專利名稱：一種紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體的是涉及一種紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)
體及其制備方法。
背景技術(shù)：
紫杉醇(Paclitaxel， PTX)是由紅豆杉屬植物提取的一種具有抗癌藥物，對晚期卵巢癌、乳腺癌、肺癌等均有一定的療效。但其水溶性極差，為了增加其溶解性，目前國內(nèi)外商品化的紫杉醇制劑均采用同一配方，即在紫杉醇乙醇注射液中加入一種增溶劑聚氧乙基蓖麻油(Cremophorel)。但這類紫杉醇制劑自身存在著不可克服的缺陷，主要缺陷如下
1.增溶劑聚氧乙基蓖麻油可產(chǎn)生過敏等副作用，給病人造成痛苦。制劑中的聚氧乙基蓖麻油會引起體內(nèi)組織胺釋放，給藥后數(shù)分鐘后病人可能出現(xiàn)藥物性皮疹，呼吸急促，支氣管痙攣，低血壓等過敏反應(yīng)。 2.制劑使用過程過于繁瑣，不方便。由于含有聚氧乙基蓖麻油的紫杉醇制劑可能帶來的過敏反應(yīng)，在使用這類制劑之前，必須先服用抗過敏藥物或注射抗過敏藥物，使使用過程變得繁瑣。并且這類制劑在臨床使用過程中被稀釋后放置24小時，就會析出顆粒性沉淀物，必須過濾除去顆粒性沉淀物，否則會給臨床帶來很大的危險。 3.紫杉醇利用效率低，毒性大，使用費用高。由于這類紫杉醇制劑缺乏靶向性，從而容易造成藥物全身分布引起全身毒性，而腫瘤組織處的藥物濃度低于殺傷濃度。臨床上只能通過加大用藥劑量來達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞的目的，這樣既增加了病人治療所需的治療費用同時增加了病人由于紫杉醇毒性而引起的痛苦。 4.傳統(tǒng)的制劑在體內(nèi)循環(huán)時間短。傳統(tǒng)的紫杉醇制劑進(jìn)入人體后容易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)的吞噬細(xì)胞捕獲，將其從血液循環(huán)系統(tǒng)中清除，從而減少了達(dá)到腫瘤組織部位的藥量。 5.傳統(tǒng)的制劑不具有緩釋功能，無法長時間維持有效的藥物濃度。傳統(tǒng)的紫杉醇制劑沒有藥物載體的保護(hù)和阻隔，直接通過靜脈注射進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，很快被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)清除，在血液中停留時間短，不利于腫瘤組織及病理部位的吸收。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于目前紫杉醇制劑存在的缺陷，為了更好的使紫杉醇更好的發(fā)揮臨床治療效果，本發(fā)明提供了一種紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體及其制備方法。本發(fā)明利用殼聚糖衍生物作為輔料通過反相蒸發(fā)法或薄膜分散法制備了這種新型的紫杉醇制劑，制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體粒徑小于100nm，可以在血液中自由運行，具有穿過靶組織內(nèi)皮細(xì)胞的能力，可以被腫瘤細(xì)胞攝取進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，將所包含的紫杉醇在細(xì)胞內(nèi)釋放，大大提高藥物的利用效率。制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體表面富含有葉酸，由于在多種腫瘤細(xì)胞(如卵巢癌、結(jié)腸直腸癌、肺癌、腎細(xì)胞癌等)膜表面葉酸受體的活性和數(shù)量明顯高于一般正常細(xì)胞的特點，利用葉酸與其受體的特異性結(jié)合的特點，可增加藥物在病灶局部的濃度，提高療效，降低毒副作用，達(dá)到靶向治療的目的。同時制備的紫杉醇納米靶
向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體表面還包覆著一層聚乙二醇(PEG), PEG能夠延長脂質(zhì)體在血液中的
駐留時間，被肝脾網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)攝取量減小，有利于腫瘤組織及病變部位的吸收。 本發(fā)明的一種紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體，是由葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修
飾的殼聚糖衍生物的結(jié)構(gòu)
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本發(fā)明的一種紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的制備方法，采用薄膜法 (1)采用薄膜分散法制備紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的過程如下稱取
5-50mg的葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物、5-20mg膽固醇和5-20mg紫杉醇，加 入到茄形瓶中，溶于5ml的二氯甲烷中； (2)于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入氮氣流加以保護(hù)；
(3)當(dāng)茄形瓶中形成一層透明均勻的脂質(zhì)膜后，繼續(xù)旋蒸至二氯甲烷揮發(fā)干凈；
(4)旋蒸完成之后將茄形瓶取下，再放到真空烘箱中充分干燥；
(5)充分干燥后，向茄形瓶中加入5ml去離子水或已經(jīng)制備好的紫杉醇納米靶向 緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體，將脂質(zhì)膜水化，然后用超聲波清洗器進(jìn)行超聲分散，直至形成半透明乳 液，即得到紫杉醇納米耙向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體； (6)重復(fù)步驟(1)-(5)0-4次，得到最終的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體溶 液。 本發(fā)明的一種紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的制備方法，采用反相蒸發(fā)法
(1)采用反相蒸發(fā)法制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體過程如下精確稱 取5-50mg的葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物、5-20mg膽固醇和5-20mg紫杉醇， 加入到茄形瓶中，溶于2ml的二氯甲烷中； (2)向茄形瓶中加入5ml的去離子水或已經(jīng)制備好的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán) 脂質(zhì)體，然后用探頭式超聲波發(fā)生器進(jìn)行超聲分散，直至形成半透明乳液；
(3)將上述乳液在35t:下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以50r/min的旋轉(zhuǎn)速度進(jìn)行旋蒸，同時 向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入適當(dāng)流速的氮氣流加以保護(hù)；
(4)當(dāng)茄形瓶中的有機(jī)溶劑完全揮發(fā)后，即得到紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體； (5)重復(fù)步驟(1)-(4)0-4次，得到最終的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體溶液。 其中原料可以采用如下方法制備
雙親性殼聚糖衍生物的制備方法 本發(fā)明所述的殼聚糖衍生物制備可按照常津等提供的專利方法(申請(專利)號200710056993.4)進(jìn)行制備。將十八烷基二甲基叔胺12g置四口瓶中，加入60ml溶劑，劇烈攪拌，升溫至55攝氏度，緩慢滴加環(huán)氧氯丙烷5. 5g，保溫回流數(shù)小時，減壓蒸餾除去未反應(yīng)的環(huán)氧氯丙烷及溶劑，得淺黃色膏狀物二甲基環(huán)氧丙基十八烷基氯化銨。取水溶性羧甲基殼聚糖(粘均分子量10萬，脫乙酰度80%)3.08溶于濃度為42% (w/v)的氫氧化鈉溶液100mL中，攪拌均勻后，加入異丙醇50mL，緩慢分批加入二甲基環(huán)氧丙基十八烷基氯化銨0. lmol，控制溫度在80攝氏度-85攝氏度，攪拌48h。鹽酸調(diào)pH = 7，無水丙酮洗滌，真空烘干得雙親性羧甲基殼聚糖十八烷基氯化銨。 乙二醇修飾的殼聚糖衍生物的制備方法中，各組分的質(zhì)量為
雙親性羧甲基殼聚糖十八烷基氯化銨0. 3-0. 5g
單羧基化聚乙二醇質(zhì)量0. 2-0. 6g 偶聯(lián)劑乙基_(3- 二甲基丙基)碳化二亞胺鹽酸(EDC) :1-1. 5g 制備步驟為稱取制備的雙親性羧甲基殼聚糖十八烷基氯化銨質(zhì)量0. 3-0. 5g溶
于10mL水中；稱取單羧基化聚乙二醇質(zhì)量0. 2-0. 6g溶于10mL水中；兩者混合均勻后加入
偶聯(lián)劑乙基_ (3- 二甲基丙基)碳化二亞胺鹽酸(EDC) 1-1. 5g，室溫下攪拌反應(yīng)24h ;反應(yīng)結(jié)
束后，用12000-14000的透析袋透析一周，最后過濾，凍干，得到產(chǎn)品。 葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物的制備方法中，各組分的質(zhì)量為 乙二醇修飾的殼聚糖衍生物0. 3-0. 5g 葉酸0. 2-0. 6g 偶聯(lián)劑N-羥基磺基琥珀酰亞胺(NHS) : 1-1. 5g 制備步驟為將O. 2-0.6g葉酸溶于50ml二甲基亞砜溶液中，向其加入1.5ml三乙胺，將l-1.5g偶聯(lián)劑N-羥基磺基琥珀酰亞胺(NHS)用一定量的二甲基亞砜溶解后加入到上述反應(yīng)體系中避光反應(yīng)12h以上。將產(chǎn)物過濾，得到黃色固體活化葉酸。取活化葉酸溶于25ml 二甲基亞砜中，加入0. 3-0. 5g的乙二醇修飾的殼聚糖衍生物。用磷酸氫二鈉與氫氧化鈉緩沖溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pH二 10，反應(yīng)lh。將最后產(chǎn)物透析24h，凍干即得葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物。 本發(fā)明的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體，其組裝次數(shù)可以為0-4次。 通過調(diào)節(jié)以上各種條件使制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體具有不同的
粒徑，載藥率，緩釋時間等性能。 整個制備過程簡單快捷，制備周期為1天，產(chǎn)率高。所制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的性能包括粒徑大小在50到150納米之間，粒徑均勻；穩(wěn)定好，可在水溶液中保存至少2個月；包封率高，載藥能力強，制備的紫杉醇制劑對藥物的包封率大于95%，載藥率載高達(dá)8-10%;緩釋性能明顯，緩釋時間可調(diào)，制備的紫杉醇制劑相對于對照組具有
5明顯的緩釋效果，并且緩釋時間可以根據(jù)制劑的組成成分，制備方法等進(jìn)行調(diào)節(jié)。 總之，與現(xiàn)有的紫杉醇制劑相比，本發(fā)明涉及的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)
體具有粒徑均勻可控，制劑穩(wěn)定性好，制備工藝簡單，載藥率高具有緩釋功能等特點，適合
大批量生產(chǎn)。


圖1 :按照實施例4制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的投射電鏡照片；
圖2 :按照實施例4制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的粒徑分析。
具體實施例方式
下面的實施例中將對本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述，但本發(fā)明不限于此。
實施例1 : 葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物的合成。稱取制備的雙親性羧甲基殼 聚糖十八烷基氯化銨質(zhì)量O. 3g溶于10mL水中；稱取單羧基化聚乙二醇質(zhì)量O. 6g溶于10mL 水中；兩者混合均勻后加入偶聯(lián)劑乙基-(3-二甲基丙基)碳化二亞胺鹽酸(EDC)1.4g，室 溫下攪拌反應(yīng)24h;反應(yīng)結(jié)束后，用12000-14000的透析袋透析一周，最后過濾，凍干，得到 乙二醇修飾的殼聚糖衍生物。將0. 6g葉酸溶于50ml 二甲基亞砜溶液中，向其加入1. 5ml 三乙胺，將1.5g偶聯(lián)劑N-羥基磺基琥珀酰亞胺(NHS)用一定量的二甲基亞砜溶解后加入 到上述反應(yīng)體系中避光反應(yīng)12h以上。將產(chǎn)物過濾，得到黃色固體活化葉酸。取活化葉酸 溶于25ml 二甲基亞砜中，加入0. 3g的乙二醇修飾的殼聚糖衍生物。用磷酸氫二鈉與氫氧 化鈉緩沖溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pH = 10，反應(yīng)lh。將最后產(chǎn)物透析24h，凍干即得葉酸受體 介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物。
實施例2 : 葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物的合成。稱取制備的雙親性羧甲基殼 聚糖十八烷基氯化銨質(zhì)量O. 4g溶于10mL水中；稱取單羧基化聚乙二醇質(zhì)量O. 2-0. 6g溶于 10mL水中；兩者混合均勻后加入偶聯(lián)劑乙基-(3-二甲基丙基)碳化二亞胺鹽酸(EDC)lg， 室溫下攪拌反應(yīng)24h ;反應(yīng)結(jié)束后，用12000-14000的透析袋透析一周，最后過濾，凍干，得 到乙二醇修飾的殼聚糖衍生物。將O. 2g葉酸溶于50ml 二甲基亞砜溶液中，向其加入1. 5ml 三乙胺，將lg偶聯(lián)劑N-羥基磺基琥珀酰亞胺(NHS)用一定量的二甲基亞砜溶解后加入到 上述反應(yīng)體系中避光反應(yīng)12h以上。將產(chǎn)物過濾，得到黃色固體活化葉酸。取活化葉酸溶 于25ml 二甲基亞砜中，加入0. 4g的乙二醇修飾的殼聚糖衍生物。用磷酸氫二鈉與氫氧化 鈉緩沖溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pH = 10，反應(yīng)lh。將最后產(chǎn)物透析24h，凍干即得葉酸受體介 導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物。
實施例3 : 葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物的合成。稱取制備的雙親性羧甲基 殼聚糖十八烷基氯化銨質(zhì)量0. 5g溶于10mL水中；稱取單羧基化聚乙二醇質(zhì)量0. 2-0. 6g 溶于10mL水中；兩者混合均勻后加入偶聯(lián)劑乙基-(3-二甲基丙基)碳化二亞胺鹽酸 (EDC)1.5g，室溫下攪拌反應(yīng)24h;反應(yīng)結(jié)束后，用12000-14000的透析袋透析一周，最后過 濾，凍干，得到乙二醇修飾的殼聚糖衍生物。將0. 4g葉酸溶于50ml 二甲基亞砜溶液中，向其加入1.5ml三乙胺，將1.4g偶聯(lián)劑N-羥基磺基琥珀酰亞胺(NHS)用一定量的二甲基亞 砜溶解后加入到上述反應(yīng)體系中避光反應(yīng)12h以上。將產(chǎn)物過濾，得到黃色固體活化葉酸。 取活化葉酸溶于25ml 二甲基亞砜中，加入0. 5g的乙二醇修飾的殼聚糖衍生物。用磷酸氫 二鈉與氫氧化鈉緩沖溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pH二 10，反應(yīng)lh。將最后產(chǎn)物透析24h，凍干即
得葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物。
實施例4 : 薄膜法。(1)采用薄膜分散法制備CPL的過程如下精確稱取20mg的葉酸受體介 導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物、20mg膽固醇和15mg紫杉醇，加入到茄形瓶中，溶于5ml的 二氯甲烷中。(2)于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入適當(dāng)流速的氮氣流 加以保護(hù)。(3)當(dāng)茄形瓶中形成一層透明均勻的脂質(zhì)膜后，繼續(xù)旋蒸至二氯甲烷揮發(fā)干凈。
(4) 旋蒸完成之后將茄形瓶取下，再放到真空烘箱中充分干燥。(5)充分干燥后，向茄形瓶 中加入5ml去離子水(重復(fù)組裝時將5ml去離子水換成制備好的5ml紫杉醇納米靶向緩釋 長循環(huán)脂質(zhì)體溶液)，將脂質(zhì)膜水化，然后用超聲波清洗器進(jìn)行超聲分散，直至形成半透明 乳液，即得到紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體(6)重復(fù)步驟(1)-(5)1次，得到最終的紫 杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體溶液。所制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的性能 包括制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體粒徑為80nm，載藥率為7. 9%，體外緩釋時 間達(dá)到8天。實施例5: 薄膜法。(1)采用薄膜分散法制備紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的過程如下 精確稱取50mg的葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物、15mg膽固醇和5mg紫杉醇， 加入到茄形瓶中，溶于5ml的二氯甲烷中。(2)于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀中通入適當(dāng)流速的氮氣流加以保護(hù)。(3)當(dāng)茄形瓶中形成一層透明均勻的脂質(zhì)膜后，繼續(xù) 旋蒸至二氯甲烷揮發(fā)干凈。(4)旋蒸完成之后將茄形瓶取下，再放到真空烘箱中充分干燥。
(5) 充分干燥后，向茄形瓶中加入5ml去離子水(重復(fù)組裝時將5ml去離子水換成制備好 的5ml紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體溶液)，將脂質(zhì)膜水化，然后用超聲波清洗器進(jìn)行 超聲分散，直至形成半透明乳液，即得到紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體(6)重復(fù)步驟 (1)_(5)0次，得到最終的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體溶液。所制備的紫杉醇納米靶 向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的性能包括制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體粒徑為54nm， 載藥率為9. 7%，體外緩釋時間達(dá)到7天。制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的投射 照片如圖1，粒徑分布如圖2。 實施例6 : 薄膜法。(1)采用薄膜分散法制備紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的過程如下 精確稱取5mg的葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物、5mg膽固醇和20mg紫杉醇，加 入到茄形瓶中，溶于5ml的二氯甲烷中。(2)于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 中通入適當(dāng)流速的氮氣流加以保護(hù)。(3)當(dāng)茄形瓶中形成一層透明均勻的脂質(zhì)膜后，繼續(xù) 旋蒸至二氯甲烷揮發(fā)干凈。(4)旋蒸完成之后將茄形瓶取下，再放到真空烘箱中充分干燥。 (5)充分干燥后，向茄形瓶中加入5ml去離子水(重復(fù)組裝時將5ml去離子水換成制備好 的5ml紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體溶液)，將脂質(zhì)膜水化，然后用超聲波清洗器進(jìn)行 超聲分散，直至形成半透明乳液，即得到紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體(6)重復(fù)步驟 (1)-(5)0次，得到最終的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體溶液。所制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的性能包括制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體粒徑為54nm， 載藥率為9. 7%，體外緩釋時間達(dá)到7天。制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的投射 照片如圖1，粒徑分布如圖2。
實施例7 : 反相蒸發(fā)法。(1)采用反相蒸發(fā)法制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體過程 如下精確稱取5mg的葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物、10mg膽固醇和10mg紫 杉醇，加入到茄形瓶中，溶于2ml的二氯甲烷中。(2)向茄形瓶中加入5ml的去離子水(重 復(fù)組裝時將5ml去離子水換成制備好的5ml紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體溶液)，然后 用探頭式超聲波發(fā)生器對其進(jìn)行超聲分散，直至形成半透明乳液。(3)將上述乳液于旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)儀上進(jìn)行旋蒸，，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入適當(dāng)流速的氮氣流加以保護(hù)。(4)當(dāng)茄形瓶中 的有機(jī)溶劑完全揮發(fā)后即得到紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體。(5)重復(fù)步驟(1)_(4)4 次，得到最終的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體溶液。如圖2所示，制備的紫杉醇納米靶 向緩釋常循環(huán)脂質(zhì)體的粒徑分析，有效粒徑為55. 7nm ;多分散指數(shù)為0. 195。所制備的紫杉 醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的性能包括制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體粒徑 為150nm，載藥率為8. 5%，體外緩釋時間達(dá)到15天。
實施例8 : 反相蒸發(fā)法。(1)采用反相蒸發(fā)法制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體過程 如下精確稱取35mg的葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物、5mg膽固醇和20mg紫 杉醇，加入到茄形瓶中，溶于2ml的二氯甲烷中。(2)向茄形瓶中加入5ml的去離子水(重 復(fù)組裝時將5ml去離子水換成制備好的5ml紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體溶液)，然后 用探頭式超聲波發(fā)生器進(jìn)行超聲分散，直至形成半透明乳液。(3)將上述乳液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀上進(jìn)行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入適當(dāng)流速的氮氣流加以保護(hù)。(4)當(dāng)茄形瓶中的 有機(jī)溶劑完全揮發(fā)后，即得到紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體。(5)重復(fù)步驟(1)_(4)2 次，得到最終的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體溶液。所制備的紫杉醇納米靶向緩釋長 循環(huán)脂質(zhì)體的性能包括制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體粒徑為104nm，載藥率 為8. 7%，體外緩釋時間達(dá)到14天。
實施例9 : 反相蒸發(fā)法。(1)采用反相蒸發(fā)法制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體過程 如下精確稱取50mg的葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物、20mg膽固醇和5mg紫 杉醇，加入到茄形瓶中，溶于2ml的二氯甲烷中。(2)向茄形瓶中加入5ml的去離子水(重 復(fù)組裝時將5ml去離子水換成制備好的5ml紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體溶液)，然后 用探頭式超聲波發(fā)生器進(jìn)行超聲分散，直至形成半透明乳液。(3)將上述乳液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀上進(jìn)行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入適當(dāng)流速的氮氣流加以保護(hù)。(4)當(dāng)茄形瓶中的 有機(jī)溶劑完全揮發(fā)后，即得到紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體。(5)重復(fù)步驟(1)_(4)2 次，得到最終的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體溶液。所制備的紫杉醇納米靶向緩釋長 循環(huán)脂質(zhì)體的性能包括制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體粒徑為104nm，載藥率 為8. 7%，體外緩釋時間達(dá)到14天。
權(quán)利要求
一種紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體，其特征是由葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物的結(jié)構(gòu)FDA0000020209810000011.tif
2. —種紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的制備方法，其特征是(1) 采用薄膜分散法制備紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的過程如下稱取5-50mg 的葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物、5-20mg膽固醇和5-20mg紫杉醇，加入到茄 形瓶中，溶于5ml的二氯甲烷中；(2) 于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入氮氣流加以保護(hù)；(3) 當(dāng)茄形瓶中形成一層透明均勻的脂質(zhì)膜后，繼續(xù)旋蒸至二氯甲烷揮發(fā)干凈；(4) 旋蒸完成之后將茄形瓶取下，再放到真空烘箱中充分干燥；(5) 充分干燥后，向茄形瓶中加入5ml去離子水或已經(jīng)制備好的紫杉醇納米靶向緩釋 長循環(huán)脂質(zhì)體，將脂質(zhì)膜水化，然后用超聲波清洗器進(jìn)行超聲分散，直至形成半透明乳液， 即得到紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體；(6) 重復(fù)步驟(1)-(5)0-4次，得到最終的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體溶液。
3. —種紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體的制備方法，其特征是(1) 采用反相蒸發(fā)法制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體過程如下稱取5-50mg 的葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物、5-20mg膽固醇和5-20mg紫杉醇，加入到茄 形瓶中，溶于2ml的二氯甲烷中；(2) 向茄形瓶中加入5ml的去離子水或已經(jīng)制備好的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì) 體，然后用探頭式超聲波發(fā)生器進(jìn)行超聲分散，直至形成半透明乳液；(3) 將上述乳液在35t:下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以50r/min的旋轉(zhuǎn)速度進(jìn)行旋蒸，同時向旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入適當(dāng)流速的氮氣流加以保護(hù)；(4) 當(dāng)茄形瓶中的有機(jī)溶劑完全揮發(fā)后，即得到紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體；(5) 重復(fù)步驟(1)-(4)0-4次，得到最終的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體及其制備方法。本發(fā)明的一種紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體，是由葉酸受體介導(dǎo)聚乙二醇修飾的殼聚糖衍生物的結(jié)構(gòu)；本發(fā)明利用殼聚糖衍生物作為輔料通過反相蒸發(fā)法或薄膜分散法制備了這種新型的紫杉醇制劑，制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體粒徑小于100nm，可以在血液中自由運行，具有穿過靶組織內(nèi)皮細(xì)胞的能力，可以被腫瘤細(xì)胞攝取進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，將所包含的紫杉醇在細(xì)胞內(nèi)釋放，大大提高藥物的利用效率。同時制備的紫杉醇納米靶向緩釋長循環(huán)脂質(zhì)體表面還包覆著一層聚乙二醇(PEG)，PEG能夠延長脂質(zhì)體在血液中的駐留時間，被肝脾網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)攝取量減小，有利于腫瘤組織及病變部位的吸收。
文檔編號A61K47/22GK101780042SQ20101013299
公開日2010年7月21日 申請日期2010年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月26日
發(fā)明者常津, 康世胤, 王漢杰, 胡秀鳳, 蘇文雅 申請人:天津大學(xué)