專利名稱：：柿葉提取物制劑及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地，本發(fā)明涉及一種柿葉提取物制劑及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
：柿葉味苦、性寒，具有下起平喘、止渴生津、療瘡等功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，柿葉提取物含黃酮類、鞣質(zhì)、酚類、香豆素、有機(jī)酸、胡蘿卜素等多種化學(xué)成分，并具有極為廣泛的生理活性，能有效改善心腦血管功能、增加冠脈流量、降血壓血脂以及防止神經(jīng)功能退化，適用于治療各種心腦血管疾病，如冠心病心絞痛、腦動(dòng)脈硬化、短暫腦缺血發(fā)作、腦血栓形成后遺癥、老年癡呆等。已有多種不同的以柿葉提取物為活性成分的中藥制劑，包括片劑、顆粒制劑、滴丸、膠囊等，如在中國(guó)專利公開號(hào)CN1813859A中公開了一種治療心腦血管疾病的腦心清顆粒，CN101036688A中公開的是一種腦心清滴丸，CN1813860A中公開的是腦心清分散片及其制備工藝等。但是，由于柿葉提取物是一種粘性大、崩解差、容易吸潮的中藥提取物，其制劑一般存在溶散時(shí)間較長(zhǎng)，溶出度低，影響其吸收和生物利用度等缺陷。因此，有必要進(jìn)一步提高該制劑的崩解性能、溶出性能及生物利用度。
發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明的目的在于，提供一種具有較好崩解性能、溶出性能和較高生物利用度的柿葉提取物制劑及其制備方法和用途。本發(fā)明的目的是采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。一方面，本發(fā)明提供了一種柿葉提取物制劑，按重量百分比計(jì)，其包括柿葉提取物干膏20-50%，糊精10-30%，淀粉20-40%，交聯(lián)聚維酮1_10%，羧甲基淀粉鈉1_10%以及吐溫-800.1-1%。優(yōu)選地，其中所述柿葉提取物干膏是通過以下方法制備的取選自水、乙醇、乙酸乙酯和丙酮中的一種或幾種溶劑適量，提取24次，回收溶劑，經(jīng)醇沉或萃取處理后，濃縮至相對(duì)密度1.101.20(60°C)，單獨(dú)干燥或加入適量輔料(淀粉或其他填充劑10%50%)干燥，濃縮干燥即得。優(yōu)選地，其中所述柿葉提取物干膏是通過以下方法制備的取干柿葉，適當(dāng)浸泡，水煎煮2次，每次0.53小時(shí)，煎液合并濃縮至相對(duì)密度1.101.20(60°C)，加乙醇至含醇量7090%，靜置過夜，過濾，同濃度乙醇洗滌殘?jiān)?，合并濾液與洗滌液，回收乙醇，之后進(jìn)行選自如下之一的處理1)直接濃縮，加入淀粉或其它填充劑如乳糖、蔗糖、甘露醇、微晶纖維素、糊精、硫酸鈣等，填充劑用量為1050%(重量)，混勻，干燥即得；或者2)經(jīng)乙酸乙酯萃取多次，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯再濃縮，加入淀粉或其它填充劑如乳糖、蔗糖、甘露醇、微晶纖維素、糊精、硫酸鈣等，填充劑用量為1050%(重量)，混勻，干燥即得。3優(yōu)選地，該制劑還可包括葡萄糖、交聯(lián)聚維酮、羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂、吐溫-80、二氧化硅等。優(yōu)選地，其中所述柿葉提取物干膏中的總黃酮含量以槲皮素和山奈素苷元計(jì)，為2%15%。優(yōu)選地，該制劑為口服固體制劑，所述口服制劑選自片劑、膠囊劑、散劑、丸劑、滴丸劑、顆粒劑、錠劑和茶劑等；優(yōu)選地，所述片劑選自普通片劑、包衣片劑、分散片、速溶片、口崩片、異形片、緩釋片、咀嚼片、泡騰片、口含片、舌下片和雙層片。另一方面，本發(fā)明提供了柿葉提取物制劑的制備方法，包括以下步驟柿葉提取物干膏粉及輔料混合，以濕法制備顆粒、干法制備顆粒，或粉末直接壓片，按需要包衣或不包衣，密封即得。再一方面，本發(fā)明提供了柿葉提取物制劑在制備治療冠心病心絞痛、腦動(dòng)脈硬化、短暫腦缺血發(fā)作、腦血栓形成后遺癥以及老年癡呆等藥物中的用途。綜上所述，按照本發(fā)明所選取的各種輔料及其配比所制備出的柿葉提取物制劑，具有更好的崩解性能，崩解時(shí)間縮短(崩解時(shí)限1-15分鐘)，形成均勻的混懸液，以槲皮素、山奈素為指標(biāo)的黃酮類溶出度15分鐘可達(dá)到93%以上，有良好的生物利用度。此外，本制劑的硬度、脆碎度理想，適合包各種衣層，如薄膜衣、糖衣、腸溶衣、緩釋包衣等。圖1A圖1F為實(shí)施例4中測(cè)定的各組大鼠腦海馬組織的光學(xué)顯微鏡圖；其中圖1A為正常對(duì)照組，圖1B為模型組，圖1C為銀杏黃酮組，圖1D為柿葉提取物低劑量組，圖1E為柿葉提取物中劑量組，圖1F為柿葉提取物高劑量組。具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明所提供的柿葉提取物制劑及其制備方法進(jìn)行詳細(xì)說明。實(shí)施例1、柿葉提取物片劑處方本實(shí)施例進(jìn)行了不同柿葉提取物片劑(制備250000片)的各種處方比較。具體處方分別如下處方1柿葉提取物干膏;盼(含淀粉約20%)加kg糊精23kg淀粉23kg交聯(lián)聚維酮9kg羧甲基淀粉鈉6kg吐溫-800.5kg其它2.5kg處方2柿葉提取物干膏;盼(含淀粉約20%)加kg淀粉35kg甘露醇10kg交聯(lián)聚維酮羧甲基淀粉鈉吐溫-80其它處方3柿葉提取物干，糖粉淀粉淀粉漿羧甲基淀粉鈉二氧化硅其它處方4柿葉提取物干，羧甲基淀粉鈉淀粉交聯(lián)聚維酮硬脂酸鎂吐溫-80其它處方5柿葉提取物干，糊精淀粉交聯(lián)聚維酮羧甲基淀粉鈉吐溫-80其它處方6柿葉提取物干，糊精淀粉交聯(lián)聚維酮羧甲基淀粉鈉吐溫-80其它10kg6kg0.5kg2.5kg粉(含淀粉約20%)36kg26kg20kg10kg5kg0.5kg2.5kg粉(含淀粉約20%)36kg6kg46kg9kglkg0.5kg2.5kg粉(含淀粉約20%)36kg26kg20kg10kg5kg0.5kg2.5kg酸鎂O.:粉(含淀粉約20%)加kg23kg23kg10kg5kg0.5kg2.5kg在上述各處方中，其它指在處方中還可以包含聚乙烯吡咯烷酮K301-3kg、硬脂5-2kg。在上述各處方中，柿葉提取物干膏有兩種制備方法，分別詳述如下柿葉提取物干膏粉制備方法1):干柿葉，適當(dāng)浸泡，水煎煮2次，每次O.53小時(shí)，煎液合并濃縮至相對(duì)密度1.101.20(60°C)，加乙醇至含醇量7090%，靜置過夜，過濾，同濃度乙醇洗滌殘?jiān)喜V液與洗滌液，回收乙醇，乙酸乙酯萃取多次。合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯，濃縮，加入20%的淀粉、甘露醇或乳糖，混勻，干燥即得。柿葉提取物干膏粉制備方法2):干柿葉，適當(dāng)浸泡，水煎煮2次，每次O.53小時(shí)，煎液合并濃縮至相對(duì)密度1.101.20(60°C)，加乙醇至含醇量7090%，靜置過夜，過濾，同濃度乙醇洗滌殘?jiān)?，合并濾液與洗滌液，回收乙醇，濃縮，加入40%的淀粉、甘露醇或乳糖，混勻，干燥即得。分別考察了按照以上各處方制備片劑的以下各項(xiàng)指標(biāo)硬度(平均5.8KN為優(yōu)良)、片重(0.40g適中，含柿葉提取物100mg/片)、脆碎度合格、崩解時(shí)限8分鐘。綜合比較測(cè)定結(jié)果，以處方l為最佳。輔你l2、輔你11白咖十翻又緒誦燃誠(chéng)本實(shí)施例為本發(fā)明所提供的柿葉提取物片劑的制備方法，詳述如下。1)柿葉提取物片劑的制備分別取柿葉提取物干膏粉36kg、淀粉23kg、糊精23kg、交聯(lián)聚維酮9kg、羧甲基淀粉鈉6kg、吐溫-800.5kg、聚乙烯吡咯烷酮K302kg、硬脂酸鎂lkg。濕法制顆粒，壓片，包薄膜衣，制成250000片。測(cè)定該柿葉提取物片劑的以下各項(xiàng)指標(biāo)硬度(平均5.5KN為優(yōu)良)、片重(0.40g適中，含柿葉提取物100mg/片)、脆碎度合格，崩解時(shí)限為8分鐘。2)柿葉提取物片劑的制備分別取柿葉提取物干膏粉18kg、淀粉30kg、糊精32kg、交聯(lián)聚維酮9kg、羧甲基淀粉鈉6kg、吐溫-800.5kg、聚乙烯吡咯烷酮K302kg、硬脂酸鎂1.5kg。濕法制顆粒，壓片，包薄膜衣，制成250000片。測(cè)定該柿葉提取物片劑的以下各項(xiàng)指標(biāo)硬度(平均6.3KN為優(yōu)良)、片重(0.40g適中，含柿葉提取物50mg/片)、脆碎度合格，崩解時(shí)限為6分鐘。實(shí)施例3、實(shí)施例1的柿葉提取物片劑的性能測(cè)定對(duì)按照實(shí)施例1中的處方1所制備的柿葉提取物片劑，以100mg/片規(guī)格進(jìn)行片劑的性能測(cè)定，包括崩解時(shí)限、脆碎度、含量及溶出度，具體詳述如下。1、崩解時(shí)限檢查參照中國(guó)藥典2005版二部附錄XIIA崩解時(shí)限檢查法進(jìn)行。測(cè)定結(jié)果崩解時(shí)限68分鐘，形成均勻的混懸液。目前市售的腦心清片(購(gòu)自廣州白云山和記黃埔中藥有限公司)的崩解時(shí)限一般為1420分鐘。2、脆碎度檢查參照中國(guó)藥典2005版二部附錄XG片劑脆碎度檢查法進(jìn)行。取16片柿葉提取物片劑，精密稱重，以脆碎度儀依法進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定結(jié)果片劑減失重量0.67%、0.44%、0.52%，平均值0.54%。未檢出斷裂、龜裂及粉碎的片。3、含量測(cè)定(槲皮素、山奈素含量)參照中國(guó)藥典2005版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定。測(cè)定條件固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠填充劑，流動(dòng)相為甲醇-0.2%磷酸溶液(50:50)，檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm。理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。對(duì)照品溶液的制備取槲皮素、山奈素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml分別含50g的混合溶液，即得。供試品溶液的制備取柿葉提取物片劑10片，精密稱定，研細(xì)，取約0.5g[規(guī)格lOOmg片及50mg片]，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率50kHz)30分鐘，取出放至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液lOml，加入甲醇10ml、25X鹽酸溶液5ml，搖勻，加熱回流30分鐘，放至室溫，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45iim)濾過，取續(xù)濾液，進(jìn)樣測(cè)定。4、溶出度測(cè)定參照中國(guó)藥典2005版二部附錄XC第三法。實(shí)驗(yàn)條件以100ml脫氣水為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速100r/分鐘，溫度37±0.5°C。于不同時(shí)間定位取樣5mL(前30分鐘每隔2分鐘取介質(zhì)溶液，后30分鐘每隔10分鐘取介質(zhì)溶液，共測(cè)定時(shí)間段90分鐘)，并迅速補(bǔ)充同溫等體積溶出介質(zhì)。0.45m微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，進(jìn)樣，按以上色譜條件測(cè)定槲皮素、山奈素含量，計(jì)算累積溶出百分率。以槲皮素、山奈素為指標(biāo)的黃酮類累積溶出百分率10分鐘可達(dá)到93%以上。參考銀杏制劑中以槲皮素、山奈素為指標(biāo)的黃酮的生物利用度研究，體外溶出度優(yōu)良，理論上生物利用度比已有制劑更高。而目前市售的腦心清片(購(gòu)自廣州白云山和記黃埔中藥有限公司)以槲皮素、山奈素為指標(biāo)的黃酮類累積溶出百分率為35分鐘80%。輔仿"、輔你11白咖十翻又緒誦,，輔本實(shí)施例對(duì)本發(fā)明實(shí)施例1所提供的柿葉提取物片劑進(jìn)行了藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，包括對(duì)大鼠急性前腦缺血再灌注損傷和心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。(—)柿葉提取物對(duì)大鼠急性前腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用1.實(shí)驗(yàn)材料1.1柿葉提取物片劑(100mg):用適量8(TC的2%NaHC03溶液溶解成2.5%溶液，再加8(TC熱生理鹽水稀釋5-10倍，備用。1.2試劑無水乙醇、二甲苯、石蠟、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、甲醛、氯化鈉等均為國(guó)產(chǎn)分析純。1.3儀器電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海)，LeicaRM2135輪轉(zhuǎn)式組織切片機(jī)(德國(guó))，光學(xué)顯微鏡(Olympusbx51)。1.4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠60只，雄性，體重175225g，清潔級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2.實(shí)驗(yàn)方法2.1分組與給藥先將大鼠稱重，按體重大小排序、編號(hào)；用隨機(jī)區(qū)組分組法將大鼠隨機(jī)分成6個(gè)組柿葉提取物片劑低劑量組(10mg/kg，SY低)、中劑量組(40mg/kg，SY中)、高劑量組(80mg/kg，SY高)，陽性藥物銀杏黃酮組(80mg/kg)、模型組、正常對(duì)照組。每組10只，5只一籠。溫度控制在25士rC，燈光控制為12小時(shí)光亮，12小時(shí)黑暗，自由飲水和食用動(dòng)物飼料。飼養(yǎng)3天后開始實(shí)驗(yàn)。給藥12天(腦缺血前4天，缺血后7天)，柿葉提取物高、中、低劑量組及銀杏黃酮組按每次15ml/kg的灌胃量給藥，每天2次，缺血造型前及夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈前2小時(shí)各灌胃l次。正常對(duì)照組和模型組腹腔灌胃給予等容量生理鹽水。2.2改良大鼠Pulsinelli四血管阻斷前腦缺血再灌注損傷模型除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠均按350mg/kg劑量腹腔注射10%水合氯醛進(jìn)行全身麻醉，手術(shù)分離兩側(cè)頸總動(dòng)脈，將4號(hào)縫線分別穿于兩側(cè)頸總動(dòng)脈下備用，縫合切口。在手術(shù)燈下，借助動(dòng)物腦定位儀，固定大鼠頭部，從正中切開頭蓋皮膚，充分暴露兩側(cè)第一頸椎橫穿孔，用直徑為0.5mm電凝針插入橫突孔，將兩側(cè)椎動(dòng)脈電凝，永久性阻斷椎動(dòng)脈血流，縫合切口。阻斷椎動(dòng)脈血流24h后，切開頸部縫線，分離并用動(dòng)脈夾夾閉兩側(cè)頸總動(dòng)脈，阻斷血流15分鐘，造成前腦缺血。前腦缺血模型成功的大鼠立即出現(xiàn)翻正反射消失，腳弓反張、四肢抽搐、肌肉震顫和瞳孔擴(kuò)大等。15分鐘后去除動(dòng)脈夾，恢復(fù)血流供應(yīng)。恢復(fù)血流供應(yīng)后3050分鐘內(nèi)大鼠重新站立起來，恢復(fù)自主活動(dòng)，全腦缺血再灌注造型成功。將大鼠置回籠中飼養(yǎng)，按上述給藥方案給藥。每天觀察大鼠行為和存活情況。2.3腦組織石蠟切片的制備實(shí)驗(yàn)大鼠分別在缺血再灌注后第8天，按350mg/kg劑量腹腔注射10%水合氯醛進(jìn)行全身麻醉，迅速剪開腹腔和胸腔，避免傷及肺和周圍臟器組織；分離充分暴露心臟，用穿剌針從左心室穿剌至主動(dòng)脈，同時(shí)剪開右心耳，先快速灌流生理鹽水200ml沖去組織中血液，然后灌注4%甲醛0.1M磷酸鹽緩沖液(PBS)約400ml，先快速灌注150ml，再緩慢滴注250ml，持續(xù)約1.5h初步固定大鼠全身組織。切下大鼠頭部，分離取出腦組織，修塊，用棉簽除去軟腦膜，置入O.lmol磷酸鹽緩沖液(PBS)、4X甲醛中后固定46h。腦塊經(jīng)常規(guī)脫水固定、浸蠟、包塊處理，用LeicaRM2135輪轉(zhuǎn)式組織切片機(jī)，切成厚度5iim腦部冠狀石蠟組織片，行常規(guī)Cresylviolet染色。2.4光鏡觀察將經(jīng)Cresylviolet染色的大鼠腦海馬組織石蠟片置光學(xué)顯微鏡下，觀察CA1區(qū)組織病理學(xué)變化，并計(jì)算存活的錐體細(xì)胞密度(個(gè)/mm)，拍照存檔。2.5實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS11.0軟件進(jìn)行方差分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x士s)表示，用方差分析比較確定方差齊性后行t檢驗(yàn)法分析各組數(shù)據(jù)差異的顯著性，P<0.05為顯著性界限。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果各組大鼠海馬CA1錐體神經(jīng)細(xì)胞密度結(jié)果見表1。表1柿葉提取物對(duì)前腦缺血再灌注損傷大鼠海馬CA1錐體神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用(x±s，n=10)組別劑量動(dòng)物CA1錐體神經(jīng)細(xì)胞密度(mg/kg)起始數(shù)存活數(shù)(個(gè)/鵬)正常對(duì)照組01010172.1±17.4模型組01077.1±3.4*銀杏黃酮組8010844.3±6.6ASY低1010740.2±6.rSY中4010980.6±9.6ASY向8010885.7±10.6A與正常對(duì)照組比較，*P<0.01;與模型組比較AP<0.01表1結(jié)果表明，模型組CA1錐體神經(jīng)細(xì)胞密度明顯減少，與正常對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.01)。柿葉提取物高、中、低劑量組CA1錐體神經(jīng)細(xì)胞密度較模型組顯著升高(均P<0.01)，且顯示出一定的劑量依賴性。陽性對(duì)照藥銀杏黃酮組的大鼠腦海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)細(xì)胞密度也比模型組明顯增加(P<0.01)。提示柿葉提取物及銀杏黃酮對(duì)急性前腦缺血再灌注所致大鼠腦海馬組織細(xì)胞損傷均有明顯保護(hù)作用。各組大鼠腦海馬組織光學(xué)顯微鏡下組織形態(tài)見圖l，其中圖IA為正常對(duì)照組，圖IB為模型組，圖1C為銀杏黃酮組，圖1D-1F分別為柿葉提取物高、中、低劑量組。正常對(duì)照組低倍鏡下(見圖l)，正常對(duì)照組大鼠腦海馬組織顯"C"形，分為CAl、CA2、CA3區(qū)，CA1區(qū)有34層錐體細(xì)胞，排列整齊；高倍鏡下，錐體細(xì)胞核大而圓，有12個(gè)核仁，錐體細(xì)胞密度為172.1±17.4。模型組大鼠經(jīng)Pulsinelli四血管阻斷、前腦缺血模型成功的大鼠立即出現(xiàn)意識(shí)消失、翻正反射消失和瞳孔擴(kuò)大。前腦缺血再灌注7天，可見動(dòng)物整體狀況不佳，大鼠外觀活動(dòng)明顯減少，皮毛聳聳，不光滑，體重減輕；大鼠腦組織細(xì)胞明顯損傷、海CA1區(qū)錐體細(xì)胞已大部分死亡，細(xì)胞碎片散亂分布。柿葉提取物高、中、低劑量組給予不同劑量的柿葉提取物，動(dòng)物整體狀況改善，大鼠外觀活動(dòng)正常，皮毛光滑，體重減輕不明顯；缺血再灌注后動(dòng)物存活數(shù)比模型對(duì)照組增多；與模型組比較，CA1區(qū)活錐體細(xì)胞密度顯著增加，不少CA1區(qū)細(xì)胞形態(tài)正常、大鼠腦海馬組織細(xì)胞形態(tài)得到明顯改善。(二)柿葉提取物片劑對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用1.材料與方法1.1試驗(yàn)藥物柿葉提取物片劑SY(含柿葉提取物100mg/片)。鹽酸維拉帕米片(40mg)，江蘇瑞年前進(jìn)制藥有限公司，批號(hào)0802001。1.2動(dòng)物SD大鼠，體重(220士30)g，雌雄各半，SPF級(jí)動(dòng)物，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK(粵)2006-0015。1.3試劑MDA、SOD、GSH-Px、ATP酶測(cè)定試劑盒和考馬斯亮藍(lán)試劑盒均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品；AST、LDH、LDH1、CK、CK-MB購(gòu)自英國(guó)朗道(RANDOX)公司。1.4儀器心電圖儀，上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司，ECG69511D心電圖機(jī)。JA-1203上皿電子天平，上海天平儀器廠。ELECTRONICBALANCE，型號(hào)AY120，D432711349，Shimadzucorporation,J即肌1.5方法大鼠隨機(jī)分為6組假手術(shù)(Sham)組、缺血再灌注(MIR)組、Ver組(9mg/kg)、SY低(10g/kg)、中(20g/kg)和高劑量(40g/kg)。各組于缺血前30分鐘經(jīng)十二指腸注射給藥。Sham和MIR組給同等體積的生理鹽水(2ml/kg)。各組大鼠以20%烏拉坦(5ml/kg)腹腔注射麻醉，仰臥位固定。針狀電極小心剌入四肢皮下，測(cè)定II導(dǎo)聯(lián)心電圖，心電圖不正常者舍去。分離氣管并插管后立即正壓人工呼吸(呼吸頻率70次/分，潮氣量50ml/kg，吸呼比l:2)。從左側(cè)第3、4肋間打開胸腔，使用淚囊掀開器充分暴露心臟，剪破心包膜，在肺動(dòng)脈圓錐左緣與左心耳右緣之間，平左心耳下緣2mm處進(jìn)針，進(jìn)針深度12mm，寬度23mm，用5/0無損傷縫合線穿過心肌層，繞過冠狀動(dòng)脈左前降支，除假手術(shù)組不結(jié)扎外，其余組均結(jié)扎。30分鐘后解除結(jié)扎，再灌注60分鐘。以心電圖ST段抬高、T波高聳作為心肌缺血的標(biāo)志；以抬高的ST段下降，T波逐漸恢復(fù)確定再灌注的成功。再灌注結(jié)束后，從腹主動(dòng)脈采血3m，1靜置30分鐘后離心(04°C，3000rpm，10分鐘)，取上層血清凍存?zhèn)溆?。取血后迅速取下心臟置于冰生理鹽水中，沖凈心腔內(nèi)血液，剪取結(jié)扎線以下的左心室組織凍存?zhèn)溆谩?)血清生化指標(biāo)的測(cè)定按試劑盒說明書分別測(cè)定血清MDA含量，SOD、GSH-Px的活性。2)血清心肌酶的測(cè)定采用生化分析儀檢測(cè)血清AST、LDH、LDH1、CK、CK-MB水平3)心肌組織ATP酶的測(cè)定心肌組織解凍后吸干水分，用冰生理鹽水制成10%組織勻漿，按試劑盒按說明書測(cè)定ATP酶的活性。2.結(jié)果2.1SY對(duì)血清MDA的含量和SOD、GSH-Px的活性的影響與Sham組比較，MIR組血清MDA含量顯著提高，而SOD、GSH-Px活性顯著降低；與MIR組相比，SY中、高劑量組MDA含量均顯著降低，而S0D、GSH-Px活性顯著提高，SY低劑量組SOD活性也顯著提高，結(jié)果見表1。表1SY對(duì)心肌缺血再灌注大鼠血清MDA、SOD和GSH-Px的影響(_x±s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>與模型組比較*P<0.05，**P<0.01(下同)2.2SY對(duì)血清心肌酶的影響與Sham組比較，MIR組血清各心肌酶均顯著提高；與MIR組比較，SY中、高劑量組血清各心肌酶均顯著降低，SY低劑量組血清除了AST水平無顯著性差異外，另外四項(xiàng)心肌酶都明顯降低。SY低、中、高劑量組各心肌酶水平下降還呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，結(jié)果見表2。表2PLF對(duì)心肌缺血再灌注大鼠血清心肌酶學(xué)的影響(-x士s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>SY低10326±301706±181*12.23±2.38*4819±564*5745±531*SY中20272±38"1374±277**9.27±2.70^3907±660**3987±863**SY高40267±19**980±190**9.49±3.15**3061±895**3183±676**2.3SY對(duì)心肌組織ATP酶活性的影響與Sham組比較，MIR組心肌組織ATP酶活性顯著降低；與MIR組比較，SY中、高劑量組心肌組織ATP酶活性顯著升高，但SY低劑量組無顯著性差異，結(jié)果見表3。表3SY對(duì)心肌缺血再灌注大鼠心肌組織ATP酶活性的影響(-x士s，n=10)組別劑量Na+K+-ATPCa2+Mg2+-ATPase(g/kg)(,olPi/mgprot.h)(|omolPi/mgprot.h)Sham4.54±0.73**5.05±0.60**MIR2.38±0.292.49±0.50Ver0.0093.49±0.53**3.51±0.56**SY低102.83±0.432.72±0.31SY中203.19±0.81**3.32±0.70*SY高403.67±0.56**3.94±0.59**綜上所述，SY對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷具有顯著的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與清除氧自由基，保護(hù)內(nèi)源性氧自由清除酶活性，增強(qiáng)抗脂質(zhì)過氧化能力和改善心肌組織能量代謝等有關(guān)。1權(quán)利要求一種柿葉提取物制劑，其特征在于，按重量百分比計(jì)，其包括柿葉提取物干膏20-50％，糊精10-30％，淀粉20-40％，交聯(lián)聚維酮1-10％，羧甲基淀粉鈉1-10％以及吐溫-800.1-1％。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述柿葉提取物制劑，其特征在于，所述柿葉提取物干膏是通過以下方法制備的取干柿葉，加入適量選自水、乙醇、乙酸乙酯和丙酮中的一種或幾種溶劑，提取24次，回收溶劑，經(jīng)醇沉或萃取處理后，濃縮至相對(duì)密度1.101.20(60°C)，單獨(dú)干燥或加入適當(dāng)輔料干燥，即得。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述柿葉提取物制劑，其特征在于，所述柿葉提取物干膏是通過以下方法制備的取干柿葉，適當(dāng)浸泡，水煎煮2次，每次0.53小時(shí)，煎液合并濃縮至相對(duì)密度1.101.20(60°C)，加乙醇至含醇量7090%，靜置過夜，過濾，同濃度乙醇洗滌殘?jiān)?，合并濾液與洗滌液，回收乙醇，之后進(jìn)行選自如下之一的處理1)直接濃縮，加入填充劑適量，干燥即得；或者2)經(jīng)乙酸乙酯萃取多次，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯再濃縮，加入填充劑適量，干燥即得；優(yōu)選地，所述填充劑選自淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇、微晶纖維素、糊精和硫酸鈣中的一種或幾種；更優(yōu)選地，所述填充劑的用量為1050%(重量)。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述柿葉提取物制劑，其特征在于，其還包括微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或硬脂酸鎂。5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述柿葉提取物制劑，其特征在于，以槲皮素和山奈素計(jì)，所述柿葉提取物干膏中的總黃酮含量為215%。6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的柿葉提取物制劑，其特征在于，該制劑為口服制劑，包括片劑、膠囊劑、散劑、丸劑、滴丸劑、顆粒劑、錠劑或茶劑；優(yōu)選地，所述片劑包括普通片劑、包衣片劑、分散片、速溶片、口崩片、異形片、緩釋片、咀嚼片、泡騰片、口含片、舌下片或雙層片。7.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述柿葉提取物制劑的制備方法，其包括以下步驟取柿葉提取物干膏20-50%、糊精10-30%，淀粉20-40%，交聯(lián)聚維酮1_10%，羧甲基淀粉鈉1-10%以及吐溫-800.1-1%混合，以濕法制備顆粒、干法制備顆粒，或者粉末直接壓片，按需要包衣或不包衣，密封即得；優(yōu)選地，所述柿葉提取物干膏是通過以下方法制備的取干柿葉，適當(dāng)浸泡，水煎煮2次，每次O.53小時(shí)，煎液合并濃縮至相對(duì)密度1.101.20(60°C)，加乙醇至含醇量7090%，靜置過夜，過濾，同濃度乙醇洗滌殘?jiān)喜V液與洗滌液，回收乙醇，之后進(jìn)行選自如下之一的處理1)直接濃縮，加入填充劑適量，干燥即得；或者2)經(jīng)乙酸乙酯萃取多次，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯再濃縮，加入填充劑適量，干燥即得；優(yōu)選地，所述填充劑選自淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇、微晶纖維素、糊精和硫酸鈣中的一種或幾種；更優(yōu)選地，所述填充劑的用量為1050%(重量)。8.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述柿葉提取物制劑在制備治療冠心病心絞痛、腦動(dòng)脈硬化、短暫腦缺血發(fā)作、腦血栓形成后遺癥以及老年癡呆的藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明提供一種柿葉提取物制劑及其制備方法和用途。本發(fā)明所提供的柿葉提取物制劑，包括柿葉提取物干膏20-50％，糊精10-30％，淀粉20-40％，交聯(lián)聚維酮1-10％，羧甲基淀粉鈉1-10％以及吐溫-800.1-1％。其制備是將提取物干膏與各種輔料混合，可采用濕法制粒(以水或一定濃度乙醇為潤(rùn)濕劑)壓片制為片劑；或者干法直接壓片制為片劑。本發(fā)明所提供的柿葉提取物制劑具有更好的崩解性能，崩解時(shí)間縮短，能形成均勻的混懸液，提高藥物生物利用度，適用于治療冠心病心絞痛、腦動(dòng)脈硬化、短暫腦缺血發(fā)作、腦血栓形成后遺癥以及老年癡呆等。文檔編號(hào)A61P25/08GK101744863SQ201010106230公開日2010年6月23日申請(qǐng)日期2010年1月29日優(yōu)先權(quán)日2010年1月29日發(fā)明者劉興華,李楚源,林青,肖曉麗申請(qǐng)人:廣州白云山和記黃埔中藥有限公司