專利名稱：一種從鉤吻提取物中制備蔓藤堿甲的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種胡蔓藤堿甲(humantenmine)的制備方法，特別是涉及一種從鉤吻提取物中分離制備胡蔓藤堿甲的方法。
背景技術(shù)：
鉤吻(Gelsemium elegans Benth.)為馬錢科胡蔓藤屬植物，分中國鉤吻和北美鉤吻兩種。我國盛產(chǎn)于福建、浙江、廣西、廣東、湖南等地，又名斷腸草。其藥用部位為全草。具有祛風(fēng)攻毒，消腫止痛的功效。鉤吻堿類化合物是存在于鉤吻中的一類化合物，被證明在腫瘤、鎮(zhèn)痛等方面有較好的活性。臨床上用于抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、治療神經(jīng)痛、局部用于擴(kuò)瞳等作用，可以被認(rèn)為是鉤吻藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。胡蔓藤堿甲(humantenmine)是自鉤吻中分離得到的一種鉤吻堿類化合物，其含量較高，具有一定的開發(fā)新藥的潛力。其藥理作用主要包括其能抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，鎮(zhèn)痛、 鎮(zhèn)靜等作用。目前，未見到胡蔓藤堿甲的制備工藝的相關(guān)報(bào)道，因此，胡蔓藤堿甲分離手段的不足是限制其醫(yī)藥用途的一個(gè)主要原因。
O-
I
^^ N \〇
I
〇\式1

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種從鉤吻提取物中制備胡蔓藤堿甲的方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中制備手段繁瑣，產(chǎn)率極低的技術(shù)問題。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的從鉤吻提取物中制備胡蔓藤堿甲的方法，包括步驟(1)乙酸乙酯萃取步驟將鉤吻提取物的水溶液用體積比為0.5 1 2 1的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑，得萃取純化的浸膏A ；(2)硅膠色譜純化步驟將步驟(1)所得浸膏A用100-200目或200-300目柱層析硅膠柱色譜分離，并以體積比為50 1 25 1的氯仿-甲醇溶液進(jìn)行洗脫，將洗脫液作TLC檢識(shí)，合并含有胡蔓藤堿甲的流份，減壓回收溶劑，得浸膏B。將浸膏B再用薄層層析硅膠柱色譜分離，并以體積比為100 1 50 1的氯仿-甲醇溶液梯度洗脫，收集洗脫液，并作TLC檢識(shí)，合并含有胡蔓藤堿甲的流份，回收溶劑，即得浸膏C。(3)反相C 18色譜純化步驟將步驟⑵所得的浸膏C用反相硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與C18反相硅膠重量比為1 30 1 50)，體積比為55% 65%的甲醇-水溶液洗脫，洗脫液作TLC檢識(shí)，合并含有胡蔓藤堿甲的流份，減壓回收溶劑，得純化的胡蔓藤堿甲。其中，所述硅膠色譜純化步驟與反相色譜純化步驟的順序能夠顛倒。所述步驟(1)中鉤吻提取物中所用的提取溶劑為體積濃度為70% 95%的乙醇溶液。采用本發(fā)明的方法依次經(jīng)(1)乙酸乙酯萃取，(2)硅膠色譜純化，(3)反相色譜純化，能極大地提高得率，因此，該方法是一種制備胡蔓藤堿甲的簡(jiǎn)化工藝，可用于胡蔓藤堿甲的工業(yè)制備。


圖1是胡蔓藤堿甲的1H-NMR譜。 圖2是胡蔓藤堿甲的13C-NMR譜。 圖3是胡蔓藤堿甲的DEPT譜。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。實(shí)施例1胡蔓藤堿甲的制備鉤吻藥材1kg，去除雜質(zhì)后粉碎成粗粉，體積濃度為70%乙醇5L回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，回收溶劑得提取液約1L。將提取液用2L乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑得浸膏A約 40g。將浸膏A用硅膠柱色譜分離(硅膠為100-200目或200-300目柱層析硅膠，浸膏樣品與硅膠重量比為1 30，硅膠柱規(guī)格Φ100*1000πιπι)，并以體積比為50 1的氯仿-甲醇溶液進(jìn)行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點(diǎn)樣，以體積比為10 1的氯仿-甲醇溶液展開后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有胡蔓藤堿甲的部分，減壓回收溶劑，得浸膏B 約12g。將浸膏B再用薄層硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與硅膠重量比為1 100，硅膠柱規(guī)格Φ100*1000πιπι)，并以體積比為100 1的氯仿-甲醇溶液洗脫，將洗脫液薄層硅膠板 (GF254)點(diǎn)樣，以體積比為100 1的氯仿-甲醇溶液展開后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有胡蔓藤堿甲的部分，減壓回收溶劑，即得浸膏C約3g。將浸膏C反相C18硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與C18硅膠重量比為1 50，硅膠柱規(guī)格Φ60*600πιπι)，體積比為55%的甲醇-水溶液洗脫，洗脫液作TLC檢識(shí)，合并含有胡蔓藤堿甲的流份，減壓回收溶劑，即得純化的胡蔓藤堿甲0. 12g。最終所得胡蔓藤堿甲經(jīng)常規(guī)公知的NMR方法鑒定J. Nat. Prod.，1989，52 (3) 588-594.，并經(jīng)高效液相檢測(cè)[Kromasil-C18柱(4. 6mm*250mm)，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，流動(dòng)相為體積比50 50的水-甲醇溶液，流速ImL · mirT1，進(jìn)樣量10 μ 1，柱溫25°C，理論塔板數(shù)以胡蔓藤堿甲計(jì)不低于5000含量在97%以上，其得率為0. 012%實(shí)施例2胡蔓藤堿甲的制備
鉤吻藥材1kg，去除雜質(zhì)后粉碎成粗粉，體積濃度為95%乙醇5L回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，回收溶劑得提取液約2L。將提取液用IL乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑得浸膏A約 35g。將浸膏A用硅膠柱色譜分離(硅膠為100-200目或200-300目柱層析硅膠，浸膏樣品與硅膠重量比為1 50，硅膠柱規(guī)格Φ100*1000πιπι)，以體積比為25 1的氯仿-甲醇溶液進(jìn)行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點(diǎn)樣，以體積比為10 1的氯仿-甲醇溶液展開后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有胡蔓藤堿甲的部分，減壓回收溶劑，得浸膏B 約Sg。將浸膏B再用薄層硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與硅膠重量比為1 50，硅膠柱規(guī)格 Φ100*1000πιπι)，并以體積比為50 1的氯仿-甲醇溶液進(jìn)行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板 (GF254)點(diǎn)樣，以體積比為10 1的氯仿-甲醇溶液展開后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有胡蔓藤堿甲的部分，減壓回收溶劑，即得浸膏C約2. 5g。將浸膏C用反相C18硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與C18硅膠重量比為1 50，硅膠柱規(guī)格Φ60*600mm)，體積比為60%的甲醇-水溶液洗脫，洗脫液作TLC檢識(shí)，合并含有胡蔓藤堿甲的流份，減壓回收溶劑，即得純化的胡蔓藤堿甲0. 13g。最終所得胡蔓藤堿甲經(jīng)常規(guī)公知的NMR方法鑒定J. Nat. Prod.，1989，52 (3) 588-594.，并經(jīng)高效液相檢測(cè)[Kromasil-C18柱(4. 6mm*250mm)，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，流動(dòng)相為體積比50 50的水-甲醇溶液，流速ImL · mirT1，進(jìn)樣量10 μ 1，柱溫25°C，理論塔板數(shù)以胡蔓藤堿甲計(jì)不低于5000含量在98%以上，其得率為0. 013%實(shí)施例3胡蔓藤堿甲的制備鉤吻藥材1kg，去除雜質(zhì)后粉碎成粗粉，體積濃度為80%乙醇5L回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，回收溶劑得提取液約1L。將提取液用0. 5L乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑得浸膏A約 35g。將浸膏A用反相C18硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與C18硅膠重量比為1 30，硅膠柱規(guī)格Φ 100*1000mm)，體積比為65 %的甲醇-水溶液洗脫，洗脫液作TLC檢識(shí)，合并含有胡蔓藤堿甲的流份，減壓回收溶劑，得浸膏B約4g。浸膏B用薄層硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與硅膠重量比為1 70，硅膠柱規(guī)格 Φ60*600πιπι)，并以體積比為75 1的氯仿-甲醇溶液進(jìn)行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板 (GF254)點(diǎn)樣，以體積比為10 1的氯仿-甲醇溶液展開后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有胡蔓藤 堿甲的部分，減壓回收溶劑，即得純化的胡蔓藤堿甲0. 26g。最終所得胡蔓藤堿甲經(jīng)常規(guī)公知的NMR方法鑒定J. Nat. Prod.，1989，52 (3) 588-594.，并經(jīng)高效液相檢測(cè)[Kromasil-C18柱(4. 6mm*250mm)，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，流動(dòng)相為體積比50 50的水-甲醇溶液，流速ImL · mirT1，進(jìn)樣量10 μ 1，柱溫25°C，理論塔板數(shù)以胡蔓藤堿甲計(jì)不低于5000含量在98%以上，其得率為0. 026%。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法用于制備胡蔓藤堿甲，工藝簡(jiǎn)單，得率在萬分之一以上，因此，本發(fā)明可用于胡蔓藤堿甲的工業(yè)制備。
權(quán)利要求
1.從鉤吻提取物中制備胡蔓藤堿甲的方法，其特征在于包括步驟(1)乙酸乙酯萃取步驟將鉤吻提取物的水溶液用體積比為0.5 1 2 1的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑，得萃取純化的浸膏A ；(2)硅膠色譜純化步驟將步驟(1)所得浸膏A用100-200目或200-300目柱層析硅膠柱色譜分離，并以體積比為50 1 25 1的氯仿-甲醇溶液進(jìn)行洗脫，將洗脫液作TLC檢識(shí)，合并含有胡蔓藤堿甲的流份，減壓回收溶劑，得浸膏B。將浸膏B再用薄層層析硅膠柱色譜分離，并以氯仿_甲醇100 1 50 1梯度洗脫，收集洗脫液，并作TLC檢識(shí)，合并含有胡蔓藤堿甲的流份， 回收溶劑，即得浸膏C。(3)反相C18色譜純化步驟將步驟⑵所得的浸膏C反相硅膠柱色譜分離，體積比為55% 65%的甲醇-水溶液洗脫，洗脫液作TLC檢識(shí)，合并含有胡蔓藤堿甲的流份，減壓回收溶劑，即得純化的胡蔓藤堿甲。其中，所述硅膠色譜純化步驟與反相色譜純化步驟的順序能夠顛倒。
2.如權(quán)利要求1所述的從鉤吻提取物中制備胡蔓藤堿甲的方法，其特征在于所述步驟(1)中鉤吻提取物中所用的提取溶劑為體積濃度為70% 95%的乙醇溶液；鉤吻提取物的水溶液濃度相當(dāng)于生藥0. 5g · πιΓ1 1. Og · Iiir10
3.如權(quán)利要求1所述的從鉤吻提取物中制備胡蔓藤堿甲的方法，其特征在于所述乙酸乙酯萃取中，鉤吻提取物的水溶液與乙酸乙酯溶液的體積比為0.5 1 2 1。
4.如權(quán)利要求1所述的從鉤吻提取物中制備胡蔓藤堿甲的方法，其特征在于所述硅膠色譜純化步驟中，硅膠為100-200目或200-300目柱層析硅膠或薄層層析硅膠，浸膏樣品與硅膠重量比為1 30 1 100。
5.如權(quán)利要求1所述的從鉤吻提取物中制備胡蔓藤堿甲的方法，其特征在于所述反相色譜純化步驟中，浸膏樣品與C18反相硅膠重量比為1 30 1 50。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從鉤吻提取物中制備胡蔓藤堿甲的方法，包括步驟(1)乙酸乙酯萃??；(2)硅膠色譜純化；(3)反相色譜純化。本發(fā)明是一種制備胡蔓藤堿甲的簡(jiǎn)化工藝，能極大地提高胡蔓藤堿甲的得率，可用于胡蔓藤堿甲的工業(yè)制備。
文檔編號(hào)A61P29/00GK102199155SQ20101013391
公開日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2010年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月26日
發(fā)明者馮怡, 梁爽, 王源, 鄭向煒, 阮克鋒 申請(qǐng)人:上海張江中藥現(xiàn)代制劑技術(shù)工程研究中心