明的化合物，本發(fā)明的抗體或包含所述肽序列、所述化合物或所述抗體的藥物組合物的步驟。


圖1 與IL-4Ra (PDB ID =IIAR)的外結(jié)構(gòu)域復(fù)合的IL_4的結(jié)構(gòu)。灰色顯示肽 1 (SEQ ID NO :2)(左)和肽 3 (SEQ ID NO :3)(右)的位置。圖2 與IL_4Ra (PDB ID =IIAR)的外結(jié)構(gòu)域復(fù)合的IL_4的結(jié)構(gòu)?；疑@示肽 3a (SEQ ID NO :1)(左)和肽 4 (SEQ ID NO :4)(右)的位置。圖3 與γ c共有受體(PDB ID :3BPL)的外結(jié)構(gòu)域復(fù)合的IL-4的結(jié)構(gòu)?；疑@示肽 1 (SEQ ID NO :2)(左)和肽 3 (SEQ ID NO :3)(右)的位置。圖4 與IL-4Ra和γ c共有受體(PDB ID :3BPL)的外結(jié)構(gòu)域復(fù)合的IL-4的結(jié)構(gòu)。 灰色顯示肽3a (SEQ ID NO :1)(左)和肽4 (SEQ ID NO :4)(右)的位置。圖5 源自IL-4的肽Phl (SEQ ID NO 2)對(duì)小腦顆粒神經(jīng)元培養(yǎng)中的神經(jīng)突增生的作用。使用P2d肽作為陽(yáng)性對(duì)照(參見(jiàn)Soroka et al.，2002)。 圖6 :Ph2 (SEQ ID NO :3)對(duì)小腦顆粒神經(jīng)元培養(yǎng)中的神經(jīng)突增生(neurite outgrowth)的作用。與對(duì)照相比的顯著性水平示于以下= P <0.001。進(jìn)行7次獨(dú)
立試驗(yàn)。圖7 當(dāng)用Wi2(SEQ ID NO 3)預(yù)處理時(shí)巨噬細(xì)胞對(duì)TNF-α的分泌。A 當(dāng)不用Ph2預(yù)處理或者IFN- γ活化時(shí)(條紋柱)，當(dāng)用0. 01 μ g/ml IFN- γ活化時(shí)(白柱)或當(dāng)用100 μ M皮質(zhì)醇預(yù)處理并用0. 01 μ g/ml IFN- γ活化時(shí)(黑柱)，從巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量的柱形圖。與不進(jìn)行預(yù)處理、活化的巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量(白柱)相比的顯著性水平示于以下。*** = ρ < 0. 001。B 當(dāng)用多種濃度的Ph2預(yù)處理然后用0. 01 μ g/ml IFN- γ活化時(shí)，從巨噬細(xì)胞釋放的TNF- α量的柱形圖。與不進(jìn)行預(yù)處理、 活化的巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量(0柱)相比的顯著性水平示于以下。*** = ρ < 0. 001。 兩圖中的結(jié)果均表示為僅用IFN-Y活化的未處理對(duì)照的百分比。顯示針對(duì)對(duì)照以及Wi2 濃度為9、27、81和243 μ g/ml的6次獨(dú)立試驗(yàn)的結(jié)果。圖 8 :Ph2 (SEQ ID NO :3)與 IL4r α 的結(jié)合。通過(guò)采用表面等離子共振的結(jié)合研究。Α:作為對(duì)照，通過(guò)將IL4ra固定在芯片上然后使含IL4的溶液在芯片上流動(dòng)，對(duì)IL4和IL4ra間的結(jié)合進(jìn)行研究。B 通過(guò)將拖2 固定在芯片上然后使含IL4ra的溶液在芯片上流動(dòng)，對(duì)Ph2和IL4r α間的結(jié)合進(jìn)行研究。 分析結(jié)果并利用計(jì)算機(jī)軟件BIAevaluation評(píng)價(jià)KD。圖9 :Ph3 (SEQ ID NO :1)對(duì)小腦顆粒神經(jīng)元培養(yǎng)中的神經(jīng)突增生的作用。與對(duì)照相比的顯著性水平示于以下** = ρ < 0. 01。進(jìn)行七次獨(dú)立試驗(yàn)。圖10 當(dāng)用Ph3(SEQ ID NO 1)預(yù)處理時(shí)巨噬細(xì)胞對(duì)TNF-α的分泌。A 當(dāng)不用Ph3預(yù)處理或者IFN- γ活化時(shí)(條紋柱)，當(dāng)用0. 01 μ g/ml IFN- γ活化時(shí)(白柱)或當(dāng)用100 μ M皮質(zhì)醇預(yù)處理并用0. 01 μ g/ml IFN- γ活化時(shí)(黑柱)，從巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量的柱形圖。與不進(jìn)行預(yù)處理、活化的巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量(白柱)相比的顯著性水平示于以下。*** = ρ < 0. 001。B 當(dāng)用多種濃度的Ph3預(yù)處理然后用0. 01 μ g/ml IFN- γ活化時(shí)，從巨噬細(xì)胞釋放的TNF- α量的柱形圖。與不進(jìn)行預(yù)處理、 活化的巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量(0柱)相比的顯著性水平示于以下。*** = ρ < 0. 001。 兩圖中的結(jié)果均表示為僅用IFN-Y活化的未處理對(duì)照的百分比。顯示針對(duì)對(duì)照以及Wi3 濃度為9、27和81 μ g/ml的6次獨(dú)立試驗(yàn)的結(jié)果。圖 11 :Ph3 (SEQ ID NO :1)與 IL4r α 的結(jié)合。
通過(guò)采用表面等離子共振的結(jié)合研究。A:作為對(duì)照，通過(guò)將IL4ra固定在芯片上然后使含IL4的溶液在芯片上流動(dòng)，對(duì)IL4和IL4ra間的結(jié)合進(jìn)行研究。B 通過(guò)將拖3 固定在芯片上然后使含IL4ra的溶液在芯片上流動(dòng)，對(duì)Ph3和IL4r α間的結(jié)合進(jìn)行研究。 分析結(jié)果并利用計(jì)算機(jī)軟件BIAevaluation評(píng)價(jià)KD。圖12 :Ph4(SEQ ID NO 4)對(duì)小腦顆粒神經(jīng)元培養(yǎng)中的神經(jīng)突增生的作用。與對(duì)照相比的顯著性水平示于以下* = ρ < 0. 05，林=ρ < 0. 01。進(jìn)行5次獨(dú)立試驗(yàn)。圖13 當(dāng)用Ph5(SEQ ID NO 5)預(yù)處理時(shí)巨噬細(xì)胞對(duì)TNF-α的分泌。A 當(dāng)不用Ph4預(yù)處理或者IFN- γ活化時(shí)(條紋柱)，當(dāng)用0. 01 μ g/ml IFN- γ活化時(shí)(白柱)和當(dāng)用100 μ M皮質(zhì)醇預(yù)處理并用0. 01 μ g/ml IFN- γ活化時(shí)(黑柱)，從巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量的柱形圖。B:當(dāng)用9 μ g/ml Ph5預(yù)處理然后用0. 01 μ g/ml IFN-γ 活化時(shí)，從巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量的柱形圖。進(jìn)行兩次獨(dú)立試驗(yàn)。圖14 當(dāng)用Ph6(SEQ ID NO 6)預(yù)處理時(shí)巨噬細(xì)胞對(duì)TNF-α的分泌。A 當(dāng)不用Ph4預(yù)處理或者IFN- γ活化時(shí)(條紋柱)，當(dāng)用0. 01 μ g/ml IFN- γ活化時(shí)(白柱)和當(dāng)用100 μ M皮質(zhì)醇預(yù)處理并用0. 01 μ g/ml IFN- γ活化時(shí)(黑柱)，從巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量的柱形圖。B:當(dāng)用多種濃度的Ph6預(yù)處理然后用0.01 μ g/ml IFN-γ 活化時(shí)，從巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量的柱形圖。進(jìn)行兩次獨(dú)立試驗(yàn)。圖15 當(dāng)用Ph8(SEQ ID NO 1)預(yù)處理時(shí)巨噬細(xì)胞對(duì)TNF-α的分泌。A 當(dāng)不用Ph3預(yù)處理或者IFN- γ活化時(shí)(條紋柱)，當(dāng)用0. 01 μ g/ml IFN- γ活化時(shí)(白柱)或當(dāng)用100 μ M皮質(zhì)醇預(yù)處理并用0. 01 μ g/ml IFN- γ活化時(shí)(黑柱)，從巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量的柱形圖。與不進(jìn)行預(yù)處理、活化的巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量(白柱)相比的顯著性水平示于以下。*** = ρ < 0. 001。B 當(dāng)用多種濃度的PhS預(yù)處理然后用0. 01 μ g/ml IFN- γ活化時(shí)，從巨噬細(xì)胞釋放的TNF- α量的柱形圖。與不進(jìn)行預(yù)處理、 活化的巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量(0柱)相比的顯著性水平示于以下。*** = ρ < 0. 001。 兩圖中的結(jié)果均表示為僅用IFN-Y活化的未處理對(duì)照的百分比。顯示針對(duì)對(duì)照以及WiS 濃度為9、27、81和243 μ g/ml的6次獨(dú)立試驗(yàn)的結(jié)果。圖16 當(dāng)用WilO (SEQ ID NO 1)預(yù)處理時(shí)巨噬細(xì)胞對(duì)TNF-α的分泌。A 當(dāng)不用PhlO預(yù)處理或者IFN-γ活化時(shí)(條紋柱)，當(dāng)用0.01 μ g/ml IFN-γ活化時(shí)(白柱)或當(dāng)用100 μ M皮質(zhì)醇預(yù)處理并用0. 01 μ g/ml IFN- γ活化時(shí)(黑柱)，從巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量的柱形圖。與不進(jìn)行預(yù)處理、活化的巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量(白柱)相比的顯著性水平示于以下。= ρ < 0. 01。B 當(dāng)用多種濃度的WilO預(yù)處理然后用0. 01 μ g/ml IFN- γ活化時(shí)，從巨噬細(xì)胞釋放的TNF- α量的柱形圖。與不進(jìn)行預(yù)處理、活化的巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量(0柱)相比的顯著性水平示于以下。** = ρ < 0. 01。兩圖中的結(jié)果均表示為僅用IFN-Y活化的未處理對(duì)照的百分比。顯示針對(duì)對(duì)照以及WilO濃度為9、27、81和243 μ g/ml的4次獨(dú)立試驗(yàn)的結(jié)果。僅兩次試驗(yàn)利用濃度為M μ g/ml的 PhlO進(jìn)行，這些數(shù)據(jù)沒(méi)有包括在統(tǒng)計(jì)學(xué)分析中。圖17 當(dāng)用Wil2(SEQ ID NO :19)預(yù)處理時(shí)巨噬細(xì)胞對(duì)TNF-α的分泌。A 當(dāng)不用Phl2預(yù)處理或者IFN-Y活化時(shí)(條紋柱)，當(dāng)用0.01 μ g/ml IFN-γ 活化時(shí)(白柱)或當(dāng)用100 μ M皮質(zhì)醇預(yù)處理并用0. 01 μ g/ml IFN- γ活化時(shí)(黑柱)，從巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量的柱形圖。B:當(dāng)用多種濃度的拖12預(yù)處理然后用0.01 μ g/ml
9IFN-Y活化時(shí)，從巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α量的柱形圖。進(jìn)行兩次獨(dú)立試驗(yàn)。發(fā)明詳述本發(fā)明的化合物可以源自白介素-4的片段，或者其可以源自白介素-4的變體，例如天然的或重組的白介素-4變體，例如通過(guò)選擇性剪接或遺傳多態(tài)性產(chǎn)生的白介素-4的變體，或者任何類(lèi)型的重組白介素-4。本發(fā)明的肽是以下肽其能夠與IL-4受體相互作用，調(diào)節(jié)IL-4受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)， 活化B細(xì)胞，活化T細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活，下調(diào)單核細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞中的Cfe和C3a或者抑制巨噬細(xì)胞活化。術(shù)語(yǔ)“調(diào)節(jié)”表示諸如抑制或刺激的變化。術(shù)語(yǔ)“相互作用”表示諸如在所述肽與所作用的IL-4受體之間的結(jié)合的作用。氨基酸序列本發(fā)明的組合物包含由源自IL-4或其片段或變體的連續(xù)氨基酸序列組成的肽。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物可以包含由源自白介素_4(SEQ ID :38)或其片段或者與SEQ ID 38或其片段具有至少70%同一性的變體的最多35個(gè)連續(xù)氨基酸組成的肽。人IL-4 前體的氨基酸序歹Ij (Swiss-Prot ID :P05112)為MGLTSQLLPP LFFLLACAGN FVHGHKCDIT LQEIIKTLNSLTEQKTLCTE LTVTDIFAAS KNTTEKETFC RAATVLRQFYSHHEKDTRCL GATAQQFHRH KQLIRFLKRL DRNLffGLAGLNSCPVKEANQ STLENFLERL KTIMREKYSK CSS(SEQ ID NO 38)本發(fā)明的肽由最多35個(gè)連續(xù)氨基酸殘基組成，例如3-35個(gè)氨基酸殘基，例如 3-30個(gè)氨基酸殘基、例如3-25個(gè)氨基酸殘基、例如5-25個(gè)氨基酸殘基、例如7_25個(gè)氨基酸殘基、例如8-25個(gè)氨基酸殘基、例如10-25個(gè)氨基酸殘基或者12-25個(gè)氨基酸殘基，例如 14-25個(gè)氨基酸殘基組成。優(yōu)選包含5-25個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基的序列。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的所述肽包含源自IL-4的α -螺旋的最多35個(gè)連續(xù)的氨基酸。術(shù)語(yǔ)“ α -螺旋”表示蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的共有基序，所述α -螺旋是右手或左手螺旋構(gòu)象，其中每一個(gè)骨架N-H基團(tuán)都為之前的四個(gè)氨基酸殘基的骨架C = O基團(tuán)貢獻(xiàn)氫鍵。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的所述肽包含具有下式的序列Χ1-Χ2_Χ3，其中Xl 為 L，Χ2為I、Q、G、T或帶電荷的氨基酸，并且X3為Q、T或帶電荷的氨基酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，X2為I或Q。在更優(yōu)選的實(shí)施方式中，X2為I。在另一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方式中，X2為Q。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，X2為帶電荷的氨基酸。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，X3為帶電荷的氨基酸。
在更優(yōu)選的實(shí)施方式中，X3為R或E。在一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施方式中，X3為R。在另一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方式中，X3為E。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，X3為Q或T。在甚至更優(yōu)選的實(shí)施方式中，Xl為L(zhǎng)，X2為I，X3為R。在另一個(gè)甚至更優(yōu)選的實(shí)施方式中，Xl為L(zhǎng)，X2為Q，X3為E。在最優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的所述肽由選自以下氨基酸序列之一或其變體或
片段的氨基酸序列組成
權(quán)利要求
1.化合物，其包含由最多35個(gè)連續(xù)氨基酸殘基組成的肽，所述連續(xù)氨基酸殘基源自白介素-4(SEQ ID NO :38)或其片段或者與SEQ ID :38或其片段具有至少70%同一性的變體。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述肽包含式X1-X2-X3的序列，其中 Xl 為 L;X2為I、Q、G、T或帶電荷的氨基酸；和 X3為Q、T或帶電荷的氨基酸。
3.如權(quán)利要求2所述的化合物，其中X2為I或Q。
4.如權(quán)利要求3所述的化合物，其中X2為I。
5.如權(quán)利要求3所述的化合物，其中X2為Q。
6.如權(quán)利要求2所述的化合物，其中X2為帶電荷的氨基酸。
7.如權(quán)利要求2-6中任一項(xiàng)所述的化合物，其中X3是帶電荷的氨基酸。
8.如權(quán)利要求7所述的化合物，其中X3為R或E。
9.如權(quán)利要求8所述的化合物，其中X3為R。
10.如權(quán)利要求8所述的化合物，其中X3為E。
11.如權(quán)利要求2-6中任一項(xiàng)所述的化合物，其中X3為Q或T。
12.如權(quán)利要求2所述的化合物，其中Xl為L(zhǎng)，X2為I，X3為R。
13.如權(quán)利要求2所述的化合物，其中Xl為L(zhǎng)，X2為Q，X3為E。
14.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的化合物，其中，所述肽能夠與IL-4受體相互作用。
15.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的化合物，其中，所述肽包含IL-4的α-螺旋的一部分。
16.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的化合物，其中，所述肽能夠調(diào)節(jié)IL-4受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
17.如權(quán)利要求16所述的化合物，其中，所述肽能夠刺激IL-4受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
18.如權(quán)利要求16所述的化合物，其中，所述肽能夠抑制IL-4受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
19.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的化合物，其中，所述肽包含以下序列之一或其片段或變體AQFHRHKQLIRFLKRA(SEQ ID NO 1) AITLQEIIKTLNSA(SEQ ID NO 2) ARFLKRLDRNLffGG(SEQ ID NO 3) AERLKTIMREKYSKS(SEQ ID NO 4) LQEIKTLN(SEQ ID NO 5) KRLQQNLFGG(SEQ ID NO 6) Ac-AQFHRHKQLIRFLKRA(SEQ ID NO :7) QEIIKKL(SEQ ID NO :8) AIQNQEEIKYLNS(SEQ ID NO :9) AIILQEI(SEQ ID NO :10) IVLQEII(SEQ ID NO :11) TLGEIIKGVNS(SEQ ID NO :12) VTLIDHSEEIFKTLN(SEQ ID NO :13) LQERIKSLN(SEQ ID NO :14)RLDRENVAVYNLff(SEQ ID NO 15) LRSLDRNL(SEQ ID NO 16) RLLRLDRN(SEQ ID NO :17) RFLKRYFYNLEENL(SEQ ID NO :18) RNKQVIDSLAKFLKR(SEQ ID NO :19) RHKALIR(SEQ ID NO :20) KKLIRYLK(SEQ ID NO :21) RHKTLIR(SEQ ID NO :22) MQDKYSKS(SEQ ID NO :23) AERVKIEQREYKKYS(SEQ ID NO :24) SQLIRFLKRLA(SEQ ID NO :25) TVTDIFAASKNTT(SEQ ID NO 26) TLENFLERLKTA(SEQ ID NO :27) TEKEVLRQFYSA(SEQ ID NO :28) KTLTELTKTLNS(SEQ ID NO 29) AHKEIIKTLNSLQKA(SEQ ID NO :30) AKTLSTELTVTA(SEQ ID NO :31) STLENFLERLA(SEQ ID NO :32) NEERLKTIMRA(SEQ ID NO :33) RAATVLRQFYSR(SEQ ID NO :34) KTLNSLTEQKT(SEQ ID NO 35) AHRHKQLIRA(SEQ ID NO :36)，或 ATAQQFHRHKQA(SEQ ID NO :37)。
20.如權(quán)利要求12所述的化合物，其中，所述肽包含以下序列之一或其片段或變體 AQFHRHKQLIRFLKRA(SEQ ID NO 1)Ac-AQFHRHKQLIRFLKRA(SEQ ID NO :7) RHKALIR(SEQ ID NO :20) KKLIRYLK(SEQ ID NO :21) RHKTLIR(SEQ ID NO :22) SQLIRFLKRLA(SEQ ID NO :25)，或 AHRHKQLIRA(SEQ ID NO :36)。
21.如權(quán)利要求13所述的化合物，其中，所述肽包含以下序列之一或其片段或變體 AITLQEIIKTLNSA(SEQ ID NO 2)LQEIKTLN(SEQ ID NO 5) AIILQEI(SEQ ID NO 10) IVLQEII(SEQ ID NO 11) LQERIKSLN(SEQ ID NO: 14)，或 AHKEIIKTLNSLQKA(SEQ ID NO :30)。
22.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的化合物，其中，所述肽能夠活化B細(xì)胞。
23.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的化合物，其中，所述肽能夠活化T細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活。
24.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的化合物，其中，所述肽能夠下調(diào)在單核細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞中的C5a和C3a。
25.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的化合物，其中，所述肽能夠抑制巨噬細(xì)胞的活化。
26.分離的肽序列，其由以下序列之一或其片段或變體組成 AQFHRHKQLIRFLKRA(SEQ ID NO 1)AITLQEIIKTLNSA(SEQ ID NO 2) ARFLKRLDRNLffGG(SEQ ID NO 3) AERLKTIMREKYSKS(SEQ ID NO 4) LQEIKTLN(SEQ ID NO 5) KRLQQNLFGG(SEQ ID NO 6) Ac-AQFHRHKQLIRFLKRA(SEQ ID NO :7) QEIIKKL(SEQ ID NO :8) AIQNQEEIKYLNS(SEQ ID NO :9) AIILQEI(SEQ ID NO :10) IVLQEII(SEQ ID NO :11) TLGEIIKGVNS(SEQ ID NO :12) VTLIDHSEEIFKTLN(SEQ ID NO :13) LQERIKSLN(SEQ ID NO :14) RLDRENVAVYNLff(SEQ ID NO :15) LRSLDRNL(SEQ ID NO :16) RLLRLDRN(SEQ ID NO :17) RFLKRYFYNLEENL(SEQ ID NO :18) RNKQVIDSLAKFLKR(SEQ ID NO :19) RHKALIR(SEQ ID NO :20) KKLIRYLK(SEQ ID NO :21) RHKTLIR(SEQ ID NO :22) MQDKYSKS (SEQ ID NO: 23)，或 AERVKIEQREYKKYS(SEQ ID NO :24)。
27.藥物組合物，其包含如權(quán)利要求1-25定義的至少一種化合物。
28.權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述的化合物或權(quán)利要求27所述的藥物組合物用于制造藥物的用途。
29.如權(quán)利要求觀所述的用途，其中，所述藥物用于治療其中IL-4受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)是必要的疾病或病癥。
30.如權(quán)利要求觀所述的用途，其中，所述藥物用于治療炎癥性疾病或病癥。
31.如權(quán)利要求30所述的用途，其中，所述藥物用于治療自身免疫性疾病或病癥。
32.如權(quán)利要求30所述的用途，其中，所述藥物用于治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
33.如權(quán)利要求觀-32中任一項(xiàng)所述的用途，其中，所述藥物用于皮下、靜脈內(nèi)、經(jīng)口、鼻、經(jīng)肺給藥、局部給藥，或者胃腸外給藥，其補(bǔ)充有關(guān)節(jié)內(nèi)給藥至關(guān)節(jié)囊內(nèi)或關(guān)節(jié)囊附近。
34.權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述化合物用于生產(chǎn)抗體的用途。
35.抗體，其能夠結(jié)合包含SEQID NO :1-37中至少一個(gè)氨基酸序列的表位。
36.如權(quán)利要求35所述的抗體，其中，所述抗體能夠調(diào)節(jié)IL-4介導(dǎo)的生物活性。
37.權(quán)利要求35-36所述的抗體用于制備治療炎癥性疾病或病癥的藥物的用途。
38.藥物組合物，其包含權(quán)利要求35-36任一項(xiàng)所述的抗體。
39.治療方法，所述方法包括向有此需要的個(gè)體施用有效量的權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述的化合物、權(quán)利要求35所述的抗體或者權(quán)利要求27或38所述的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及能夠與IL-4受體結(jié)合并且抑制巨噬細(xì)胞活化，并由此防止炎癥反應(yīng)發(fā)生的源自細(xì)胞因子白介素-4(IL-4)的小肽。本發(fā)明還涉及所述肽用于生產(chǎn)用于治療不同病理狀況的藥物中的用途。
文檔編號(hào)A61K38/17GK102216323SQ200980145907
公開(kāi)日2011年10月12日 申請(qǐng)日期2009年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月17日
發(fā)明者伊麗莎白·博克, 瓦拉迪米·別列津 申請(qǐng)人:哥本哈根大學(xué)