專利名稱：續(xù)斷藥材質(zhì)量控制的檢測鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種續(xù)斷藥材質(zhì)量控制的檢測鑒定方法，屬于天然藥物的質(zhì)量控制領(lǐng) 域，具體為指紋圖譜領(lǐng)域，涉及續(xù)斷藥材的HPLC指紋圖譜的鑒定方法。其可作為續(xù)斷藥材 質(zhì)量控制的指標之一。
背景技術(shù)：
續(xù)斷為川續(xù)斷科川續(xù)斷屬植物川續(xù)斷(Dipsacus asperoides C.Y.Cheng etT. Μ. Ai)的干燥根，具有補肝腎、強筋骨、續(xù)折傷、止崩漏等功效，可用于腰膝酸軟、風濕痹痛、 跌撲損傷等。續(xù)斷含有三萜皂苷類、環(huán)烯醚萜類、生物堿類、揮發(fā)油類及留醇類等成分，其中 三萜皂苷類是續(xù)斷的主要活性成分，具有抗骨質(zhì)疏松、促進骨折愈合的作用。目前關(guān)于續(xù)斷 藥材的化學(xué)成分質(zhì)量控制研究多為采用高效液相色譜法測定川續(xù)斷皂苷VI含量，或采用 比色法測定總皂苷的含量，對于多成分的全面檢測研究尚不多，代表的有胥秀英等(中國 藥業(yè)2008年第17卷第5期)研究了續(xù)斷指紋圖譜模糊模式識別，雖然分析時間較短為50 分鐘，但續(xù)斷成分信息量較少，只有8個主要色譜峰；劉鳳樂等(中醫(yī)藥學(xué)報2009年第37 卷第5期)用HPLC指紋圖譜控制續(xù)斷質(zhì)量，色譜反映的化學(xué)成分信息增多，為18個主要成 分，但分析時間過長，1個樣品分析需近2小時；而王秀軍等(安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)2009年第37卷 第26期)和楊明利等(武漢生物工程學(xué)字學(xué)報2009年第5卷第3期)續(xù)斷指紋圖譜研究 僅給出2個特征成分峰。上述所有研究中只有1個成分峰川續(xù)斷皂苷VI可以用對照品確 認外，其它大量成分峰的鑒定尚屬空白?，F(xiàn)有質(zhì)量研究尚未能全面、有效表征續(xù)斷化學(xué)成分 的特征，難以有效控制續(xù)斷質(zhì)量。但是具體采用哪些成分峰能夠準確而真實地確定續(xù)斷化 學(xué)成分的特征，成為本領(lǐng)域尚未解決的難題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種續(xù)斷藥材的檢測鑒定方法及其質(zhì)量控制方法，以建立 一種能夠更全面、更有效檢測續(xù)斷化學(xué)成分的指紋圖譜。為了用盡可能短的時間表征更豐 富的續(xù)斷化學(xué)成分信息，本申請通過采用高效液相色譜在205nm檢測續(xù)斷化學(xué)成分建立續(xù) 斷指紋圖譜，在80分鐘完成檢測，有24個主要色譜峰，進一步用二極管陣列檢測技術(shù)，初步 分析了續(xù)斷化學(xué)成分的紫外吸收特征及其化合物類型，判斷24個主要成分色譜峰中有13 個是皂苷類化合物，再進一步通過液相色譜與電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)首次分析了續(xù)斷化學(xué)成 分的質(zhì)譜特征，鑒定了 33個化合物的分子量，通過與對照品或文獻對照對其中10個成分進 行了確認、推測。從而實現(xiàn)更有效、全面的控制續(xù)斷藥材質(zhì)量。本發(fā)明的檢測方法所得到的指紋圖譜可以用于續(xù)斷藥材的質(zhì)量控制。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的一種續(xù)斷藥材的檢測鑒定方法，使用高效液相色譜儀，DAD檢測器，高效液相色譜 與電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用儀，色譜工作站，續(xù)斷藥材供試品溶液，其特征在于，各步驟中采用如下 色譜條件
色譜柱碳十八烷基鍵合硅膠填料色譜柱和預(yù)柱；柱溫25 35°C ；流動相A為體積百分比0. 05 0. 5%的磷酸水溶液(液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用時磷 酸水溶液改為甲酸水溶液)；B為乙腈；A+B= 100%，采用梯度洗脫0 20min，8 16% B, 20 30min，16 19 % B, 30 40min，19 29 % B, 40 45min，29 % B，45 50min， 29 48% B, 50 60min，48% B, 60 70min，48 85% B, 70 75min，85 100% B, 75 80min, 100% B ；流速lml/min;檢測波長205nm;所述供試品溶液的制備方法是取續(xù)斷細粉0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加 入體積百分比50% 100%甲醇10 50mL，超聲處理30min，放冷，用體積百分比50% 100%甲醇補足減失的重量，搖勻，過0. 45 μ m濾膜。本發(fā)明推薦以下優(yōu)化方案所述的柱溫是25°C。所述的磷酸水溶液的體積百分濃度為0. ；所述供試品溶液的制備方法中，所述加入甲醇的體積百分比是70%、25mL;補充 甲醇的體積百分比是70%甲醇補足減失的重量。所述液相色譜儀進樣量為10 μ 1 ；記錄時間在80分鐘。本申請采用高效液相色譜與電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，在205nm檢測續(xù)斷化學(xué)成分建 立續(xù)斷色譜指紋圖譜，通過二極管陣列檢測(DAD)技術(shù)分析續(xù)斷化合物的類型，進一步通 過液相色譜與電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)首次分析了續(xù)斷化學(xué)成分的質(zhì)譜特征，通過與對照品或 文獻對照對續(xù)斷成分進行確認、推測。本研究有效彌補了現(xiàn)有續(xù)斷質(zhì)量控制的不足，為續(xù)斷 藥材的深入質(zhì)量控制奠定堅實基礎(chǔ)。本發(fā)明通過對續(xù)斷藥材供試液制備方法，色譜條件選擇及色譜條件方法學(xué)研究， 確定了續(xù)斷藥材的指紋圖譜，進一步用二極管陣列檢測及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，分析 了續(xù)斷化學(xué)成分的紫外吸收特征及化合物類型，從而實現(xiàn)更有效、全面的控制續(xù)斷藥材質(zhì) 量。我們又進一步將此指紋圖譜用于24種續(xù)斷藥材的質(zhì)量控制。下面是本發(fā)明的部分試驗1.供試品溶液的制備取續(xù)斷細粉0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 70 %甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用70 %甲醇補足減失 的重量，搖勻，微孔濾膜過濾，得供試品溶液(0. 02g生藥/ml)。進樣10μ1進行色譜分析。2. HPLC色譜分析條件色譜柱碳十八烷基鍵合硅膠填料色譜柱(4.6X150mm IDjym)和預(yù)柱 (4.6X12. 5mm ID,5ym)；柱溫:25°C ；流動相，A 為 0. 的磷酸水；B 為乙腈；A+B = 100%, 采用梯度洗脫:0-20min,8-16% B, 20-30min, 16-19 % B, 30-40min, 19-29 % B，40_45min， 29%B, 45-50min, 29-48 % B, 50_60min，48%B, 60_70min，48-85 % B, 70_75min，85-100 % B, 75-80min,100% B0 流速lml/min ；檢測波長 205nm。記錄時間 80min。3色譜條件的選擇及結(jié)果3. 1洗脫系統(tǒng)的選擇及結(jié)果
本實驗對4種流動相系統(tǒng)進行了選擇(1)乙腈-水梯度洗脫；(2)乙 腈-0.05%-0.1%磷酸梯度洗脫；(3)乙腈-0.1%甲酸梯度洗脫；(4)甲醇-水梯度洗脫。結(jié)果表明，乙腈-水和乙腈-0.05% -0. 磷酸水梯度洗脫吸收峰數(shù)目多，峰形 好，基線平穩(wěn)(色譜圖 XD120401、XD120403、XD000005)，優(yōu)于乙腈-0. 甲酸(XD120404)， 甲醇-水(XD120801)梯度洗脫系統(tǒng)(見圖1)。乙腈_水和乙腈-0. 05% -0. 磷酸水梯 度洗脫效果相當，以0. 磷酸最好，故更優(yōu)的是乙腈-0. 磷酸梯度洗脫。3. 2洗脫梯度、柱溫的選擇及結(jié)果對5個洗脫梯度進行考察。結(jié)果確定洗脫梯度0 20min，8 16% B，20 30min，16 19% B，30 40min，19 29 % B，40 45min，29 % B，45 50min，29 48 % B，50 60min，48 % B，60 70min，48 85% B, 70 75min，85 100% B, 75 80min，100% B (流動相 A 為 0. 的磷酸水；B 為 乙腈；A+B = 100% ) ο比較了柱溫25°C (色譜圖XD000005)和30°C (色譜圖XD000001)，結(jié)果兩種柱溫 均可行，以25°C柱溫為優(yōu)(見圖2)。3. 3檢測波長的確定續(xù)斷含有皂苷類和生物堿類等成分。根據(jù)這些成分的紫外吸收特征，設(shè)置205， 212，220, 254和280nm五個波長對色譜條件進行考察，結(jié)果表明續(xù)斷化學(xué)成分在205nm、 212nm和220nm低波長處色譜峰最多，其中以205nm處峰強度最高，有些成分同時在254和 280nm處有色譜峰。綜合考慮，選擇205nm為優(yōu)(見圖3)。3. 4供試品制備提取溶劑的選擇本試驗對續(xù)斷的提取溶劑了優(yōu)選，旨在使續(xù)斷供試液能全面反映其各類極性有效 成分。供試液1 取取續(xù)斷細粉0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇 25mL,密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50 %甲醇補足減失的重量，搖 勻，微孔濾膜過濾(色譜圖XD000004)。供試液2 取取續(xù)斷細粉0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇 25mL,密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用70 %甲醇補足減失的重量，搖 勻，微孔濾膜過濾(色譜圖XD000005)。供試液3 取取續(xù)斷細粉0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密 塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，微孔濾膜 過濾(色譜圖XD000006)。制備續(xù)斷各供試品溶液，液相色譜儀自動進樣10 μ 1進行色譜分析。結(jié)果表明 50% 100%甲醇提取，均可提出續(xù)斷主要成分，其中甲醇提取脂溶性成分含量略高，50% 甲醇提取水溶性成分含量略高，70%甲醇提取可很好的兼顧續(xù)斷水溶性及脂溶性成分，故 優(yōu)選的提取溶劑為70%甲醇(見圖4)。3. 5檢測方法的方法學(xué)考察3. 5. 1供試品溶液穩(wěn)定性及儀器精密度實驗按“1”項下方法制備續(xù)斷供試品溶液，連續(xù)進樣6次檢測指紋圖譜(見圖5)，結(jié) 果表明高效液相色譜儀的精密度符合要求；分別在0、1. 5、3、6、9、18、24小時檢測指紋圖譜(見圖6)，結(jié)果表明續(xù)斷供試液在24小時內(nèi)穩(wěn)定。3. 5. 2供試品溶液測定的重復(fù)性實驗取同一批續(xù)斷藥材細粉，按“1”項下方法平行制備3份續(xù)斷供試溶液，檢測HPLC 指紋圖譜(見圖7)，考察續(xù)斷的提取方法及指紋圖譜檢測方法的穩(wěn)定性和重復(fù)性。結(jié)果表 明續(xù)斷供試液制備方法穩(wěn)定可靠，具有很好的重現(xiàn)性。3. 5. 3記錄時間的確定續(xù)斷供試液在“2”項色譜條件下的2小時記錄圖和空白對照圖(見圖8)，考察最 佳記錄時間。結(jié)果表明，75min以后基本無樣品中的成分，因而確定最佳記錄時間為80min。3. 5. 4標準品對照實驗采用川續(xù)斷皂苷VI為參照物，精密稱定適量，用70%甲醇溶解，制成標準品 溶液，記錄色譜圖(見圖9 :70%甲醇XD000028、川續(xù)斷皂苷VI :XDDZ0002、續(xù)斷藥材 XD121402)。4.續(xù)斷化學(xué)成分紫外吸收特征及化合物類型初步分析通過二極管陣列檢測(DAD)(見圖10)，在205nm處檢測到續(xù)斷24個主要化學(xué)成 分，其中有 11 個成分(色譜峰 2,3,4,10，11，12，13，14，15，16，17)在 205nm 和 254nm 處均 有色譜峰。一般來說，皂苷類化合物無紫外吸收，只能在低波長處檢測(如203-220nm)，而 在高波長處(如254nm)檢測到的成分則紫外吸收強，通常不是皂苷類化合物。故推測續(xù)斷 在205nm處有吸收而在254nm處無吸收的成分為皂苷類成分，如13個色譜峰1，5，6，7，8，9， 18，19，20，21，22，23和24，而在254nm處也有吸收的成分為非皂苷類成分，如11個色譜峰 2，3，4，10，11，12，13，14，15，16 和 17。5.續(xù)斷化學(xué)成分的高效液相色譜與電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用分析用高效液相色譜與電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-ESI-MS)對化學(xué)成分進一步定性， 通過負離子模式[(-)ESI-MS]和正離子模式[(+)ESI-MS]分別進行分析(質(zhì)譜總離子流圖 見圖11)，檢測到續(xù)斷液相色譜峰在不同模式下的分子離子峰[M-H]-、[M+HC00]-、[M+H] + 和[M+Na]+，可見續(xù)斷成分在負離子模式下信號靈敏，在正離子模式下信號較弱。由準分 子離子峰確定可能分子量，通過與文獻[藥學(xué)學(xué)報1991年26卷第9期；藥學(xué)學(xué)報1991年 26卷第12期；藥學(xué)學(xué)報1992年27卷第12期；藥學(xué)學(xué)報1993年第28卷第5期；中國藥 科大學(xué)學(xué)報1993年第24卷第5期]報道的成分與部分對照品對照，推測出色譜峰的可能 組成，確定了續(xù)斷中33個化合物分子量(XD1-XD33)(見表1)，其中24個主要液相色譜峰 中19個峰的化合物分子量得到確定(除色譜峰1，8，22，23，24外)。通過與對照品對照確 定3個化合化合物XD24(色譜峰19)為川續(xù)斷皂苷VI :33_0_ α -L-吡喃阿拉伯糖常春 藤皂苷元28-0-β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷；XD28為川續(xù)斷皂苷 V :3-0-α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸-28-0-β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄 糖酯苷；XD32為3-0-α -L-吡喃阿拉伯糖_常春藤皂苷元。通過與文獻對照推測7個化 合物化合物XD21 (色譜峰18)為川續(xù)斷皂苷X :3-0-[β -D-吡喃木糖(1 — 4)-β-D-吡 喃葡萄糖(1 — 4) ] [ α -L-吡喃鼠李糖(1 — 3)]-β- -吡喃葡萄糖(1 — 3)-a-L-吡 喃鼠李糖(1 — 2) - α -L-吡喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元-28-0- β -D-吡喃葡萄糖 (1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷；化合物XD22為川續(xù)斷皂苷VII 3-0-β-D-吡喃葡萄糖 (1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖(1 — 2) - α -L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷元28_0_ β -D-吡喃葡萄糖(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷；化合物XD23為川續(xù)斷皂苷VIII :3-0-a-L-吡 喃鼠李糖(1 — 3)-β-D-吡喃葡萄糖(1 — 3)-a-L-吡喃鼠李糖(1 — 2)-a-L-吡喃 阿拉伯糖常春藤皂苷元28-0-β-D-吡喃葡萄糖(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷；化合 物XD25-XD27為川續(xù)斷皂苷IV 3-0-(4-0-乙?；?-α -L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷元 28-0-β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷及其同份異構(gòu)體；化合物XD30為 川續(xù)斷皂苷IX :3-0-[β -D-吡喃木糖(1 — 4)-β-D-吡喃葡萄糖(1 — 4)] [ α -L-吡喃鼠 李糖(1 — 3)]-β-D-吡喃葡萄糖(1 — 3)-a-L-吡喃鼠李糖(1 — 2) - α-L-吡喃阿拉伯 糖-常春藤皂苷元。表1續(xù)斷化學(xué)成分的HPLC-ESI-MS數(shù)據(jù) 結(jié)論通過對續(xù)斷供試液制備方法，色譜條件選擇及色譜條件方法學(xué)研究，確定的現(xiàn)有 續(xù)斷色譜分析條件可滿足對續(xù)斷中多種成分的有效檢測與分析；通過二極管陣列檢測以 及高效液相色譜與電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用分析，有效確定了續(xù)斷化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)類型及分子量特 征。申請人:將此指紋圖譜條件進一步用于24種續(xù)斷藥材的質(zhì)量控制。具體如下1.續(xù)斷藥材的供試液制備取續(xù)斷藥材粉碎，稱取細粉，取續(xù)斷細粉0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加 入70 %甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減 失的重量，搖勻，過0. 45 μ m濾膜，即得。2.用本發(fā)明的指紋圖譜條件對續(xù)斷藥材的供試液進行HPLC色譜分析，即得續(xù)斷 藥材的指紋圖譜(圖10)。


圖1流動相選擇實驗色譜圖(色譜圖XD120401 乙腈-水；XD120403 乙腈-0. 05%磷酸；XD000005 乙腈-0. 磷酸；XD120404 乙腈-0. 甲酸；XD120801 甲 醇-水)圖2柱溫選擇實驗的色譜圖；圖3波長選擇實驗的色譜圖；圖4提取溶劑選擇實驗的色譜圖；圖5精密度實驗的色譜圖；圖6穩(wěn)定性實驗的色譜圖；圖7重復(fù)性實驗的色譜圖；圖8記錄時間實驗的色譜圖(其中XD000028為空白；XD121402為供試品)圖9標準品對照試驗的色譜圖(其中XD000028為空白；XDDZ0002為對照品川續(xù) 斷皂苷VI ；XD121402為供試品)圖10DAD分析色譜圖；圖11續(xù)斷藥材的正、負離子模式質(zhì)譜總離子流圖(ES+為正離子模式；ES-為負離子模式)圖12續(xù)斷藥材的指紋圖譜；圖13是實施例中第1 12種續(xù)斷藥材的指紋圖譜；圖14是實施例中第13 14種續(xù)斷藥材的指紋圖譜。附圖9中數(shù)字表示的是19.川續(xù)斷皂苷VI。
具體實施例方式實施例1，續(xù)斷藥材質(zhì)量控制的檢測鑒定方法。1實驗材料1. 1儀器與器材Agilent 1100型系列高效液相色譜儀，包括G1311A四元梯度泵、G1313A自動進樣 器、G1316A柱溫箱，G1315B DAD檢測器；Chemstation 6. 01色譜工作站。KQ3200DE型數(shù)控 超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。1. 2試劑及試藥藥材24種續(xù)斷藥材購于南京市多個藥店，貴州、云南、湖北省藥材公司，黑龍江 省藥材市場，吉林市藥店，錦州市藥店，安徽毫州藥材市場(見表1)。2.實驗方法2. 1色譜條件色譜柱C18色譜柱(ZORBAX EXTEND C18,4. 6 X 250mm ID，5 μ m)和 C18 預(yù)柱 (4.6X12. 5mm ID,5ym)；柱溫:25°C ；流動相，A 為 0. 的磷酸水；B 為乙腈；A+B = 100%, 采用梯度洗脫0 20min，8 16% B，20 30min，16 19% B，30 40min，19 29% B， 40 45min，29 % B，45 50min，29 48 % B，50 60min，48 % B，60 70min，48 85 % B, 70 75min，85 100% B, 75 80min，100% B ；；流速lml/min ；檢測波長 205nm。記 錄時間80min。2. 2供試品溶液的制備取續(xù)斷藥材粉碎，稱取細粉，取續(xù)斷細粉0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70 %甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減 失的重量，搖勻，微孔濾膜過濾，得供試品溶液。3.實驗結(jié)果將供試品溶液進樣10 μ 1進行色譜分析，即得續(xù)斷指紋圖譜，記錄時 間為80min。見圖12 (第1 12種續(xù)斷藥材)和圖13 (第13 24種續(xù)斷藥材)。表1 續(xù)斷藥材及色譜圖 綜上，本發(fā)明所建立的續(xù)斷藥材的HPLC指紋圖譜可有效用于檢測續(xù)斷中多種成 分，方法可靠、穩(wěn)定，分析時間較短，可用于續(xù)斷藥材的質(zhì)量控制。實施例2，與實施例1基本相同，但有以下改變所述的柱溫35°C ；所述的流動相中的A為體積百分比0. 05%的磷酸水溶液；在供試品溶液的制備方法中，所述加入甲醇的體積百分比是50%，25mL;補充甲 醇的體積百分比是50%。實施例3，與實施例1基本相同，但有以下改變所述的柱溫30°C ；所述的流動相中的A為體積百分比0. 5%的磷酸水溶液；在供試品溶液的制備方法中，所述加入甲醇的體積百分比是100% 25mL ；補充甲 醇的體積百分比是100%。實施例4，與實施例1基本相同，但有以下改變所述的流動相中的A為體積百分比0. 2%的磷酸水溶液；在供試品溶液的制備方法中，所述加入甲醇的體積百分比是75% ；補充甲醇的體 積百分比是75%。實施例5，與實施例1基本相同，但有以下改變所述的流動相中的A為體積百分比0. 3%的磷酸水溶液。所述液相色譜儀進樣量 為10 μ 1 ；記錄時間在80分鐘。
權(quán)利要求
一種續(xù)斷藥材質(zhì)量控制的檢測鑒定方法，使用高效液相色譜儀，DAD檢測器，色譜工作站，續(xù)斷藥材供試品溶液，其特征在于，各步驟中采用如下色譜條件色譜柱碳十八烷基鍵合硅膠填料色譜柱和預(yù)柱；柱溫25～35℃；流動相A為體積百分比0.05～0.5％的磷酸水溶液；B為乙腈；A十B＝100％，采用梯度洗脫0～20min，8～16％B，20～30min，16～19％B，30～40min，19～29％B，40～45min，29％B，45～50min，29～48％B，50～60min，48％B，60～70min，48～85％B，70～75min，85～100％B，75～80min，100％B；流速1ml/min；檢測波長205nm；所述供試品溶液的制備方法是取續(xù)斷細粉0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入體積百分比50％～100％甲醇10～50mL，超聲處理30min，放冷，用50％～100％甲醇補足減失的重量，搖勻，過0.45μm濾膜。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的續(xù)斷藥材質(zhì)量控制的檢測鑒定方法，其特征在于，所述的柱溫是25°C。所述的磷酸水溶液的體積百分濃度為0. ；所述供試品溶液的制備方法中，所述加入甲醇的體積百分比是70%、25mL;補充甲醇 的體積百分比是70%甲醇補足減失的重量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的續(xù)斷藥材質(zhì)量控制的檢測鑒定方法，其特征在于，所述液 相色譜儀進樣量為10 μ 1 ；記錄時間在80分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的續(xù)斷藥材質(zhì)量控制的檢測鑒定方法，其特征在于，所述續(xù)斷 藥材的檢測鑒定標準依據(jù)以下數(shù)據(jù)續(xù)斷化學(xué)成分的HPLC-ESI-MS數(shù)據(jù)
全文摘要
續(xù)斷藥材質(zhì)量控制的檢測鑒定方法，使用高效液相色譜儀，DAD檢測器，特征是采用如下條件色譜柱碳十八烷基鍵合硅膠填料色譜柱和預(yù)柱；柱溫25～35℃；流動相A為0.05～0.5％的磷酸水溶液；B為乙腈；A十B＝100％，梯度洗脫0～20min，8～16％B，20～30min，16～19％B，75～80min，100％B；流速1ml/min；檢測波長205nm。本發(fā)明采用高效液相色譜與電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，首次分析了續(xù)斷化學(xué)成分的質(zhì)譜特征，通過與對照品或文獻對照對續(xù)斷成分進行確認、推測。本研究有效彌補了現(xiàn)有續(xù)斷質(zhì)量控制的不足，為續(xù)斷藥材的深入質(zhì)量控制奠定堅實基礎(chǔ)。
文檔編號A61P19/10GK101919886SQ20101012323
公開日2010年12月22日 申請日期2010年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月1日
發(fā)明者彭蘊茹, 朱粉霞, 賈曉斌, 陳斌, 韋英杰 申請人:江蘇省中醫(yī)藥研究院