專利名稱：一類白楊素和取代水楊酸酯復合物及其制法和用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一類新型白楊素和取代水楊酸酯復合物(又名2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]取代安息香酸酯)及其制備方法及其用途。

背景技術：
水楊酸類藥物(Salicylates)作為一種抗炎藥，其應用可追溯到遠古的亞西利亞帝國文化時代，亞述人用柳樹葉浸出液治療血管肌肉疼痛的疾病。水楊酸鹽是最早(1875年)治療風濕和痛風的藥物。鑒于水楊酸鹽的胃腸道刺激性和不適的口感，1897年德國拜爾公司的化學家霍夫曼(Hoffman)成功合成了阿司匹林——乙酰水楊酸(acetosalicylic acid，ASA)。到目前為止，阿司匹林已應用百年，成為醫(yī)藥史上三大經(jīng)典藥物之一，至今它仍是世界上應用最廣泛的解熱、鎮(zhèn)痛和抗炎藥，也是作為比較和評價其他藥物的標準制劑。在體內具有抗血栓的作用，它能抑制血小板的釋放反應，抑制血小板的聚集。臨床上用于預防心腦血管疾病的發(fā)作。但長期大量用藥(如治療風濕熱)，尤其是當藥物血濃度＞200μg/mL時則較易出現(xiàn)副作用。血濃度愈高，副作用愈明顯，較常見的有惡心、嘔吐、上腹部不適或疼痛等胃腸道反應。在免疫系統(tǒng)中，T細胞有著十分重要的作用，其功能的正常發(fā)揮是獲得性細胞免疫的核心環(huán)節(jié)，而T細胞功能的失調則會導致一系列自身免疫性疾病，許多研究表明，在肝炎，多發(fā)性硬化癥和類風濕關節(jié)炎等炎癥性疾病的病理過程中均有過度活化的T細胞的參與，因而，發(fā)現(xiàn)和研究能影響T細胞活化或者對活化的T細胞的功能具有調節(jié)作用的化合物或藥物，對免疫性疾病的治療有著重要的意義。
黃酮類天然產(chǎn)物小分子具有活性好，低毒，分子量不高，脂溶性好等一系列作為藥物的優(yōu)點，白楊素(Chrysin，又叫5，7-二羥基黃酮)是一種廣泛存在于多種植物中的黃酮類化合物，具有多種藥理作用，如抗病毒、抗氧化、抗腫瘤等。研究表明，白楊素能抑制多種炎癥介質和細胞因子的產(chǎn)生，具有抗炎和抗過敏效應，提示白楊素有一定的免疫抑制作用。水楊酸酯類化合物具有明顯的抗炎活性，同時在很大程度上減小胃潰瘍等副作用(J.Hannah，W.V.Ruyle，H.Jones，A.R.Matzuk，K.W.Kelly，B.E.Witzel，W.J.Holtz，R.A.Houser，T.Y.Shen，and L.H.Sarett.J.Med.Chem.，1978，21(11)，1093-1100.K.D.Rainsford and M.W.Whitehouse，Agents and Actions.1980，10(5)，451-456.)。鑒于以上研究，我們通過在各種取代的水楊酸酯分子羥基位置引入天然產(chǎn)物小分子白楊素，合成出一系列白楊素和取代水楊酸酯復合物，提高水楊酸的脂溶性，而且白楊素的低毒性和高活性的特點使此系列新型化合物可能具有非常低的毒性和很好的抗炎活性，為發(fā)現(xiàn)高效低毒的抗炎藥物打下基礎。


發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一類新型的白楊素和取代水楊酸酯復合物及其制備方法與用途。
本發(fā)明的技術方案如下 一類白楊素和取代水楊酸酯復合物，它有如下通式
式中R1＝CH3或CH2CH3；R2＝H、OCH3；R3＝H、Cl、Br或CH3；R4＝H、F、Cl、Br、OH、或CH3。
一種制備上述白楊素和取代水楊酸酯復合物的方法，它包括如下步驟 步驟1.在無水丙酮中依次加入白楊素和無水碳酸鉀，然后逐滴加入溴乙酸乙酯，60℃下加熱回流12h。其中白楊素與碳酸鉀的物質的量之比為1∶2，白楊素與溴乙酸乙酯的物質的量之比為1∶1.5。待反應物白楊素完全反應后，停止加熱。完全冷卻后，真空抽慮，棄掉固體后得到濾液，先用水洗一遍后再用氫氧化鈉溶液洗滌，最后再用水洗一遍，待干燥后得到淡黃色固體；
步驟2.將第一步得到的淡黃色固體溶于二甲亞砜(DMSO)溶液中，完全溶解后，加入5％碳酸鈉水溶液，90℃下加熱回流8h。待反應物完全反應后，加入1M鹽酸溶液，不斷攪拌，靜置4h，析出黃色固體，水洗兩遍后，干燥，得到黃色固體；
步驟3.將第二步得到的黃色固體溶于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入各種取代的水楊酸甲酯或者乙酯、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，95℃下加熱回流10h，其中反應物黃色固體與各種取代的水楊酸甲酯或者乙酯的物質的量之比是1∶1，與N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)的物質的量之比是1∶0.2，與N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)的物質的量之比是1∶1.1，反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和取代水楊酸酯復合物。

實驗結果表明，本發(fā)明的新型白楊素和取代水楊酸酯復合物能夠對由ConA引起的小鼠淋巴細胞增殖具有明顯的抑制作用。本發(fā)明還對篩選出的活性好的化合物進行了抗CD3和抗CD28抗體引起的小鼠淋巴細胞增殖實驗，結果顯示此化合物能夠呈劑量依賴性的抑制抗CD3和抗CD28抗體引起的小鼠淋巴細胞增殖，且抑制效果和環(huán)孢霉素A相當。因此可以有潛力成為一類非甾體抗炎藥。



圖1為不同劑量的化合物3對正常小鼠淋巴細胞活力的影響； 圖2為化合物3對抗CD3和抗CD28抗體引起的小鼠淋巴細胞增殖的影響。

具體實施例方式 通過以下實施例進一步詳細說明本發(fā)明，但應注意本發(fā)明的范圍并不受這些實施例的任何限制。
實施例一2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸乙酯的制備
在無水丙酮中依次加入白楊素(2.54g，10mmol)和無水碳酸鉀(2.76g，20mmol)，然后逐滴加入溴乙酸乙酯(0.3ml，15mmol)，60℃下加熱回流12h。完全冷卻后，真空抽慮，棄掉固體后得到濾液，先用水(100ml)洗一遍后再用氫氧化鈉溶液(10％，100ml)洗滌，最后再用水(100ml)洗一遍，待干燥后得到此目標化合物。淡黃色固體，產(chǎn)率86％，mp243-245℃，1H NMR(300MHz，d6-DMSO)1.25(t，J＝6.9Hz，3H)；4.19(m，2H)；4.96(s，2H)；6.43(m，1H)；6.85(m，1H)，7.01(s，1H)，7.60(m，3H)，8.10(m，2H)，12.81(s，1H)。MS(ESI)340.1(C19H16O6，[M+H]+).Anal.Calcd for C19H16O6C，67.05；H，4.74％；FoundC，67.08；H，4.72％。
實施例二2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸的制備
將實施例一得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸乙酯(3.4g，10mmol)溶于二甲亞砜(DMSO)溶液中，完全溶解后，加入5％碳酸鈉水溶液40ml，90℃下加熱回流8h。待反應物完全反應后，加入1M鹽酸溶液50ml，不斷攪拌，靜置4h，析出黃色固體。水洗(100ml)兩遍后，干燥，得到此目標化合物，黃色固體。產(chǎn)率82％，mp315-316℃；1H NMR(500MHz，d6-DMSO)2.51(s，3H)；4.85(s，2H)；6.41(m，1H)，6.82(m，1H)；7.04(s，1H)；7.61(m，3H)，8.11(m，2H)，12.80(s，1H)，13.20(s，1H)。MS(ESI)312.1(C17H12O6，[M+H]+).Anal.Calcd for C17H12O6C，65.39；H，3.87％；FoundC，65.37；H，3.85％. 實施例三5-羥基-2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸甲酯(化合物1)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入5-羥基水楊酸甲酯(1.68g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和5-羥基水楊酸酯復合物。白色粉末。產(chǎn)率為74％。M.p.187-188℃.1H NMR(300MHz，d6-DMSO)3.86(s，3H)；5.31(s，2H)；6.53-6.56(d，J＝2.17Hz，1H)；6.94-6.97(d，J＝2.43Hz，1H)；7.08(s，1H)；7.41-7.43(d，J＝5.67Hz，1H)；7.57-7.62(m，3H)；7.91-7.94(dd，J1＝2.47，J2＝8.56Hz，1H)；7.94-7.96(d，J＝2.61Hz，1H)；8.11-8.13(m，2H)；12.82(s，1H).MS(ESI)463.1(C25H19O9，[M+H]+).Anal.Calcd for C25H18O9C，64.94；H，3.92％；FoundC，64.76；H，3.74％. 實施例四5-甲基-2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸甲酯(化合物2)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入5-甲基水楊酸甲酯(1.66g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和5-甲基水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為71％.M.p.196-197℃.1H NMR(300MHz，d6-DMSO)2.38(s，3H)；3.85(s，3H)；5.31(s，2H)；6.53-6.55(d，J＝2.06Hz，1H)；6.96-6.97(d，J＝2.43Hz，1H)；7.07(s，1H)；7.41-7.43(d，J＝5.61Hz，1H)；7.57-7.62(m，3H)；7.93-7.96(dd，J1＝2.41，J2＝8.61Hz，1H)；7.95-7.96(d，J＝2.73Hz，1H)；8.09-8.11(m，2H)；12.81(s，1H).MS(ESI)461.1(C26H21O8，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H20O8C，67.84；H，4.38％；FoundC，67.62；H，4.59％. 實施例五5-溴-2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸甲酯(化合物3)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入5-溴水楊酸甲酯(2.29g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和5-溴水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為76％.M.p.202-203℃.1H NMR(300MHz，d6-DMSO)3.86(s，3H)；5.28(s，2H)；6.54-6.55(d，J＝2.09Hz，1H)；6.96-6.97(d，J＝2.43Hz，1H)；7.06(s，1H)；7.34-7.36(d，J＝5.13Hz，1H)；7.57-7.63(m，3H)；7.92-7.95(dd，J1＝2.55，J2＝8.61Hz，1H)；8.07-8.08(d，J＝2.71Hz，1H)；8.09-8.11(m，2H)；12.80(s，1H).MS(ESI)525.0(C25H18BrO8，[M+H]+).Anal.Calcd for C25H17BrO8C，57.16；H，3.26％；FoundC，57.41；H，3.38％. 實施例六5-氯-2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸甲酯(化合物4)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入5-氯水楊酸甲酯(1.86g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和5-氯水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為73％.M.p.204-205℃.1H NMR(300MHz，d6-DMSO)3.87(s，3H)；5.30(s，2H)；6.55-6.56(d，J＝2.19Hz，1H)；6.98-6.99(d，J＝2.40Hz，1H)；7.08(s，1H)；7.42-7.44(d，J＝5.58Hz，1H)；7.59-7.64(m，3H)；7.92-7.95(dd，J1＝2.57，J2＝8.64Hz，1H)；7.96-7.97(d，J＝2.73Hz，1H)；8.10-8.12(m，2H)；12.83(s，1H).MS(ESI)481.0(C25H18ClO8，[M+H]+).Anal.Calcd for C25H17ClO8C，62.45；H，3.56％；FoundC，62.73；H，3.35％. 實施例七5-氟-2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸甲酯(化合物5)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入5-氟水楊酸甲酯(1.70g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和5-氟水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為75％.M.p.207-209℃.1HNMR(300MHz，d6-DMSO)3.84(s，3H)；5.27(s，2H)；6.54-6.56(d，J＝2.17Hz，1H)；6.94-6.96(d，J＝2.41Hz，1H)；7.07(s，1H)；7.36-7.38(d，J＝5.17Hz，1H)；7.59-7.64(m，3H)；7.91-7.94(dd，J1＝2.64，J2＝8.73Hz，1H)；8.08-8.09(d，J＝2.73Hz，1H)；8.08-8.10(m，2H)；12.81(s，1H).MS(ESI)465.0(C25H18FO8，[M+H]+).Anal.Calcdfor C25H17FO8C，64.66；H，3.69％；FoundC，64.37；H，3.46％. 實施例八4-甲基-2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]安息香酸甲酯(化合物6)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入4-甲基水楊酸甲酯(1.66g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和4-甲基水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為70％.M.p.183-184℃.1H NMR(300MHz，d6-DMSO)2.39(s，3H)；3.83(s，3H)；5.27(s，2H)；6.54-6.55(d，J＝1.97Hz，1H)；6.98-6.99(d，J＝2.43Hz，1H)；7.06(s，1H)；7.17(s，1H)；7.25-7.27(d，J＝7.74Hz，1H)；7.59-7.62(m，3H)；7.87-7.89(d，J＝4.74Hz，1H)；8.09-8.11(m，2H)；12.82(s，1H).MS(ESI)461.1(C26H21O8，[M+H]+).Anal.Calcdfor C26H20O8C，67.82；H，4.38％；FoundC，67.63；H，4.52％. 實施例九4-氯-2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸甲酯(化合物7)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入4-氯水楊酸甲酯(1.86g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和4-氯水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為71％.M.p.171-174℃.1HNMR(300MHz，d6-DMSO)3.82(s，3H)；5.26(s，2H)；6.53-6.54(d，J＝2.14Hz，1H)；6.97-6.98(d，J＝2.41Hz，1H)；7.06(s，1H)；7.18(s，1H)；7.26-7.28(d，J＝7.81Hz，1H)；7.58-7.63(m，3H)；7.88-7.89(d，J＝4.71Hz，1H)；8.09-8.13(m，2H)；12.81(s，1H).MS(ESI)481.0(C25H18ClO8，[M+H]+).Anal.Calcd for C25H17ClO8C，62.45；H，3.56％；FoundC，62.73；H，3.71％. 實施例十4-溴-2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸甲酯(化合物8)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入4-溴水楊酸甲酯(2.29g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和4-溴水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為74％.M.p.176-178℃.1H NMR(300MHz，d6-DMSO)3.84(s，3H)；5.27(s，2H)；6.52-6.54(d，J＝2.19Hz，1H)；6.96-6.97(d，J＝2.43Hz，1H)；7.06(s，1H)；7.16(s，1H)；7.27-7.29(d，J＝7.83Hz，1H)；7.56-7.61(m，3H)；7.86-7.88(d，J＝4.74Hz，1H)；8.08-8.12(m，2H)；12.83(s，1H).MS(ESI)525.0(C25H18BrO8，[M+H]+).Anal.Calcd forC25H17BrO8C，57.16；H，3.26％；FoundC，57.43；H，3.47％. 實施例十一3-甲氧基-2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸甲酯(化合物9)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入3-甲氧基水楊酸甲酯(1.82g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和3-甲氧基-水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為73％.M.p.180-182℃.1H NMR(300MHz，d6-DMSO)3.87(s，3H)；3.89(s，3H)；5.30(s，2H)；6.92-6.93(d，J＝2.40Hz，1H)；7.07(s，1H)；7.37-7.51(m，3H)；7.58-7.64(m，3H)；8.09-8.12(m，2H)；12.84(s，1H).MS(ESI)477.1(C26H21O9，[M+H]+).Anal.Calcdfor C26H20O9C，65.55；H，4.23％；FoundC，65.72；H，4.43％. 實施例十二2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸甲酯(化合物10)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入水楊酸甲酯(1.52g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為76％.M.p.174-175℃。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)3.89(s，3H)；5.30(s，2H)；6.56-6.57(d，J＝2.07Hz，1H)；6.99-7.00(d，J＝2.41Hz，1H)；7.07(s，1H)；7.35-7.37(d，J＝7.95Hz，1H)；7.45-7.48(m，1H)；7.58-7.63(m，3H)；7.72-7.75(m，1H)；7.98-8.01(dd，J1＝2.43，J2＝8.67Hz，1H)；8.10-8.12(m，2H)；12.83(s，1H).MS(ESI)447.1(C25H20O8，[M+H]+).Anal.Calcdfor C25H18O8C，67.26；H，4.06％；FoundC，67.47；H，4.31％. 實施例十三5-羥基-2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸乙酯(化合物11)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入5-羥基水楊酸乙酯(1.82g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和5-羥基水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為70％。M.p.193-194℃.1H NMR(300MHz，d6-DMSO)1.29-1.34(t，J＝7.14Hz，3H)；3.87(s，3H)；4.31-4.36(m，2H)；5.31(s，2H)；6.53-6.56(d，J＝2.17Hz，1H)；6.91-6.95(d，J＝2.43Hz，1H)；7.07(s，1H)；7.41-7.44(d，J＝5.67Hz，1H)；7.54-7.61(m，3H)；7.91-7.95(dd，J1＝2.47，J2＝8.56Hz，1H)；7.95-7.98(d，J＝2.61Hz，1H)；8.11-8.13(m，2H)；12.81(s，1H).MS(ESI)477.1(C26H21O9，[M+H]+).Anal.Calcd forC26H20O9C，65.55；H，4.23％；FoundC，65.41；H，4.38％. 實施例十四5-甲基-2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸乙酯(化合物12)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入5-甲基水楊酸乙酯(1.80g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和5-甲基水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為76％.M.p.199-201℃.1H NMR(300MHz，d6-DMSO)1.27-1.34(t，J＝7.14Hz，3H)；2.39(s，3H)；3.83(s，3H)；4.33-4.38(m，2H)；5.31(s，2H)；6.51-6.55(d，J＝2.06Hz，1H)；6.93-6.97(d，J＝2.43Hz，1H)；7.07(s，1H)；7.41-7.43(d，J＝5.61Hz，1H)；7.57-7.62(m，3H)；7.92-7.95(dd，J1＝2.41，J2＝8.61Hz，1H)；7.95-7.97(d，J＝2.73Hz，1H)；8.06-8.10(m，2H)；12.81(s，1H).MS(ESI)475.1(C27H23O8，[M+H]+).Anal.Calcdfor C27H22O8C，68.35；H，4.67％；FoundC，68.52；H，4.45％. 實施例十五5-溴-2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸乙酯(化合物13)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入5-溴水楊酸乙酯(2.43g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和5-溴水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為71％.M.p.207-209℃.1H NMR(300MHz，d6-DMSO)1.28-1.35(t，J＝7.14Hz，3H)；3.87(s，3H)；4.32-4.37(m，2H)；5.29(s，2H)；6.52-6.55(d，J＝2.09Hz，1H)；6.94-6.97(d，J＝2.43Hz，1H)；7.06(s，1H)；7.34-7.36(d，J＝5.13Hz，1H)；7.57-7.63(m，3H)；7.91-7.95(dd，J1＝2.55，J2＝8.61Hz，1H)；8.07-8.08(d，J＝2.71Hz，1H)；8.09-8.11(m，2H)；12.80(s，1H).MS(ESI)539.0(C26H20BrO8，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H19BrO8C，57.90；H，3.55％；FoundC，57.76；H，3.32％. 實施例十六5-氯-2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸乙酯(化合物14)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-4-氧-2-苯基-4H-苯并吡喃基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入5-氯水楊酸乙酯(2.00g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗(飽和食鹽水與反應物的摩爾比為100∶1)，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和5-氯水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為72％.M.p.217-219℃.1H NMR(300MHz，d6-DMSO)1.25-1.34(t，J＝7.14Hz，3H)；3.87(s，3H)；4.32-4.39(m，2H)；5.31(s，2H)；6.53-6.56(d，J＝2.19Hz，1H)；6.96-6.99(d，J＝2.40Hz，1H)；7.08(s，1H)；7.42-7.44(d，J＝5.58Hz，1H)；7.56-7.64(m，3H)；7.91-7.95(dd，J1＝2.57，J2＝8.64Hz，1H)；7.95-7.97(d，J＝2.73Hz，1H)；8.11-8.14(m，2H)；12.81(s，1H).MS(ESI)494.0(C26H20ClO8，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H19ClO8C，63.10；H，3.87％；FoundC，63.36；H，3.62％. 實施例十七5-氟-2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸乙酯(化合物15)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入5-氟水楊酸乙酯(1.84g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和5-氟水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為78％.M.p.221-223℃.1H NMR(300MHz，d6-DMSO)1.28-1.34(t，J＝7.14Hz，3H)；3.83(s，3H)；4.34-4.37(m，2H)；5.27(s，2H)；6.54-6.56(d，J＝2.17Hz，1H)；6.92-6.96(d，J＝2.41Hz，1H)；7.07(s，1H)；7.36-7.38(d，J＝5.17Hz，1H)；7.57-7.64(m，3H)；7.92-7.94(dd，J1＝2.64，J2＝8.73Hz，1H)；8.06-8.09(d，J＝2.73Hz，1H)；8.08-8.10(m，2H)；12.81(s，1H).MS(ESI)478.0(C26H20FO8，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H19FO8C，65.27；H，4.00％；FoundC，65.41；H，4.17％. 實施例十八4-甲基-2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸乙酯(化合物16)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入4-甲基水楊酸乙酯(1.80g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和4-甲基水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為74％.M.p.178-180℃.1H NMR(300MHz，d6-DMSO)1.26-1.34(t，J＝7.14Hz，3H)；2.38(s，3H)；3.84(s，3H)；4.31-4.37(m，2H)；5.27(s，2H)；6.52-6.55(d，J＝1.97Hz，1H)；6.98-6.99(d，J＝2.43Hz，1H)；7.07(s，1H)；7.17(s，1H)；7.25-7.27(d，J＝7.74Hz，1H)；7.59-7.62(m，3H)；7.87-7.89(d，J＝4.74Hz，1H)；8.07-8.11(m，2H)；12.84(s，1H).MS(ESI)475.1(C27H23O8，[M+H]+).Anal.Calcd for C27H22O8C，68.35；H，4.67％；FoundC，68.52；H，4.51％. 實施例十九4-氯-2-[2-(5-羥基-4-氧-2-苯基-4H-苯并吡喃基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸乙酯(化合物17)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入4-氯水楊酸乙酯(2.00g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和4-氯水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為73％.M.p.177-179℃.1HNMR(300MHz，d6-DMSO)1.28-1.34(t，J＝7.14Hz，3H)；3.81(s，3H)；4.31-4.37(m，2H)；5.26(s，2H)；6.52-6.54(d，J＝2.14Hz，1H)；6.96-6.98(d，J＝2.41Hz，1H)；7.07(s，1H)；7.19(s，1H)；7.25-7.28(d，J＝7.81Hz，1H)；7.57-7.63(m，3H)；7.86-7.89(d，J＝4.71Hz，1H)；8.09-8.13(m，2H)；12.82(s，1H).MS(ESI)495.0(C26H20ClO8，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H19ClO8C，63.10H，3.87％；FoundC，63.38；H，3.64％. 實施例二十4-溴-2-[2-(5-羥基-4-氧-2-苯基-4H-苯并吡喃基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸乙酯(化合物18)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入4-溴水楊酸乙酯(2.45g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和4-溴水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為71％.M.p.171-173℃.1HNMR(300MHz，d6-DMSO)1.26-1.34(t，J＝7.14Hz，3H)；3.83(s，3H)；4.31-4.37(m，2H)；5.28(s，2H)；6.51-6.54(d，J＝2.19Hz，1H)；6.95-6.97(d，J＝2.43Hz，1H)；7.06(s，1H)；7.16(s，1H)；7.27-7.29(d，J＝7.83Hz，1H)；7.56-7.61(m，3H)；7.87-7.88(d，J＝4.74Hz，1H)；8.08-8.12(m，2H)；12.83(s，1H).MS(ESI)538.0(C26H20BrO8，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H19BrO8C，57.90；H，3.55％；FoundC，57.68；H，3.41％. 實施例二十一3-甲氧基-2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸乙酯(化合物19)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入3-甲氧基水楊酸乙酯(1.96g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和3-甲氧基水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為76％.M.p.184-186℃.1H NMR(300MHz，d6-DMSO)1.28-1.34(t，J＝7.14Hz，3H)；3.86(s，3H)；3.89(s，3H)；4.34-4.39(m，2H)；5.31(s，2H)；6.91-6.93(d，J＝2.40Hz，1H)；7.07(s，1H)；7.37-7.51(m，3H)；7.56-7.64(m，3H)；8.09-8.12(m，2H)；12.83(s，1H).MS(ESI)490.1(C27H23O9，[M+H]+).Anal.Calcd for C27H22O9C，66.12；H，4.52％；FoundC，66.37；H，4.41％. 實施例二十二2-[2-(5-羥基-2-苯基-4H-苯并吡喃酮基-7-氧)乙酰氧]-安息香酸乙酯(化合物20)的制備。

將實施例二得到的產(chǎn)物2-(5-羥基-4-氧-2-苯基-4H-苯并吡喃基-7-氧)乙酸(3.12g，10mmol)溶于30ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入水楊酸乙酯(1.66g，10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(3.08g，11mmol)，95℃下加熱回流12h。反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗(飽和食鹽水與反應物的摩爾比為100∶1)，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到上述本發(fā)明的白楊素和水楊酸酯復合物。白色粉末，產(chǎn)率為71％.M.p.187-189℃.1H NMR(300MHz，d6-DMSO)1.26-1.34(t，J＝7.14Hz，3H)；3.87(s，3H)；4.32-4.37(m，2H)；5.31(s，2H)；6.54-6.57(d，J＝2.07Hz，1H)；6.97-7.01(d，J＝2.41Hz，1H)；7.09(s，1H)；7.35-7.37(d，J＝7.95Hz，1H)；7.46-7.48(m，1H)；7.57-7.63(m，3H)；7.72-7.76(m，1H)；7.96-8.01(dd，J1＝2.43，J2＝8.67Hz，1H)；8.11-8.13(m，2H)；12.82(s，1H).MS(ESI)460.1(C26H21O8，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H20O8C，67.82；H，4.38％；FoundC，67.54；H，4.56％. 實施例二十三本發(fā)明合成的新型的白楊素和取代水楊酸酯復合物對ConA引起的小鼠淋巴細胞增殖具有明顯的抑制作用。
1.實驗材料和方法 1.1藥品與試劑 地塞米松磷酸鈉注射液(dexamethasone，南京華康)；RPMI-1640培養(yǎng)基(Gibco)內含100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素，用雙蒸水配制，調pH值至7.3，于1000mL容量瓶中定容，過濾滅菌，4℃保存，臨用前加10％滅活除菌的新生牛血清(Newborn Bovine Serum，南京亞榮)；刀豆蛋白A(ConcanavalinA，ConA，Sigma)；噻唑藍(MTT，Sigma)；鼠源IL-2，IFN-γ和TNF-αELISA試劑盒(Sigma)；環(huán)孢素A(Cyclosporin A，CsA，Sigma)； 1.2實驗動物 BALB/c雌性小鼠，6-8周齡，18-22克，購自揚州大學實驗動物中心；飼養(yǎng)于21±2℃，正常飼料，自由飲水。動物的實驗操作嚴格的按照善待實驗動物的指導性意見(中華人民共和國國家科學技術委員會，2006)，所有實驗操作均盡量減少動物的痛苦，損傷和使用數(shù)量。
1.3小鼠淋巴細胞懸液的制備 無菌取小鼠頸部，腋下，腹股溝淋巴結，置于有RPMI-1640的培養(yǎng)皿中，輕輕擠壓并用移液管反復吹打使細胞分散。通過濾網(wǎng)(400目)過濾，4℃，1000rpm離心5min，去上清，RPMI-1640重懸沉淀，得細胞懸液。用臺盼藍染色，細胞計數(shù)并檢測存活率，再調成所需濃度。
1.4細胞毒實驗 取制備好的小鼠淋巴細胞，以5×105cells/well置96孔培養(yǎng)板中，加入不同濃度藥物，于37℃，5％CO2，培養(yǎng)24h。終止培養(yǎng)前4h加入20μL MTT(4mg/mL)培養(yǎng)基溶液。4h后吸去上清，每孔加入200μL二甲亞砜，振蕩，使沉淀完全溶解，540nm處測量吸光度，觀察藥物是否存在細胞毒作用。
1.5Con A所致的正常小鼠淋巴細胞增殖試驗 取制備好的小鼠淋巴細胞，以5×105cells/well置96孔培養(yǎng)板中，在終濃度5μg/mL Con A，以及不同濃度藥物的共存下置37℃，5％CO2，培養(yǎng)72h。終止培養(yǎng)前4h加入20μL MTT(4mg/mL)培養(yǎng)基溶液或氚標記的胸腺嘧啶。4h后吸去上清，每孔加入200μL二甲亞砜，振蕩，使沉淀完全溶解，540nm處測吸光度，觀察藥物對細胞增殖的抑制效果。
2.實驗結果與討論 由Table1.可以看出，復合物1-10在三個濃度下(1μM，3μM，9μM)抑制率一般高于復合物11-20.提示白楊素接枝水楊酸甲酯復合物的抑制活性普遍高于相應的水楊酸乙酯復合物。在復合物1-10中，復合物3，4和5的抑制活性比同組其它復合物要高，說明5位鹵素取代水楊酸酯與白楊素組成的復合物其抑制活性要高于其它取代基的復合物。這三個復合物中，以復合物3的抑制活性最高，對應的三個濃度下均比白楊素的抑制率要高，在9μM濃度下其抑制率達到了78.85％，與陽性藥物環(huán)孢霉素A相當。說明復合物3能夠顯著的抑制由ConA引起的小鼠淋巴細胞增殖，是一種潛在的免疫抑制劑。
Table 1.白楊素和取代水楊酸酯復合物1-20對ConA引起的小鼠淋巴細胞增殖的抑制率。


實施例二十四本發(fā)明合成的新型的白楊素和取代水楊酸酯復合物3對抗CD3和抗CD28抗體引起的小鼠淋巴細胞增殖具有顯著的抑制作用。
1.化合物3對小鼠淋巴細胞活力的影響 首先考察了化合物3對正常小鼠淋巴細胞活力的影響。如Figure 1所示，不同劑量的化合物3分別和小鼠淋巴細胞共同培養(yǎng)24h，隨后用MTT法檢測淋巴細胞的存活。結果顯示，各濃度化合物3組的吸光值和Alone組無差異，因此，此實驗結果說明在1μM至64μM的濃度范圍內，化合物3對小鼠淋巴細胞的活力沒有影響。
2.化合物3對抗CD3和抗CD28抗體引起的小鼠淋巴細胞增殖的影響 如Figure 2所示，和Control組相比，1μM化合物3組的氚標胸腺嘧啶摻入值與之無差異；4μM化合物3組有顯著差異(P＜0.05)；8μM化合物3組有極顯著差異。因此，化合物3呈劑量依賴性地抑制了抗CD3和抗CD28抗體引起的小鼠淋巴細胞增殖，且8μM的化合物3的抑制效果和1μM環(huán)孢霉素A相當。
權利要求
1.一類白楊素和取代水楊酸酯復合物，其特征是它有如下通式
式中R1＝CH3或CH2CH3；R2＝H、OCH3；R3＝H、Cl、Br或CH3；R4＝H、F、Cl、Br、OH、或CH3。
2.一種制備權利要求1所述白楊素和取代水楊酸酯復合物的方法，其特征是它包括如下步驟
步驟1.在無水丙酮中依次加入白楊素和無水碳酸鉀，然后逐滴加入溴乙酸乙酯，60℃下加熱回流12h。其中白楊素與碳酸鉀的物質的量之比為1∶2，白楊素與溴乙酸乙酯的物質的量之比為1∶1.5。待反應物白楊素完全反應后，停止加熱。完全冷卻后，真空抽慮，棄掉固體后得到濾液，先用水洗一遍后再用氫氧化鈉溶液洗滌，最后再用水洗一遍，待干燥后得到淡黃色固體；
步驟將第一步得到的淡黃色固體溶于二甲亞砜(DMSO)溶液中，完全溶解后，加入5％碳酸鈉水溶液，90℃下加熱回流8h。待反應物完全反應后，加入1M鹽酸溶液，不斷攪拌，靜置4h，析出黃色固體，水洗兩遍后，干燥，得到黃色固體；
步驟3.將第二步得到的黃色固體溶于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入各種取代的水楊酸甲酯或者乙酯、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，95℃下加熱回流10h，其中反應物黃色固體與各種取代的水楊酸甲酯或者乙酯的物質的量之比是1∶1，與N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)的物質的量之比是1∶0.2，與N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)的物質的量之比是1∶1.1，反應完全后，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水Na2SO4干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2-1∶5，得到白楊素和取代水楊酸酯復合物。
3.權利要求1所述的白楊素和取代水楊酸酯復合物在制備非甾體類抗炎藥物中的應用。
全文摘要
一類新型的白楊素和取代水楊酸酯復合物，它有如下通式式中R1＝CH3或CH2CH3；R2＝H、OCH3；R3＝H、Cl、Br或CH3；R4＝H、F、Cl、Br、OH、或CH3。本發(fā)明的新型白楊素和取代水楊酸酯復合物能夠對由ConA引起的小鼠淋巴細胞增殖具有明顯的抑制作用。本發(fā)明還對篩選出的活性好的化合物進行了抗CD3和抗CD28抗體引起的小鼠淋巴細胞增殖實驗，結果顯示此化合物能夠呈劑量依賴性的抑制抗CD3和抗CD28抗體引起的小鼠淋巴細胞增殖，且抑制效果與陽性藥物環(huán)孢霉素A相當。因此可以有潛力成為一類非甾體抗炎藥。本發(fā)明公開了其制備方法。
文檔編號A61P29/00GK101768147SQ20101011130
公開日2010年7月7日 申請日期2010年1月22日 優(yōu)先權日2009年8月21日
發(fā)明者朱海亮, 呂鵬程, 王開銳, 陳進, 毛文君 申請人:南京大學中國醫(yī)藥城研發(fā)中心