專(zhuān)利名稱：人工細(xì)胞外基質(zhì)及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及人工細(xì)胞外基質(zhì)及其制備方法。
背景技術(shù)：
臨床上神經(jīng)外科醫(yī)師在手術(shù)中常利用自體顱骨骨膜，頸肌筋膜、帽狀腔膜，闊筋膜等自體組織修補(bǔ)硬腦膜缺損，但是取這些材料不僅花費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，有時(shí)這些組織自身受到損傷而不能被利用，有的部位自身就沒(méi)有完整的可利用的組織，常導(dǎo)致沒(méi)有足夠的面積能被利用。移植其他組織不僅需要術(shù)前規(guī)劃，準(zhǔn)備第二個(gè)手術(shù)部位，增加手術(shù)和麻醉時(shí)間，還要產(chǎn)生新的創(chuàng)傷。另外，即使使用自身組織，自身組織的缺氧常會(huì)誘導(dǎo)下方皮質(zhì)的炎癥反應(yīng)， 導(dǎo)致腦膜與腦之間的粘連。目前臨床應(yīng)用的人工硬腦膜材料主要分為同種異體材料、異種材料、合成材料和天然材料四個(gè)類(lèi)型。同種異體腦膜是最早用于臨床的非自體的修復(fù)材料。這種材料是從死亡的人體腦取得，經(jīng)過(guò)冷凍干燥加工后作為商品出售。優(yōu)點(diǎn)為制備簡(jiǎn)單、能直接使用、植入方便，可以長(zhǎng)期保存，保留了新鮮腦膜的生理特性即早期成纖維細(xì)胞的滲入和血管再生，它能融合到周?chē)恼＝M織內(nèi)而消除排斥反應(yīng)。但是異體硬腦膜有3個(gè)顯著的弱點(diǎn)一是材料來(lái)源受到限制，捐獻(xiàn)者缺乏，而且還存在倫理方面的問(wèn)題；二是傳染性蛋白質(zhì)因子(Prion)的存在，根據(jù)日本厚生省1997年3月發(fā)布的調(diào)查報(bào)告，766名克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布(Creutz feldt-JakobSyndrome (disease), CJD)患者中，觀例經(jīng)歷過(guò)人體干燥硬腦膜修補(bǔ)術(shù)，與JCD 百萬(wàn)分之一的自然發(fā)生率相比，作過(guò)硬腦膜修補(bǔ)術(shù)的人J⑶發(fā)病率明顯高于自然發(fā)病率， 為此，厚生省發(fā)布使用異體干燥腦膜的禁令，同時(shí)世界衛(wèi)生組織亦發(fā)布手術(shù)中禁止使用人異體硬腦膜的緊急公告，所以目前有些國(guó)家已取消使用冷凍人體硬腦膜作為修補(bǔ)材料；三是價(jià)格昂貴超過(guò)了病員的承受能力。國(guó)內(nèi)外，異種硬腦膜修復(fù)材料是在臨床應(yīng)用較多的品種，主要是用牛心包膜和羊心包膜制備。異種硬腦膜修補(bǔ)材料的優(yōu)點(diǎn)是便于獲取，制備簡(jiǎn)單，防漏性能較好。但是由于近年來(lái)動(dòng)物源性材料的安全問(wèn)題，有的國(guó)家已經(jīng)限制該類(lèi)材料的使用。合成材料容易成型加工，易于消毒，無(wú)傳遞病毒的風(fēng)險(xiǎn)。常用于硬腦(脊)膜修補(bǔ)的材料有硅橡膠、聚丙烯、聚四氟乙烯等。但是這些材料僅具有機(jī)械充填的功能，而無(wú)促組織再生的能力，特別在材料處理不好情況下，日長(zhǎng)容易產(chǎn)生滲漏，甚至?xí)鹈?xì)血管出血，產(chǎn)生慢性炎癥。天然材料是經(jīng)過(guò)加工提純的天然生物大分子物質(zhì)，可用于硬腦脊膜修補(bǔ)的材料有膠原、殼聚糖、硫酸軟骨素等。它們被稱為人工細(xì)胞外基質(zhì)，是良好的組織工程支架材料。它們除了具有機(jī)械屏障作用外，還可作為細(xì)胞生長(zhǎng)的良好基質(zhì)，有傳遞細(xì)胞化學(xué)信號(hào)的功能， 因此能促進(jìn)組織再生。在此過(guò)程中，材料本身發(fā)生降解，最終被愈合的自身組織替代。這一點(diǎn)正是現(xiàn)代再生醫(yī)學(xué)要求和提倡的。但是這些材料也有缺點(diǎn)，比如降解速率過(guò)快，以致自身新腦膜還未完全形成而材料已經(jīng)降解。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種有良好的可控降解性能的人工細(xì)胞外基質(zhì)及其制備方法。本發(fā)明所提供的人工細(xì)胞外基質(zhì)，主要由殼聚糖、膠原蛋白、透明質(zhì)酸鈉和賴氨酸制備而成。本發(fā)明的人工細(xì)胞外基質(zhì)，其中，所述殼聚糖、所述膠原蛋白、所述透明質(zhì)酸鈉和所述賴氨酸通過(guò)交聯(lián)劑交聯(lián)。本發(fā)明的人工細(xì)胞外基質(zhì)，其中，所述殼聚糖、所述膠原蛋白、所述透明質(zhì)酸鈉和所述賴氨酸的質(zhì)量比為(0. 1 400) (1 400) (0.1 5000) (0. 1 5000)。本發(fā)明的人工細(xì)胞外基質(zhì)，其中，所述交聯(lián)劑選自如下任一種或任幾種甲醛、戊二醛、碳化二亞胺、雙環(huán)氧化合物、京尼平和原花青素。本發(fā)明所提供的人工細(xì)胞外基質(zhì)的制備方法，包括如下步驟將殼聚糖膠體溶液、膠原蛋白水凝膠、透明質(zhì)酸鈉水溶液和賴氨酸水溶液混合，再加入交聯(lián)劑反應(yīng)；交聯(lián)好的混合凝膠冷凍干燥，獲得所述的人工細(xì)胞外基質(zhì)。本發(fā)明的人工細(xì)胞外基質(zhì)的制備方法，其中，所述殼聚糖、所述膠原蛋白、所述透明質(zhì)酸鈉和所述賴氨酸的質(zhì)量比為(O. 1 400) (1 400) (0. 1 5000) (0. 1 5000)。本發(fā)明的人工細(xì)胞外基質(zhì)的制備方法，其中，所述交聯(lián)劑選自如下任一種或任幾種甲醛、戊二醛、碳化二亞胺、雙環(huán)氧化合物、京尼平和原花青素。本發(fā)明的人工細(xì)胞外基質(zhì)的制備方法，其中，所述殼聚糖膠體溶液為0. 1 5mg/ ml殼聚糖的乙酸溶液，所述乙酸溶液中乙酸的濃度為0. lml/lOOml 0. 5ml/100ml ；所述膠原蛋白水凝膠中膠原蛋白的濃度為1 50mg/ml ；所述透明質(zhì)酸鈉水溶液中透明質(zhì)酸鈉的濃度為0. 1 100mg/ml ；所述賴氨酸水溶液中賴氨酸的濃度為0. 1 100mg/ml。本發(fā)明的人工細(xì)胞外基質(zhì)的制備方法，其中，所述冷凍干燥的溫度為-80°C 40 "C。本發(fā)明的人工細(xì)胞外基質(zhì)具有良好的可控降解性能，良好的生物相容性能和組織修復(fù)性能，可作為臨床適用的新型人工硬腦膜。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1、人工細(xì)胞外基質(zhì)0. Olml/lOOml的乙酸溶液中加入脫乙酰度60%的經(jīng)過(guò)純化的殼聚糖，攪拌2小時(shí)，配制成0. lmg/ml的殼聚糖膠體溶液。將0. lmg/ml殼聚糖膠體溶液、lmg/ml膠原蛋白水凝膠、0. lmg/ml透明質(zhì)酸鈉水溶液和0. lmg/ml賴氨酸水溶液放入交聯(lián)罐中混合，0. lmg/ml殼聚糖膠體溶液、lmg/ ml膠原蛋白水凝膠、0. lmg/ml透明質(zhì)酸鈉水溶液和0. lmg/ml賴氨酸水溶液的體積比為 1:1:1: 1，再加入碳化二亞胺混均，碳化二亞胺與殼聚糖的質(zhì)量比為0.001 1，50°C 反應(yīng)2小時(shí)，降溫至室溫，將交聯(lián)好的混合凝膠裝入凍干盤(pán)于_80°C 40°C條件下真空冷凍干燥48小時(shí)得到人工細(xì)胞外基質(zhì)。人工細(xì)胞外基質(zhì)的外觀為白色的片狀矩形，表面有晶體光澤，肉眼或放大鏡下可見(jiàn)材料呈無(wú)規(guī)則短纖維網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)，用手感知有一定的韌性，外表潔凈無(wú)污點(diǎn)。人工細(xì)胞外基質(zhì)的長(zhǎng)為4. 32 4. 56cm,寬為4. 24 4. 54cm,厚為0. 5 0. 9cm。人工細(xì)胞外基質(zhì)的化學(xué)性能人工細(xì)胞外基質(zhì)的熾灼殘?jiān)?. 3%，pH值7. 1，人工細(xì)胞外基質(zhì)的重金屬含量(以鉛計(jì))小于lOug/g。人工細(xì)胞外基質(zhì)的生物學(xué)性能無(wú)菌檢驗(yàn)(GB/T 19973. 2-2005)人工細(xì)胞外基質(zhì)符合無(wú)菌規(guī)定。細(xì)胞毒性試驗(yàn)(GB/T 16886.5-200 檢測(cè)人工細(xì)胞外基質(zhì)的細(xì)胞毒性為 0 1級(jí)。細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)(EN455-3-2000)檢測(cè)人工細(xì)胞外基質(zhì)的細(xì)菌內(nèi)毒素小于0. 5EU/ ml。Ames試驗(yàn)(GB/T 16886. 3-2008)檢測(cè)為陰性。染色體畸變?cè)囼?yàn)(GB/T 16886. 3-2008)檢測(cè)為陰性。微核試驗(yàn)(GB/T 16886. 3-2008)檢測(cè)為陰性。致敏試驗(yàn)(GB/T 16886. 10-2005) 檢測(cè)無(wú)致敏反應(yīng)。急性供毒試驗(yàn)(ISO 10993-11 2006)檢測(cè)無(wú)急性生身毒性反應(yīng)。植入后局部反應(yīng)試驗(yàn)(ISO 10993-6 :2007)，人工細(xì)胞外基質(zhì)植入1周后，在試樣材料周?chē)休^多的淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞及少量多核巨細(xì)胞，材料周?chē)腥庋拷M織包繞。植入4周后，在試樣材料周?chē)休^多的淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞。植入12周后，植入部位有極少的淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞，試樣材料被降解吸收，無(wú)肉眼可辨別異物。上述結(jié)果說(shuō)明本實(shí)施例中的人工細(xì)胞外基質(zhì)具有良好的可控降解性能的，良好的生物相容性能和組織修復(fù)性能。實(shí)施例2、人工細(xì)胞外基質(zhì)0. 5ml/100ml的乙酸溶液中加入脫乙酰度70%的經(jīng)過(guò)純化的殼聚糖，攪拌10小時(shí)，配制成5mg/ml的殼聚糖膠體溶液。 將5mg/ml殼聚糖膠體溶液、50mg/ml膠原蛋白水凝膠、100mg/ml透明質(zhì)酸鈉水溶液和100mg/ml賴氨酸水溶液放入交聯(lián)罐中混合，5mg/ml殼聚糖膠體溶液、50mg/ ml膠原蛋白水凝膠、100mg/ml透明質(zhì)酸鈉水溶液和100mg/ml賴氨酸水溶液的體積比為 80 80 50 50，再加入戊二醛，戊二醛與殼聚糖膠體溶液的體積比為1 400混均， 50°C反應(yīng)2小時(shí)，降溫至室溫，將交聯(lián)好的混合凝膠裝入凍干盤(pán)于_60°C 30°C條件下真空冷凍干燥48小時(shí)得到人工細(xì)胞外基質(zhì)。人工細(xì)胞外基質(zhì)的外觀為白色的片狀矩形，表面有晶體光澤，肉眼或放大鏡下可見(jiàn)材料呈無(wú)規(guī)則短纖維網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)，用手感知有一定的韌性，外表潔凈無(wú)污點(diǎn)。人工細(xì)胞外基質(zhì)的長(zhǎng)為4. 32 4. 56cm,寬為4. 24 4. 54cm,厚為0. 5 0. 9cm。人工細(xì)胞外基質(zhì)的化學(xué)性能人工細(xì)胞外基質(zhì)的熾灼殘?jiān)?. 5%，pH值7. 1，人工細(xì)胞外基質(zhì)的重金屬含量(以鉛計(jì))小于lOug/g。人工細(xì)胞外基質(zhì)的生物學(xué)性能無(wú)菌檢驗(yàn)(GB/T 19973. 2-2005)人工細(xì)胞外基質(zhì)符合無(wú)菌規(guī)定。細(xì)胞毒性試驗(yàn)(GB/T 16886.5-200 檢測(cè)人工細(xì)胞外基質(zhì)的細(xì)胞毒性為 0 1級(jí)。細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)(EN455-3-2000)檢測(cè)人工細(xì)胞外基質(zhì)的細(xì)菌內(nèi)毒素小于0. 5EU/ ml。Ames試驗(yàn)(GB/T 16886. 3-2008)檢測(cè)為陰性。染色體畸變?cè)囼?yàn)(GB/T 16886. 3-2008)檢測(cè)為陰性。微核試驗(yàn)(GB/T 16886. 3-2008)檢測(cè)為陰性。致敏試驗(yàn)(GB/T 16886. 10-2005) 檢測(cè)無(wú)致敏反應(yīng)。急性供毒試驗(yàn)(ISO 10993-11 2006)檢測(cè)無(wú)急性生身毒性反應(yīng)。植入后局部反應(yīng)試驗(yàn)(ISO 10993-6 :2007)，人工細(xì)胞外基質(zhì)植入1周后，在試樣材料周?chē)休^多的淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞及少量多核巨細(xì)胞，材料周?chē)腥庋拷M織包繞。植入4周后，在試樣材料周?chē)休^多的淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞。植入12周后，植入部位有極少的淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞，試樣材料被降解吸收，無(wú)肉眼可辨別異物。上述結(jié)果說(shuō)明本實(shí)施例中的人工細(xì)胞外基質(zhì)具有良好的可控降解性能的，良好的生物相容性能和組織修復(fù)性能。實(shí)施例3、人工細(xì)胞外基質(zhì)0. 3ml/100ml的乙酸溶液中加入脫乙酰度85%的經(jīng)過(guò)純化的殼聚糖，攪拌30小時(shí)，配制成2mg/ml的殼聚糖膠體溶液。將2mg/ml殼聚糖膠體溶液、10mg/ml膠原蛋白水凝膠、10mg/ml透明質(zhì)酸鈉水溶液和20mg/ml賴氨酸水溶液放入交聯(lián)罐中混合，2mg/ml殼聚糖膠體溶液、10mg/ml膠原蛋白水凝膠、10mg/ml透明質(zhì)酸鈉水溶液和20mg/ml賴氨酸水溶液的體積比為80 20 30 30， 再加入雙環(huán)氧化合物混均，雙環(huán)氧化合物與殼聚糖膠體溶液的體積比為1 500，50°C反應(yīng) 2小時(shí)，降溫至室溫，將交聯(lián)好的混合凝膠裝入凍干盤(pán)于_40°C 40°C條件下真空冷凍干燥 48小時(shí)得到人工細(xì)胞外基質(zhì)。人工細(xì)胞外基質(zhì)的外觀為白色的片狀矩形，表面有晶體光澤，肉眼或放大鏡下可見(jiàn)材料呈無(wú)規(guī)則短纖維網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)，用手感知有一定的韌性，外表潔凈無(wú)污點(diǎn)。人工細(xì)胞外基質(zhì)的長(zhǎng)為4. 32 4. 56cm,寬為4. 24 4. 54cm,厚為0. 5 0. 9cm。人工細(xì)胞外基質(zhì)的化學(xué)性能人工細(xì)胞外基質(zhì)的熾灼殘?jiān)?. 4%，pH值7. 2，人工細(xì)胞外基質(zhì)的重金屬含量(以鉛計(jì))小于lOug/g。人工細(xì)胞外基質(zhì)的生物學(xué)性能無(wú)菌檢驗(yàn)(GB/T 19973. 2-2005)人工細(xì)胞外基質(zhì)符合無(wú)菌規(guī)定。細(xì)胞毒性試驗(yàn)(GB/T 16886.5-200 檢測(cè)人工細(xì)胞外基質(zhì)的細(xì)胞毒性為 O 1級(jí)。細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)(EN455-3-2000)檢測(cè)人工細(xì)胞外基質(zhì)的細(xì)菌內(nèi)毒素小于0. 5EU/ ml。Ames試驗(yàn)(GB/T 16886. 3-2008)檢測(cè)為陰性。染色體畸變?cè)囼?yàn)(GB/T 16886. 3-2008)檢測(cè)為陰性。微核試驗(yàn)(GB/T 16886. 3-2008)檢測(cè)為陰性。致敏試驗(yàn)(GB/T 16886. 10-2005) 檢測(cè)無(wú)致敏反應(yīng)。急性供毒試驗(yàn)(ISO 10993-11 2006)檢測(cè)無(wú)急性生身毒性反應(yīng)。植入后局部反應(yīng)試驗(yàn)(ISO 10993-6 :2007)，人工細(xì)胞外基質(zhì)植入1周后，在試樣材料周?chē)休^多的淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞及少量多核巨細(xì)胞，材料周?chē)腥庋拷M織包繞。植入4周后，在試樣材料周?chē)休^多的淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞。植入12周后，植入部位有極少的淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞，試樣材料被降解吸收，無(wú)肉眼可辨別異物。上述結(jié)果說(shuō)明本實(shí)施例中的人工細(xì)胞外基質(zhì)具有良好的可控降解性能的，良好的生物相容性能和組織修復(fù)性能。實(shí)施例4、人工細(xì)胞外基質(zhì)0. lml/lOOml的乙酸溶液中加入脫乙酰度99%的經(jīng)過(guò)純化的殼聚糖，攪拌60小時(shí)，配制成3mg/ml的殼聚糖膠體溶液。將3mg/ml殼聚糖膠體溶液、30mg/ml膠原蛋白水凝膠、30mg/ml透明質(zhì)酸鈉水溶液和30mg/ml賴氨酸水溶液放入交聯(lián)罐中混合，3mg/ml殼聚糖膠體溶液、30mg/ml膠原蛋白水凝膠、30mg/ml透明質(zhì)酸鈉水溶液和30mg/ml賴氨酸水溶液的體積比為50 30 10 10， 再加入甲醛混均，甲醛與殼聚糖膠體溶液的體積比為1 600，50°C反應(yīng)2小時(shí)，降溫至室溫，將交聯(lián)好的混合凝膠裝入凍干盤(pán)于_80°C 30°C條件下真空冷凍干燥48小時(shí)得到人工細(xì)胞外基質(zhì)。人工細(xì)胞外基質(zhì)的外觀為白色的片狀矩形，表面有晶體光澤，肉眼或放大鏡下可見(jiàn)材料呈無(wú)規(guī)則短纖維網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)，用手感知有一定的韌性，外表潔凈無(wú)污點(diǎn)。人工細(xì)胞外基質(zhì)的長(zhǎng)為4. 32 4. 56cm,寬為4. 24 4. 54cm,厚為0. 5 0. 9cm。人工細(xì)胞外基質(zhì)的化學(xué)性能人工細(xì)胞外基質(zhì)的熾灼殘?jiān)?. 4%，pH值7. 1，人工細(xì)胞外基質(zhì)的重金屬含量(以鉛計(jì))小于lOug/g。人工細(xì)胞外基質(zhì)的生物學(xué)性能無(wú)菌檢驗(yàn)(GB/T 19973. 2-200 人工細(xì)胞外基質(zhì)符合無(wú)菌規(guī)定。細(xì)胞毒性試驗(yàn)(GB/T 16886.5-200 檢測(cè)人工細(xì)胞外基質(zhì)的細(xì)胞毒性為 0 1級(jí)。細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)(EN455-3-2000)檢測(cè)人工細(xì)胞外基質(zhì)的細(xì)菌內(nèi)毒素小于0. 5EU/ ml。Ames試驗(yàn)(GB/T 16886. 3-2008)檢測(cè)為陰性。染色體畸變?cè)囼?yàn)(GB/T 16886. 3-2008)檢測(cè)為陰性。微核試驗(yàn)(GB/T 16886. 3-2008)檢測(cè)為陰性。致敏試驗(yàn)(GB/T 16886. 10-2005) 檢測(cè)無(wú)致敏反應(yīng)。急性供毒試驗(yàn)(ISO 10993-11 2006)檢測(cè)無(wú)急性生身毒性反應(yīng)。植入后局部反應(yīng)試驗(yàn)(ISO 10993-6 :2007)，人工細(xì)胞外基質(zhì)植入1周后，在試樣材料周?chē)休^多的淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞及少量多核巨細(xì)胞，材料周?chē)腥庋拷M織包繞。植入4周后，在試樣材料周?chē)休^多的淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞。植入12周后，植入部位有極少的淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞，試樣材料被降解吸收，無(wú)肉眼可辨別異物。上述結(jié)果說(shuō)明本實(shí)施例中的人工細(xì)胞外基質(zhì)具有良好的可控降解性能的，良好的生物相容性能和組織修復(fù)性能。以上的實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神的前提下，本領(lǐng)域普通工程技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作出的各種變形和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求書(shū)確定的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種人工細(xì)胞外基質(zhì)，主要由殼聚糖、膠原蛋白、透明質(zhì)酸鈉和賴氨酸制備而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工細(xì)胞外基質(zhì)，其特征在于所述殼聚糖、所述膠原蛋白、 所述透明質(zhì)酸鈉和所述賴氨酸通過(guò)交聯(lián)劑交聯(lián)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的人工細(xì)胞外基質(zhì)，其特征在于所述殼聚糖、所述膠原蛋白、所述透明質(zhì)酸鈉和所述賴氨酸的質(zhì)量比為(0.1 400) (1 400) (0.1 5000) (0. 1 5000)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的人工細(xì)胞外基質(zhì)，其特征在于所述交聯(lián)劑選自如下任一種或任幾種；甲醛、戊二醛、碳化二亞胺、雙環(huán)氧化合物、京尼平和原花青素。
5.人工細(xì)胞外基質(zhì)的制備方法，包括如下步驟將殼聚糖膠體溶液、膠原蛋白水凝膠、透明質(zhì)酸鈉水溶液和賴氨酸水溶液混合，再加入交聯(lián)劑反應(yīng)；交聯(lián)好的混合凝膠冷凍干燥，獲得所述的人工細(xì)胞外基質(zhì)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述殼聚糖、所述膠原蛋白、所述透明質(zhì)酸鈉和所述賴氨酸的質(zhì)量比為(0. 1 400) (1 400) (0.1 5000) (0. 1 5000)。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于所述交聯(lián)劑選自如下任一種或任幾種；甲醛、戊二醛、碳化二亞胺、雙環(huán)氧化合物、京尼平和原花青素。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述冷凍干燥的溫度為_(kāi)80°C 40°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述殼聚糖膠體溶液為0.1 5mg/ml殼聚糖的乙酸溶液，所述乙酸溶液中乙酸的濃度為0. lml/lOOml 0. 5ml/100ml ；所述膠原蛋白水凝膠中膠原蛋白的濃度為1 50mg/ml ；所述透明質(zhì)酸鈉水溶液中透明質(zhì)酸鈉的濃度為0. 1 100mg/ml ；所述賴氨酸水溶液中賴氨酸的濃度為0. 1 100mg/ml。
10.權(quán)利要求1至4中任一所述的人工細(xì)胞外基質(zhì)在制備人工硬腦膜材料中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種人工細(xì)胞外基質(zhì)及其制備方法。本發(fā)明的人工細(xì)胞外基質(zhì)主要由殼聚糖、膠原蛋白、透明質(zhì)酸鈉和賴氨酸制備而成。所述殼聚糖、所述膠原蛋白、所述透明質(zhì)酸鈉和所述賴氨酸的質(zhì)量比為(0.1～400)∶(1～400)∶(0.1～5000)∶(0.1～5000)。本發(fā)明的人工細(xì)胞外基質(zhì)的制備方法是將殼聚糖膠體溶液、膠原蛋白水凝膠、透明質(zhì)酸鈉水溶液和賴氨酸水溶液混合，再加入交聯(lián)劑反應(yīng)；交聯(lián)好的混合凝膠冷凍干燥，獲得所述的人工細(xì)胞外基質(zhì)。本發(fā)明的人工細(xì)胞外基質(zhì)具有良好的可控降解性能的，良好的生物相容性能和組織修復(fù)性能，可作為臨床適用的新型人工硬腦膜。
文檔編號(hào)A61L27/24GK102188746SQ20101012227
公開(kāi)日2011年9月21日 申請(qǐng)日期2010年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月11日
發(fā)明者宋文領(lǐng), 張艷花, 石凌鋒, 趙春卉 申請(qǐng)人:北京益而康生物工程開(kāi)發(fā)中心