專利名稱：一種含有plga加強網(wǎng)的復合型組織工程支架及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及組織工程構(gòu)建的支架材料及其制備方法，具體得說是涉及一種含有 PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架及其制備方法和應用。
背景技術：
各種致傷因素導致的組織缺損或器官衰竭，是人類健康的大敵。以真皮組織為例， 真皮組織位于表皮與皮下組織之間，對維持正常皮膚的彈性、韌性具有重要作用。真皮組織一旦遭受嚴重損傷，則無法再生。臨床上，單純的自體刃厚皮移植和單純的表皮細胞膜片移植后期大量的瘢痕形成和瘢痕攣縮也從另一個角度證明真皮組織的重要作用。目前，應對組織缺損的方式主要有三種，即自體組織移植、異體/異種組織移植、 人工材料替代。自體組織移植雖然臨床效果好，但是自體組織供區(qū)有限，且是一種“以傷治傷”的辦法；而異體或異種組織移植又受到免疫排斥反應的限制，都不是理想的治療方式。 組織工程和再生醫(yī)學的興起為克服組織缺損提供了第三條途徑。以組織工程軟骨為例，組織工程軟骨的發(fā)展通過重建受損的軟骨組織使軟骨再生成為可能。中國發(fā)明專利申請(申請?zhí)?2112498. 1申請日2002-07-10)公開了一種采用天然生物材料膠原和殼聚糖為原料，通過冷凍-凍干，再進一步通過真空干熱法、醛類化合物或碳化二亞胺類化合物交聯(lián)，制備具有微結(jié)構(gòu)可控、適宜降解速率和良好生物相容性的多孔支架。該發(fā)明的膠原/殼聚糖支架的生物相容性好，降解速率可控，且材料來源廣泛， 成本低，制備工藝簡單可行，重復性好，所構(gòu)建的支架可以廣泛地應用于組織工程領域，具有良好的臨床應用前景。中國發(fā)明專利申請(申請?zhí)?200610041912.9,申請日=2006-03-13)公開了一種制備可生物降解的組織工程用支架材料的方法。該發(fā)明提供的可生物降解組織工程用支架材料具有適宜的微觀結(jié)構(gòu)和空隙率，具有優(yōu)良的機械強度和可控的降解速率，可廣泛應用于皮膚、神經(jīng)修復管、血管以及心臟瓣膜等多種組織的修復與重建。中國發(fā)明專利申請(申請?zhí)?200510061872.X,申請日:2005-12-07)公開了一種膠原-殼聚糖和硅橡膠雙層皮膚再生支架及其制備方法。該皮膚再生支架由膠原/殼聚糖多孔支架和硅橡膠薄膜通過生物相容性良好的膠粘劑粘結(jié)而成。其中膠原/殼聚糖多孔支架可以有效誘導缺損組織處細胞的遷移、增殖和分化，原位誘導缺損真皮組織的再生；硅橡膠薄膜則起到了臨時表皮層的作用，可以有效控制水分的揮發(fā)和防止細菌的侵入等，對創(chuàng)面起到了臨時保護作用。本發(fā)明所制備的膠原-殼聚糖/硅橡膠復合支架具有良好的生物相容性，可控的降解速率和優(yōu)異的創(chuàng)面修復能力，具有較良好的臨床應用前景。中國發(fā)明專利(申請?zhí)?200710068310. 7，申請日=2007-04-25)公開了膠原-殼聚糖/纖維蛋白膠不對稱支架，該不對稱支架包括膠原-殼聚糖多孔材料層和纖維蛋白膠層，纖維蛋白膠層均勻設置在膠原-殼聚糖多孔材料層的表面，兩者之間形成有交界面。本發(fā)明所制備的膠原-殼聚糖/纖維蛋白膠不對稱支架具有良好的細胞相容性，是一種適應組織工程皮膚尤其是復合皮膚構(gòu)建的皮膚再生材料。但是理想的組織工程支架，除了具有良好的生物相容性和可降解性之外，還應具有良好的機械性能，從而不但可以在體內(nèi)起到良好的支撐作用，而且也有利于臨床上的操作和應用。有研究者甚至將力學性能作為材料生物相容性的重要方面之一。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有組織工程支架的機械性能問題，本發(fā)明的第一個目的是提供一種生物相容性良好，機械性能優(yōu)良，并具有特定的三維多孔結(jié)構(gòu)，能夠完好地滿足組織工程組織、器官構(gòu)建，進而促進組織缺損的填充、愈合并提高愈合質(zhì)量的含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架。本發(fā)明的第二個目的是提供上述的復合型組織工程支架的制備方法。本發(fā)明的第三個目的是提供上述的復合型組織工程支架的應用。為了實現(xiàn)上述的第一個目的，本發(fā)明采用了以下技術方案含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架，該組織工程支架包括具有良好生物相容性的多孔支架和PLGA加強網(wǎng)，所述的PLGA加強網(wǎng)由PLGA纖維編織而成，PLGA加強網(wǎng)與多孔支架緊密結(jié)合在一起。作為優(yōu)選，上述的復合型組織工程支架至少包括以下三種結(jié)構(gòu)①PLGA加強網(wǎng)位于多孔支架的一側(cè)形成“偏心”型結(jié)構(gòu)；②或者，PLGA加強網(wǎng)位于多孔支架的中間構(gòu)成“夾心”型的結(jié)構(gòu)；③或者，在PLGA加強網(wǎng)的網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)中形成多孔支架的三維多孔結(jié)構(gòu)。作為優(yōu)選，上述的多孔支架具有30 500 μ m的孔徑結(jié)構(gòu)。作為優(yōu)選，上述的PLGA加強網(wǎng)具有200 3000 μ m的網(wǎng)孔，單根PLGA編織線的直徑在10 200 μ m之間。作為優(yōu)選，上述的多孔支架采用膠原/殼聚糖復合型多孔支架或膠原多孔支架， 其中膠原的重量百分比含量為80% 100%。膠原材料可以是牛、羊或豬腱膠原，牛、羊或豬皮膠原或鼠尾膠原。當然，本發(fā)明的多孔支架的材料也可以采用現(xiàn)有的適用于組織工程用多孔支架材料，如可降解聚酯或者背景技術中提到的多孔支架，所屬領域技術人員可以通過合理推斷并多次實驗獲得。作為優(yōu)選，上述的所述的PLGA纖維中聚乳酸單體和聚乙醇酸單體的摩爾數(shù)量之比為 50 50 1 99。為了實現(xiàn)上述的第二個目的，本發(fā)明采用了以下技術方案一種制備上述的含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架的制備方法，該方法包括如下步驟①配制質(zhì)量濃度為0. 05% 5%的多孔支架材料溶液；②將PLGA纖維編織，再經(jīng)丙酮清洗、純凈水超聲波清洗和真空熱定型后得到PLGA 加強網(wǎng)；上述的PLGA纖維由聚乳酸(LA)和聚乙醇酸(GA)單體充分混合后在高溫下行本體混合，經(jīng)熔融紡絲制得；③將PLGA加強網(wǎng)裁剪成一定的形狀并平展地放入模具中并固定，然后將多孔支架材料溶液注入模具中，于rc 5°C下充分作用，采用冷凍-凍干法制備得到預交聯(lián)復合
5型組織工程支架；④將上述所得的預交聯(lián)復合型組織工程支架根據(jù)需要選擇或者不選擇進行以下一種或兩種交聯(lián)反應，交聯(lián)反應后清洗，再次冷凍-凍干I、真空干熱交聯(lián)，置于80°C 180°C下真空干熱交聯(lián)處理；II、化學交聯(lián)，置于醛類化合物或碳化二亞胺類化合物中化學交聯(lián)12 48小時。作為優(yōu)選，上述的步驟①采用酸性溶液配置多孔支架材料溶液，所述的多孔支架材料采用膠原或者膠原和殼聚糖混合溶液，其中膠原的重量百分比含量為80% 100%。 作為再優(yōu)選，上述的酸性溶液為0. 5M 2. 5M乙酸、甲酸、鹽酸中的一種或幾種，pH為2. 0 3. 0。作為優(yōu)選，上述的步驟③和④冷凍-凍干法的溫度為_5°C _80°C。作為優(yōu)選，上述的步驟④醛類化合物甲醛或戊二醛，碳化二亞胺類化合物為1-乙基-3-3- ( 二甲基胺丙基)-碳化二亞胺。本發(fā)明三種具體的復合型組織工程支架的制備方法如下(一 ) “偏心”型含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架的制備方法1)將PLGA加強網(wǎng)裁剪成合適的形狀后，平展地鋪在一塊平板模具上；2)將一塊具有一定厚度的“框”型模具緊密壓在PLGA加強網(wǎng)上，以四周剛好將網(wǎng)壓住為好；3)將一定量的多孔支架材料溶液注入“框”型模具中，使溶液平展地分布在PLGA 加強網(wǎng)的上方并將網(wǎng)完全浸潤，然后冷凍、凍干，復合型支架在80°C -130°C下真空干熱交聯(lián)處理，再經(jīng)醛類化合物或碳化二亞胺類化合物中化學交聯(lián)12-48小時、經(jīng)去離子水充分漂洗后，再次冷凍-凍干后得到“偏心”型含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架。( 二)“夾心”型含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架的制備方法1)將一塊特定厚度的“框”型模具置于一塊平板模具上，然后注滿多孔支架材料溶液并將液面推平；2)將PLGA加強網(wǎng)裁剪成合適的形狀后，平展地鋪在第一塊模具及多孔支架材料溶液的液面上；3)將另一塊相同大小的“框”型模具緊密壓在PLGA加強網(wǎng)上，使上下兩塊“框”型模具對齊且其四周剛好將網(wǎng)壓住為好；4)將一定量的多孔支架材料溶液注入“框”型模具中，使溶液平展地分布在PLGA 加強網(wǎng)的上方，然后冷凍、凍干，經(jīng)干熱和化學交聯(lián)、去離子水充分漂洗、再次冷凍-凍干后得到“夾心”型含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架。(三)“簡單”型含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架的制備方法將PLGA加強網(wǎng)裁剪成合適的形狀后浸入多孔支架材料溶液中，一定時間后取出平展地鋪在平板模具上，并將PLGA加強網(wǎng)上多余的溶液成分輕輕刮去，經(jīng)冷凍-凍干、物理化學交聯(lián)、去離子水充分漂洗和再冷凍-凍干后得到“簡單”型含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架。上述的平板模具和“框”型模具均為醫(yī)用級的材料制備而成，其材質(zhì)可以是玻璃、
聚氨酯、聚酯、聚氯乙烯、聚乙烯、聚苯乙烯、硅膠、金屬等。當然上述的復合型支架在應用于細胞培養(yǎng)或體內(nèi)移植前，可以不經(jīng)過交聯(lián)處理，或者是只進行某一種方式的交聯(lián)(真空干熱交聯(lián)或化學交聯(lián))，或者是理化交聯(lián)方式聯(lián)合應用。為了實現(xiàn)第三個目的，本發(fā)明公開了上述復合型組織工程支架(“夾心”型、“偏心，，型和“簡單”型)用于構(gòu)建組織工程皮膚、骨、軟骨、肌腱、腹膜、硬腦膜、黏膜、血管中的應用。本發(fā)明制備的PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架因為含有PLGA加強網(wǎng)而具有與脫細胞真皮基質(zhì)相似的機械性能，更有利于支架三維多孔結(jié)構(gòu)的維系，從而更有利于細胞、血管及組織的長入；而膠原、殼聚糖等天然來源的大分子其優(yōu)良的生物相容性使復合支架本身的生物學性能得以保持，有利于細胞的粘附、增殖和分泌。因此，本發(fā)明制備的含有 PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架(“夾心”型、“偏心”型和“簡單”型)是一種適用于組織工程組織、器官構(gòu)建的優(yōu)良的再生材料。


圖1是本發(fā)明含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架橫斷面的掃描電鏡(SEM) 照片。圖2是本發(fā)明含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架PLGA加強網(wǎng)一側(cè)的掃描電鏡(SEM)照片。圖3是本發(fā)明含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架在SD大鼠體內(nèi)埋植的手術照片。圖4是本發(fā)明含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架體內(nèi)埋植2周的病理切片照片，Masson染色X 40。圖5是本發(fā)明含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架體內(nèi)埋植4周的病理切片照片，Masson染色X 40。圖6是本發(fā)明含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架體內(nèi)埋植4周的病理切片照片，Masson染色X 40。圖7是本發(fā)明含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架在SD大鼠體內(nèi)移植的手術照片。圖8是本發(fā)明含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架體內(nèi)移植2周的病理切片照片，HE染色X 40。圖9是本發(fā)明含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架體內(nèi)移植4周的病理切片照片，HE染色X 40。
具體實施例方式實施例IPLGA加強網(wǎng)的制備聚乳酸(LA)和聚乙醇酸(GA)單體按摩爾1 1，充分混合后在高溫下行本體混合，經(jīng)熔融紡絲成線后，編織得到PLGA加強網(wǎng)，PLGA加強網(wǎng)具有200 3000 μ m的網(wǎng)孔，單根PLGA編織線的直徑在10 200 μ m之間；該網(wǎng)經(jīng)丙酮清洗、純凈水超聲波清洗和真空熱定型后得到PLGA加強網(wǎng)。上述的聚乳酸(LA)和聚乙醇酸(GA)單體按摩爾也可以選擇1 1 1 99中任意一個組分比。實施例2含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架掃描電鏡下的超微結(jié)構(gòu)觀察將膠原和殼聚糖分別配成質(zhì)量分數(shù)為0. 5%乙酸溶液，然后將膠原溶液和殼聚糖溶液按照9 1的體積比混合后，充分攪拌均勻，備用；將PLGA加強網(wǎng)裁剪成4. 5cmX4. 5cm 大小，并平展地鋪在平板上，再將一塊厚度為Icm大小為4cmXkm的“框”型模具緊密地壓在網(wǎng)上，然后注入膠原/殼聚糖溶液3. 2mL使其均勻地將PLGA加強網(wǎng)浸潤；將PLGA加強網(wǎng)、膠原/殼聚糖溶液連同模具共同置于4°C下M小時后，于-20°C冷凍M小時，然后置于凍干機中凍干16小時；凍干的復合支架于105°C下真空干熱交聯(lián)M小時，再置于摩爾濃度比為2 1的EDAC(40_ol)和N-羥基丁二酰亞胺(NHS)混合溶液中交聯(lián)M小時，經(jīng)三蒸水反復清洗后再次冷凍-凍干得到交聯(lián)后的“偏心”型含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架。將制備的“偏心”型含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架表面噴金處理后，做掃描電鏡觀察。由復合支架的橫斷面和側(cè)面可見膠原/殼聚糖支架與PLGA加強網(wǎng)緊密地結(jié)合在一起，并保持本身的三維多孔結(jié)構(gòu)(孔徑為80μπι-200μπι)；通過PLGA加強網(wǎng)的網(wǎng)孔可見膠原/殼聚糖的三維結(jié)構(gòu)。見圖1，圖2。實施例3含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架體內(nèi)埋植實驗將膠原和殼聚糖分別配成質(zhì)量分數(shù)為0. 5%乙酸溶液，然后將膠原溶液和殼聚糖溶液按照9 1的體積比混合后，充分攪拌均勻，備用；將PLGA加強網(wǎng)裁剪成4. 5cmX4. 5cm 大小，并平展地鋪在平板上，再將一塊厚度為Icm大小為4cmXkm的“框”型模具緊密地壓在網(wǎng)上，然后注入膠原/殼聚糖溶液3. 2mL使其均勻地將PLGA加強網(wǎng)浸潤；將PLGA加強網(wǎng)、膠原/殼聚糖溶液連同模具一起置于4°C下M小時后，于-20°C冷凍M小時，然后置于凍干機中凍干16小時；凍干的復合支架于105°C下真空干熱交聯(lián)M小時，再置于摩爾濃度比為2 1的EDAC(40_ol)和N-羥基丁二酰亞胺(NHS)混合溶液中交聯(lián)M小時，經(jīng)三蒸水反復清洗后再次冷凍-凍干得到交聯(lián)后的“偏心”型含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架。將含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架裁剪成IcmX Icm的小片，置入70%乙醇溶液中浸泡消毒M小時后，用生理鹽水充分漂洗，備用；手術前一天，將SD大鼠背部的鼠毛剪去，然后用脫毛劑脫毛；手術時，在SD大鼠的脊柱兩側(cè)各做兩個“囊”(見圖幻，然后將復合支架平展地植入，縫合，傷口用聚維酮碘擦拭并腹腔注射慶大霉素抗感染。于術后2 周、4周、8周取材，Masson染色觀察復合支架在體內(nèi)的生物學特征，見圖4，圖5，圖6。實施例4含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架體內(nèi)移植實驗將膠原和殼聚糖分別配成質(zhì)量分數(shù)為0. 5%乙酸溶液，然后將膠原溶液和殼聚糖溶液按照9 1的體積比混合后，充分攪拌均勻，備用；將PLGA加強網(wǎng)裁剪成直徑為2. Ocm 的圓形，然后浸入配制好的膠原/殼聚糖溶液中充分作用12h。取出PLGA加強網(wǎng)后平展地鋪在平板模具上，并將PLGA加強網(wǎng)上多余的溶液成分輕輕刮去，共同置于-20°C冷凍M小時，然后置于凍干機中凍干16小時；凍干的復合支架于105°C下真空干熱交聯(lián)M小時，再置于摩爾濃度比為2 1的EDAC(40_ol)和N-羥基丁二酰亞胺(NHS)混合溶液中交聯(lián) 24小時，經(jīng)三蒸水反復清洗后再次冷凍-凍干得到交聯(lián)后的“簡單”型含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架。
將含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架置入70 %乙醇溶液中浸泡消毒M小時后，用生理鹽水充分漂洗，備用；手術前一天，將SD大鼠背部的鼠毛剪去，然后用脫毛劑脫毛；手術時，在SD大鼠的脊柱兩側(cè)各做一直徑為2. Ocm的圓形的全層缺損，然后將復合支架平展地鋪在創(chuàng)面上，再將切下的皮膚剪成刃厚皮后置于復合支架上，縫合，傷口用聚維酮碘擦拭并腹腔注射慶大霉素抗感染。于術后2周、4周取材，HE染色觀察復合支架在體內(nèi)的生物學特征，見圖7，圖8，圖9。實施例5將膠原配成質(zhì)量分數(shù)為乙酸溶液，充分攪拌均勻，備用；將PLGA加強網(wǎng)裁剪成 4. 5cmX4. 5cm大小，并平展地鋪在平板上，再將一塊厚度為Icm大小為4cmX4cm的“框” 型模具緊密地壓在網(wǎng)上，然后注入膠原溶液3. 2mL使其均勻地將PLGA加強網(wǎng)浸潤；將PLGA 加強網(wǎng)、膠原溶液連同模具共同置于4°C下M小時后，于-10°C冷凍M小時，然后置于凍干機中凍干M小時；凍干的復合支架于105°C下真空干熱交聯(lián)M小時，再置于摩爾濃度比為 2 1的EDAC(40_ol)和N-羥基丁二酰亞胺(NHS)混合溶液中交聯(lián)M小時，經(jīng)三蒸水反復清洗后再次冷凍-凍干得到交聯(lián)后的“偏心”型含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支 架。實施例6將膠原和殼聚糖分別配成質(zhì)量分數(shù)為0. 5%乙酸溶液，然后將膠原溶液和殼聚糖溶液按照8 2的體積比混合后，充分攪拌均勻，備用；將PLGA加強網(wǎng)裁剪成4. 5cmX4. 5cm 大小，并平展地鋪在平板上，再將一塊厚度為Icm大小為4cmXkm的“框”型模具緊密地壓在網(wǎng)上，然后注入膠原/殼聚糖溶液3. 2mL使其均勻地將PLGA加強網(wǎng)浸潤；將PLGA加強網(wǎng)、膠原/殼聚糖溶液連同模具共同置于4°C下M小時后，于-20°C冷凍M小時，然后置于凍干機中凍干16小時；凍干的復合支架于105°C下真空干熱交聯(lián)M小時，再置于摩爾濃度比為2 1的EDAC(40_ol)和N-羥基丁二酰亞胺(NHS)混合溶液中交聯(lián)M小時，經(jīng)三蒸水反復清洗后再次冷凍-凍干得到交聯(lián)后的“偏心”型含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架。
權(quán)利要求
1.含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架，其特征在于該組織工程支架包括具有良好生物相容性的多孔支架和PLGA加強網(wǎng)，所述的PLGA加強網(wǎng)由PLGA纖維編織而成，PLGA 加強網(wǎng)與多孔支架緊密結(jié)合在一起。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架，其特征在于PLGA 加強網(wǎng)位于多孔支架的一側(cè)形成“偏心”型結(jié)構(gòu)；或者，PLGA加強網(wǎng)位于多孔支架的中間構(gòu)成“夾心”型的結(jié)構(gòu)；或者，在PLGA加強網(wǎng)的網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)中形成多孔支架的三維多孔結(jié)構(gòu)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架，其特征在于 所述的多孔支架具有30 500 μ m的孔徑結(jié)構(gòu)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架，其特征在于 所述的PLGA加強網(wǎng)具有200 3000 μ m的網(wǎng)孔，單根PLGA編織線的直徑在10 200 μ m 之間。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架，其特征在于 所述的多孔支架采用膠原/殼聚糖復合型多孔支架或膠原多孔支架，其中膠原的重量百分比含量為80% 100%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架，其特征在于 所述的PLGA纖維中聚乳酸單體和聚乙醇酸單體的摩爾數(shù)量之比為50 50 1 99。
7.一種制備如權(quán)利要求1或2所述的含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟①配制質(zhì)量濃度為0.05% 5%的多孔支架材料溶液；②將PLGA纖維編織，再經(jīng)丙酮清洗、純凈水超聲波清洗和真空熱定型后得到PLGA加強網(wǎng)；③將PLGA加強網(wǎng)裁剪成一定的形狀并平展地放入模具中并固定，然后將多孔支架材料溶液注入模具中，于1°C 5°C下充分作用，采用冷凍-凍干法制備得到預交聯(lián)復合型組織工程支架；④將上述所得的預交聯(lián)復合型組織工程支架根據(jù)需要選擇或者不選擇進行以下一種或兩種交聯(lián)反應，交聯(lián)反應后清洗，再次冷凍-凍干I、真空干熱交聯(lián)，置于80°C 180°C下真空干熱交聯(lián)處理；II、化學交聯(lián)，置于醛類化合物或碳化二亞胺類化合物中化學交聯(lián)12 48小時。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架的制備方法，其特征在于步驟①采用酸性溶液配置多孔支架材料溶液，所述的多孔支架材料采用膠原或者膠原和殼聚糖混合溶液，其中膠原的重量百分比含量為80% 100%。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架的制備方法，其特征在于酸性溶液為0. 5M 2. 5M乙酸、甲酸、鹽酸中的一種或幾種，pH為2. 0 3. 0。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架的制備方法， 其特征在于步驟③和④冷凍-凍干法的溫度為-5V -80°C。
11.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架的制備方法， 其特征在于步驟④醛類化合物甲醛或戊二醛，碳化二亞胺類化合物為1-乙基-3-3-(二甲基胺丙基)_碳化二亞胺。
12.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架用于構(gòu)建組織工程皮膚、骨、軟骨、肌腱、腹膜、硬腦膜、黏膜或血管中應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及組織工程構(gòu)建的支架材料及其制備方法，具體得說是涉及一種含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架及其制備方法和應用。含有PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架，該組織工程支架包括具有良好生物相容性的多孔支架和PLGA加強網(wǎng)，所述的PLGA加強網(wǎng)由PLGA纖維編織而成，PLGA加強網(wǎng)與多孔支架緊密結(jié)合在一起。本發(fā)明制備的PLGA加強網(wǎng)的復合型組織工程支架具有與脫細胞真皮基質(zhì)相似的機械性能，更有利于支架三維多孔結(jié)構(gòu)的維系，從而更有利于細胞、血管及組織的長入；而膠原、殼聚糖等天然來源的大分子其優(yōu)良的生物相容性使復合支架本身的生物學性能得以保持，有利于細胞的粘附、增殖和分泌，是一種適用于組織工程組織、器官構(gòu)建的優(yōu)良的再生材料。
文檔編號A61L27/56GK102188747SQ201010117188
公開日2011年9月21日 申請日期2010年3月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月4日
發(fā)明者于瑋潔, 孫華鳳, 有傳剛, 王新剛, 胡信雷, 胡行, 韓春茂, 高長有 申請人:浙江大學