專利名稱：：用于治療皮膚老化跡象的組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及治療皮膚老化的方法和組合物。更具體地講，本發(fā)明涉及用于(i)刺激原彈性蛋白的產(chǎn)生和(ii)同時(shí)使原彈性蛋白交聯(lián)的方法和組合物。
背景技術(shù)：
：皮膚的老化可理解為受到內(nèi)在因素和外在因素的影響。內(nèi)在因素包括皮膚的自然變化，這是由基因組成(geneticmakeup)調(diào)節(jié)。外在因素包括諸如紫外損害、環(huán)境因素等的外源性影響。皮膚的老化會(huì)通過真皮胞外基質(zhì)的兩種主要組分即膠原和彈性蛋白這兩種纖維狀蛋白質(zhì)的變化，對(duì)皮膚的彈性和強(qiáng)度造成不利影響。例如，彈性蛋白是由彈性蛋白的前體蛋白分子(例如原彈性蛋白)交聯(lián)成為螺旋絲而形成的大的纖維狀蛋白質(zhì)。螺旋絲由能夠伸展然后又恢復(fù)它們的原始形狀的肽鏈組成。彈性蛋白由真皮結(jié)締組織的成纖維細(xì)胞分泌到胞外基質(zhì)中。但是，彈性蛋白的生物合成通常在成年期的某個(gè)時(shí)間停止。此外，在內(nèi)在和外在的老化過程中，彈性蛋白發(fā)生結(jié)構(gòu)上和組成上的變化，例如彈性纖維逐漸變性和分離成片斷。這些變化會(huì)通過諸如細(xì)紋(lines)、皺紋、彈性損失、松垂、皮膚干燥和不平、紅疤和老年斑的老化跡象而顯現(xiàn)出來。有一些物質(zhì)因其抑制交聯(lián)的彈性蛋白的降解的有益作用而為人所知。例如，已知基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)在彈性蛋白降解中起到重要作用，這是一組能夠分解胞外基質(zhì)中的大分子的酶類。已發(fā)現(xiàn)衰老皮膚中的MMP含量明顯高于年輕皮膚。MMP在外源性因素引起的皮膚過早老化中也起到關(guān)鍵作用。在光老化的皮膚中檢測到比避光的老化皮膚更高的MMP水平。J.H.Chung等人，J.Invest.Dermatol.(2001)117,1218-1224。研究還證實(shí)，在炎癥患者中，一系列基質(zhì)金屬蛋白酶(ΜΜΡ-1、-3、-9和-13)的水平顯著較高。T.Kuboto等人，Arch.Oral.Biol.(1996)41,253-262；A.L.Ejeil等人，J.Periodontol.(2003)74,188-195。此外還發(fā)現(xiàn)MMP-2和MMP-9是降解彈性蛋白的蛋白酶。Cosmetics&Toiletries(2000)115(11)，75—82)。有多種植物提取物已被描述為各種MMP的抑制劑。例如J.L.Lamaison描述了用選自薔薇科的植物的提取物抑制彈性蛋白酶(豬胰彈性蛋白酶)，并將該抑制作用歸因于這些提取物所含的單寧類物質(zhì)。Ann.PharmaceutiquesFrancaises(1990)48，335-340。Μ.Herrmann等人揭示，黑莓葉的水醇提取物SymMatriχ顯示MMP-1、MMP-2和ΜΜΡ-9抑制活性。SOFWJournal(2006)132(4)，42-46。另外，一些天然或合成化合物因其促進(jìn)彈性蛋白前體的產(chǎn)生的有益作用而為人所知。例如，類視色素能上調(diào)成纖維細(xì)胞中的彈性蛋白產(chǎn)生。LiuB,HarveyCS,McGowanSE.Am.J.Physiol.(1993年11月)265(5Pt1):L430_437。此外，已指出某些物質(zhì)能正面影響原彈性蛋白的交聯(lián)。例如，賴氨酰氧化酶充當(dāng)交聯(lián)酶并充當(dāng)確保彈性蛋白的空間上確定的沉積的支架的部件。Liu，Xiaoqing等人，NatureGenetics(2004)，36(2)，178-182。Valerie等人公開了能誘導(dǎo)賴氨酰氧化酶(LOXL)的基因表達(dá)的蒔蘿提取物，該酶負(fù)責(zé)成人中的彈性蛋白交聯(lián)。ExperimentalDermatology(2006)，15(8)，574-81。另夕卜，黑醋栗、小豆蔻(cardamon)、黑蘿卜(blackradish)、冬青(boxholly)、阿魏(Aseafoetida)膠、己烯酸乙酯、丁酸甲酯和癸二烯酸乙酯被公開為LOXL基因表達(dá)的促進(jìn)劑。GB2，438，999。因此，已提出了多種途徑和物質(zhì)來正面影響彈性蛋白及與其相關(guān)的皮膚特性。但是，本發(fā)明人已確認(rèn)，通過局部施用同時(shí)包含原彈性蛋白促進(jìn)劑和原彈性蛋白交聯(lián)劑的組合物，獲得了出乎意料的有益協(xié)同功效。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及治療皮膚老化跡象的組合物和方法。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，組合物包含至少一種原彈性蛋白促進(jìn)劑和至少一種原彈性蛋白交聯(lián)劑。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例，治療皮膚老化跡象的方法包括將美容上有效量的包含至少一種原彈性蛋白促進(jìn)劑和至少一種原彈性蛋白交聯(lián)劑的組合物局部施用于有需要的皮膚。通過本發(fā)明的具體實(shí)施方式和權(quán)利要求書，本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將顯而易見。具體實(shí)施例方式除非另有定義，否則本文使用的所有科學(xué)技術(shù)術(shù)語的含義與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常所理解的含義相同。另外，將本文提及的所有出版物、專利申請(qǐng)、專利及其他參考文獻(xiàn)以引用方式并入本文中。除非另有指明，否則百分比是指重量百分比(即％(W/W))。本文所用的“皮膚老化跡象”包括細(xì)紋和皺紋、彈性損失、皮膚不平、紅疤和老年斑的存在。本文所用的“治療”指減輕、降低、預(yù)防、改善或消除病癥或疾病的存在或出現(xiàn)。本文所用的“皺紋”包括微細(xì)紋、微皺紋或粗皺紋。皺紋的實(shí)例包括但不限于眼睛周圍的微細(xì)紋(例如“魚尾紋”)、前額和頰皺紋、眉心紋和嘴巴周圍的笑紋。本文所用的“彈性損失”包括皮膚或組織的彈性或結(jié)構(gòu)完整性的損失，包括但不限于松垂、松弛和松散組織。彈性或組織結(jié)構(gòu)完整性的損失可由多種因素所致，包括但不限于疾病、衰老、激素變化、機(jī)械創(chuàng)傷、環(huán)境損害，或者是向組織施用諸如美容品或藥物的產(chǎn)品的結(jié)果。本文所用的“皮膚不平”是指與彌漫性或斑駁性色素沉著有關(guān)的皮膚狀況，所述色素沉著可分類為色素沉著過度，如發(fā)炎后色素沉著過度。本文所用的“紅疤”是指與發(fā)紅或紅斑有關(guān)的皮膚狀況。本文所用的“老年斑”是指與不連續(xù)色素沉著有關(guān)的皮膚狀況，例如可在臉上以及手上發(fā)展的較深色素沉著小區(qū)域。本文所用的“美容品”指能保持、恢復(fù)、賦予、刺激或增強(qiáng)體美外觀或者似乎能增進(jìn)美貌或年輕的美容物質(zhì)或制品，具體地涉及到組織或皮膚的外觀。本文所用的“美容上有效量”是指足以治療一種或多種皮膚老化跡象、但充分低以避免嚴(yán)重副作用的生理活性化合物或組合物的量?；衔锘蚪M合物的美容上有效量要隨以下因素而變所治療的具體病癥、最終用戶的年齡和身體狀況、所治療/預(yù)防的病癥的嚴(yán)重程度、治療的持續(xù)時(shí)間、其他治療的性質(zhì)、所采用的具體化合物或產(chǎn)品/組合物、所具體采用的美容上可接受的載體等等。據(jù)信根據(jù)本文的描述，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可最大限度地利用本發(fā)明。下面的具體實(shí)施例應(yīng)該理解為僅僅是示例性的，并且無論如何都不會(huì)以任何方式限制本公開內(nèi)容的其余部分。原彈件蛋白促講劑本文所用的“原彈性蛋白促進(jìn)劑”指具有增強(qiáng)原彈性蛋白的產(chǎn)生的生物活性的一類化合物。根據(jù)本發(fā)明，原彈性蛋白促進(jìn)劑包括所有能夠增強(qiáng)人體中原彈性蛋白的產(chǎn)生的天然或合成化合物。合適的原彈性蛋白促進(jìn)劑可例如用下文的“原彈性蛋白促進(jìn)作用的測定”來進(jìn)行確定。使心肌母細(xì)胞系H9c2(2X104個(gè)細(xì)胞/孔)在48孔板中生長24小時(shí)，以達(dá)到80-90%鋪滿。第二天，采用脂質(zhì)轉(zhuǎn)染胺(LipOfectamine)2000，按照生產(chǎn)商說明書(InvitrogenCorporation，Carlsbad，美國加州)，用pGL2_彈性蛋白2.2螢光素酶報(bào)告基因構(gòu)建物對(duì)細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，所述構(gòu)建物濃度為總DNA，比例61pGLpRL。在所有轉(zhuǎn)染中都包括具有海腎(Renilla)螢光素酶報(bào)告基因的構(gòu)建物(pRL_TK)作為內(nèi)對(duì)照。轉(zhuǎn)染后一天，用指定劑量的試驗(yàn)樣品處理細(xì)胞24小時(shí)，然后將它們裂解以供分析。用得自Promega公司的二元螢光素酶報(bào)告基因測定系統(tǒng)，按照生產(chǎn)商的方案進(jìn)行螢光素酶測定。用螢火蟲與海腎螢光素酶活性比(RLU)評(píng)估試驗(yàn)樣品的原彈性蛋白促進(jìn)活性。具體地講，將樣品的螢火蟲與海腎螢光素酶活性比(RLU)除以介質(zhì)對(duì)照所測得的RLU，以得到試驗(yàn)樣品的原彈性蛋白促進(jìn)活性。優(yōu)選地，原彈性蛋白促進(jìn)劑的原彈性蛋白促進(jìn)活性為至少1.2，優(yōu)選至少1.25，更優(yōu)選至少1.3，最優(yōu)選至少1.5；當(dāng)在0.5微克/毫升至2.5微克/毫升(以活性物質(zhì)計(jì))的范圍內(nèi)的一個(gè)或多個(gè)濃度下測試時(shí)，優(yōu)選地當(dāng)在1.O微克/毫升至2.5微克/毫升(以活性物質(zhì)計(jì))的范圍內(nèi)的某個(gè)濃度下測試時(shí)。合適的原彈性蛋白促進(jìn)劑的實(shí)例包括但不限于黑莓提取物、黃櫨(cotinus)提取物、小白菊提取物和具有銅和/或鋅組分的雙金屬絡(luò)合物。具有銅和/或鋅組分的雙金屬絡(luò)合物可以是例如檸檬酸銅-鋅、草酸銅-鋅、酒石酸銅-鋅、蘋果酸銅-鋅、琥珀酸銅-鋅、丙二酸銅_鋅、馬來酸銅_鋅、天冬氨酸銅_鋅、谷氨酸銅_鋅、戊二酸銅-鋅、富馬酸銅-鋅、葡糖二酸銅_鋅、聚丙烯酸銅_鋅、己二酸銅_鋅、庚二酸銅_鋅、辛二酸銅_鋅、壬二酸銅-鋅、癸二酸銅-鋅、十二酸銅-鋅或者它們的組合。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，原彈性蛋白促進(jìn)劑選自黑莓提取物、黃櫨提取物、小白菊提取物和它們的組合。所謂“黃櫨提取物”是指黃櫨(Cotinuscoggygria)這種植物的提取物，如從保加利亞索非亞的BiIkokoop公司市售獲得的黃櫨水提取物(3%活性)。所謂“小白菊提取物”是指小白菊(Tanacetumparthenium)這種植物的提取物，如可按公布的美國專利申請(qǐng)NO.US2007/0196523中所述進(jìn)行制備。一種特別合適的小白菊提取物市售獲自美國紐約Ossining鎮(zhèn)的IntegratedBotanicalTechnologies公司，為約20%活性小白菊提取物。特別優(yōu)選的原彈性蛋白促進(jìn)劑是黑莓提取物。所謂“黑莓提取物”是指懸鉤子屬(Rubus)植物的提取物，所述植物優(yōu)選歐洲黑莓(Rubusfruticosus)。在一個(gè)實(shí)施例中，提取物是從植物的花分離。在又一個(gè)實(shí)施例中，提取物是從植物的干燥的花分離。這類提取物可從植物的一個(gè)或多個(gè)部分分離(例如整株植物及該植物的花、種子、根、根莖、莖干、果實(shí)和/或葉)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，黑莓提取物是黑莓葉提取物。提取過程可包括物理法移取該植物的一塊并例如對(duì)其進(jìn)行研磨。還可用本領(lǐng)域公知的提取方法從植物分離合適的化合物，例如使用有機(jī)溶劑，如低級(jí)C1-C8醇、C1-C8烷基多元醇、C1-C8烷基酮、CfC8烷基醚、乙酸C1-C8烷基酯及氯仿，和/或無機(jī)溶劑如水、無機(jī)酸如鹽酸和無機(jī)堿如氫氧化鈉。例如，可用水、醇(如乙醇)或者它們的組合進(jìn)行提取，來制備黑莓提取物。優(yōu)選使用同時(shí)包含乙醇和水的提取劑。黑莓植物各部分優(yōu)選先進(jìn)行干燥再進(jìn)行提取。優(yōu)選僅使用黑莓植物的葉子，而不使用其他植物部分，如黑莓果實(shí)(漿果)、枝條或根。在一個(gè)實(shí)施例中，如下制備黑莓葉提取物a)將含有選自甲醇、乙醇、正丙醇和異丙醇的醇的提取劑加到黑莓葉子，和b)使黑莓葉子與所述提取劑接觸最長達(dá)72小時(shí)。優(yōu)選確定提取劑與葉子固形物的質(zhì)量比，使得提取劑與葉子固形物質(zhì)量比為至少10倍，但優(yōu)選提取劑與葉子固形物質(zhì)量比不超過50倍，優(yōu)選在10倍至20倍。特別優(yōu)選的是提取劑與葉子固形物質(zhì)量比為14至18倍。用16倍質(zhì)量的含醇溶劑(相對(duì)于葉子固形物)獲得了良好的結(jié)果。進(jìn)行提取步驟b)的時(shí)間最多為72小時(shí)，但還可更短。如果提取時(shí)間特別短，則在步驟b)中僅獲得非常稀的提取物。因此優(yōu)選在步驟b)中提取黑莓葉子至少1小時(shí)，特別是至少2小時(shí)。必需的提取時(shí)間是根據(jù)待提取的黑莓葉子的性質(zhì)(特別是它們的齡期)以及其他提取條件(特別是提取溫度)來選擇。在高的提取溫度下，特別是在60至100°C范圍內(nèi)、優(yōu)選80至100°C范圍內(nèi)的提取溫度下，提取時(shí)間優(yōu)選為1小時(shí)至6小時(shí)，特別優(yōu)選2小時(shí)至4小時(shí)。另外，還特別優(yōu)選通過使提取劑回流，特別是在最高達(dá)約100°C、優(yōu)選80至100°C范圍內(nèi)的溫度下回流，來進(jìn)行步驟b)中的提取。在這個(gè)情況中，提取時(shí)間優(yōu)選不超過24小時(shí)。提取溫度是根據(jù)所用的提取劑來確定。如果使用含乙醇的溶劑，則優(yōu)選60°C至100°C范圍內(nèi)、特別是80°C至100°C范圍內(nèi)的溫度，特別是如果如下所述使用乙醇和水的混合物作為提取劑的話。如果提取劑所含的醇(特別是乙醇)的量占提取劑總重量的至少20wt.%，這是優(yōu)選的。如果提取劑所含的水的量占提取劑總重量的至少15wt.%，這同樣是優(yōu)選的。如果相對(duì)于提取劑的總重量而言，提取劑同時(shí)含有至少20wt.%的醇(優(yōu)選乙醇)和至少15wt.%的水，這是特別優(yōu)選的。特別優(yōu)選的黑莓葉提取物是用由重量比為28(2重量份的乙醇與8重量份的水混合)至82、優(yōu)選重量比為37至73、特別優(yōu)選重量比為37至11的乙醇和水組成的提取物獲得的。制備合適的黑莓葉提取物的詳細(xì)程序在公布的美國專利申請(qǐng)No.2008/0095719有公開，該專利申請(qǐng)全文并入本文。因此，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，黑莓提取物是黑莓葉提取物，即提取物是從黑莓植物的葉子生產(chǎn)的。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施例中，黑莓提取物是從歐洲黑莓的葉子生產(chǎn)。在又一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施例中，通過用水和低級(jí)醇(如乙醇)的混合物提取歐洲黑莓的葉子來生產(chǎn)黑莓提取物。一種通過用水和乙醇的混合物提取歐洲黑莓的葉子來生產(chǎn)的特別合適的黑莓提取物，是市售獲自美國新澤西州Teterboro的Symrise，Inc.的材料“SymMatrix”，其在麥芽糖糊精基質(zhì)中混合成約5至10重量％。本發(fā)明的組合物可包含美容上有效量的一種或多種原彈性蛋白促進(jìn)劑，如上文所述的原彈性蛋白促進(jìn)劑。以活性物質(zhì)計(jì)，所述組合物優(yōu)選包含約0.至約10重量％的原彈性蛋白促進(jìn)劑，更優(yōu)選約0.5%至約5重量％的原彈性蛋白促進(jìn)劑，最優(yōu)選約0.5%至約2重量％的原彈性蛋白促進(jìn)劑。原彈件蛋白交聯(lián)劑本發(fā)明的組合物包含一種或多種原彈性蛋白交聯(lián)劑。所謂“原彈性蛋白交聯(lián)劑”是指這么一類化合物，它們具有增強(qiáng)彈性蛋白前體(如原彈性蛋白、原纖蛋白等)的酶促互相交聯(lián)或者交聯(lián)到其他彈性蛋白前體上或者交聯(lián)到現(xiàn)有的彈性纖維上的生物活性。在一個(gè)實(shí)施例中，如Colectica的公布的專利申請(qǐng)GB2402676(其以引用方式并入本文)中所述，原彈性蛋白交聯(lián)劑適合于促進(jìn)賴氨酰氧化酶的同種型(如L0XL，賴氨酰氧化酶樣同種型)的活性。原彈性蛋白交聯(lián)劑的特別合適的實(shí)例包括天然或合成的化合物，如但不限于蒔蘿提取物、黑醋栗提取物、小豆蔻提取物、黑蘿卜提取物、冬青提取物、阿魏提取物(例如膠)、己烯酸乙酯、丁酸甲酯和癸二烯酸乙酯。一種特別合適的原彈性蛋白交聯(lián)劑是蒔蘿提取物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，本發(fā)明的組合物包含美容上有效量的蒔蘿提取物。所謂“蒔蘿提取物”是指前胡屬(Peucedanum)植物的提取物，所述植物優(yōu)選蒔蘿(Peucedanumgraveolens)0提取物可以是來自整株植物及該植物的花、種子、根、根莖、莖干、果實(shí)和/或葉之一，如可通過研磨或化學(xué)提取來制備。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，蒔蘿提取物是蒔蘿(dill)的果實(shí)的提取物，優(yōu)選蒔蘿(Peucedanumgraveolens)的果實(shí)的提取物。還可用本領(lǐng)域公知的提取方法從植物分離這類化合物，例如使用有機(jī)溶劑，如低級(jí)C1-C8醇、C1-C8烷基多元醇、C1-C8烷基酮、CfC8烷基醚、乙酸C1-C8烷基酯及氯仿，和/或無機(jī)溶劑如水、無機(jī)酸如鹽酸和無機(jī)堿如氫氧化鈉。一種特別合適的蒔蘿提取物是“蒔蘿果實(shí)”5%-10%水溶液，市售獲自美國新澤西州Parsippany的BASF公司，商品名稱為“Lys‘lastin”。在一個(gè)實(shí)施例中，以活性物質(zhì)計(jì)，組合物優(yōu)選包含約0.至約10重量％的原彈性蛋白交聯(lián)劑，更優(yōu)選約0.5%至約5重量％的原彈性蛋白交聯(lián)劑，最優(yōu)選約0.5%至約2重量％的原彈性蛋白交聯(lián)劑。根據(jù)本發(fā)明，用本發(fā)明的組合物實(shí)現(xiàn)了在治療一種或多種皮膚老化跡象方面的出乎意料和協(xié)同的作用。具體地講，本發(fā)明組合物的局部施用能改善皮膚的特性，如減少細(xì)紋和皺紋，增加彈性以及減少皮膚不平狀況、紅疤和老年斑。應(yīng)指出的是，原彈性蛋白促進(jìn)劑和原彈性蛋白交聯(lián)劑可以是兩種或更多種單獨(dú)的化合物?；蛘撸鼈兛梢允峭瑫r(shí)具有原彈性蛋白促進(jìn)活性和原彈性蛋白交聯(lián)活性的單一化合物。美容上可接受載體本發(fā)明的美容組合物中還可存在一種或多種美容上可接受的載體。本文所用的“美容上可接受的”是指適合用于與(人)組織(例如皮膚)接觸而無不適當(dāng)?shù)亩拘?、不相容性、不穩(wěn)定性、刺激性、過敏反應(yīng)等，與合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比相稱。本發(fā)明的合適載體包括但不限于水、乙醇、異丙醇、1，2_丙二醇、丙三醇、芐醇、異山梨醇二甲基醚、丙三醇三乙酸酯、乙二醇醚、丙二醇和聚乙二醇(PEG)。特別優(yōu)選的溶劑包括平均分子量在約200至約400之間的PEG、蓖麻油、丙三醇三乙酸酯、異山梨醇二甲基醚、乙醇和水以及它們的組合。美容上可接受的載體占組合物重量的約50%至約99.99%，更優(yōu)選占組合物重量的約80%至約95%。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施例中，組合物包含至少約25重量％水，更優(yōu)選至少約50重量％水?？蓪⒏鞣N化合物加到配方中，以使摩爾滲透壓濃度和/或PH改變至可接受的水平。這些化合物包括但不限于甘露糖醇、蔗糖、氯化鈣、氯化鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氫氧化鈉和鹽酸?？蓪⒔M合物制備成多種美容制品，包括但不限于洗劑、霜?jiǎng)?、凝膠、棒(stick)、噴齊U、軟膏劑、清潔液體洗劑和固體皂、香波和頭發(fā)調(diào)理劑、糊劑、泡沫、粉末、摩絲、剃須霜、拭巾(wipe)、帶(strip)、片(patch)、電動(dòng)片、傷口敷料和膠粘繃帶、水凝膠、成膜產(chǎn)品、臉和皮膚面膜、美容品如粉底、眼線膏和眼影膏等等。這些產(chǎn)品類型可含有幾種類型的美容上可接受的載體，包括但不限于溶液、懸浮液、乳液(如微乳液和納米乳液)、凝膠、固體和脂質(zhì)體。其他的載體可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員配制。為了促進(jìn)合適的載體的配制，可在組合物中包括多種功能成分中的任何一種。例如，可包括多種以下載體中的任何一種柔潤劑、保濕劑、PH調(diào)節(jié)劑、螯合劑、乳化劑、濕潤齊U、增稠劑、聚合物、防腐劑、著色劑、香料和其他常用于個(gè)人護(hù)理和美容產(chǎn)品中的成分。所選的PH并不關(guān)鍵，而是可在一個(gè)范圍內(nèi)，例如約4至約8，如約5至約7。另外的美容活性劑在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的組合物除了上述組分外，還可含有一種或多種另外的美容活性劑。所謂“美容活性劑”是對(duì)組織具有美容或治療作用的化合物，其可為合成的化合物，或者為從天然來源提取、分離、純化或濃縮的化合物，或者為含有化合物的混合物的天然提取物，包括但不限于抗微生物劑，如抗酵母劑、抗真菌劑和抗細(xì)菌劑，抗炎劑、抗老化齊、抗寄生蟲齊、抗氧化劑、角質(zhì)層分離劑、營養(yǎng)物、維生素、礦物質(zhì)、能量增強(qiáng)劑等。可作為本發(fā)明組合物的組分的維生素的實(shí)例包括但不限于維生素Α，維生素B類如維生素Β3、維生素Β5、維生素Β7和維生素Β12，維生素C，維生素K，維生素E如α，γ或δ-生育酚，以及它們的衍生物(如鹽和酯)和混合物?？捎糜诒景l(fā)明組合物和方法的抗氧化劑的實(shí)例包括但不限于水溶性抗氧化劑如巰基化合物和它們的衍生物(例如焦亞硫酸鈉和N-乙酰-半胱氨酸)、硫辛酸和二氫硫辛酸、白藜蘆醇、乳鐵蛋白以及抗壞血酸和抗壞血酸衍生物(例如抗壞血酸棕櫚酸酯和抗壞血酸多肽)。適用于本發(fā)明組合物的油溶性抗氧化劑包括但不限于丁羥甲苯、類視色素(例如視黃醇和視黃醇棕櫚酸酯)、不同類型的生育酚(例如α，Υ和δ-生育酚以及它們的酯(如乙酸酯)和它們的混合物)、生育三烯醇和泛醌。含有適用于本發(fā)明組合物的抗氧化劑的天然提取物包括但不限于含有類黃素、異類黃素和它們的衍生物如染料木黃酮(genistein)和大豆黃素(diadzein)的提取物(例如大豆和丁香提取物)、含有白藜蘆醇的提取物等。其他材料可用于本發(fā)明的組合物中還可存在各種其他的材料。這些材料包括蛋白質(zhì)和多肽、防腐劑以及堿性劑。這些材料的實(shí)例在美國個(gè)人護(hù)理用品理事會(huì)(PersonalCareProductsCouncil)出版的《2008國際美容成分詞典和手冊(cè)》(2008InternationalCosmeticIngredientDictionaryandHandbook)(Μ12Hjx)中有公開0以下實(shí)例進(jìn)一步說明本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)理解，這些實(shí)例雖然指示出了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，但僅以舉例說明的方式示出。鍾實(shí)例I原彈件蛋白促講作用的測定用以下提取物制備不同樣品黃櫨(得自保加利亞索非亞的Bilkokoop公司)、小白菊20%活性，不含小白菊內(nèi)酯的小白菊提取物，得自紐約Ossining鎮(zhèn)的IntegratedBotanicalTechnologies)、歐洲黑莓(10%活性，SymMatrix，得自Symrise)和蒔蘿(10%活性，Lys‘lastin,得自BASF)。將提取物稀釋于細(xì)胞培養(yǎng)基(Invitrogen的DMEM培養(yǎng)基，SanDiegoCA)中至下表1所指明的“活性”提取物的濃度。黑莓提取物預(yù)先稀釋于足夠的乙醇中制備成均勻混合物，然后再用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋。樣品中的乙醇濃度為約1%。將每個(gè)樣品進(jìn)行原彈性蛋白促進(jìn)作用測定。結(jié)果在下表1中顯示。表1提取物r^s原彈性蛋白促進(jìn)活(以活性物質(zhì)計(jì))性的提高黃護(hù)15ug/ml1.57+0.24*~小白菊20ug/ml1.54+.011*小白菊5ug/ml1.27+.024歐洲黑莓5ug/ml1.73+.026*歐洲黑莓0.5ug/ml1.33+.019蒔蘿2.5mg/ml0.95+0.11介質(zhì)對(duì)照(乙醇)0.01%1.0+0.10*=P<0.05，用Studentt_檢驗(yàn)黑莓提取物提供最大的原彈性蛋白促進(jìn)作用，其次是小白菊提取物和黃櫨提取物也提供顯著的原彈性蛋白促進(jìn)作用。相反，蒔蘿提取物即使在高濃度下也不提供原彈性蛋白促進(jìn)作用。實(shí)例II組合物的制備分別用下表2和表3中所示的成分，制備本發(fā)明的以下組合物即組合物1和2。表2組合物1<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>VERSENE得自美國密歇根州的DowChemicalofMidland。ULTREZ/CARB0MER得自美國俄亥俄州Wickliffe的LubrizolCorporation。BRIJ得自荷蘭阿姆斯特丹的ICI-Uniquema-AkzoNobel。FINS0LV得自美國新澤西州ElmwoodPark的FinetexCorporation。MIRASIL得自美國新澤西州Cranbury的RhodiaGroup。ΡΗΕΝ0ΝΙΡ得自美國德克薩斯州Woodlands的ClariantFunctionalChemicals。LYS，LASTINE得自美國新澤西州Parsippany的BASF。SymMatrix得自美國新澤西州Teterboro的SymriseInc.。組合物1是如下進(jìn)行制備。如下制備油相。將苯甲酸C12-15烷基酯加到清潔的玻璃燒杯中。開始攪拌，并將容器加熱到55-60°C。當(dāng)油相達(dá)到55°C或以上的溫度時(shí)，加入Brij72和Brij721。當(dāng)油相達(dá)到55_60°C時(shí)，使它保持在該溫度并混合15分鐘(或者直到均勻)。然后將溫度保持在55-60°C，同時(shí)進(jìn)行攪拌，直到將其加入到水相。如下制備水相。將水加到清潔的玻璃燒杯中。開始攪拌，并將容器加熱到55-60°C。加入EDTA二鈉和Ultrez10。在55_60°C下，將各成分混合15分鐘或者直到均勻。然后將溫度保持在55-60°C，同時(shí)進(jìn)行攪拌以定相。在加強(qiáng)攪拌下將油相加到水相，然后高速混合10-20分鐘。在50°C或以下的溫度下，加入二甲硅油。在40°C或以下的溫度下，加入PhenonipXB。然后將兩相混合10分鐘或直到均勻。加入氫氧化鈉(目標(biāo)PH為5.4)。然后將組合物混合10分鐘或直到均勻。然后加入Lys’Lastine和SymMatrix，混合至均勻。接著將水加到QS，然后將組合物混合10分鐘。以活性物質(zhì)計(jì)，黑莓提取物和蒔蘿提取物在最終組合物中的濃度分別為1%。表3組合物2<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>HYDR0VANCE和STRUCTUREXL得自AkzoNobel公司。AMIGEL得自美國佛羅里達(dá)州邁阿密Alban的MullerInternational公司。羥苯甲酯得自美國馬薩諸塞州WardHill的AlfaAesar公司。DUBVCI得自英國Aylesbury的StearinerieDubois公司。EMULIUM得自法國St-Priest的Gattefosse公司。DC1413得自美國密歇根州Midland的DowCorning公司。MICR0PEARL得自美國新澤西州Fairfield的S印pic公司。組合物2是如下制備。如下制備油相。向容器中加入DUBVCI、異壬酸異壬酯、MIRASIL、EMULIUM、BHT、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯和生育酚乙酸酯，同時(shí)混合和加熱到80°C。如下制備水相。將水加入到容器中，并加入STRU⑶REXL和EDTA。施加熱量，并加入HYDROVANCE和丙三醇。當(dāng)水相達(dá)到40°C時(shí)，加入AMIGEL。當(dāng)水相達(dá)到75°C時(shí)，加入咖啡因和對(duì)羥基苯甲酸甲酯。將水相和油向在80°C下合并，并讓其冷卻。在35°C下，加入MICR0PEARL、苯氧基乙醇、香料、PEG-8、視黃醇和CL14700。當(dāng)混合物冷卻到20°C時(shí)，加入醇。以活性物質(zhì)計(jì)，黑莓提取物和蒔蘿提取物在最終組合物中的濃度分別為1%。用表4中所示的成分，制備比較組合物A(安慰劑)。表4比較組合物A<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>DC200FluidIOOcst得自美國密歇根州Midland的DowCorning公司。SEPIGEL305得自美國新澤西州Fairfield的S印pic公司。如下制備比較組合物A。向清潔的玻璃燒杯中加入水和丙二醇，開始攪拌。將該容器加熱到40-45°C。將這個(gè)水相混合15分鐘或者直到均勻。然后加入BHT、丙三醇和DC200Fluid，高速混合10-20分鐘。讓其冷卻下來。在40°C或以下的溫度，加入PhenonipXB?；旌?0分鐘或者直到均勻。然后加入S印igel305，將各成分混合10分鐘或者直到均勻，然后讓其冷卻到室溫。這個(gè)樣品充當(dāng)安慰劑(無活性物質(zhì))。用表5中所示的成分，制備比較組合物B。表5比較組合物B<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>黃櫨(10%水提取物)得自美國新澤西州Teterboro的SymriseInc公司。按與制備比較組合物A相似的方式制備比較組合物B，例外的是在容器冷卻到室溫后向其中加入黃櫨提取物，并將所得混合物再混合10分鐘。以活性物質(zhì)計(jì)，最終組合物中的黃櫨提取物濃度為2%。用與比較組合物A相同的成分制備比較組合物C，例外的是還包括20%的歐洲黑莓提取物，并相應(yīng)減少水量。用丙二醇將歐洲黑莓提取物預(yù)混合成漿液，將此預(yù)混合液加到容器中(容器中的物料已冷卻到室溫)，然后將所得的混合物再混合10分鐘。以活性物質(zhì)計(jì)，最終組合物的歐洲黑莓提取物濃度為2%。用與比較組合物A相同的成分制備比較組合物D，例外的是還包括10%和Lys'Lastine(蒔蘿提取物)，并相應(yīng)減少水量。用丙二醇將Lys’Lastine預(yù)混合成漿液，將此預(yù)混合液加到容器中(容器中的物料已冷卻到室溫)，然后將所得的混合物再混合10分鐘。以活性物質(zhì)計(jì)，最終組合物中的Lys’Lastine濃度為1%。皮膚彈件計(jì)測試在用50個(gè)人受試者(女性，年齡在35歲至50歲之間)進(jìn)行的臨床研究中，使用組合物1和2以及比較組合物A-D。在研究過程中，每個(gè)受試者隨機(jī)分配兩種不同的組合物。受試者用組合物處理后，如下所述用皮膚彈性計(jì)進(jìn)行測試。用皮膚彈性計(jì)進(jìn)行的測試能提供與皮膚彈性有關(guān)的特性的體內(nèi)定量測量。在每個(gè)受試者的上臂內(nèi)側(cè)施用第一組合物，用量為豌豆般大小，每天兩次，持續(xù)12個(gè)星期。第二組合物以相同方式施用在受試者的另一上臂。用皮膚彈性計(jì)SEM580(得自德國科隆的Courage&Khazaka)在每個(gè)上臂內(nèi)側(cè)的中央進(jìn)行測量，以評(píng)估皮膚施用部位的粘彈性。該儀器通過2毫米探針向皮膚小區(qū)域施加400毫巴真空兩秒鐘。然后通過光學(xué)技術(shù)測量皮膚的彈性反應(yīng)。這個(gè)方法提供以下與皮膚彈性有關(guān)的變形參數(shù)“總彈性”和“彈性回復(fù)率”。結(jié)果在表6中顯示。表6:皮膚彈件計(jì)測試結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>*=P<0.05，與安慰劑相比顯著(用Studentt檢驗(yàn))**=P<0.1，與安慰劑相比顯著(用Studentt檢驗(yàn))非常出乎意料的是，同時(shí)含有歐洲黑莓和蒔蘿的組合物1顯示出協(xié)同的皮膚彈性改進(jìn)作用。這個(gè)組合作用比單獨(dú)的甚至2%歐洲黑莓和蒔蘿的各自作用之和還要大。事實(shí)上，同時(shí)含有歐洲黑莓和蒔蘿的組合物1的彈性改進(jìn)作用為2%歐洲黑莓(組合物C)和蒔蘿(組合物D)的各自作用之和的三倍以上。此外，這個(gè)出乎意料的協(xié)同作用對(duì)于總彈性和彈性回復(fù)率凈增都適用。權(quán)利要求一種美容組合物，包含(a)至少一種原彈性蛋白促進(jìn)劑；和(b)至少一種原彈性蛋白交聯(lián)劑。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容組合物，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑選自黑莓葉提取物、黃櫨提取物、小白菊提取物、具有銅和/或鋅組分的雙金屬絡(luò)合物以及它們的組合。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容組合物，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑選自黑莓葉提取物、黃櫨提取物、小白菊提取物以及它們的組合。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容組合物，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑包含黑莓葉提取物。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容組合物，其中所述原彈性蛋白交聯(lián)劑選自蒔蘿提取物、黑醋栗提取物、小豆蔻提取物、黑蘿卜提取物、冬青提取物、阿魏提取物、已烯酸乙酯、丁酸甲酯、癸二烯酸乙酯以及它們的組合。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容組合物，其中所述原彈性蛋白交聯(lián)劑包含蒔蘿提取物。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容組合物，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑包含黑莓葉提取物，所述原彈性蛋白交聯(lián)劑選自蒔蘿提取物、黑醋栗提取物、小豆蔻提取物、黑蘿卜提取物、冬青提取物、阿魏提取物、已烯酸乙酯、丁酸甲酯、癸二烯酸乙酯以及它們的組合。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容組合物，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑選自黑莓葉提取物、黃櫨提取物和小白菊提取物，所述原彈性蛋白交聯(lián)劑包含蒔蘿提取物。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容組合物，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑的存在量占所述組合物的約0.1重量％至約10重量％。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容組合物，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑的存在量占所述組合物的約0.5重量％至約5重量％。11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容組合物，其中所述原彈性蛋白交聯(lián)劑的存在量占所述組合物的約0.重量至約10重量％。12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容組合物，其中所述原彈性蛋白交聯(lián)劑的存在量占所述組合物的約0.5重量％至約5重量％。13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容組合物，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑包含黑莓提取物，所述原彈性蛋白交聯(lián)劑包含蒔蘿提取物。14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容組合物，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑的原彈性蛋白促進(jìn)活性為至少約1.2。15.一種治療皮膚老化跡象的方法，包括將美容上有效量的包含(a)至少一種原彈性蛋白促進(jìn)劑和(b)至少一種原彈性蛋白交聯(lián)劑的組合物局部施用于需要這種治療的皮膚。16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述皮膚老化跡象選自細(xì)紋、皺紋、彈性損失、皮膚不平、紅疤和老年斑。17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑選自黑莓葉提取物、黃櫨提取物、小白菊提取物、具有銅和/或鋅組分的雙金屬絡(luò)合物以及它們的組合。18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑選自黑莓葉提取物、黃櫨提取物、小白菊提取物以及它們的組合。19.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑包含黑莓葉提取物。20.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述原彈性蛋白交聯(lián)劑選自蒔蘿提取物、黑醋栗提取物、小豆蔻提取物、黑蘿卜提取物、冬青提取物、阿魏提取物、已烯酸乙酯、丁酸甲酯、癸二烯酸乙酯以及它們的組合。21.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述原彈性蛋白交聯(lián)劑包含蒔蘿提取物。22.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑包含黑莓葉提取物，所述原彈性蛋白交聯(lián)劑選自蒔蘿提取物、黑醋栗提取物、小豆蔻提取物、黑蘿卜提取物、冬青提取物、阿魏提取物、已烯酸乙酯、丁酸甲酯、癸二烯酸乙酯以及它們的組合。23.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑選自黑莓葉提取物、黃櫨提取物和小白菊提取物，所述原彈性蛋白交聯(lián)劑包含蒔蘿提取物。24.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑的存在量占所述組合物的約0.1重量％至約10重量％。25.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑的存在量占所述組合物的約0.5重量％至約5重量％。26.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述原彈性蛋白交聯(lián)劑的存在量占所述組合物的約0.1重量％至約10重量％。27.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述原彈性蛋白交聯(lián)劑的存在量占所述組合物的約0.5重量％至約5重量％。28.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑包含黑莓提取物，所述原彈性蛋白交聯(lián)劑包含蒔蘿提取物。29.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述原彈性蛋白促進(jìn)劑的原彈性蛋白促進(jìn)活性為至少約1.2。全文摘要本發(fā)明涉及用于治療皮膚老化的方法和組合物，所述組合物包含至少一種原彈性蛋白促進(jìn)劑和至少一種原彈性蛋白交聯(lián)劑。文檔編號(hào)A61K8/97GK101810552SQ20101012923公開日2010年8月25日申請(qǐng)日期2010年2月20日優(yōu)先權(quán)日2009年2月20日發(fā)明者M(jìn)·G·科佐利斯,M·索思奧,S·D·特克-薩馬拉斯申請(qǐng)人:強(qiáng)生消費(fèi)者公司