專利名稱：用于增強(qiáng)對流遞送到中樞神經(jīng)中心的脂質(zhì)體組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種脂質(zhì)體制劑，其通過增強(qiáng)對流遞送系統(tǒng)遞送，并用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。
背景技術(shù)：
對于腦腫瘤患者，全身性遞送治療通常伴隨全身性的副作用，同時在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)只能達(dá)到臨界治療濃度，從而全身性治療的效果受到限制?？捎^察到的缺乏療效的原因主要是由于治療劑穿過血腦屏障的滲透性較差。雖然血腦屏障可能在腫瘤中心被破壞，允許全身性遞送化療藥物大部分地進(jìn)入腫瘤的非活性中心，但屏障在最需要藥物的增長腫瘤邊緣通常保持完整。繞過血腦屏障的一種方法是將治療藥物直接注入中樞神經(jīng)系統(tǒng)。然而，直接注入腦中的藥物的擴(kuò)散性很差。即使從注射位點將小分子藥物移動幾毫米就需要高濃度梯度，而且這種濃度通常是有神經(jīng)毒性的。解決這個問題的一個研發(fā)中的策略是腦內(nèi)直接注射方法，被稱為增強(qiáng)對流遞送(CED)。CED采用正壓在胞外空間產(chǎn)生分散劑，包括治療性大分子(Bobo，R. H.，et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91 :2076-80. ；Chen, Μ. Y.，et al. (1999) J. Neurosurg. 90 :31520)的局部壓力梯度。CED在給定的靶組織內(nèi)可重復(fù)分布， 并在整個分布容積(Vd)內(nèi)產(chǎn)生均勻的藥物濃度(Croteau et al. ,2005 ；Lonser et al.， 2002)。通過CED局部遞送的化療藥物產(chǎn)生了良好的治療效果(Bruce et al.，2000 ；Degen et al. ,2003 ；Kaiser et al. 2000)。然而，多數(shù)直接遞送到神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞毒性藥物具有損害健康細(xì)胞的能力。因此，用于CED給藥進(jìn)入腦腫瘤的好的候選藥物必須具備與健康神經(jīng)細(xì)胞相比對于腫瘤細(xì)胞最高可能的治療指數(shù)。然而脂質(zhì)體藥物遞送提供了避免高峰藥物濃度的潛能，高峰藥物濃度通常伴隨明顯的毒性，而且通過CED給予的脂質(zhì)體包裹喜樹堿藥物的臨床前研究已經(jīng)示出了一些在藥物緩釋中的改善(Moog et al,2002 ；Saito et al, 2006 ；Nobel et al，2006)，聚乙二醇化脂質(zhì)體的使用被認(rèn)為是掩蓋組織結(jié)合位點相互作用必不可少的，且因此增加組織分布容積(Saito et al，2006)。雖然聚乙二醇化脂質(zhì)體成功地克服了脂質(zhì)體/組織的相互作用，但最近已證明聚乙二醇化脂質(zhì)體可能產(chǎn)生不必要的和潛在威脅生命的免疫應(yīng)答(Szebeni等.Q007) J. Liposome Res. 17 :107-117 ;lshida禾口Kiwada(2008) Int J Phartn 354—56—62 Epub Nov 9 2007)。當(dāng)向相同實驗對象給藥兩次時，除了加速血液清除，聚乙二醇化脂質(zhì)體可能會導(dǎo)致非IgE介導(dǎo)的過敏反應(yīng)，其中包括心肺窘迫癥狀(例如呼吸困難、呼吸急促、心跳過速、胸痛、高血壓和低血壓)(Ishida和 Kiwada (2008)，上文，Moghimi 等(2006) FASEB J 202591-3 Epub Oct 25，2006)。因此，所需要的是一種用于增強(qiáng)對流遞送的改進(jìn)的脂質(zhì)體藥物制劑，其能提供增加的組織分布容積，且能避免與聚乙二醇相關(guān)的有問題的免疫原性。發(fā)明概述
本發(fā)明人令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)陰離子脂質(zhì)組分用于聚乙二醇代替物制劑中，脂質(zhì)體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織中可高度對流，如本文所描述并要求的。而且，該制劑顯示出相比較于本領(lǐng)域中使用的聚乙二醇化制劑的藥代動力學(xué)特征，且同時避免與聚乙二醇相關(guān)的有問題的免疫原性。因此，本文提供了通過陰離子脂質(zhì)體制劑的增強(qiáng)對流遞送改進(jìn)的組合物和將治療藥物給藥到中樞神經(jīng)系統(tǒng)的分散的組織中的方法，例如，局部CNS腫瘤。一方面，本文描述了治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的方法，中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病如，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中與死亡或特定神經(jīng)元群功能障礙相關(guān)的疾病。這些方法包括向患有中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病人給藥治療上有效劑量的藥物組合物，其中所述藥物組合物通過增強(qiáng)對流遞送系統(tǒng)局部地遞送到特定神經(jīng)元群，且其中所述藥物組合物包括至少一種包封于非聚乙二醇化脂質(zhì)體的治療劑和至少一種陰離子飽和脂質(zhì)，治療劑包括中性飽和磷脂的混合物，且其中所述藥物組合物的增強(qiáng)對流遞送治療患有中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病人。本發(fā)明中發(fā)現(xiàn)有利的治療劑包括，例如，抗腫瘤藥、碘化合物、毒素(包括蛋白質(zhì)毒素)、包括抑制細(xì)胞生長或細(xì)胞溶解性藥物的細(xì)胞毒性劑、基因和病毒載體、疫苗、合成載體、生長因子、神經(jīng)營養(yǎng)因子、抗病毒、抗生素、神經(jīng)遞質(zhì)、細(xì)胞因子、靶向特定位點損傷的酶和藥物。通過本文提供的組合物和方法可能治療的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病包括，例如，癌癥、傳染病、頭部外傷、脊髓損傷、多發(fā)性硬化癥、路易體癡呆、ALS、溶酶體貯積癥、精神疾病、神經(jīng)退行性疾病、中風(fēng)、癲癇癥、以及其他急性和慢性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。在一個實施例中，本文提供了用于抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤生長，減少中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，殺死一個或多個中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞，和/或治療患有中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的病人的方法。這些方法包括向患有中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的病人給藥治療上有效劑量的藥物組合物，其中所述藥物組合物通過增強(qiáng)對流遞送系統(tǒng)局部地遞送到中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，且其中所述藥物組合物包括至少一種包封于非聚乙二醇化脂質(zhì)體的治療劑和至少一種陰離子飽和脂質(zhì)，治療劑包括中性飽和磷脂的混合物，且其中所述藥物組合物的增強(qiáng)對流遞送抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤生長，減少中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，殺死一個或多個中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞， 和/或治療患有中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的病人。在另一個實施例中，本文提供了抑制或減少癲癇病人的癲癇發(fā)作次數(shù)或發(fā)作時間。這些方法包括向患有癲癇的病人給藥治療上有效劑量的藥物組合物，其中所述藥物組合物通過增強(qiáng)對流遞送系統(tǒng)局部地遞送到顯示異?；蜻^度高滲透物排放的中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的集合，且其中所述藥物組合物包括至少一種包封于非聚乙二醇化脂質(zhì)體的治療劑和至少一種陰離子飽和脂質(zhì)，治療劑包括中性飽和磷脂的混合物，且其中所述藥物組合物的增強(qiáng)對流遞送抑制或減少癲癇病人的癲癇發(fā)作次數(shù)或發(fā)作時間。在一個實施例中，所述治療劑是毒素，例如肽毒素。在一個實施例中，所述肽毒素是ω-芋螺毒素，如ω-芋螺毒素MVIIA或ω-芋螺毒素GVIA。在另一個實施例中，所述毒素是肉毒桿菌毒素，例如，A型肉毒桿菌毒素如BOTOX 或DYSPORT ，B型肉毒桿菌毒素如MYOBLOC 等。在另一個實施例中，所述毒素是μ -芋螺毒素或α -芋螺抑制肽。在一個實施例中，所述藥物組合物還包括至少一種包裹于非聚乙二醇化陰離子脂質(zhì)體的診斷劑(有時稱為“追蹤劑”或“示蹤劑”)，其允許在增強(qiáng)對流遞送期間或之后治療劑分布的可視化。在優(yōu)選實施例中，所述包裹診斷劑的非聚乙二醇化脂質(zhì)體和包裹治療劑
4的非聚乙二醇化脂質(zhì)體由相同的脂質(zhì)組成。因此，在一個實施例中，本文中描述的方法還包括檢測診斷劑的步驟。如本文所述，非聚乙二醇化脂質(zhì)體可能包括一種治療劑。在一個實施例中，所述治療劑是一種不可溶治療劑。在另一個實施例中，所述治療劑是拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑(如喜樹堿及其衍生物)，其包括但不限于拓?fù)洚悩?gòu)酶I/II抑制劑。例如，在一個實施例中，所述治療劑是一種喜樹堿衍生物，選自以下組9-氨基喜樹堿、7-乙基喜樹堿、10-羥基喜樹堿、9-硝基喜樹堿、10，11-甲基非飽和二羥基喜樹堿、9-氯-10，11-甲基非飽和二羥基喜樹堿、依立替康、拓?fù)涮婵怠?-(4-甲基哌嗪亞甲基)-10,11-亞乙二氧基-20( -喜樹堿、 7- (4-甲基哌嗪亞甲基)-10，11-亞甲二氧基-20 (S)-喜樹堿和7- (2- (N-異丙基氨基)乙基)(20 -喜樹堿。在另一實施例中，喜樹堿衍生物選自以下組中依立替康、拓?fù)涮婵怠?7- (4-甲基哌嗪亞甲基)-10，11-亞乙二氧基-20 (S)-喜樹堿、7- (4-甲基哌嗪亞甲基)-10， 11-亞甲二氧基-20(S)_喜樹堿和742-(N-異丙基氨基)乙基M20S)-喜樹堿。在另一個實施例中，喜樹堿是拓?fù)涮婵?。在另一個實施例中，拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑是拓?fù)洚悩?gòu)酶I/II抑制劑，例如， 6-[[2-( 二甲氨基)-乙基]氨基]-3-羥基-7H-茚并[2，l-c]喹啉_7_單鹽酸鹽、偶氮毒素、或3-甲氧基-IlH-吡啶并[3' ,4' _4，5]吡咯并[3，2-c]喹啉-1，4-二酮。在另一個實施例中，所述治療藥物是一種毒素，例如，一種蛋白質(zhì)毒素，如ω-芋螺毒素(如，ω-芋螺毒素MVIIA或ω-芋螺毒素，GVIA)，一種肉毒桿菌毒素(例如，A型肉毒桿菌毒素如BOTOX 或DYSPORT ，B型肉毒桿菌毒素如MYOBLOC )，μ _芋螺毒素，α-芋螺抑制肽等。在一個實施例中，初始藥物濃度至少約為100μ g/mL，優(yōu)選至少約為200 μ g/mL， 更優(yōu)選至少約為300μβ/ιΛ。在另一個實施例中，初始藥物濃度約為2 5mg/ml。在一個實施例中，治療藥物和/或診斷劑與脂質(zhì)的比例約為0. 1 0. 5。在另一個實施例中，治療藥物和/或診斷劑與脂質(zhì)的比例約為0. 1。在另一個實施例中，治療藥物和/或診斷劑與脂質(zhì)的比例約為0. 3。在另一個實施例中，治療藥物和/或診斷劑與脂質(zhì)的比例約為0. 5。在一方面，非聚乙二醇化脂質(zhì)體包括診斷劑。在一個實施例中，所述診斷劑是 MRI(核磁共振成像)磁體。在另一實施例中，所述診斷劑是釓螯合物。在另一個實施例，所述診斷劑選自釓雙胺和羅丹明。在另一個是實施例，所述診斷劑是釓雙胺。本文所述的方法包括脂質(zhì)體制劑的對流增強(qiáng)遞送，脂質(zhì)體制劑包括至少一種治療劑和/或至少一種包封于非聚乙二醇化脂質(zhì)體的診斷劑，非聚乙二醇化脂質(zhì)體由至少一種中性飽和磷脂和至少一種陰離子飽和磷脂的混合物組成。在一個實施例中，所述中性飽和磷脂選自卵磷脂衍生物和其混合物，例如，二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)及其混合物。還可能使用長鏈飽和脂肪，如C20 和C22。在一個實施例中，所述陰離子飽和磷脂從包括磷脂酰甘油衍生物(如二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG))、二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸及其混合物的組中選擇。本文所述的脂質(zhì)體制劑還可能包括其他脂質(zhì)組分，如留醇及其衍生物(如膽固醇 (CHOL))或鞘脂類(如鞘磷脂和鞘糖脂，特別是神經(jīng)節(jié)糖脂)。在優(yōu)選實施例中，脂質(zhì)體制劑將基本上包括或包括至少一種中性飽和磷脂，至少一種陰離子飽和磷脂和穩(wěn)定劑，如膽固醇。在一個實施例中，非聚乙二醇化脂質(zhì)體是由二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)和二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)的組合物組成的。在一個實施例中，非聚乙二醇化脂質(zhì)體包括大約 10 95摩爾百分比的DSPC。在一個實施例中，非聚乙二醇化脂質(zhì)體包括大約5 90摩爾百分比的DSPG。在一個實施例中，非聚乙二醇化脂質(zhì)體還包括膽固醇(CHOL)，例如大約5 45摩爾百分比的膽固醇。在一個優(yōu)選實施例中，脂質(zhì)體包括或主要包括大約60 90摩爾百分比的DSPC，大約5 10摩爾百分比的膽固醇和大約5 30摩爾百分比的DSPG。在一個優(yōu)選實施例中，非聚乙二醇化脂質(zhì)體包括或基本上由摩爾比為7 2 1的DSPC、DSPG和 CHOL組成。在另一個實施例中，非聚乙二醇化脂質(zhì)體包括或基本上由摩爾比為6 :2:2 的DSPC、DSPG和CHOL組成。在另一個實施例中，非聚乙二醇化脂質(zhì)體包括或基本上由摩爾比為 5 2 3 的 DSPC、DSPG 禾口 CHOL 組成。在一個實施例中，本文所述的非聚乙二醇化脂質(zhì)體制劑的增強(qiáng)對流遞送(CED)相比較于自由地給藥的治療藥物的組織分布、毒性和體內(nèi)半衰期，其增強(qiáng)了組織分布，減弱了毒性并延長了體內(nèi)半衰期。在一方面，本發(fā)明提供了套管，其包括本文所述的脂質(zhì)體制劑，例如，包括至少一種包封于非聚乙二醇化脂質(zhì)體的治療劑的脂質(zhì)體制劑，非聚乙二醇化脂質(zhì)體由至少一種中性飽和磷脂和至少一種陰離子飽和磷脂的混合物組成，且其中所述制劑通過增強(qiáng)對流遞送系統(tǒng)(CED)遞送。在另一個實施例中，所述套管還包括脂質(zhì)體制劑，其包括包封于非聚乙二醇化脂質(zhì)體的診斷劑，非聚乙二醇化脂質(zhì)體由至少一種中性飽和磷脂和至少一種陰離子飽和磷脂的混合物組成，且其中所述制劑可能通過增強(qiáng)對流遞送系統(tǒng)(CED)遞送。在另一個實施例中，所述套管包括一脂質(zhì)體制劑，其包括包含治療劑的第一脂質(zhì)體和包含診斷劑的第二脂質(zhì)體，其中第一和第二脂質(zhì)體都是非聚乙二醇化的，其中第一和第二脂質(zhì)體由至少一種中性飽和磷脂和至少一種陰離子飽和磷脂的混合物組成，且其中所述制劑可能通過增強(qiáng)對流遞送系統(tǒng)(CED)遞送。所述套管與到中樞神經(jīng)系統(tǒng)的增強(qiáng)對流遞送相兼容。在一個實施例中，所述套管是免回流設(shè)計的套管。在一方面，本發(fā)明提供了生產(chǎn)本文所述脂質(zhì)體制劑的方法。在一方面，本發(fā)明提供了生產(chǎn)用于治療患有中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的病人的藥物的方法，該藥物包括本文所述脂質(zhì)體制劑。在一個實施例中，所述方法包括通過遠(yuǎn)程裝載將治療藥物或診斷劑包埋于脂質(zhì)體中， 例如，通過硫酸銨梯度。本文所述儀器和方法的其他目的、特征和優(yōu)勢將在下文的詳細(xì)描述和相應(yīng)的顯示本發(fā)明說明性實施例的附圖中變得更加清楚。


圖1A-1F比較了脂質(zhì)組分、藥物濃度和藥物脂質(zhì)比對聚乙二醇化和非聚乙二醇化脂質(zhì)體制劑的拓?fù)涮婵档尼尫盘卣鞯挠绊?。圖2示出了 Ls-TPT制劑和正常腦組織中游離的拓?fù)涮婵档乃幋鷦恿W(xué)。圖3示出了蔗糖對羅丹明脂質(zhì)體對流遞送能力的影響。圖4示出了向紋狀體注入20 μ 1羅丹明裝載的脂質(zhì)體后的分布容積(Vd)。圖5示出了通過治療組的動物存活率。
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圖6示出了通過聯(lián)合治療組和組2 (0. 5mg/mL雙劑量)的動物存活率。圖7示出了通過U87細(xì)胞裝載在腫瘤移植的總存活率。圖8示出了通過聯(lián)合治療組和組2(0.5mg/mL雙劑量)及低U87MG細(xì)胞負(fù)荷 (6. 8 X IO3)的動物存活率。圖9示出了通過聯(lián)合治療組和組2 (0. 5mg/mL雙劑量)及高U87MG細(xì)胞負(fù)荷 (9. 7 X IO5)的動物存活率。圖10示出了在幼鼠腦組織中Ls-TPT-碼頭藍(lán)色DHPE與Ls-Gd-羅丹明-PE融合的分布容積。對于每種制劑，η = 3且每個大腦半球注入20 μ L0圖11示出了在U87MG異種移植鼠的腦組織中Ls-TPT-碼頭藍(lán)色DHPE與Ls-Gd-羅丹明-PE融合的分布容積。對于每種制劑，η = 4且每個大腦半球注入20 μ L0圖12示出了通過治療組的動物存活率(未計入安樂死動物)。圖13示出了通過治療組的動物存活率(計入安樂死動物)。詳細(xì)說明定義如本文中使用的，“脂質(zhì)體”是指包含包埋水相體積的脂質(zhì)雙分子層膜。脂質(zhì)體可能是具有單一的膜雙分子層的單層囊泡，或具有多個通過水分子層相互分離的膜雙分子層的多層囊泡。通常地，脂質(zhì)體雙分子層由兩個脂質(zhì)單分子層組成，其具有疏水性“尾巴”區(qū)域和親水性“頭部”區(qū)域。膜雙分子層的結(jié)構(gòu)是，脂質(zhì)單分子層的疏水性(非極性)“尾巴” 面向雙分子層的中心，而親水性(極性)“頭部”面向包埋的水相體積或外脂質(zhì)體的水環(huán)境。 在一個實施例中，本發(fā)明的脂質(zhì)體包括靶部分，如抗體或其他配體。“脂質(zhì)體制劑”被理解為其中的部分或全部的治療藥物和/或診斷劑被包埋于脂質(zhì)體中。本文中使用的脂質(zhì)體制劑是指只具有已列舉的脂質(zhì)組分的脂質(zhì)體，其不含有其他脂質(zhì)組分?！傲字北焕斫鉃楦视偷膬捎H性衍生物，其中的一個羥基被磷酸酯化，另兩個羥基被長鏈脂肪酸酯化，其可能彼此相同或不同。飽和磷脂是指其脂肪酸只有碳碳單鍵，而沒有碳碳多鍵。中性磷脂是指極性基團(tuán)(通常為羥基或胺類)取代乙醇將另一個磷酸羥基酯化， 且中性磷脂在生理PH下其凈電荷為零。陰離子磷脂是指極性基團(tuán)取代乙醇將另一個磷酸羥基酯化，且中性磷脂在生理PH 下其凈電荷為負(fù)值。“帶電飽和磷脂”表達(dá)的意思，包括帶電飽和磷脂和其他凈電荷不為零的兩親化合物。這種兩親化合物包括，但不限于，極性基團(tuán)(如胺類)取代的長鏈碳酸氫鹽衍生物和脂肪酸衍生物。本文中所使用的，“活性劑”或“治療劑”是指以高分子量神經(jīng)治療的方式遞送到中樞神經(jīng)系統(tǒng)靶組織的任何分子，且當(dāng)其被遞送后，在靶中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織引起有利響應(yīng)。 治療劑包括但不限于抗腫瘤藥、碘化合物、毒素(包括蛋白質(zhì)毒素)、包括抑制細(xì)胞生長或細(xì)胞溶解性藥物的細(xì)胞毒性藥物、基因和病毒載體、疫苗、合成載體、生長因子、神經(jīng)營養(yǎng)因子、抗病毒、抗生素、神經(jīng)遞質(zhì)、細(xì)胞因子、靶向特定位點損傷的酶和藥物。治療劑包括但不限于核酸(包括核酸類似物)、蛋白質(zhì)(包括抗體和小分子化學(xué)組合物)?；钚詣┌ㄈ硇越o藥時顯示毒性和不良影響的制劑。本文中所使用的，“CNS疾病”是指受體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。該疾病可能與中樞神經(jīng)系統(tǒng)特定神經(jīng)元群的死亡和/或功能障礙有關(guān)。該疾病可能與中樞神經(jīng)系統(tǒng)中細(xì)胞的異常生長有關(guān)。中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常生長的細(xì)胞可能源于中樞神經(jīng)系統(tǒng)也可能來源于其他組織。CNS疾病包括癌癥、感染、頭部外傷、脊髓損傷、多發(fā)性硬化癥、路易體癡呆、ALS、溶酶體貯積癥、精神疾病、神經(jīng)退行性疾病、中風(fēng)、癲癇癥、以及其他急性和慢性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。神經(jīng)膠質(zhì)瘤是最常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)原發(fā)瘤。多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM) 是最頻繁、最惡性的神經(jīng)膠質(zhì)瘤類型。成人GBM的發(fā)病率比兒童高。根據(jù)美國統(tǒng)計報告的中心腦腫瘤登記，在美國GBM大約占所有腦腫瘤的20% (CBTRUS, 1998-2002)。其他的CNS 腫瘤包括，但不限于，其他的神經(jīng)膠質(zhì)瘤，包括星形細(xì)胞瘤(包括纖維(擴(kuò)散)星形細(xì)胞瘤、 毛細(xì)胞型星形細(xì)胞瘤、多形性黃色星形細(xì)胞瘤)和腦干膠質(zhì)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、和室管膜瘤及相關(guān)室旁腫塊、神經(jīng)腫瘤，低分化腫瘤(包括成神經(jīng)管細(xì)胞瘤)、其他實質(zhì)腫瘤(包括原發(fā)性腦淋巴瘤、生殖細(xì)胞腫瘤和松果體實質(zhì)腫瘤)、腦膜瘤、轉(zhuǎn)移性腫瘤，副腫瘤綜合癥、外周神經(jīng)鞘瘤(包括神經(jīng)鞘瘤、纖維神經(jīng)瘤和惡性外周神經(jīng)鞘瘤(惡性神經(jīng)鞘瘤))。癲癇是與中樞神經(jīng)系統(tǒng)中特定神經(jīng)元群的功能障礙有關(guān)的最常見的嚴(yán)重的CNS 疾病(Shorvon, S, Epidemiology, classification, natural history, and genetics of epilepsy,Lancet 1990 Jul 14,336(8707)93-6,McNamara J,The neurobiological basis of epilepsy, Trends Neurosci 1992 October，15 (10) 357-9)。嚴(yán)格地，穿透性頭部外傷與大于50%的引起癲癇的風(fēng)險相關(guān)。其他癲癇的原因包括中風(fēng)、感染和遺傳敏感性。癲癇發(fā)作是一種由中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元群的異常、過度、高滲透排放引起的神經(jīng)性功能障礙。癲癇發(fā)作可在行為上體現(xiàn)(如果包含運動系統(tǒng))或在電記錄器上體現(xiàn)。癲癇描述的是這樣一種情況，其中病人由于慢性，潛在的過程最近有癲癇發(fā)作。盡管很多癲癇綜合癥的臨床和病理特征不同，但是其普遍潛在的病因都是神經(jīng)元的超興奮性。因此，癲癇包括中樞神經(jīng)系統(tǒng) (CNS)超興奮性紊亂，以神經(jīng)功能的慢性，周期性，突發(fā)性變化為特征，可根據(jù)腦電圖和臨床表現(xiàn)進(jìn)行分類(Dichter M.，Basic mechanisms of epilepsy :targets for therapeutic intervention, Epilepsia 1997 ；38 Suppl 9 :S2_6)。癲癇發(fā)作大致分為兩類病灶(部分)發(fā)作或全身性發(fā)作。病灶性癲癇發(fā)作是由于大腦皮質(zhì)或皮質(zhì)下區(qū)域的特定神經(jīng)元群的異?；顒右鸬?。潛在的結(jié)構(gòu)異?；驌p傷可能由于產(chǎn)傷、頭部創(chuàng)傷、腫瘤、膿腫、梗塞、血管畸形或遺傳性疾病引起的(Dichter 1997， Ibid)0病灶活動的位置可通過臨床癲癇發(fā)作表現(xiàn)識別或可能被隱藏。同樣地，活性病灶可能不涉及損傷本身，但可能出現(xiàn)在鄰近的或較遠(yuǎn)的(但相關(guān)的)神經(jīng)元群，支持可塑突觸重組引起病灶過度反應(yīng)的假設(shè)(參見例如I^rince D. A. , Epileptogenic neurons and circuits. In :Jasper' s Basic Mechanisms of the Epilepsies,Third Edition(1999), Delgado-Escueta A. V. , et al. , editors), Advances in Neurology 79 :665-684)。局灶性癲癇發(fā)作如果在意識上沒有明顯變化，則被認(rèn)為是“簡單”的，否則將被認(rèn)為是“復(fù)雜”的。復(fù)雜的局灶性癲癇發(fā)作牽扯到顳葉和大腦邊緣系統(tǒng)，是最普遍的成人癲癇病癥。局灶性癲癇發(fā)作時，若腦電圖成像變成雙向，同時出現(xiàn)意識喪失，伴隨或不伴隨肌體痙攣現(xiàn)象，則被稱為是二次發(fā)作。原發(fā)性的癲癇發(fā)作表現(xiàn)為單向電圖成像，意識喪失，伴隨或不伴隨肌體痙攣現(xiàn)象。局灶性癲癇能夠牽扯到大腦的幾乎所有部分，通常由功能異常的局部病灶引發(fā)。目前對局灶性癲癇的治療方法是，使用EEG將由器質(zhì)性腦疾病引發(fā)的異常峰值波局部化(器質(zhì)性腦疾病更易誘導(dǎo)局灶性癲癇發(fā)作)，然后對病灶進(jìn)行外科手術(shù)切除以防復(fù)發(fā)。脂質(zhì)體制劑本文所述的脂質(zhì)體制劑，例如，包括這種制劑的藥物組合物，可能以多種方式形成，包括主動或被動的裝載方法。例如，可能使用跨膜PH梯度裝載技術(shù)包封一種或多種治療劑和/或診斷劑。通過使用跨膜電位穿過脂質(zhì)體雙分子層將治療藥物裝載于脂質(zhì)體的常用方法在本領(lǐng)域是眾所周知的(例如美國專利No. 5，171，578 ；5, 077, 056和5，192，549)。簡短地，例如，可先將脂質(zhì)體溶于有機(jī)溶劑，如乙醇、叔丁醇及其混合物等，然后溫和地加熱(如60°C 70°C)。用于形成非聚乙二醇化脂質(zhì)體的紙質(zhì)組合物可能從多種囊泡形成脂質(zhì)中選擇，通常包括磷脂和甾醇(例如美國專利No. 5，059，421和5，100, 662)。例如， 來自于蛋黃、大豆或其他蔬菜或動物組織的磷脂，如卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰環(huán)己六醇、磷脂酰甘油、鞘磷脂等，其混合物，如蛋黃磷脂、大豆磷脂等，其氫化物及合成磷脂，如二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰甘油或可能使用的類似物。如本文所述，本發(fā)明的非聚乙二醇化陰離子脂質(zhì)體是兩種或多種非聚乙二醇化脂質(zhì)的混合物，例如，一中性磷脂和一陰離子磷脂。在一個實施例中，所述中性磷脂選自卵磷脂衍生物和其混合物組成的組中，例如二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿 (DSPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)及其混合物。在一個實施例中，所述陰離子磷脂從由磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰環(huán)己六醇、磷脂酸的衍生物和其混合物組成的組中選擇，例如，二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)和磷脂酰絲氨酸和不同飽和脂肪酸形成的酯類的混合物。為了脂質(zhì)體穩(wěn)定和其他目的，還可能添加固醇(如膽固醇)、α -生育酚、雙十六烷基磷酸酯、硬脂胺或其類似物。為了使脂質(zhì)溶解，可能加入預(yù)熱的水溶液同時劇烈混合。例如，可能添加含有 150 300mM緩沖物的溶液?？赡苁褂玫木彌_物包括，但不限于，硫酸銨、檸檬酸鹽、馬來酸鹽和谷氨酸鹽?；旌虾螅瑢a(chǎn)生的多層囊泡(MLV)加熱，并通過擠壓裝置的擠壓，將MLV轉(zhuǎn)換為單層脂質(zhì)體囊泡。最初使用的溶解脂質(zhì)的有機(jī)溶劑和通過透析、滲濾等從脂質(zhì)體制劑中移除。一種或多種治療藥物和/或診斷劑可能使用跨膜PH梯度裝載技術(shù)被包封于脂質(zhì)體中。通過提高脂質(zhì)體外溶液的PH，脂質(zhì)體雙分子層間將存在pH差異。因此，脂質(zhì)體雙分子層間產(chǎn)生了跨膜電位，而且一種或多種治療藥物和/或診斷劑通過跨膜電位被裝載于脂質(zhì)體中。通常地，治療藥物和/或診斷劑與脂質(zhì)的比例約為0. 01至約0. 5 (wt/wt)。在一個實施例中，治療藥物和/或診斷劑與脂質(zhì)的比例約為0. 1。在另一個實施例中，治療藥物和 /或診斷劑與脂質(zhì)的比例約為0. 3。在一個實施例中，囊泡通過跨膜離子濃度制備，且在能使治療藥物和/或診斷劑包封的條件下與弱酸或堿性的治療藥物和/或診斷劑一起培育。 在另一個實施例中，囊泡在存在治療藥物和/或診斷劑時被制備，且非包封材料通過透析、 離子交換色譜、凝膠過濾色譜或滲濾移除。
用于裝載的優(yōu)選實施例以美國專利No. 5，192，549為基礎(chǔ)，且包括將氨氮從外界環(huán)境中去除。該結(jié)果產(chǎn)生了跨膜氨氮濃度梯度，其引起PH梯度。將藥物添加到囊泡中，并在高溫培育后“遠(yuǎn)距離”裝載。在一個優(yōu)選實施例中，藥劑基本上是不透水的(例如，診斷劑如釓雙胺)，該藥劑存在于緩沖液中，其使脂質(zhì)體在囊泡形成期間被動包封。這種優(yōu)選方法還可應(yīng)用于其他兩性離子藥物，如氨甲蝶呤。相反地，弱堿(和酸)可遠(yuǎn)距離裝載于脂質(zhì)體。本文所述的脂質(zhì)體制劑可能用于到中樞神經(jīng)系統(tǒng)區(qū)的增強(qiáng)對流遞送，而且CED在 CNS內(nèi)達(dá)到高組織分布容積。因此，該脂質(zhì)體制劑可能用于治療CNS疾病。這種CNS疾病包括但不限于CNS腫瘤，如惡性膠質(zhì)瘤，及與神經(jīng)細(xì)胞的功能障礙相關(guān)的疾病，如癲癇。因此，許多用于治療CNS疾病的藥物可能以本文所述方法包埋于本文所述的脂質(zhì)體制劑。這種治療藥物包括抗腫瘤藥、毒素、生物制劑(如多巴胺、5-羥色胺)和神經(jīng)營養(yǎng)性因子(如⑶NF、CDNF、MANF)等。在一個實施例中，本文所述脂質(zhì)體制劑包括拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑(包括但不限于拓?fù)洚悩?gòu)酶I/II抑制劑)。在一個實施例中，拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑是喜樹堿及其衍生物。例如，治療劑是一種喜樹堿衍生物，選自以下組9-氨基喜樹堿、7-乙基喜樹堿、10-羥基喜樹堿、9-硝基喜樹堿、10，11-甲基非飽和二羥基喜樹堿、9-氯-10，11-甲基非飽和二羥基喜樹堿、依立替康、拓?fù)涮婵怠?-(4-甲基哌嗪亞甲基)-10，11-亞乙二氧基-20( -喜樹堿、 7-(4-甲基哌嗪亞甲基)-10,11-亞甲二氧基-20 (S)-喜樹堿和7-(N-異丙基氨基)乙基)(20 -喜樹堿。在另一實施例中，喜樹堿衍生物選自以下組中依立替康、拓?fù)涮婵怠?7- (4-甲基哌嗪亞甲基)-10，11-亞乙二氧基-20 (S)-喜樹堿、7- (4-甲基哌嗪亞甲基)-10， 11-亞甲二氧基-20(S)_喜樹堿和742-(N-異丙基氨基)乙基)(20S)-喜樹堿。在另一個實施例中，喜樹堿是拓?fù)涮婵?。對于本領(lǐng)域的通用技術(shù)這將是顯而易見的，雖然某些藥劑被說明性描述，但還有許多其他藥劑也適合于本發(fā)明的脂質(zhì)體組合物。本文還考慮使用毒素，如蛋白質(zhì)毒素，包括μ-芋螺毒素(如μ-芋螺毒素GIIIA、 μ -芋螺毒素GIIIB、μ -芋螺毒素GIIIC、μ -芋螺毒素ΡΙΙΙΑ、μ -芋螺毒素SmIIΙΑ、μ -芋螺毒素KIIIA等)、ω-芋螺毒素(如ω-芋螺毒素GVIA(本文中也稱為“ω-芋螺毒素G” 和“ ω -CTX-G，，)、ω -芋螺毒素MVIIA (本文中也稱為"ω-芋螺毒素Μ”和“ ω -CTX-M")、 肉毒桿菌毒素(如肉毒桿菌毒素Α(本文中也稱為“ΒΤΧ-Α”)、肉毒桿菌毒素B (本文中也稱為“ΒΤΧ-Β” )、肉毒桿菌毒素Cl、肉毒桿菌毒素D、肉毒桿菌毒素Ε、肉毒桿菌毒素F等)、芋螺抑制肽(如芋螺抑制肽G、芋螺抑制肽Τ、芋螺抑制肽L、芋螺抑制肽Si、芋螺抑制肽0c、芋螺抑制肽Gm、芋螺抑制肽Ca2、芋螺抑制肽Cal和芋螺抑制肽Qu)及其衍生物，和其藥學(xué)上可接受的鹽。在一個實施例中，來源于芋螺毒液的芋螺毒素可使用實驗制劑遞送。毒液的活性組分是短肽毒素，通常長度為10 30個氨基酸殘基，而且由于其高密度的二硫鍵，基本上被高度抑制。毒液組分作用于電壓控制離子通道、配體控制離子通道和G-蛋白偶聯(lián)受體。芋螺毒素的藥物選擇性至少部分由特定的二硫鍵構(gòu)架與氨基酸在二硫鍵環(huán)內(nèi)結(jié)合決定。由于芋螺多肽的高效能和強(qiáng)選擇性，多種已被評估用于治療人類疾病，且目前使用一種 ω -芋螺毒素MVIIA(齊考諾肽)，一種N型鈣通道阻滯劑，通過可植入的、可編程的泵與導(dǎo)管進(jìn)入鞘內(nèi)空間治療人類患者的疼痛。
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在本發(fā)明的特定實施例中，抗癲癇藥物制劑包括ω -芋螺毒素(如ω -芋螺毒素 GVIA、ω-芋螺毒素 MVIIA 和 ω-芋螺毒素 CVID)(參見例如 Gasior et al J Pharmacol Exp Ther 323 458-68(2007)).在另一實施例中，抗癲癇藥物制劑包括μ _芋螺毒素(如 μ -芋螺毒素GIIΙΑ、μ -芋螺毒素GIIIB、μ -芋螺毒素GIIIC、μ -芋螺毒素PIIΙΑ、μ -芋螺毒素 SmIIIA、μ -芋螺毒素 KIIIA 等)(Zhang 等，J Biol Chem 282 30699-30706(2007) 其他實施例中使用本文所述芋螺毒素的衍生物或藥學(xué)上可接受的鹽。本文還考慮使用來源于肉毒梭菌的肉毒桿菌毒素。已經(jīng)描述了 7種不同免疫性的肉毒桿菌神經(jīng)毒素，這些肉毒桿菌神經(jīng)毒素按血清型分類分別為A、B、Cl、D、E、F和G，每種毒素通過特異性抗體的中和作用識別。肉毒桿菌毒素的不同血清類型在動物物種中變化， 其影響所引起的癱瘓的嚴(yán)重程度和持續(xù)時間。例如，已通過計算小鼠的癱瘓率確定，A型肉毒桿菌毒素的效力比B型肉毒桿菌毒素高500倍。此外，已確定在靈長類動物中480U/kg 劑量的B型肉毒桿菌毒素是無毒的，其約為靈長類動物L(fēng)D50中A型肉毒桿菌毒素的12倍。 因此，非A型肉毒桿菌毒素與A型肉毒桿菌毒素相比可能具有低效力和/或短持續(xù)時間。雖然所有血清型肉毒桿菌毒素都能明顯抑制神經(jīng)肌肉交界處的神經(jīng)遞質(zhì)釋放，但其通過影響不同的神經(jīng)分泌蛋白質(zhì)和/或在不同位點使這些蛋白質(zhì)分開作用。例如，A型和E型肉毒桿菌毒素都能使25千道爾頓(kD)突觸相關(guān)的蛋白質(zhì)(SNAP-25)分開，但他們在該蛋白質(zhì)中靶定于不同的氨基酸序列。B、D、F和G型肉毒桿菌毒素作用于囊泡相關(guān)的蛋白質(zhì)(VAMP，也稱為小突觸泡蛋白)，每種血清型使蛋白質(zhì)在不同位點分開。最后，示出了 Cl 型肉毒桿菌毒素能使突觸融合蛋白和SNAP-25都分開。這些作用原理的不同可能影響各種血清型肉毒桿菌毒素的相對效力和/或持續(xù)時間。體外研究表明，肉毒桿菌毒素抑制鉀離子引起的原代細(xì)胞培養(yǎng)和腦突觸體制備的各種神經(jīng)遞質(zhì)釋放。谷氨酸是負(fù)責(zé)腦中大量突觸激發(fā)的神經(jīng)遞質(zhì)，且已認(rèn)為其在癲癇發(fā)作和蔓延中是必須的。據(jù)報道，肉毒桿菌毒素抑制脊髓神經(jīng)元原代培養(yǎng)中谷氨酸的誘發(fā)釋放， 且在腦突觸體制備中肉毒桿菌毒素抑制谷氨酸和其他神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。在本發(fā)明的一些實施例中，抗癲癇藥物是A型肉毒桿菌毒素或B型肉毒桿菌毒素。 在其他實施例中，毒素是A型肉毒桿菌毒素或B型肉毒桿菌毒素的片段或類似物，其具備母體肉毒桿菌毒素的生物活性。在其他實施例中，毒素被修飾以與大腦神經(jīng)元的合適靶標(biāo)特異性結(jié)合。在一些實施例中，使用重組技術(shù)已生產(chǎn)梭菌神經(jīng)毒素或其片段或類似物。本發(fā)明還考慮使用芋螺抑制肽，包括美國專利No. 6，172，041和6，399，574所述的，其公開內(nèi)容已納入本文做參考。診斷劑也可能包埋于本文所述的脂質(zhì)體。合適的藥劑包括用于MRI的順磁離子， 本文成為“MRI磁體”。合適的金屬離子包括那些原子數(shù)為22-29(計算在內(nèi)的)、42、44和 58 70 (計算在內(nèi)的)，且氧化價態(tài)為+2或+3的離子。這種金屬離子的例子為鉻(III)，錳 (II)，鐵(II)，鐵(III)，鈷(II)，鎳(II)，銅(II)，鐠(III)，釹(III)，釤(III)，釓(III)， 鋱(III)，鏑(III)，鈥(III)，鉺(III)和鐿(III)。在實施例中，X-射線成像(如CT)用于檢測CED，診斷劑可能包括一種不透射線的物質(zhì)。已知的合適的不透射線的物質(zhì)包括碘化合物、鋇化合物、鎵化合物、鉈化合物等。不透射線的物質(zhì)的具體例子包括鋇、二乙酰氨基三碘苯甲酸鹽、乙碘油、檸檬酸鎵、碘卡明酸、碘西他酸、碘達(dá)酸、膽影酸、碘沙酸、iogulamide、碘苯六醇，碘帕醇、碘番酸、碘普西酸、碘西法酸、碘絲酸、碘砜葡胺、碘琥酸、碘酞硫、碘替酸、異泛影酸、碘托西酸、碘克沙酸、羥泛影酸、 碘泊酸鹽、甲葡胺、甲泛葡胺、甲泛影鈉、丙碘酮和氯化亞鉈。如本文所述的脂質(zhì)體制劑適合于增強(qiáng)對流遞送。增強(qiáng)對流遞送增強(qiáng)對流遞送(CED)是一種直接的顱內(nèi)藥物遞送技術(shù)，其利用大流量原理，使大分子遞送并分布到固體組織的臨床重要的容積中。CED比簡單擴(kuò)散提供更大的分布容積，旨在治療劑直接作用于特定靶位點(見美國專利No. 5，720，720)，本文的參考文獻(xiàn)將其公開。 簡言之，增強(qiáng)對流遞送(CED)是一種能繞過血腦屏障，并使大分子量物質(zhì)(如藥物裝載脂質(zhì)體)在腦中指定區(qū)域以控制的方式均勻地被給藥的方法(見USSN 11/740，M8，包含于本文參考文獻(xiàn))。CED可用于通過組織間隙的直接對流注入將液體藥劑(如脂質(zhì)體制劑)給藥于固體組織，且將導(dǎo)管直接插入組織超過預(yù)定時間，并在壓力下通過導(dǎo)管以預(yù)定流量進(jìn)入組織間隙空間使用藥劑，如大約0. 1至約12μ L/min。如本文詳細(xì)敘述，申請人發(fā)現(xiàn)CED可能有效地用于治療藥物的遞送，且非必須的， 診斷劑包埋于非聚乙二醇化脂質(zhì)體制劑中，其中該制劑包括或主要包括至少一種中性飽和磷脂和至少一種陰離子飽和磷脂的混合物。如實施例部分所述，CED組合物包括至少一種治療藥物(如拓?fù)涮婵?和/或包埋于本文所述非聚乙二醇化脂質(zhì)體制劑的診斷劑，增加分布容積，并顯著提高治療藥物的血清半衰期。用于給藥脂質(zhì)體制劑(如藥物組合物)的合適器具可能包括泵裝置，其包含裝滿脂質(zhì)體制劑的蓄水池。該泵可置于體外或植入體內(nèi)。該泵連接導(dǎo)管，導(dǎo)管可植入CNS的離散組織。該泵在引起特定組織內(nèi)溶解物對流的壓力和流量下被激活，釋放脂質(zhì)體制劑?？烧{(diào)整注入的持續(xù)時間和其他參數(shù)，使遍及離散組織的脂質(zhì)體制劑分布于離散組織的相鄰區(qū)域，如，不進(jìn)入腦脊液。根據(jù)離散組織的大小和形狀不同，可能需要使用多個植入注射導(dǎo)管或使用帶有多個出液口的注射導(dǎo)管。使用CED，脂質(zhì)體制劑可在正壓下通過細(xì)導(dǎo)管緩慢注入組織間隙空間擴(kuò)散?？墒褂帽渺o水壓力產(chǎn)生的大流量將脂質(zhì)體制劑擴(kuò)散到CNS的胞外空間。因為CED的使用運行脂質(zhì)體制劑通過導(dǎo)管末端直接擴(kuò)散到神經(jīng)組織，血腦屏障被越過，且可靶定于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的離散組織，包括制定的離散組織，如癌組織或用于傳統(tǒng)手術(shù)評估的切除術(shù)，及多個病灶需要治療的不同病灶?；诖罅髁康男再|(zhì)，CED可用于脂質(zhì)體制劑可靠地、安全地、均勻地分布整個體積范圍(參見例子USSN 11，/740，508)。而且，CED不會引起注入組織的結(jié)構(gòu)和功能損傷，且對脂質(zhì)體制劑擴(kuò)散提供更強(qiáng)的控制。此外，不論包括于脂質(zhì)體制劑中的脂質(zhì)體的分子量，脂質(zhì)體制劑都可均勻地分布于整個分布容積內(nèi)，其與注入體積是成比例的。在一個實施例中，一個超細(xì)遞送導(dǎo)管(由聚氨酯構(gòu)成并在新“步驟”設(shè)計中與石英熔合)可被永久性地植入經(jīng)皮口。新型導(dǎo)管設(shè)計可快速生物整合，且內(nèi)部密封，過濾阻止細(xì)菌侵入，并保證進(jìn)一步的安全。脂質(zhì)體制劑可根據(jù)需要注入這個導(dǎo)管系統(tǒng)的端口。在本文所述的一個實施例中，CED可適用于小直徑導(dǎo)管，其通過輸液泵永久性地植入大腦區(qū)域。給藥的脂質(zhì)體制劑可制備為水等滲溶液，或其他合適制劑。在給藥(如注入) 期間，脂質(zhì)體溶液可在胞外空間流動，對腦組織損傷很小甚至不損大腦組織。在一個實施例中，可能使用專門為經(jīng)皮CED遞送設(shè)計的超細(xì)(端口外徑為0. 2mm)、 最低限度創(chuàng)傷的導(dǎo)管系統(tǒng)。該導(dǎo)管系統(tǒng)的一步設(shè)計可消除沿導(dǎo)管兩側(cè)的溶液回流。這種溶液泄露是直邊導(dǎo)管的一個主要問題。該導(dǎo)管系統(tǒng)可能由聚氨酯構(gòu)成并與石英或Peek Optima熔合，使其為高度生物相容的并不干擾MRI信號。CNS疾病的治療可能需要在不同時間間隔重復(fù)給藥脂質(zhì)體制劑，如，每隔一周、每隔一月等。例如，參見USSN11/740，124，其公開內(nèi)容已納入本文做參考。經(jīng)皮口在間隔期間可能保持封閉。多導(dǎo)管設(shè)計是可行的，對于灑遍大面積離散組織，多導(dǎo)管比單一導(dǎo)管更可行。已發(fā)現(xiàn)，CED注入后脂質(zhì)體的分布容積與注入的溶液體積線性相關(guān)。特別優(yōu)選的套管在以下三篇文獻(xiàn)中有詳述，Krauze等人發(fā)表于2005年11月神經(jīng)外科雜志上的文章103(5)923-9，在此附上引用文獻(xiàn)全文；發(fā)表于L. J. S，專利申請公開號 US2007/0088295 Al中的文章，在此附上引用文獻(xiàn)全文；以及發(fā)表于美國專利申請公開號 US 2006/0135945 Al中的文章，在此附上引用文獻(xiàn)全文。在一個實施例中，CED包括約為0. 1 10yL/min的注入速率。在另一個實施例中， CED包括大于0. 1 0. 3 μ L/min的注入速率，例如，約為0. 2 μ L/min。優(yōu)選為大于0. 7 μ L/ min,更優(yōu)選為大于1 μ L/min,更優(yōu)選為大于1. 2 μ L/min,更優(yōu)選為大于1. 5 μ L/min,更優(yōu)選為大于1. 7 μ L/min，更優(yōu)選為大于2 μ L/min，更優(yōu)選為大于2. 2 μ L/min，更優(yōu)選為大于2. 5 μ L/min,更優(yōu)選為大于2. 7 μ L/min,更優(yōu)選為大于3 μ L/min,且優(yōu)選為小于12 μ L/ min,更優(yōu)選為小于10 μ L/min。在一個優(yōu)選實施例中，CED包括流量的增量，指在遞送期間“步進(jìn)”或向上滴定。優(yōu)選地，進(jìn)一步包括約為0. 1 10 μ L/min的注入速率。在一個優(yōu)選實施例中，進(jìn)一步包括大于0. 5 μ L/min的注入速率，優(yōu)選為大于 0. 7 μ L/min,更優(yōu)選為大于1 μ L/min,更優(yōu)選為大于1. 2 μ L/min,更優(yōu)選為大于1. 5 μ L/ min,更優(yōu)選為大于1. 7 μ L/min,更優(yōu)選為大于2 μ L/min,更優(yōu)選為大于2. 2 μ L/min,更優(yōu)選為大于2. 5 μ L/min,更優(yōu)選為大于2. 7 μ L/min,更優(yōu)選為大于3 μ L/min,且優(yōu)選為小于 12 μ L/min,更優(yōu)選為小于10 μ L/min。本文的治療方法還優(yōu)選地包括通過診斷劑的神經(jīng)影像，優(yōu)選為MRI，用于目標(biāo)定位并引導(dǎo)導(dǎo)管位置。優(yōu)選的立體定向支架用于與診斷劑神經(jīng)影像的結(jié)合，以提供引導(dǎo)導(dǎo)管位置或靶定神經(jīng)元群。通過磁共振成像(MRI)或X射線計算機(jī)斷層掃描的示蹤劑優(yōu)選為可檢測的。示蹤劑的擴(kuò)散被監(jiān)控并用于間接測量高分子量神經(jīng)治療物的擴(kuò)散。這種監(jiān)控用于檢測注入物到非靶組織的多余遞送，并證明高分子量神經(jīng)治療物到達(dá)靶組織且達(dá)到有效濃度。在一個實施例中，診斷劑獨立于治療劑。診斷劑以與治療劑相關(guān)的速度擴(kuò)散，因此其為治療劑擴(kuò)散的間接指標(biāo)。在一個優(yōu)選實施例中，診斷劑和治療劑是分開給藥的，但都被相同的非聚乙二醇陰離子脂質(zhì)體制劑包埋，使其具有高度相似的擴(kuò)散特點。在另一個實施例中，診斷劑和治療劑是共同給藥的。本文的治療方法還優(yōu)選地包括用于監(jiān)控注入物擴(kuò)散的神經(jīng)影像。在一個優(yōu)選實施例中，治療方法包括MRI的使用，用于監(jiān)控本發(fā)明的注入藥物組合物的擴(kuò)散，其中該藥物組合物包括MRI磁體。
實施例實施例1用于CED的聚乙二醇化和非聚乙二醇化脂質(zhì)體制劑的比較
實施例1. 1材料和方法實施例1. 1. 1 DSPC/CH0L(摩爾比 60/40)稱量26. Img DSPC(MW790, lot#C3L00,實際重量 26. 2mg) +8. 5mg 膽固醇(MW387, lot#CHlS003,實際重量為 8. 8mg)。溶解于0. 5ml的氯仿中，在KOH中加入75 μ 1 5mg/ml RhPE (0. 2摩爾百分比的磷脂)。在氮氣中干燥樣品，同時渦流形成薄膜。在真空下完成干燥1小時。使脂質(zhì)在60 "C 下，在 1.5ml HBS (5mM HEPES-145mM NaCl pH7. 0,0. 1192g HEPES [MW238. 3]+0. 8475g NaCl [MW58. 45]，用 NaOH 調(diào)節(jié) pH 值，補充體積至 100ml)中再次水合以形成MLV。在60°C下通過hlOOnm過濾器擠出以獲得LUV (靶標(biāo)大小為100_120nm)。磷酸鹽測定-稀釋到20mM的磷脂。放入2. Oml的血清瓶中(預(yù)先去熱源)。實施例1. 1. 2 :DSPC/CH0L/PEG2000DSPE (摩爾比 59. 5/40/0. 5)稱量25. 8mg DSPC(MW790, lot#C3L006,實際重量為 25. 6mg) +8. 5mg 膽固醇 (MW387, lot#CHlS003，實際重量為 8. 7mg) +0. 75mgPEG2000DSPE (MW2774, lot#PPE2011809，實際重量為 50 μ 1 的 15mg/ml 溶解于 CHCl3,制備 ISiig [實際 17. 9mg]在 1. 2ml CHCL3)。溶解于0. 5ml的氯仿中，加入75 μ 1 5mg/ml RhPE (O. 2摩爾%的磷脂)。在氮氣中干燥樣品，同時渦流形成薄膜。在真空下完成干燥1小時。使脂質(zhì)在60°C下，在 1.5ml HBS(5mM HEPES-145mM NaCl pH7. 0)中再次水合以形成 MLV。在60°C下通過hiOOnm過濾器擠出以獲得LUV (靶標(biāo)大小為100_120nm)。磷酸鹽測定-稀釋到20mM的磷脂，放入2. Oml的血清瓶中(預(yù)先去熱源)。實施例1.1.3 :DSPC/CH0L/PEG2000DSPE (摩爾比 55/40/5)稱量23. 9mg DSPC(MW790, lot#C3L006,實際重量為 23. 8mg) +8. 5mg 膽固醇 (MW387, lot#CHlS003,實際重量為 8. 6mg) +7. 5mgPEG2000DSPE (MW2774, lot#PPE2011809,實際重量為500 μ 1的15mg/ml溶于CHCl3)。溶解于0.5ml的氯仿中，加入75 μ 1 RhPE (0. 2摩爾％的磷脂)。在氮氣中干燥樣品，同時渦流形成薄膜。在真空下完成干燥1小時。使脂質(zhì)在60°C下，在 2. Oml HBS(5mM HEPES-145mM NaCl pH7. 0)中再次水合以形成 MLV。在60°C下通過hiOOnm過濾器擠出以獲得LUV (靶標(biāo)大小為100_120nm)。磷酸鹽測定-稀釋到20mM的磷脂。放入2. Oml的血清瓶中(預(yù)先去熱源)。實施例1.1.4 :DSPC/CHOL/NG-DOPE (摩爾比 55/40/5)稱量23. 9mg DSPC(MW790, lot#C3L006,實際重量為 24. 2mg) +8. 5mg 膽固醇 (MW387, lot#CHlS003，實際重量為 8. 9mg) +2. 4mgNG-D0PE (MW880. 13，lot#050328L，實際重量為2. 4mg)溶解于0.5ml的氯仿中，加入75 μ 1 RhPE (0. 2摩爾％的磷脂)。
在氮氣中干燥樣品，同時渦流形成薄膜。在真空下完成干燥1小時。使脂質(zhì)在60°C下，在 2. Oml HBS(5mM HEPES-145mM NaCl pH7. 0)中再次水合以形成 MLV。在60°C下通過hiOOnm過濾器擠出以獲得LUV (靶標(biāo)大小為100_120nm)。磷酸鹽測定-稀釋到20mM的磷脂。放入2. Oml的血清瓶中(預(yù)先去熱源)。實施例1.1.5 :DSPC/PEG2000DSPE (99/1 摩爾比)稱量25. 8mg DSPC(MW790 ;lot#C3L006 ；實際重量為 26. lmg)+0. 9mg PEG2000DSPE (MW2774 ；lot#PPE2011809 ；實際重量為 60 μ 1 的 15mg/ml 溶于 CHCl3)。溶解于0. 5ml的氯仿中；加入75 μ 1 RhPE (0. 2摩爾%的磷脂)。在氮氣中干燥樣品，同時渦流形成薄膜。在真空下完成干燥1小時。使脂質(zhì)在60°C下，在 1.5ml HBS(5mM HEPES-145mM NaCl pH7. 0)中再次水合以形成 MLV。在60°C下通過hiOOnm過濾器擠出以獲得LUV (靶標(biāo)大小為100_120nm)。磷酸鹽測定-稀釋到20mM的磷脂。放入2. Oml的血清瓶中(預(yù)先去熱源)。實施例1.1.6 :DSPC/PEG2000DSPE (摩爾比 95/5)稱量24. 8mg DSPC(MW790 ;lot#C3L006 ；實際重量為 24. 6mg)+4. 6mg PEG2000DSPE (MW2774 ；lot#PPE2011809 ；實際重量為 307 μ 1 的 15mg/ml 溶于 CHCl3)。溶解于0. 5ml的氯仿中；加入75 μ 1 RhPE (0. 2摩爾％的磷脂)。在氮氣中干燥樣品，同時渦流形成薄膜。在真空下完成干燥1小時。使脂質(zhì)在60°C下，在1. 5ml HBS (5mMHEPES-145mM NaCl pH7. 0)中再次水合以形成 MLV。在60°C下通過hiOOnm過濾器擠出以獲得LUV (靶標(biāo)大小為100_120nm)。磷酸鹽測定-稀釋到20mM的磷脂。放入2. Oml的血清瓶中(預(yù)先去熱源)。實施例1. 1. 7 :DSPC/DSPG(摩爾比 70/30)稱量18. 2mg DSPC (MW790 ；lot#C3L006 ；實際重量為 18. lmg) +7. 4mg DSPG (MW745 ； lot#G3L006 ；實際重量為 7. 6mg)溶解于0.5ml的氯仿/MeOH (9/1，ν/ν)中；加入75 μ 1 RhPE (0. 2摩爾％的磷脂)。在氮氣中干燥樣品，同時渦流形成薄膜。在真空下完成干燥1小時。使脂質(zhì)在60°C下，在 2. Oml HBS(5mM HEPES-145mM NaCl pH6. 5)中再次水合以形成 MLV。在60°C下通過hiOOnm過濾器擠出以獲得LUV (靶標(biāo)大小為100_120nm)。磷酸鹽測定-稀釋到20mM的磷脂。放入2. Oml的血清瓶中(預(yù)先去熱源)。實施例1. 1. 8磷酸鹽測定用水將樣品稀釋50倍QO μ 1至1. Oml)，使?jié)舛葹?. 4mM將每份稀釋的樣品等分為3x200 μ 1
根據(jù)ACM-010測定磷酸鹽。實施例1.2結(jié)果參見圖1A-1F實施例2腦內(nèi)遞送到嚙齒類動物大腦的納米脂質(zhì)體化合物的藥物學(xué)評估實施例2.1材料和方法實施例2. 1.1試驗用品在該實施例中的實驗，使用的是研究級材料-脂質(zhì)體-拓?fù)涮婵?Ls-TPT)和脂質(zhì)體釓雙胺(Ls-GD)。用于游離拓?fù)涮婵抵苿┖蚅s-TPT制備的拓?fù)涮婵?TPT)是從海正藥業(yè) (中國浙江泰州)獲得的。Ls-TPT由北脂公司提供(Burnaby, BC, Canada) 0簡言之，脂質(zhì)體由二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)和膽固醇以7 2 1的摩爾比組成，具有75 90nm的靶尺寸。使用內(nèi)部和外部緩沖液將拓?fù)涮婵颠h(yuǎn)距離載入(主動封裝)到脂質(zhì)體中，以響應(yīng)跨膜PH梯度，所述緩沖液由250mM pH5. 5的硫酸銨和5mM的組氨酸，145mM pH6. 0的NaCl組成。假設(shè)藥物包封率為90-95%，濃度為2. Omg/mL和0. 67mg/ mL的拓?fù)涮婵捣謩e對應(yīng)的藥物脂質(zhì)比例為0. 1和0. 3(w/w)。在兩個制劑中維持恒定的總脂質(zhì)濃度6. 7mg/mL。制作過程如實施例2. 1. 2詳細(xì)描述。用于Ls-GD制劑的釓雙胺(⑶)從北京SHLHT科學(xué)貿(mào)易(中國，北京)獲得。Ls-GD 與Ls-TPT的制備類似，除了釓雙胺是被動封裝在脂質(zhì)體中。內(nèi)部緩沖溶液由520mM pH3. 5 的釓雙胺代替250mM pH5.5的硫酸銨。假設(shè)4_6 %的包封率，以釓雙胺與脂質(zhì)的比例為 0. 3 (w/w)并且粒經(jīng)為75 120nm為靶標(biāo)。最終脂質(zhì)體制劑和釓雙胺的濃度分別為51. Img/ mL 禾口 17. Omg/mL。除非另有說明，Ls-TPT試驗用品被冷凍保存(-20 _30°C )。給藥溶液給藥時新鮮制備并在室溫保存。用5mM組氨酸，145mM pH6. O NaCI，300mM的蔗糖貯備液(Ls-ΤΡΤ和游離拓?fù)涮婵?進(jìn)行適當(dāng)稀釋，以達(dá)到所需濃度。每天給藥時使用新鮮瓶子儲存試驗用品溶液。實施例212脂質(zhì)體的制作過程計算用于批量所需的脂質(zhì)的量并且將脂質(zhì)粉末在稱量船上稱重。以叔丁醇，乙醇和水05 45 lOvol/vol)的比例制備溶劑溶液并加熱到70°C。同時攪拌，將脂質(zhì)粉末加入到溶劑溶液中。溶劑維持在70°C并且攪拌直到脂質(zhì)溶解(1小時)。在這點上，溶液中脂質(zhì)的濃度為320mg/mL。制備250mM硫酸銨溶液(體積為脂質(zhì)溶液的9倍)并加熱到 70°C。當(dāng)硫酸銨達(dá)到所述溫度時，將脂質(zhì)溶液傾倒入硫酸銨溶液中，同時攪拌產(chǎn)生多層囊泡 (MLV)。多層囊泡維持在70°C并且通過具有SOnm孔徑的4層聚碳酸酯疊過濾器擠出。需要兩個通道產(chǎn)生所需尺寸(平均直徑75 90nm)的大單層囊泡(LUV)。通過QELS測量脂質(zhì)體的尺寸，接著每個通道通過擠壓機(jī)。將LUV維持在70°C直到其減少到所需尺寸，然后用 PH6. 0的組氨酸鹽緩沖液將其稀釋到濃度為5%的溶劑，因為LUV在低于相變溫度-55°C，濃度為10%的溶劑中不穩(wěn)定。然后通過超過濾作用使LUV重新濃縮到總脂質(zhì)為50mg/mL，隨后用10倍洗滌體積的IOmM組氨酸，145mM Nacl緩沖液滲濾以除去溶劑并使外部的緩沖液從硫酸銨更換為PH6. 0的組氨酸緩沖液。這種緩沖液的更換導(dǎo)致跨膜pH梯度的產(chǎn)生，其用于將拓?fù)涮婵递d入到制備好的脂質(zhì)體中。然后通過磷酸分析測定總脂質(zhì)濃度。在測定脂質(zhì)總量后，要求拓?fù)涮婵档牧窟_(dá)到藥物脂質(zhì)比例為0 1 1或0 3 l(w/w)，通過分別乘以0.1和0.3計算脂質(zhì)總量。為了達(dá)到最終的藥物脂質(zhì)比0 1 1或0 3 1 (w/w), 假定裝載效率為90%。計算所需的拓?fù)涮婵档目偭亢?，將粉末稱重加入到一個干凈的瓶子中。將LUV懸浮液加熱到60°C并加入拓?fù)涮婵捣勰?。拓?fù)涮婵笛b載60分鐘后添加藥物以確保脂質(zhì)體中的最佳裝載。在隨后的藥物裝載中，未膠囊化的拓?fù)涮婵低ㄟ^使用5倍洗滌體積的5mM組氨酸，300mM pH6. 0的蔗糖緩沖液滲濾移除。該步驟也用于將外部緩沖液從 NaCl溶液更換為蔗糖溶液，所述蔗糖溶液作為冷凍保護(hù)劑使用并允許制劑在不改變物理性質(zhì)的情況下將其冷凍。該階段估計的脂質(zhì)含量為8. ;3mg/mL(藥物脂質(zhì)比為0.3 1)。將制劑加熱到50°C，用0. 2μπι注射器過濾后，將產(chǎn)物裝瓶。最后將產(chǎn)物冷凍，完成該制作過程。實施例2. 1. 3動物與分組使用重 250 350 克的成年雄性 Sprague-Dawley 大鼠(Harlan, Indianapolis, IN)(批次 120806 和 120806)。用于制劑篩選組分，此實施例根據(jù)Ls-TPT制劑或游離拓?fù)涮婵祵嶒瀯游锓殖伤慕M，如表1所列。
表1制劑篩選的分組和劑量
權(quán)利要求
1.一種改進(jìn)的非聚乙二醇化脂質(zhì)體遞送載體，其用于通過增強(qiáng)對流遞送將藥劑給藥到中樞神經(jīng)系統(tǒng)，所述載體包含包封于脂質(zhì)體制劑的治療劑或診斷劑，所述脂質(zhì)體制劑包含至少一種飽和的中性磷脂和至少一種飽和的陰離子磷脂。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非聚乙二醇化脂質(zhì)體遞送載體，其中，所述載體基本上由至少一種飽和的中性磷脂和至少一種飽和的陰離子磷脂組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非聚乙二醇化脂質(zhì)體遞送載體，還包含甾醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的非聚乙二醇化脂質(zhì)體遞送載體，其中，所述脂質(zhì)體制劑包括或基本上由DSPC、DSPG和CHOL組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的非聚乙二醇化脂質(zhì)體遞送載體，其中，所述脂質(zhì)體遞送載體基本上由摩爾比為7 2 1的DSPC、DSPG和CHOL組成。
6.一種包括根據(jù)權(quán)利要求1到5任一項所述的非聚乙二醇化脂質(zhì)體遞送載體的治療組合物，其中，所述脂質(zhì)體遞送載體包封拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的治療組合物，其中，拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑是拓?fù)涮婵怠?br> 8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的治療組合物，其中，所述拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑初始藥物濃度至少約為500μ g/mL。
9.一種包括根據(jù)權(quán)利要求1到5任一項所述的非聚乙二醇化脂質(zhì)體遞送載體的治療組合物，其中，所述脂質(zhì)體遞送載體包封毒素。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的治療組合物，其中，所述毒素選自以下物質(zhì)組成的組ω-芋螺毒素、肉毒桿菌毒素、μ -芋螺毒素和σ -芋螺抑制肽。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的治療組合物，其中，所述蛋白質(zhì)毒素是芋螺毒素。
12.—種改進(jìn)的治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的方法，包括向所需病人給藥根據(jù)權(quán)利要求1 到5中任一項所述的非聚乙二醇化脂質(zhì)體遞送載體或者根據(jù)權(quán)利要求6到11中任一項所述的治療組合物。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病是中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤， 并且其中所述治療劑是拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病是癲癇，并且其中所述治療劑是毒素。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，所述毒素是芋螺毒素。
16.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，還包括共同給藥至少一種包封于脂質(zhì)體的診斷劑， 所述脂質(zhì)體包括或基本上由飽和的中性磷脂和飽和的陰離子磷脂組成。
17.一種根據(jù)權(quán)利要求6到8中任一項所述的治療組合物，其具有治療需要患者中的中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的用途。
18.一種根據(jù)權(quán)利要求9到11中任一項所述的治療組合物，其具有治療需要患者中的癲癇的用途。
19.一種包括根據(jù)權(quán)利要求1到5任一項所述的非聚乙二醇化脂質(zhì)體遞送載體的診斷組合物，其中，所述脂質(zhì)體遞送載體包封磁共振成像磁體。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的診斷組合物，其中，所述磁共振成像磁體選自釓雙胺和羅丹明。
全文摘要
增強(qiáng)對流遞送(CED)作為一種將藥物制劑直接注入遞送到中樞神經(jīng)系統(tǒng)，從而繞開血液-血液屏障的方法使用。非聚乙二醇化脂質(zhì)體組合物包含至少一種飽和的中性磷脂和至少一種飽和的陰離子磷脂和包封在其中的治療劑或診斷劑，其用于克服與局部CED遞送產(chǎn)生的高峰值藥物濃度相關(guān)的毒性，同時增加用于改進(jìn)持續(xù)藥物釋放的組織分布容積。在一個實施例中，脂質(zhì)體組合物包括摩爾比為7∶2∶1的DSPC∶DSPG∶CHOL，和選自拓?fù)涮婵?，芋螺毒素，釓雙胺或羅丹明的治療劑或診斷劑，并用于治療癲癇。
文檔編號A61K49/18GK102256596SQ200980151445
公開日2011年11月23日 申請日期2009年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月21日
發(fā)明者M·魯茲, T·雷德梅爾 申請人:醫(yī)源治療公司