專利名稱：殼寡糖在制備防治心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及殼寡糖在制備防治心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用， 具體涉及殼寡糖在制備防治腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，隨著生活水平的提高和飲食方式的改變，作為人類“頭號(hào)殺手”的心腦血管疾病的發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢(shì)。每年數(shù)千萬(wàn)的患者死于心腦血管疾病，雖約有一半患者經(jīng)搶救而幸存，但留下殘疾，生活不能自理，承受著身體與心理雙重壓力。流行病學(xué)資料推測(cè)，到2020年，心腦血管疾病仍將是人類的首位死因。因此，殼寡糖在制備防治心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，為治療心腦血管疾病開辟新途徑具有積極的作用。殼寡糖(chitooligosaccharides，COS)，系指由甲殼素或殼聚糖經(jīng)水解后產(chǎn)生的一類聚合度低且可溶于水的氨基糖類化合物，可被機(jī)體吸收利用。殼寡糖不僅具有甲殼素和殼聚糖相似的性質(zhì)，而且一些生理活性或功能更為顯著，甚至顯示出甲殼素和殼聚糖所不具備的生理活性(魏新林，夏文水.甲殼低聚糖的生理活性研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2003，19(6) :614-7)。國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究表明，殼寡糖具有抗氧化、神經(jīng)保護(hù)、抗腫瘤等多種藥理作用(Sun R, Yao Q, Zhou D, et al. Antioxidant activity of N-carboxymethylchitosan oligosaccharides[J]. Bioorg Med Chem Lett,2008,18(21) 5774-6 ；KhodagholiF, Eftekharzadeh B, Maghsoudi N, et al. Chitosan prevents oxidative stress-inducedamyloid beta formation and cytotoxicity in NT2 neurons involvement of transcriptionfactors Nrf2 and NF-kappaB[J].Mol Cell Biochem, 2010,337(1-2) :39-51 ；Shen K Τ, ChenM H, Chan H Y, et al. Inhibitory effects of chitooligosaccharides on tumor growthand metastasis[J]. Food Chem Toxicol,2009, 47(8) :1864-71)。但尚未有關(guān)殼寡糖治療腦血管疾病的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了殼寡糖的新用途，即殼寡糖在制備防治心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用，特別是殼寡糖在制備防治腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，包括但不限于腦缺血、腦缺氧等腦血管疾病。本發(fā)明提供了一種包含殼寡糖及常規(guī)藥用載體的藥物組合物，其特征是所述藥物組合物是采用常規(guī)或特殊制劑工藝制備而成的口服或非口服途徑方式給藥的制劑。本發(fā)明提供了預(yù)防或治療心腦血管疾病的方法，包括向心腦血管病人給予殼寡糖或前面所述藥物組合物。本發(fā)明提供的殼寡糖可以長(zhǎng)期應(yīng)用，具有明顯的預(yù)防或改善心腦功能作用，來(lái)源廣泛，成本低，安全性高。
具體實(shí)施例方式
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心腦血管疾病系心血管病和腦血管病的統(tǒng)稱。心血管病包括但不限于高血壓、高血壓性心臟病、冠心病、心絞痛、心肌梗塞、心肌缺血、心率失常、肺心病及高脂血癥等；腦血管疾病包括但不限于腦血栓、腦栓塞、腦中風(fēng)及腦溢血等。本發(fā)明提供了殼寡糖在制備防治心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用，特別是殼寡糖在制備防治腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，包括但不限于腦缺血、腦缺氧等腦血管疾病。本發(fā)明所述的殼寡糖可以根據(jù)臨床需要，加入相應(yīng)藥用載體，以片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、懸浮液、溶液、糖漿、注射劑、霜?jiǎng)?、軟膏、凝膠劑、噴霧劑、口嚼劑或貼劑等制劑形式存在。本發(fā)明所述的殼寡糖可根據(jù)臨床需要，采用口服或非口服方式用藥，優(yōu)選口服給藥方式。本發(fā)明所述的殼寡糖制劑采用口服方式用藥時(shí)，人用劑量?jī)?yōu)選I-IOOOmg/人/日， 其中更優(yōu)選為10-500mg/人/日，最優(yōu)選為50-100mg/人/日。本發(fā)明所述的殼寡糖是由甲殼素或殼聚糖經(jīng)解聚后獲得，可采用任何已公開文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄌ崛≈苽?舒德海，錢俊青，吳薇.過氧化氫制備殼寡糖的工藝[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2009，35 (6) :121-125;蔡圣寶，邢榮娥，劉松，等.兩種方法制備殼寡糖平均分子質(zhì)量與氨基含量分析[J].海洋科學(xué)，2009，33 (5) :70-73)。采用各種不同方法制備的殼寡糖對(duì)本發(fā)明的用途沒有影響。以下結(jié)合實(shí)驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明，但本發(fā)明并不受限于該實(shí)施例。實(shí)施例1殼寡糖抗腦缺血再灌注作用1材料與方法1.1 材料1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性ICR小鼠，體重25 ^g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào) SCXK(京)2007-001。自然光照周期飼養(yǎng)，術(shù)前1 禁食，自由飲水。1. 1. 2藥品及試劑殼寡糖(純度彡90%，平均分子量1500，脫乙酰度彡90%)北京聯(lián)合大學(xué)生物化學(xué)工程學(xué)院；依達(dá)拉奉南京先聲東元制藥有限公司；紅四氮唑(2，3， 5-triphenyltetrazolium chloride, TTC)，北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司；丙二醛(MDA)、 羰基、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽-過氧化物酶(GSH-Px)、考馬斯亮蘭試劑盒，南京建成生物工程研究所；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。1. 1.3實(shí)驗(yàn)儀器水浴鍋北京市長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表公司；多功能酶標(biāo)儀=Sigma公司；TGL 16M離心機(jī) 湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司；渦旋混合器金壇市醫(yī)療器械廠。1. 2 方法1.2. 1動(dòng)物分組及給藥將小鼠隨機(jī)分為6組，即假手術(shù)組、模型組、依達(dá)拉奉(3mg · kg_S陽(yáng)性對(duì)照藥)組及殼寡糖高、中、低劑量(200、100、50mg · kg-1)組。藥物用前溶于蒸餾水，按照IOml · kg-1 體重灌胃給藥，每天1次，連續(xù)7d，末次給藥后Ih制備腦缺血/再灌注模型。1. 2. 2局灶性腦缺血/再灌注模型的制備
采用線栓法制備小鼠左側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞模型。用4%水合氯醛GOOmg · kg—1) 腹腔注射麻醉小鼠，仰臥固定，頸部皮膚去毛消毒后作正中切口，分離出左側(cè)頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈，結(jié)扎頸外動(dòng)脈，在頸總動(dòng)脈上開一小口，將一頭端用硅橡膠包裹的直徑為0. Ilmm的魚線沿頸總動(dòng)脈，經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈向顱內(nèi)插至大腦中動(dòng)脈分叉處，插入深度約12 13mm，結(jié)扎頸內(nèi)動(dòng)脈和頸總動(dòng)脈，固定魚線，縫合皮膚。缺血池后將魚線拉出至頸內(nèi)外動(dòng)脈分叉處，即實(shí)現(xiàn)再灌注。假手術(shù)組僅分離頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈，但不插入魚線。小鼠蘇醒后出現(xiàn)手術(shù)對(duì)側(cè)肢體運(yùn)動(dòng)障礙即為模型制備成功。1. 2. 3神經(jīng)功能缺陷評(píng)分參照Longa的五分制評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行神經(jīng)功能缺陷評(píng)分0分正常，無(wú)神經(jīng)損傷癥狀；1分不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪；2分提尾后向外側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分行走時(shí)向?qū)?cè)傾倒；4分 不能自發(fā)行走或意識(shí)喪失。1.2. 4腦梗死面積測(cè)定缺血池再灌2 后，迅速將小鼠斷頭，去除嗅球、小腦和低位腦干，取出完整前腦， 冠狀切成1.5mm厚的腦片，于0.5% TTC溶液中37°C水浴孵育15min。然后置于10%的中性甲醛溶液中固定。對(duì)每腦片正反兩面進(jìn)行掃描，用圖像分析軟件Wiotoshop 6.0求出梗死區(qū)和非梗死區(qū)面積。1. 2. 5生化指標(biāo)測(cè)定小鼠斷頭取腦，用濾紙吸干腦表面殘血，去除嗅腦、腦干、小腦。將大腦分別置于勻漿器中，用冰生理鹽水按質(zhì)量與體積比為1 9的比例冰浴下制備成10%的腦組織勻漿，立即放入-20°C冰箱中保存。按照南京建成生物工程研究所提供的試劑盒說(shuō)明書測(cè)定腦組織中MDA、羰基含量、SOD、CAT及GSH-Px活性。蛋白質(zhì)含量采用考馬斯亮蘭法測(cè)定。1.2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 13. 0 For Windows統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以I士 s表示，多組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，兩組間數(shù)據(jù)比較采用TTEST檢驗(yàn)。P < 0. 05表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果2. 1殼寡糖對(duì)腦缺血/再灌注小鼠神經(jīng)功能缺陷評(píng)分和腦梗死面積的影響從表1可以得知，腦缺血/再灌注后，模型組和給藥組小鼠顯現(xiàn)出明顯的神經(jīng)功能缺陷癥狀、腦組織梗死。殼寡糖呈劑量依賴性地降低神經(jīng)功能缺陷評(píng)分和腦梗死面積，尤其是殼寡糖高、中劑量OOOUOOmg · kg—1)組與模型組有顯著性差異。表1殼寡糖對(duì)腦缺血/再灌注小鼠神經(jīng)功能缺陷評(píng)分及腦梗死面積的影響G士 S， η = 9)
權(quán)利要求
1.殼寡糖在制備防治心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征是殼寡糖在制備防治腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征是殼寡糖在制備防治腦缺血疾病藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征是殼寡糖在制備防治腦缺氧疾病藥物中的應(yīng)用。
5.一種藥物組合物，其特征是所述藥物組合物包含殼寡糖及常規(guī)藥用載體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物是采用常規(guī)或特殊制劑工藝制備而成的口服或非口服途徑方式給藥的制劑。
7.一種預(yù)防或治療心腦血管疾病的方法，包括向心腦血管疾病患者給予殼寡糖。
8.一種預(yù)防或治療心腦血管疾病的方法，包括向心腦血管疾病患者給予權(quán)利要求5或 6所述的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及殼寡糖在制備防治心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，殼寡糖具有顯著的抗腦缺血、抗腦缺氧等作用，來(lái)源廣泛，機(jī)體易吸收，毒副作用小，具有良好的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61P9/00GK102210699SQ20101013945
公開日2011年10月12日 申請(qǐng)日期2010年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月6日
發(fā)明者劉婷, 姜招峰, 孫雅煊, 張靜, 戴雪伶, 王振華, 鄭秋生, 高兆蘭 申請(qǐng)人:北京聯(lián)合大學(xué)應(yīng)用文理學(xué)院