專利名稱：：抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物及其藥物組合物的制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種具有良好抗炎活性和生物可降解性的抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物作為聯(lián)合治療藥物載體，本發(fā)明還涉及該偶聯(lián)物的制備方法及其藥物組合物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種病因未明的自身免疫性疾病。治療方法包括藥物治療、外科治療和心理治療等，一般以藥物治療為主?？癸L(fēng)濕藥可分為四大類非甾體抗炎藥、改善病情的抗風(fēng)濕藥、糖皮質(zhì)激素和植物藥。研究表明，任何單一用藥都無法既緩解癥狀又改善病情，也都不能長期單獨(dú)使用。例如布洛芬、消炎痛等非甾體抗炎藥，具有良好的止痛、抗炎作用，但它們既不能長期應(yīng)用，也不能改變病程和預(yù)防關(guān)節(jié)破壞。又如，甲氨蝶呤、柳氮磺吡啶等改善病情的抗風(fēng)濕藥具有改善和延緩病情進(jìn)展等作用，但它們不具備即刻止痛和抗炎作用，對癥狀改善幫助不大，且發(fā)揮作用慢，用藥后臨床癥狀改善約需48周，故而稱為慢作用藥。再如，潑尼松、強(qiáng)的松龍等糖皮質(zhì)激素具有改善關(guān)節(jié)腫脹、疼痛等作用，也有助于減輕炎癥，但一般只能作為起效前的"橋梁"用藥，或應(yīng)用非甾體抗炎藥療效不滿意時(shí)的短期措施，不能長期使用。雷公藤等植物藥制劑在單獨(dú)使用時(shí)劑量偏大，可引起性腺抑制或(和)骨髓抑制等嚴(yán)重不良反應(yīng)，不可單獨(dú)使用。近年，大量臨床觀察與研究表明，早期聯(lián)合應(yīng)用抗風(fēng)濕藥，不僅可以盡快緩解病情，還可延緩病情進(jìn)展。然而，現(xiàn)有抗風(fēng)濕藥多為水難溶性藥物，難于制備適宜的制劑，往往需要采取各種增加溶解度的方法，如將藥物制備成鹽、加入潛溶劑、加入助溶劑以及加入表面活性劑增溶。但成鹽常需要強(qiáng)酸或強(qiáng)堿條件，對許多藥物不適用；生理安全的潛溶媒又很少，且用量有所限制；通過藥物形成絡(luò)合物而增加藥物溶解度的助溶劑，其安全性不易保證。此外，目前聯(lián)合用藥常采用多種制劑分別給藥，方式繁瑣，患者順應(yīng)性不好。藥物_高分子偶聯(lián)物應(yīng)運(yùn)而生，即將小分子疏水性抗炎藥物接入水溶性大分子載體，從而達(dá)到增加藥物可溶性、被動靶向和緩控釋作用、避免被腎臟快速清除延長藥物半衰期等目的。作為生命有機(jī)體的重要組分的多糖，在控制細(xì)胞分裂、調(diào)節(jié)細(xì)胞生長以及維持生命有機(jī)體正常代謝等方面有重要作用。同時(shí)，多糖具有優(yōu)良的生物相容性并能夠在生物體中酶解成易被活體吸收、無毒副作用的小分子物質(zhì)，此外，多糖的主鏈結(jié)構(gòu)還有大量的氨基和羧基，易于化學(xué)修飾(如?；?、硫酸酯化、接枝與交聯(lián)等)而改善其理化性質(zhì)。故以多糖作為抗炎藥物_高分子偶聯(lián)物的水溶性部分，具有其他高分子材料無以比擬的優(yōu)勢?，F(xiàn)已有部分多糖_藥物偶聯(lián)物處于研究階段，但這些偶聯(lián)物僅僅以藥物_多糖偶聯(lián)物形式給藥，仍無法通過一種制劑達(dá)到聯(lián)合治療的目的，并且藥物釋放行為單一，難以滿足類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療要求。此外，還存在以下缺陷高分子化學(xué)反應(yīng)本身固有的困難，使得合成條件較為苛刻，產(chǎn)率較低；當(dāng)不能通過羥基、氨基等官能團(tuán)直接進(jìn)行縮合時(shí)，所使用的連接臂較為復(fù)雜，如氨基酸或多肽；疏水性藥物的接枝率較低，載藥量不高，導(dǎo)致難以達(dá)到給藥劑量，影響治療效果等。針對以上問題，本專利以天然多糖為骨架，在多糖的羧基或經(jīng)衍生化形成的羧基上通過簡單的亞烷基二胺為連接臂，引入含羧基疏水性非甾體抗炎藥物，由于該抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物含有親水性多糖部分，和疏水性非甾體抗炎藥物部分，使其具有了兩親性，故該偶聯(lián)物可作為抗風(fēng)濕藥物載體，構(gòu)建一種新型、能夠通過一種制劑聯(lián)合給藥、治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物傳遞系統(tǒng)，兼具聚合物膠束的特征1)在水溶液中可自組裝形成納米膠束，避免了有機(jī)溶劑、表面活性劑、交聯(lián)劑或加熱條件的使用；2)膠束的疏水內(nèi)核通過物理包裹方式，增溶疏水性抗風(fēng)濕藥物，與化學(xué)偶聯(lián)的非甾體抗炎藥物協(xié)同發(fā)揮作用，達(dá)到聯(lián)合治療效果；3)由于增溶在偶聯(lián)物內(nèi)核的抗風(fēng)濕藥物是以非共價(jià)的方式與載體結(jié)合，使得運(yùn)載的藥物能夠較為容易釋放出來，與化學(xué)偶聯(lián)的非甾體抗炎藥物釋放行為相互輔助，達(dá)到程序性釋藥效果，從而降低毒副作用，提高療效。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種具有抗炎活性并生物可降解的抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物。該偶聯(lián)物在水介質(zhì)中可自組裝形成納米膠束，避免化學(xué)交聯(lián)劑、大量有機(jī)溶劑、加熱條件的使用，制備工藝簡單；可通過疏水基團(tuán)所形成的疏水內(nèi)核物理包裹抗風(fēng)濕藥物，顯著提高抗風(fēng)濕藥物的溶解性；此外，可通過化學(xué)偶聯(lián)非甾體抗炎藥物與物理包裹疏水性抗風(fēng)濕藥物，達(dá)到聯(lián)合治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的效果。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供包含上述抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物的藥物組合物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物及包含上述偶聯(lián)物藥物組合物的制備方法。本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供上述抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物及其藥物組合物在制藥中的應(yīng)用。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供一種新型抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物是在多糖分子的羧基或經(jīng)過衍生化形成的羧基上，通過亞烷基二胺為連接臂，引入疏水基團(tuán)——含羧基非甾體抗炎藥物，使其具有兩親性性質(zhì)，在水介質(zhì)中可自組裝為納米膠束。由于疏水基團(tuán)為非甾體抗炎藥物，通過物理包裹增溶抗風(fēng)濕藥物，故能夠達(dá)到聯(lián)合用藥治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的效果。所述的抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物，其中選用的多糖包括原本含有羧基的多糖未分級肝素、低分子量肝素、脫硫酸化肝素、透明質(zhì)酸、軟骨素、多硫酸化軟骨素、海藻酸和原本不具有羧基但引入羧基的多糖殼聚糖、羧甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖、琥珀酰殼聚糖、葡聚糖、真菌多糖。所述的抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物，其中疏水基團(tuán)為含羧基的非甾體抗炎藥物，包括疏水性含羧基的水楊酸類、苯丙酸類、苯乙酸類、噴哚類、滅酸類、烯醇酸類非甾體抗炎藥，優(yōu)選自阿司匹林、雙氯芬酸、酮洛芬、布洛芬、芬布芬、甲芬那酸、甲氯芬那酸、吲哚美辛、舒林酸、阿西美辛、芐達(dá)明、依托度酸、萘普生、異丁苯丙酸。所述的抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物的制備方法，包括下列步驟將含羧基非甾體抗炎藥物溶于適當(dāng)有機(jī)溶劑中，采用亞烷基二胺為連接臂，二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)、羥基琥珀酰亞胺(NHS)為活化劑進(jìn)行縮合反應(yīng)，得到游離一端氨基的活性中間體；將含羧基或經(jīng)衍生化成含羧基的多糖溶于反應(yīng)溶劑中，與得到的活性中間體通過1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)為活化劑，進(jìn)一步羧基和氨基縮合反應(yīng)。所述的制備方法，其中適當(dāng)有機(jī)溶劑優(yōu)選自N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、二甲基亞砜。所述的制備方法，其中連接臂為碳原子數(shù)212的亞烷基二胺結(jié)構(gòu)。所述的制備方法，其中反應(yīng)溶劑優(yōu)選自水、或甲酰胺、或N，N-二甲基甲酰胺與水、或甲酰胺與水、或甲酰胺與N，N-二甲基甲酰胺的混合溶劑。所述的抗炎藥物組合物，包含本發(fā)明所述的抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物和具有藥學(xué)活性或藥理活性分子。其中該藥學(xué)活性或藥理活性的分子選自慢作用抗風(fēng)濕藥包括甲氨蝶呤、羥氯喹、柳氮磺吡啶、來氟米特。所述的抗炎藥物組合物，可以用作注射、口服或外用給藥。其中注射給藥優(yōu)選注射劑、凍干粉針，口服給藥優(yōu)選片劑、膠囊劑、丸劑、糖漿劑、顆粒劑、口服溶液劑，外用給藥優(yōu)選貼劑、搽劑、洗劑、凝膠劑、涂劑、軟膏劑。該抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物的藥物組合物，制備成載藥納米膠束的方法操作步驟如下抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物與水按重量比為350:iooo的比例溶解，得到抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物納米膠束；將治療有效量的難溶或微溶于水的慢作用抗風(fēng)濕藥物用藥學(xué)上可接受溶劑溶解后，與所述抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物納米膠束混合后，經(jīng)超聲或高壓均質(zhì)處理，溶液用透析法或超濾法或柱分離法除去有機(jī)溶劑和小分子，凍干制得粒徑為101000nm的納米膠束。具體方案如下在含羧基或經(jīng)衍生化形成含羧基的多糖分子鏈上引入疏水基團(tuán)(含羧基抗炎藥物)，使其具有兩親性，在水介質(zhì)中可自組裝成納米膠束，相對疏水的含羧基抗炎藥物聚集成內(nèi)核，多糖分子親水鏈形成高度親水性外殼，具有穩(wěn)定膠束、有效躲避生物體網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的捕捉的作用。因此這類抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物可作為一類優(yōu)良的藥物載體，尤其對于難溶性抗風(fēng)濕藥物，從而能夠達(dá)到聯(lián)合治療目的。該偶聯(lián)物作為藥物載體，粒徑在101000nm可控，表面光滑，均勻度好，再分散性好，載藥量和包封率高。該偶聯(lián)物可用于注射、口服或外用給藥。兼具抗炎活性和生物可降解的抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物的合成及藥物組合物制備方法詳細(xì)說明如下—、抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物的合成1、活性中間體的的制備a.將含羧基非甾體抗炎藥物溶于適當(dāng)有機(jī)溶劑中，以二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)、羥基琥珀酰亞胺(NHS)為活化劑，控溫反應(yīng)至完全，抽濾除去沉淀，加入過量乙酸乙酯洗滌；對抽濾液進(jìn)行萃取，合并乙酸乙酯層，除去溶劑，得到活化中間酯。b.將亞烷基二胺和活化中間酯按適當(dāng)比例分別溶于適當(dāng)有機(jī)溶劑中，O4t:將亞烷基二胺緩慢滴入活化中間酯的溶液中，監(jiān)控反應(yīng)至完全；對反應(yīng)液進(jìn)行萃取，合并有機(jī)溶劑層。c.分離純化上述產(chǎn)品，得到氨基化的藥物，即活性中間體。所述合成路線圖解如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>R-COOH+NHKCH"-NH:R-C-NH-(CHi)n-NH2在上述活性中間體的制備方法中步驟a所述有機(jī)溶劑優(yōu)選為N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、二甲基亞砜，更優(yōu)選為N，N-二甲基甲酰胺；控溫反應(yīng)優(yōu)選為先o4t:反應(yīng)10150min，再升至室溫反應(yīng)到完全，更優(yōu)選為(TC反應(yīng)30min，再升至室溫反應(yīng)到完全；反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為436h，更優(yōu)選為24h。步驟b中所述亞烷基二胺和活化中間酯的比例優(yōu)選為230:l，更優(yōu)選為3:1;所述有機(jī)溶劑優(yōu)選為二氯甲烷。2、抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物的合成將含羧基或經(jīng)衍生化成含羧基的多糖和活性中間體溶于適當(dāng)反應(yīng)溶劑中，在N2保護(hù)下，以1-乙基_(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺為活化劑，室溫反應(yīng)至完全；反應(yīng)結(jié)束后，加入丙酮沉淀產(chǎn)物，抽濾得沉淀；加水復(fù)溶沉淀，透析，冷凍干燥即得最終產(chǎn)物抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物。所述合成路線圖解如下PS-COOH+R-C-NH-(CH^-NH2一R|NH-(CH2)n-NH-t;-PS在上述抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物的制備方法中所述反應(yīng)溶劑優(yōu)選為水、或甲酰胺、或N，N-二甲基甲酰胺與水、或甲酰胺與水、或甲酰胺與N，N-二甲基甲酰胺的混合溶劑，更優(yōu)選為水與甲酰胺的混合溶劑；反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為448h，更優(yōu)選為24h;透析時(shí)間優(yōu)選為15d，更優(yōu)選為3d。二、抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物膠束的制備方法按每lml水中溶解330mg的抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物的比例，將制得的抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物溶于水中，經(jīng)超聲或高壓均質(zhì)處理，制備成粒徑為101000nm的抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物膠束。三、以抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物作為載體，制備含難溶性抗炎藥物的藥物組合物抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物溶于水，將難溶性抗風(fēng)濕藥物如甲氨蝶呤用適當(dāng)溶劑溶解，與抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物水溶液混合，經(jīng)超聲或高壓均質(zhì)處理，通過透析法或超濾法或柱分離法除去有機(jī)溶劑及小分子，制得粒徑為101000nm的納米膠束。所謂適當(dāng)溶劑，指藥學(xué)上使用的能溶解該藥物的溶劑。四、采用抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物作為載體制備藥物組合物，可對抗炎藥物有效負(fù)載可使用該抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物作為載體的藥物有甲氨蝶呤、羥氯喹、柳氮磺吡啶、來氟米特及青霉胺等，但并不局限于這些所列藥物。本發(fā)明的有益效果—、本發(fā)明以亞烷基二胺為連接臂與含羧基非甾體抗炎藥物縮合，得到具有一端游離氨基的活性中間體，用一種簡單經(jīng)濟(jì)和容易實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)的方法將該活性中間體與含羧基或能夠衍生化形成含羧基的多糖反應(yīng)，制備了一系列抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物，條件溫和、反應(yīng)簡單、產(chǎn)率高；二、本發(fā)明提供的抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物，可以在水中自發(fā)形成納米膠束，不但可用于抗風(fēng)濕藥物的包載，還可以結(jié)合化學(xué)偶聯(lián)的非甾體抗炎藥物，達(dá)到聯(lián)合治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的效果；三、本發(fā)明提供了抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物的新應(yīng)用，獲得一種新型抗炎藥物組合物，治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎效果好、安全性高；四、本發(fā)明提供的抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物及其藥物組合物可用于注射、口服或外用給藥。本藥物組合物具有高度安全性，粒徑可控制在101000nm。具體實(shí)施方案下面通過實(shí)施例對本發(fā)明加以進(jìn)一步的說明，但下述實(shí)施例并不限制本專利的權(quán)利范圍。實(shí)施例1:酮洛芬_硫酸軟骨素偶聯(lián)物的合成取lOmmol酮洛芬、12mmo1二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)、15mmo1羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解在30mlN，N-二甲基甲酰胺中，避光、氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰浴反應(yīng)30min，然后升至室溫反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，濾去沉淀，并加大量乙酸乙酯洗滌沉淀。對濾液進(jìn)行萃取，合并乙酸乙酯層，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑得到酮洛芬活化中間酯。將3mmo1酮洛芬活化中間酯溶于15ml二氯甲烷中，在冰浴條件下，緩慢滴入9mmol/ml乙二胺的二氯甲烷溶液中，薄層色譜法(TLC法)監(jiān)控反應(yīng)至完全后，對反應(yīng)液進(jìn)行萃取，合并有機(jī)層，硅膠柱層析法分離純化所得產(chǎn)物，即酮洛芬活性中間體。取30mmo11_乙基_(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺，加入含0.2mmo1硫酸軟骨素的甲酰胺溶液中，室溫反應(yīng)20min，將含45mmo1酮洛芬活性中間體的N，N-二甲基甲酰胺的溶液緩慢加入上述反應(yīng)液中，室溫反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，加入丙酮沉淀產(chǎn)物，抽濾得沉淀。加水復(fù)溶沉淀，在水中透析3d，冷凍干燥即得最終產(chǎn)物酮洛芬-硫酸軟骨素偶聯(lián)物。實(shí)施例2:布洛芬-肝素偶聯(lián)物的合成取lOmmol布洛芬、16mmo1二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)、16mmo1羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解在20mlN，N-二甲基甲酰胺中，避光、氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰浴反應(yīng)45min，然后升至室溫反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，濾去沉淀，并加大量乙酸乙酯洗滌沉淀。對濾液進(jìn)行萃取，合并乙酸乙酯層，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑得到布洛芬活化中間酯。將2mmo1環(huán)丙沙星活化中間酯溶于10ml二氯甲烷中，在冰浴條件下，緩慢滴入5mmol/ml乙二胺的二氯甲烷溶液中，薄層色譜法(TLC法)監(jiān)控反應(yīng)至完全后，對反應(yīng)液進(jìn)行萃取，合并有機(jī)層，硅膠柱層析法分離純化所得產(chǎn)物，即布洛芬活性中間體。取36mmo11_乙基_(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺，加入含0.lmmol肝素的甲酰胺溶液中，室溫反應(yīng)20min，將含26mmo1布洛芬活性中間體的N，N-二甲基甲酰胺的溶液緩慢加入上述反應(yīng)液中，室溫反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，加入丙酮沉淀產(chǎn)物，抽濾得沉淀。加水復(fù)溶沉淀，在水中透析3d，冷凍干燥即得最終產(chǎn)物布洛芬-肝素偶聯(lián)物。實(shí)施例3:雙氯芬酸_透明質(zhì)酸偶聯(lián)物的合成取lOmmol雙氯芬酸、15mmo1二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)、15mmo1羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解在25ml二甲基亞砜中，避光、氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰浴反應(yīng)40min，然后升至室溫反7應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，濾去沉淀，并加大量乙酸乙酯洗滌沉淀。對濾液進(jìn)行萃取，合并乙酸乙酯層，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑得到雙氯芬酸活化中間酯。將3mmo1雙氯芬酸活化中間酯溶于25ml二氯甲烷中，在冰浴條件下，緩慢滴入5mmol/ml乙二胺的二氯甲烷溶液中，薄層色譜法(TLC法)監(jiān)控反應(yīng)至完全后，對反應(yīng)液進(jìn)行萃取，合并有機(jī)層，硅膠柱層析法分離純化所得產(chǎn)物，即雙氯芬酸活性中間體。取30mmo11_乙基_(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺，加入含0.lmmol透明質(zhì)酸的水溶液中，室溫反應(yīng)30min，將含30mmo1雙氯芬酸活性中間體的二甲基亞砜的溶液緩慢加入上述反應(yīng)液中，室溫反應(yīng)20h。反應(yīng)結(jié)束后，加入丙酮沉淀產(chǎn)物，抽濾得沉淀。加水復(fù)溶沉淀，在水中透析3d，冷凍干燥即得最終產(chǎn)物雙氯芬酸-透明質(zhì)酸偶聯(lián)物。實(shí)施例4:吲哚美辛_羧甲基殼聚糖偶聯(lián)物的合成取lOmmol噴哚美辛、16mmo1二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)、16mmo1羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解在25ml四氫呋喃中，避光、氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰浴反應(yīng)30min，然后升至室溫反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，濾去沉淀，并加大量乙酸乙酯洗滌沉淀。對濾液進(jìn)行萃取，合并乙酸乙酯層，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑得到吲哚美辛活化中間酯。將5mmo1吲哚美辛活化中間酯溶于40ml二氯甲烷中，在冰浴條件下，緩慢滴入20mmol/ml乙二胺的二氯甲烷溶液中，薄層色譜法(TLC法)監(jiān)控反應(yīng)至完全后，對反應(yīng)液進(jìn)行萃取，合并有機(jī)層，硅膠柱層析法分離純化所得產(chǎn)物，即吲哚美辛活性中間體。取30mmo11_乙基_(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺，加入含O.lmmol的羧甲基殼聚糖水溶液中，室溫反應(yīng)30min，將含25mmol吲哚美辛活性中間體的N，N-二甲基甲酰胺的溶液緩慢加入上述反應(yīng)液中，室溫反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，加入丙酮沉淀產(chǎn)物，抽濾得沉淀。加水復(fù)溶沉淀，在水中透析2d，冷凍干燥即得最終產(chǎn)物噴哚美辛-羧甲基殼聚糖偶聯(lián)物。實(shí)施例5:抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物納米膠束的制備和表征1、抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物納米膠束的制備實(shí)施例14抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物48mg溶解在8ml水中于室溫?cái)嚢鑜h，然后冰浴下超聲或高壓均質(zhì)后，O.45iim濾膜過濾，即得。2、粒徑將1制備得到抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物納米膠束，取lml用水稀釋到3ml，用粒徑測定儀(Malvernlnstr聽nts，Malvern，UK)進(jìn)行測定，結(jié)果見表l。3、臨界膠束濃度(CMC)采用最為靈敏的熒光探針法測定CMC。以芘為熒光探針，芘是一種疏水性芳香化合物，對環(huán)境極性極敏感。當(dāng)兩親性分子的濃度低于CMC時(shí)，溶液不會形成膠束，芘溶解在極性的水中；隨著兩親性分子的濃度高于CMC，膠束形成。芘相向膠束內(nèi)核的疏水部分分配，從而進(jìn)入非極性環(huán)境，繼而在其熒光光譜中可以觀察到一系列變化，如熒光強(qiáng)度增加，放射光譜中振動精細(xì)結(jié)構(gòu)(thevibrationalfinestructureoftheemissionspectra)發(fā)生變化，激光光譜(o，o)波段紅移。因此，通過以芘的發(fā)射光譜中的比(在固定的激發(fā)波長下掃描，Ipl3分別代表發(fā)射光譜中第一和第三強(qiáng)峰的熒光強(qiáng)度比)或激發(fā)光譜中1338/I333比(激發(fā)光譜中波長分別為338nm和333nm的熒光強(qiáng)度比)對兩親性分子的濃度作圖即可獲得兩親性分子的表觀CMC，結(jié)果見表1。表1抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物膠束的表征<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)施例6:包含甲氨蝶呤的抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物自組裝納米膠束組合物的制備和表征1、制備工藝抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物20mg，溶解在3ml水中攪拌lh。甲氨蝶呤8mg溶解在N，N-二甲基甲酰胺(二甲基亞砜)中。然后二者混合，探頭超聲30min后，重蒸水透析過夜，離心(3000rpm)15min，用0.45ym濾膜過濾，冷凍干燥。2、抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物自組裝納米膠束中甲氨蝶呤含量的測定用HPLC(LC-2010C，Shimadzu，Japan)方法進(jìn)行含量測定。流動相為乙睛0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖液(pH=4.85)=10:90(v/v)，色譜柱為LichrospherC18(150X4.6iim)，柱子粒徑為5iim。流速為1.OmL/min，檢測波長為313nm(SPD-10A，UVdetector,Shimadzu，Japan)，柱溫為25。C，注射樣品體積為20iU。以公式(1)計(jì)算樣品的載藥量。結(jié)果見表2。包封率(％),臓鵬x剛(1)投藥量表2實(shí)施例14載有甲氨蝶呤的抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物自組裝納米膠束<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)施例7:包含柳氮磺吡啶的抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物自組裝納米膠束組合物的制備和表征1、制備工藝抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物18mg，溶解在3ml水中攪拌lh。柳氮磺吡啶9mg溶解在二甲基亞砜(N，N-二甲基甲酰胺)中。然后二者混合，探頭超聲30min后，重蒸水透析過夜，離心(3000rpm)15min，用0.45ym濾膜過濾，冷凍干燥。2、抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物自組裝納米膠束中柳氮磺吡啶含量的測定用HPLC(LC-2010C，Shimadzu，J即an)方法進(jìn)行含量測定。流動相為甲醇乙腈水=35:35:30(v/v)，色譜柱為LichrospherC18(150X4.6ym)，柱子粒徑為5ym。流速為0.9mL/min，檢測波長為365nm(SPD-10A，UVdetector,Shimadzu，J即an)，柱溫為25°C，注射樣品體積為20iU。以公式(l)計(jì)算樣品的載藥量。結(jié)果見表3。表3實(shí)施例14載有柳氮磺吡啶的抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物自組裝納米膠束抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物希ijzr—乂'載藥量(％)實(shí)施例1透析法15.7實(shí)施例2透析法16.4實(shí)施例3透析法13.2實(shí)施例4透析法17.1實(shí)施例8:包含來氟米特的抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物自組裝納米膠束組合物的制備和表征1、制備工藝抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物20mg，溶解在3ml水中攪拌lh。來氟米特10mg溶解在乙酸乙酯中。然后二者混合，探頭超聲30min后，重蒸水透析過夜，離心(3000rpm)15min，用0.45iim濾膜過濾，冷凍干燥。2、抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物自組裝納米膠束中來氟米特含量的測定用HPLC(LC-2010C，Shimadzu，J即an)方法進(jìn)行含量測定。流動相為0.01mo1/l四丁基溴化銨(用醋酸調(diào)pH為3.o):乙腈甲醇=30:20:so(v/v)，色譜柱為LichrospherC18(150X4.6ym)，柱子粒徑為5ym。流速為1.OmL/min，檢測波長為260nm(SPD-10A，UVdetector,Shimadzu，J即an)，柱溫為25。C，注射樣品體積為20ii1。以公式(1)計(jì)算樣品的載藥量。結(jié)果見表4。表4實(shí)施例14載有來氟米特的抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物自組裝納米膠束抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物制備工藝載藥量(％)實(shí)施例1透析法15.6實(shí)施例2透析法17.4實(shí)施例3透析法14.3實(shí)施例4透析法15.2實(shí)施例9:包含抗風(fēng)濕藥物的抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物自組裝納米膠束組合物用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以實(shí)施例68為例，觀察其對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的影響1、方法將SD雄性大鼠70只按體重隨機(jī)分為14組，每組5只，設(shè)為空白對照組(ig生理鹽水10ml/kg)、模型組(ig生理鹽水10ml/kg)、包含甲氨蝶呤酮洛芬-硫酸軟骨素組(ig甲氨蝶呤5mg/kg)、包含甲氨蝶呤布洛芬-肝素組(ig甲氨蝶呤5mg/kg)、包含甲氨蝶呤雙氯芬酸_透明質(zhì)酸組(ig甲氨蝶呤5mg/kg)、包含甲氨蝶呤吲哚美辛_羧甲基殼聚糖組(ig甲氨蝶呤5mg/kg)、包含柳氮磺吡啶酮洛芬_硫酸軟骨素組(ig柳氮磺吡啶20mg/kg)、包含柳氮磺吡啶布洛芬_肝素組(ig柳氮磺吡啶20mg/kg)、包含柳氮磺吡啶雙氯芬酸_透10明質(zhì)酸組(ig柳氮磺吡啶20mg/kg)、包含柳氮磺吡啶吲哚美辛-羧甲基殼聚糖組(ig柳氮磺吡啶20mg/kg)、包含來氟米特酮洛芬_硫酸軟骨素組(ig來氟米特40mg/kg)、包含來氟米特布洛芬_肝素組(ig來氟米特40mg/kg)、包含來氟米特雙氯芬酸_透明質(zhì)酸組(ig來氟米特40mg/kg)、包含來氟米特吲哚美辛-羧甲基殼聚糖組(ig來氟米特40mg/kg)。其中除空白組以外其余各組均按0.1ml/只弗氏完全佐劑注射于大鼠左后足跖內(nèi)。觀察指標(biāo)A:體重觀察從實(shí)驗(yàn)第一天起，以后每周稱重一次；B:腫脹率測定采用游標(biāo)卡尺測定大鼠踝關(guān)節(jié)下約0.5cm處的足趾中心厚度代表足趾腫脹度，于致炎前及至炎后連續(xù)測定21天；C:關(guān)節(jié)炎指數(shù)(AI)計(jì)算致炎后第12天開始觀察并記錄全身關(guān)節(jié)病變程度，l次/3d。全身病變按5級評分法評價(jià)。根據(jù)未注射佐劑的其余3只肢體的病變程度累計(jì)積分，計(jì)算出AI。無紅腫為0分；小趾關(guān)節(jié)紅腫為1分；趾關(guān)節(jié)和足跖腫脹為2分；踝關(guān)節(jié)以下的足爪腫脹為3分；包括踝關(guān)節(jié)在內(nèi)的全部足爪腫脹為4分。把各個(gè)關(guān)節(jié)的累計(jì)起來，即為每只大鼠的AI。2、結(jié)果與模型對照組比較，各個(gè)載藥膠束組合物組大鼠左右足趾腫脹值在12-21天內(nèi)均有明顯降低，表明載藥膠束組合物對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)病變有較好的預(yù)防和治療作用；與模型對照組比較，各個(gè)載藥膠束組合物組大鼠的體重增長在3周時(shí)有顯著差異，表明載藥膠束組合物組隊(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠體重增長緩慢有明顯的改善；與模型對照組比較，各個(gè)載藥膠束組合物組在第12天時(shí)大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)(AI)比較差異不顯著(p>0.05)，此后模型組大鼠AI逐漸升高，第21天達(dá)峰，表明載藥膠束組合物組均能抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的關(guān)節(jié)病變。權(quán)利要求一種抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物，其特征在于該偶聯(lián)物是在多糖的羧基或經(jīng)衍生化形成的羧基上，通過亞烷基二胺為連接臂引入疏水性羧酸類非甾體抗炎藥物，使其具有兩親性質(zhì)，在水介質(zhì)中可自組裝為納米膠束；所述多糖包括原本含有羧基的多糖未分級肝素、低分子量肝素、脫硫酸化肝素、透明質(zhì)酸、軟骨素、多硫酸化軟骨素、海藻酸和原本不具有羧基但引入羧基的多糖殼聚糖、羧甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖、琥珀酰殼聚糖、葡聚糖、真菌多糖；所述抗炎藥物選自疏水性含羧基的水楊酸類、苯丙酸類、苯乙酸類、吲哚類、滅酸類、烯醇酸類非甾體抗炎藥。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的連接臂，其特征在于，連接臂為碳原子數(shù)212的亞烷基二胺結(jié)構(gòu)。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非甾體抗炎藥物，其特征在于選自阿司匹林、雙氯芬酸、酮洛芬、布洛芬、芬布芬、甲芬那酸、甲氯芬那酸、噴哚美辛、舒林酸、阿西美辛、芐達(dá)明、依托度酸、萘普生、異丁苯丙酸。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物的制備方法，其特征在于包括下列步驟將含羧基非甾體抗炎藥物溶于適當(dāng)有機(jī)溶劑中，采用亞烷基二胺為連接臂，二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)、羥基琥珀酰亞胺(NHS)為活化劑進(jìn)行縮合反應(yīng)，得到游離一端氨基的活性中間體；將含羧基或經(jīng)衍生化成含羧基的多糖溶于反應(yīng)溶劑中，與得到的活性中間體通過1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)為活化劑，進(jìn)一步羧基和氨基縮合反應(yīng)；所得多糖偶聯(lián)物即具有良好兩親性，在水介質(zhì)中可自發(fā)形成納米膠束。5.—種抗炎藥物組合物，其特征在于該組合物包含權(quán)利要求1所述的抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物和具有藥學(xué)活性或藥理活性的分子。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗炎藥物組合物，其特征在于，所述具有藥學(xué)活性或藥理活性的分子選自慢作用抗風(fēng)濕藥，包括甲氨蝶呤、羥氯喹、柳氮磺吡啶、來氟米特。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗炎藥物組合物，其特征在于該組合物可以用于聯(lián)合用藥治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗炎藥物組合物的應(yīng)用，其特征在于該組合物可以用于注射、口服或外用給藥。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述抗炎藥物組合物的應(yīng)用，其特征在于注射給藥優(yōu)選注射劑、凍干粉針，口服給藥優(yōu)選片劑、膠囊劑、丸劑、糖漿劑、顆粒劑、口服溶液劑，外用給藥優(yōu)選貼劑、搽劑、洗劑、凝膠劑、涂劑、軟膏劑。10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗炎藥物組合物，其特征在于該抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物和藥學(xué)活性或藥理活性分子制成載藥納米膠束，其方法包括如下步驟抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物與水按重量比為350:iooo的比例溶解，得到抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物納米膠束；將治療有效量的難溶或微溶于水的慢作用抗風(fēng)濕藥物用藥學(xué)上可接受溶劑溶解，與所述抗炎藥物_多糖偶聯(lián)物納米膠束混合后，經(jīng)超聲或高壓均質(zhì)處理，溶液用透析法或超濾法或柱分離法除去有機(jī)溶劑和小分子，凍干制得粒徑為101000nm的納米膠束。全文摘要本發(fā)明公開了一種抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物及其藥物組合物的制備與應(yīng)用。所述抗炎藥物組合物包括該抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物和慢作用抗風(fēng)濕藥物。該抗炎藥物-多糖偶聯(lián)物通過亞烷基二胺為連接臂，在多糖骨架上引入疏水性含羧基的非甾體抗炎藥物，使其具有兩親性質(zhì)，在水中自組裝形成納米膠束，從而能夠物理包裹抗風(fēng)濕藥物，并結(jié)合化學(xué)偶聯(lián)的非甾體抗炎藥物，達(dá)到聯(lián)合治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的效果。該偶聯(lián)物及其藥物組合物安全性高、治療效果好，可用于注射、口服或外用給藥。文檔編號A61P19/04GK101732728SQ201010100280公開日2010年6月16日申請日期2010年1月25日優(yōu)先權(quán)日2010年1月25日發(fā)明者侯琳,周建平,姚靜申請人:中國藥科大學(xué)