專利名稱：用于微生物細(xì)胞和微生物油的巴氏消毒方法
用于微生物細(xì)胞和微生物油的巴氏消毒方法本發(fā)明為基于發(fā)明專利申請(qǐng)03814382. 8提出的分案申請(qǐng)。 技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行巴氏消毒的方法，包括在不超過30分鐘之內(nèi) 將細(xì)胞從40°C加熱到70°C。該巴氏消毒過程中，加熱速率可以為至少0.5°C/分鐘。所述 巴氏消毒方法可以包含三個(gè)階段，即加熱階段、平臺(tái)(其間細(xì)胞被保持于恒定的溫度)以 及冷卻階段。如果用繪圖方式來描述該巴氏消毒方案，則其在時(shí)間(分鐘)對(duì)溫度(°C) 曲線圖下的面積小于13，000°C ·分鐘。巴氏消毒后，可以從細(xì)胞中提取出多不飽和脂肪酸 (polyunsaturated fatty acid, PUFA)，例如花生四烯酸，或者提取出微生物油。所述的油 可能具有低過氧化值(peroxide value,P0V)和/或低茴香胺值(anisidine value，AnV)。
背景技術(shù)：
多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid)，或PUFA，可以在自然界中發(fā) 現(xiàn)。各種各樣不同的PUFA由不同的單細(xì)胞生物(藻類、真菌等)產(chǎn)生。一種特別重要 的PUFA是花生四烯酸(arachidonic acid, ARA)，它是若干種長鏈多不飽和脂肪酸(Long Chain Polyunsaturated FattyAcid, LC-PUFA)之一?；瘜W(xué)上，花生四烯酸是順式 _5，8， 11，14-二十碳四烯酸(20:4)，屬于LC-PUFA的(n-6)族?；ㄉ南┧崾嵌喾N具有生物活性的化合物的主要前體，這些化合物合稱為類二十 烷酸(eicosanoid)，其中包含多種前列腺素(prostaglandin)、凝血噁烷(thromboxane)和 白細(xì)胞三烯(Ieukotriene)?；ㄉ南┧徇€是人類母乳脂類成分(lipid fraction)的組分 之一，并被認(rèn)為對(duì)嬰兒的理想神經(jīng)發(fā)育來說是必要的?；ㄉ南┧峋哂懈鞣N各樣的不同應(yīng) 用，包括用于嬰兒配方食品(infant formula)、食品和動(dòng)物飼料。W0-A-97/37032 (Gist-Brocades)中提到了由經(jīng)過巴氏消毒的生物物質(zhì) (biomass)來制備含有PUFA的微生物油。但是，其卻并未揭示迅速地加熱至巴氏消毒發(fā)生 的溫度或冷卻自巴氏消毒發(fā)生的溫度。此外，對(duì)巴氏消毒過程中所使用的能量總數(shù)也未有 說明。W0-A-00/15045和WO-A-01/67886中都提到了在食物制備中使用Mucorales真菌。 上述文獻(xiàn)中的第一篇提到，在將細(xì)胞加入到食品中之前需要進(jìn)行減少RNA的操作，并暗示 使用加熱的步驟。單獨(dú)的巴氏消毒或熱激都是可行的。第二篇文獻(xiàn)暗示，通過將真菌細(xì)胞 置于發(fā)酵容器內(nèi)，并使其得以“成熟(ripen) ”，可以避免用加熱步驟來減少RNA的含量。國際專利申請(qǐng)PCT/EP01/08902中提到了制備油類混合物的方法，該方法通過混 合一種粗制的含《6PUFA的油和一種粗制的含《3PUFA的油，制成油類混合物，然后再對(duì)該 粗制的油類混合物進(jìn)行提純。涉及加熱生物物質(zhì)或微生物細(xì)胞的方法是已知的。從W0-A-97/37032也可以獲 知，在被提取出以油的形式存在的PUFA之前，微生物細(xì)胞可以被進(jìn)行巴氏消毒。然而，本 申請(qǐng)人:已發(fā)現(xiàn)，一種新的巴氏消毒方法能夠提高從經(jīng)過巴氏消毒的細(xì)胞中提取到的油的質(zhì)量。具體而言，得到的油可能氧化更少或更少地被氧化，而且可能具有低過氧化值(POV)和 /或低茴香胺值(AnV)。此外，本申請(qǐng)人還發(fā)現(xiàn)，上述新的巴氏消毒方法更為高效，因?yàn)槠渲?需要更少的能量。故而該方法是有益的，因?yàn)槠洳粌H提高了油的質(zhì)量，而且因其需要的能量 更少從而可以降低成本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明就此提供了一種對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行的改良的巴氏消毒方法。除需要更少的 能量之外，本發(fā)明的巴氏消毒方法還能得到更高質(zhì)量的產(chǎn)品。因此，本發(fā)明的第一方面涉及一種對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行巴氏消毒的方法，該方法包 含在不超過30分鐘之內(nèi)，(于一種溫度，包含)從40°C至(60°C或)70°C加熱細(xì)胞；或以 至少0. 5°C /分鐘的速率加熱細(xì)胞。該方面因此提供了在巴氏消毒期間對(duì)微生物細(xì)胞的迅 速的加熱，這樣的高加熱速率在本領(lǐng)域還未有披露過。雖然本領(lǐng)域給出過巴氏消毒的溫度， 但卻沒有對(duì)下列內(nèi)容有過正面的評(píng)價(jià)或討論，包括加熱速率、或者該參數(shù)可能是重要的以 及相對(duì)迅速的速率能帶來益處。事實(shí)上，高加熱速率是與直覺相反的，因?yàn)樗鼈兛赡鼙徽J(rèn)為 會(huì)導(dǎo)致氧化，或者會(huì)降解從細(xì)胞中提取出來的PUFA或油。本發(fā)明的第二方面涉及一種對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行巴氏消毒的方法，該方法包含一種 包括(至少)三個(gè)階段的巴氏消毒方案。它們是一個(gè)(第一)加熱階段、一個(gè)(第二)平 臺(tái)階段(其間，微生物細(xì)胞被保持于期望溫度，或細(xì)胞被維持在恒定和/或最高的溫度上) 以及一個(gè)(第三)冷卻階段。本發(fā)明的此方面被稱為三階段巴氏消毒方案。如果將該方案 繪制于時(shí)間對(duì)溫度的曲線圖上，將能得到一個(gè)梯形。本發(fā)明的第三方面涉及一種對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行巴氏消毒的方法，該方法包含使 用一種巴氏消毒方案，使得在時(shí)間(分鐘)對(duì)溫度CC )曲線圖下的面積小于13，000°C·分 鐘。時(shí)間對(duì)溫度曲線圖下的面積給出了在巴氏消毒過程中加熱細(xì)胞所消耗的能量值?，F(xiàn)已 發(fā)現(xiàn)迅速加熱和/或迅速冷卻(分別對(duì)應(yīng)于第二方面中的第一和第三階段)能提供益處， 例如一種更高質(zhì)量的油。此外，較之本領(lǐng)域中描述過的巴氏消毒方法，上述的巴氏消毒方法 需要的能量也會(huì)減少。上述第三方面因此關(guān)系到所述巴氏消毒方法所需要的能量輸入。本發(fā)明的第四方面涉及一種對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行巴氏消毒的方法，該方法包含 (加熱細(xì)胞并且)將細(xì)胞在一個(gè)提高的溫度(τ，V )下維持一段時(shí)間(t，分鐘)，例如在 平臺(tái)階段；其中乘積tT(即時(shí)間和溫度參數(shù)相乘，例如在該平臺(tái)階段)為140°C 分鐘至 100,800°c 分鐘。如人們所認(rèn)識(shí)到的，該第四方面與第二方面相似，因?yàn)樗埠衅脚_(tái)階 段。此時(shí)細(xì)胞被保持于恒定的或是最高的溫度。乘積tT因此可以代表此平臺(tái)階段在時(shí)間 對(duì)溫度曲線圖下的面積。


圖1是三種巴氏消毒方案的溫度(°C)對(duì)時(shí)間(分鐘)的曲線圖(A和C屬于本發(fā) 明，B用作對(duì)照)；圖2是在三種不同溫度平臺(tái)(40°C、70°C和85°C )進(jìn)行的巴氏消毒的溫度(°C )對(duì)時(shí)間(分鐘)曲線圖；圖3和4是AnV(及圖3的P0V)對(duì)時(shí)間(小時(shí))的曲線圖。
圖5是具有兩種不同(持續(xù)/平臺(tái))時(shí)間(8秒和300秒)的巴氏消毒的P0V(meq/ kg)和AnV對(duì)溫度(V )的曲線圖；圖6和7是在五種不同溫度(60°c、80°c、10(rc、12(rc和140°C)下進(jìn)行的兩種不 同(持續(xù)/平臺(tái))時(shí)間(圖6為8秒，圖7為5分鐘)的溫度(°C)對(duì)時(shí)間(秒)的曲線 圖。
具體實(shí)施方式
第一方面——迅諫加熱在該方面，細(xì)胞被加熱，從而其溫度在不超過30分鐘(例如不超過15分鐘)內(nèi)經(jīng) 歷或是從40°C至70°C (或60°C )。從40°C至70°C所經(jīng)歷的時(shí)間優(yōu)選不超過40至50分 鐘?；蛘呋虼送?，上述細(xì)胞以至少0.5°C/分鐘的速率被加熱。當(dāng)然，微生物細(xì)胞可以始于 (或被加熱于)低于40°C的溫度。例如，這些細(xì)胞可以處于室溫或環(huán)境溫度。這些細(xì)胞可 以處于發(fā)酵溫度，例如30°C 士5°C。所以，當(dāng)加熱(巴氏消毒)開始時(shí)，細(xì)胞可以處于20°C 至40°C，例如23°C至27°C (或者25°C或29°C至32°C或37°C )。在某些情況下，微生物細(xì) 胞可以是經(jīng)過冷卻的，例如在發(fā)酵結(jié)束之后。所以當(dāng)加熱開始時(shí)，這些細(xì)胞的(初始)溫度 可以是5°C至10°C，例如7°C至9°C。微生物細(xì)胞可以被加熱至其溫度升高到(60°C或)70°C以上。因此，該溫度可以并 非巴氏消毒期間微生物細(xì)胞的最終溫度。事實(shí)上，細(xì)胞可以被加熱到(60°C或)70°C以上的 溫度。溫度可能升高直至達(dá)到70°C至90°C、110°C或130°C，例如75°C至87°C，最適為78V 至84°C。巴氏消毒期間的最高溫度因此可以在上述范圍內(nèi)，但對(duì)于某些實(shí)施方式，其也可以 達(dá)到100°C、12(TC或140°C。優(yōu)選地，細(xì)胞被保持或被維持于該(最高)溫度。因此可以認(rèn)識(shí)到，對(duì)細(xì)胞的加熱可以在低于40°C的溫度下進(jìn)行或從40°C開 始，達(dá)到70°C或更高。40°C至70°C的范圍可以提供更寬廣的加熱/溫度范圍的“快照 (snapshot)”，其時(shí)間(及由此的速率)可以被確定(并由此被計(jì)算)?？梢杂?jì)算出，上述的加熱(30分鐘內(nèi)從40°C至70°C )速率為1°C /分鐘。但是如 果有必要的話，速率還可以較此稍低，第一方面中的迅速加熱意味著加熱速率超過0. 5°C / 分鐘。該速率優(yōu)選為至少0. 6°C /分鐘、1. O0C /分鐘或者甚至1. 5°C /分鐘。但是，特別快 速的加熱速率是可以考慮的，它取決于設(shè)備和被加熱的微生物細(xì)胞的體積或質(zhì)量。因此本 發(fā)明中也有超過2. 0°C /分鐘或甚至2. 5°C /分鐘的加熱速率?？梢允褂脤ｉT的設(shè)備來獲得特別高的加熱速率。其可以在一段短時(shí)間內(nèi)達(dá)到高 溫，同時(shí)，這樣做能將之后被分離出來的PUFA或微生物油的氧化或破壞降至最低。因此，力口 熱可以在最高溫度高達(dá)140°C、150°C或者甚至160°C下進(jìn)行。優(yōu)選地，加熱可以達(dá)到100°C 至180°C之間的溫度范圍，例如120°C至160°C，優(yōu)選從130°C至150°C。采用特別迅速的加 熱儀，可以特別快地獲得上述的溫度，例如在少于一分鐘的時(shí)間(30秒)以內(nèi)。達(dá)到上述的 溫度可以僅在20、30、40或50秒內(nèi)，也可以需要150、175、200、225或250秒。然而，上述的 溫度可以在短如2、4、6、8或10秒內(nèi)達(dá)到，例如采用灌流加熱儀(infusion heater)，或是相 對(duì)較小的樣品。因此，高達(dá)每分鐘5(rc、ioo°c、i5(rc或者甚至2oo°c的加熱速率都是可以 獲得的。稍低一些的加熱速率，每分鐘從5°C或10°C至50°C或60°C因此也是可能的，例如 每分鐘從151至451。
已發(fā)現(xiàn)，迅速的巴氏消毒過程中的迅速加熱不僅更加高效及需能更少，而且它看 上去還是獲得更高質(zhì)量的微生物油(一旦從經(jīng)過巴氏消毒后的細(xì)胞中被提取出來)的原因 中的至少一個(gè)因素。第二方面——三階段巴氏消毒方案第一階段可以是加熱階段。它實(shí)際上相當(dāng)于本發(fā)明第一方面中所描述過的迅速加 熱，因此，第一方面中的所有特征和特性在經(jīng)過必要的修正后都可以應(yīng)用于第二方面的第 一(加熱)階段。第二階段是細(xì)胞處于(溫度)平臺(tái)之時(shí)。由此細(xì)胞可以在特定的期望溫度下(正 負(fù)1°C或2°C、5°C或甚至10°C )被保持一段期望長度的時(shí)間。上述細(xì)胞由此可被維持于恒 定的溫度。該平臺(tái)階段的溫度(或溫度范圍)優(yōu)選為上述巴氏消毒方案中所達(dá)到的最高溫 度。該平臺(tái)階段的溫度(和/或巴氏消毒期間的最高溫度)優(yōu)選為至少70°C。它可以低于 90°C或100°C，適于從70V 至85°C，例如從70V至77°C。此外，它可以從80°C至160°C，例 如從 100°C至 1400C O平臺(tái)階段或是細(xì)胞被保持于期望或最高溫度的時(shí)間的長度，可以從5秒至90分 鐘，例如從1或10分鐘至80分鐘，例如從20分鐘至70分鐘。該時(shí)間最適于從40或50分 鐘至60或70分鐘，例如從45分鐘至65分鐘，從55分鐘至63分鐘是有益的。特別短的時(shí) 間，例如從8秒至5分鐘，也是可能的。第三階段是冷卻階段。優(yōu)選地，細(xì)胞被冷卻至與前面所提到的加熱(或第一階段) 伊始時(shí)的溫度范圍相同或在其范圍之內(nèi)的溫度。微生物細(xì)胞優(yōu)選被線性地冷卻和/或加熱 (適當(dāng)?shù)兀谝缓?或第三階段)，那即是說，當(dāng)被繪制在時(shí)間對(duì)溫度的曲線圖上時(shí)，冷卻或 加熱曲線(近似地)為直線。上述細(xì)胞可以自然冷卻，或者其可以被主動(dòng)冷卻，例如使用熱 交換器(heat exchanger)和/或冷卻物質(zhì)，例如為了(降低)到環(huán)境溫度或室溫，或者更 低。冷卻速率優(yōu)選為至少0. 40C /分鐘、0. 60C /分鐘、1. O0C /分鐘或1. 5°C /分鐘。 這些數(shù)值代表了細(xì)胞被自然冷卻時(shí)可獲得的冷卻速率。但是，更迅速的冷卻速率也是有可 能的，尤其是采用了主動(dòng)冷卻時(shí)。因此，至少為2. O0C /分鐘、2. 5°C /分鐘、3. O0C /分鐘或 者甚至3. 5°C /分鐘的冷卻速率也是可以得到的。但是，更高的冷卻速率，例如高于每分鐘 5°C也是可能的，例如，每分鐘7°C或10°C至50°C或60°C，優(yōu)選為每分鐘15°C至45°C。優(yōu)選的加熱和/或冷卻速率優(yōu)選保持在至少10°C、20°C或30°C以上，雖然在一些 實(shí)施方式中，可以獲得超過至少40°C或50°C的范圍的速率?？梢哉J(rèn)識(shí)到，具有迅速加熱階段和迅速冷卻階段的巴氏消毒，其中用到的能量可 以被降低。這不僅僅導(dǎo)致了成本的節(jié)約，而且還不會(huì)對(duì)(最終的)微生物油的質(zhì)量產(chǎn)生負(fù) 面影響，事實(shí)上，它看起來還對(duì)油有著有益的效果。HHTfg——時(shí)丨旬對(duì)溫鹿曲線圖下的面積(能量輸入)從第二方面可以明顯獲知，如果將本發(fā)明的巴氏消毒方案繪制在一幅時(shí)間對(duì)溫度 的曲線圖上，將會(huì)得到一個(gè)梯形。第一(加熱)和第三(冷卻)階段的形狀可能均為三角 形，而中間或第二(平臺(tái))階段(第四方面的主題)(通常)是矩形。時(shí)間對(duì)溫度曲線圖下 的面積代表輸入到系統(tǒng)中的能量值。通過將巴氏消毒方案分為三部分，就可以計(jì)算出曲線 圖的面積，從而計(jì)算出能量輸入。
在第三方面，時(shí)間(分鐘)對(duì)溫度(°C)的曲線圖下的面積小于13，000°C 分鐘。 但是，遠(yuǎn)小于此的數(shù)量也已經(jīng)被獲得，小于11，000°C 分鐘、10，000°C 分鐘、9，000°C 分 鐘、8，000°C 分鐘或者甚至1，000°C 分鐘的數(shù)值也是可能的。在本發(fā)明的優(yōu)選方面，這些 數(shù)值可以不超過7，000°C 分鐘、6，000°C 分鐘或800°C 分鐘。在所述的曲線圖中，時(shí)間 被繪制在x軸(或水平軸或橫坐標(biāo))上，0分鐘代表原點(diǎn)。溫度由此將被繪制在y軸(或垂 直軸或縱坐標(biāo))上，0°C代表原點(diǎn)。微生物細(xì)胞一旦被加熱至它們巴氏消毒的溫度，然后即可冷卻(或被冷卻)。這些 細(xì)胞通常被冷卻至室溫或環(huán)境溫度，或至少低于30°C的溫度。因此不但有細(xì)胞從30°C被加 熱至60°C的時(shí)間，也還有細(xì)胞從60°C冷卻至30°C的時(shí)間。這兩個(gè)時(shí)間可以被加合起來提供 組合的30°C -60°C -30°C的加熱和冷卻時(shí)間。該組合時(shí)間優(yōu)選為少于150分鐘，例如是少 于120分鐘或100分鐘。但是，對(duì)更小的樣品，還能獲得更快得多的時(shí)間，上述組合(30°C到 60°C再回到30°C )時(shí)間可以少于70、50或者甚至30分鐘。HETfM—有平臺(tái)口介段^IRE^肖毒方#本方案可以是一種依據(jù)第二方面的方案，其中有(例如，第一)加熱階段和(例 如，第三)冷卻階段、夾在中間的(例如，第二或中間或居中的)平臺(tái)階段。但是，這并不是 必需的，其它的巴氏消毒方案也能被設(shè)想出來。第四方面涉及上述平臺(tái)階段的優(yōu)選特征。第 二(和其它)方面中的所有特征和特性在經(jīng)過必要的修正后也適用于此第四方面。上述細(xì)胞被維持或保持于特定的期望溫度(正負(fù)1°C、2°C、5°C或者甚至10°C )，在 一種溫度(T，°C )下持續(xù)一段時(shí)間(t，分鐘)。這兩個(gè)參數(shù)可以被乘起來，從而給出乘積tT。 它適于從140°C 分鐘或280°C 分鐘至50，000°C 分鐘或100，800°C 分鐘。該乘積優(yōu)選 從500°C 分鐘、1，000°C 分鐘、2，000°C 分鐘或3，000°C 分鐘或甚至6，000°C 分鐘至 10，000°C 分鐘、18，000°C 分鐘或25，000°C 分鐘。該乘積tT最適為2，000°C 分鐘至 6，000°C 分鐘，例如3，000°C 分鐘至5，000°C 分鐘，最適從4，000°C 分鐘至4，500°C 分 鐘。在一些實(shí)施方式中，該乘積tT為從13°C 分鐘至900°C 分鐘，例如從100°C 分鐘 或200°C 分鐘至700°C 分鐘或800°C 分鐘，優(yōu)選從300°C 分鐘或400°C 分鐘至 600°C 分鐘或700°C 分鐘。因此，通過與第三方面中相似的方式，可以認(rèn)識(shí)到，該乘積tT代表了當(dāng)細(xì)胞被保 持于升高的溫度時(shí)的時(shí)間對(duì)溫度曲線圖下的面積。因此，該倍增因數(shù)tT實(shí)際上正是平臺(tái) (但非加熱或冷卻)階段曲線圖下的面積。PUFA 的提取本發(fā)明的第五方面涉及一種從微生物細(xì)胞中獲取PUFA的方法，該方法包含如前 所述，根據(jù)本發(fā)明的第一、第二、第三或第四方面中之任一，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行巴氏消毒，再從經(jīng)過 巴氏消毒的細(xì)胞中提取和/或分離出PUFA。本發(fā)明的第六方面涉及微生物油，其可以包含至少40%的花生四烯酸(ARA)和/ 或具有含量為至少90%的甘油三酯。所述的油可以具有低于2. 5,1. 5,0. 8,0. 6或者甚至 0. 5的P0V和/或低于1. 0的AnV。所述的油可以通過第五方面的方法來制備。多不飽和脂肪酸(PUFA)和微生物油所述的PUFA可以是一種PUFA，也可以是兩種或更多種不同的PUFA。該P(yáng)UFA或每 種PUFA可以是n-3或n-6族的。優(yōu)選為C18、C20或C22的PUFA。它可以是具有至少18個(gè)碳原子和/或至少3或4個(gè)雙鍵的PUFA。該P(yáng)UFA可以以一種游離脂肪酸、一種鹽的形式， 作為一種脂肪酸酯(例如甲酯或乙酯)，作為一種磷脂和/或以甘油單、雙或三酯的形式被 提供。適合的(n-3和 n-6) PUFA 包括二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，DHA，22 6 Q 3)，適合來自藻類或真菌， 例如(甲藻)Crypthecodinium 或(真菌)Thraustochytrium ；亞麻酸(Y-linolenic acid, GLA, 18:3Q6)；a-亞麻酸(a -linolenic acid, ALA, 18:3 Q 3)；共軛亞油酸(conjugatedlinoleic acid,十八碳 二烯酸 (octadecadienoicacid), CLA)；雙高-Y-亞麻酸(dihomo-y-linolenic acid, DGLA,20:3Q6)；花生四烯酸(ARA，20:4Q6)；和二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid, EPA, 20:5 Q 3) 優(yōu)選的PUFA包括花生四烯酸(ARA)、二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA) 和/或Y _亞麻酸(GLA)。具體而言，優(yōu)選為ARA。所述的PUFA可以通過經(jīng)本發(fā)明的方法進(jìn)行了巴氏消毒的細(xì)胞來生產(chǎn)，例如微生 物細(xì)胞。其可以是細(xì)菌、藻類、真菌或酵母細(xì)胞。真菌是優(yōu)選的，優(yōu)選為Mucorales目的， 例如 Mortierella、Phycomyces、Blakeslea、Aspergillus、Thraustochytrium、Pythium 或 Entomophthora。ARA 的優(yōu)選來源為 Mortierella alpina、Blakeslea trispora、 Aspergillusterreus或Pythium insidiosum。藻類可以是甲藻(dinoflagellate)禾口/或包 括Porphyridium、Nitschia 或 Crypthecodinium (例如 Crypthecodiniumcohnii)。酵母包 括 Pichia 或 Saccharomyces 屬的，例如 Pichia ciferrii。細(xì)菌可以是 Propionibacterium 屬的。該微生物油(在室溫下)可以為液體。大多數(shù)的PUFA優(yōu)選為以甘油三酯的形式存在。因此，優(yōu)選為至少50%，例如至少 60%，或最優(yōu)為至少70%的PUFA都以甘油三酯的形式存在。但是，甘油三酯的數(shù)量還可以 更高，例如為油的至少85 %，優(yōu)選為至少90 %，最優(yōu)為至少95 %或98 %。這些甘油三酯中， 優(yōu)選至少40%，例如至少50%，而最優(yōu)為至少60%的PUFA，都處于甘油的a位(出現(xiàn)于甘 油三酯的主鏈(backbone)中)也就是所謂的1或3號(hào)位。處于0 (2)位的上述PUFA優(yōu)選 為至少20%，例如至少30%，最優(yōu)為至少40%。上述微生物油可以包含至少10%、35%、40%或45%或更多期望的PUFA，例如花 生四烯酸。它可以有至少90%的甘油三酯含量。該微生物油具有的甘油三酯含量優(yōu)選為 從90%至100%，例如至少96%，優(yōu)選為至少98%，更優(yōu)選為至少99%，而最優(yōu)的為超過 99.5%。典型地，這種油中二十碳五烯酸(EPA)的含量低于5%，優(yōu)選為低于1%，而更優(yōu) 選的是低于0. 5%。該油中C2(1、C20:3> C22⑴和/或C24:(1多不飽和脂肪酸(PUFA)中任何一種 的含量可以少于5%，少于2%，少于1%。游離脂肪酸(free fattyacid,FFA)的含量可以 ≤0. 4%，0. 2%或0. 1%。上述的油可以含有很少或沒有GLA和/或DGLA。該微生物油可以是粗制的油。它可以通過使用溶劑從細(xì)胞中萃取出來，例如超臨 界態(tài)二氧化碳、己烷或異丙醇。巴氏消毒過程
巴氏消毒通常發(fā)生于發(fā)酵完成之后。在一種優(yōu)選實(shí)施方式中，巴氏消毒將終止發(fā) 酵，因?yàn)榘褪舷酒陂g的熱度會(huì)殺死細(xì)胞。巴氏消毒因此可以對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)液(或液體(水 性)培養(yǎng)基中的細(xì)胞)進(jìn)行，雖然其也能夠?qū)呐囵B(yǎng)液中獲得的微生物生物物質(zhì)(biomass) 進(jìn)行。在前一種情況中，巴氏消毒可以發(fā)生于微生物細(xì)胞仍處于發(fā)酵罐中時(shí)。巴氏消毒優(yōu) 選于微生物細(xì)胞受到更多的處理之前進(jìn)行，例如微?；?比如通過擠壓)粉碎，或者捏煉 (kneading)0優(yōu)選地，巴氏消毒方案足以抑制或失活一種或多種能使PUFA或微生物油降解或 者對(duì)其產(chǎn)生不良影響的酶，例如脂肪酶。一旦發(fā)酵被終止，就可以過濾發(fā)酵培養(yǎng)液，或者進(jìn)行其它處理以去除其中的水或 水性液體。水分被移除之后，可以獲得一種生物物質(zhì)“壓濾渣(cake)”。如果巴氏消毒還未 開展，就可以對(duì)這些去水的細(xì)胞(或生物物質(zhì)壓濾渣)進(jìn)行巴氏消毒。PUFA的提取方法然后PUFA(或通常包含該P(yáng)UFA的微生物油)就可以從所述(經(jīng)過巴氏消毒)的微 生物細(xì)胞中提取得到。其優(yōu)選從含有細(xì)胞的(比如，干燥的)微粒(例如，擠壓出的產(chǎn)物) 中提取。這種提取可以使用溶劑來進(jìn)行。優(yōu)選使用無極性溶劑，例如Ci_8，優(yōu)選為c2_6的鏈 烷，舉例來說是己烷。也可以使用二氧化碳(液態(tài)形式的，比如處于超臨界狀態(tài)的)。優(yōu)選地，溶劑被允許從干燥微粒中濾出。在W0-A-97/37032中描述了合適的微生 物微?；蛿D壓技術(shù)以及其后的對(duì)含有PUFA的微生物油的提取。上述溶劑可以令我們獲得含有PUFA的粗制油。這種油在此狀態(tài)即可被使用，無 需更多處理，或者它也可以再經(jīng)過一步或數(shù)步精煉。然而，粗制的油通常含有溶劑，例如用 來萃取該油的溶劑(例如己烷，或醇，例如異丙醇)，或其還未經(jīng)歷下述精煉步驟中的一種 (或優(yōu)選為全部)。PCT/EP01/08902號(hào)國際專利申請(qǐng)(該文件的內(nèi)容和本文中所述及的其 它所有文件的內(nèi)容通過引用的方式包括于本文中)中描述了合適的精煉方案。例如，可以 對(duì)這種油進(jìn)行一步或數(shù)步的精煉，包括酸處理或脫膠(degumming)、堿處理或去除游離脂 肪酸、脫色或去除色素、過濾、冬化(winterisation)(或冷卻，例如為了去除飽和的甘油三 酯)、脫臭(或?qū)τ坞x脂肪酸的去除)和/或上光(polishing)(或?qū)τ筒蝗苄晕镔|(zhì)的去 除)。上述所有精煉步驟在PCT/EP01/08902中都有更為詳細(xì)的描述，在經(jīng)過必要的修正后 都可以被應(yīng)用于本申請(qǐng)所描述的步驟中。由此得到的油特別適合于營養(yǎng)上的用途，其可以被添加到(人類)食物或(動(dòng)物) 飼料中。例子包括奶、嬰兒配方食品、健康飲品、面包和動(dòng)物飼料。微生物細(xì)胞本發(fā)明中使用的微生物細(xì)胞(或微生物)可以是上文所述的任何一種，尤其是在 關(guān)于PUFA和微生物油的一節(jié)中的那些。它們可以包含或能被用于生產(chǎn)PUFA或微生物油， 所述的PUFA油可以適當(dāng)?shù)靥崛』蚍蛛x自上述的細(xì)胞中。這些細(xì)胞可以是絲狀的形式，例如 真菌或細(xì)菌，或者可以是酵母、藻類和細(xì)菌等單個(gè)的細(xì)胞。這些細(xì)胞可以包含酵母、真菌、 細(xì)菌或藻類等微生物。優(yōu)選的真菌是Mucorales目的，例如該真菌可以是Mortierella、 Phycomyces、Blakeslea 或 Aspergillus 屬的。優(yōu)選的真菌是 Mortierella alpina、 Blakeslea trispora 或 Aspergillus terreus 禾中的。至于考慮到酵母，優(yōu)選是Pichia(例如是Pichia ciferrii種的)或Saccharomyces 屬的。細(xì)菌可以是 Propionibacterium 屬的。如果該細(xì)胞來自藻類，優(yōu)選為甲藻(denoflagellate)和/或?qū)儆?Crypthecodinium 屬的，優(yōu)選的藻為 Crypthecodinium cohnii 屬的。jMi直接或間接地加熱(上述細(xì)胞)都是可行的。所述的加熱，如果是直接的，則可 以是通過向發(fā)酵罐中傳送蒸汽。間接的方式可以是通過熱交換器使用一種介質(zhì)，其既可以 通過發(fā)酵罐的壁，也可以有加熱線圈，或外部的熱交換器，例如板式熱交換器(plate heat exchanger)0通常，巴氏消毒將發(fā)生于進(jìn)行發(fā)酵的發(fā)酵容器中。但是，對(duì)一些微生物(例如細(xì) 菌)而言，通常優(yōu)選的是首先將細(xì)胞移出容器，然后再進(jìn)行巴氏消毒。巴氏消毒可以發(fā)生于 對(duì)生物進(jìn)行其它處理之前，例如干燥或微?；０褪舷就ǔ⑺来蠖鄶?shù)的微生物，如果不是全部的話。巴氏消毒后，至少 95%、96%或者甚至98%的微生物都已被殺死，即它們已經(jīng)死亡。酸化在一些情況下，人們期望降低細(xì)菌在經(jīng)過巴氏消毒之后生長的風(fēng)險(xiǎn)。一種可能是 用合適的酸來酸化細(xì)胞。因此，為了防止微生物物種的生長(outgrowth)，將細(xì)胞的pH調(diào)節(jié) 到從3至4的范圍是合乎期望的。但是根據(jù)所述的細(xì)胞，也還可以采用更寬的PH范圍，所 以pH可以調(diào)節(jié)為2至5，最優(yōu)是在大約3. 3至3. 7的范圍內(nèi)。對(duì)細(xì)胞的酸化可以發(fā)生于巴氏消毒之前。然而，其優(yōu)選卻進(jìn)行于巴氏消毒之后。對(duì)pH的調(diào)節(jié)可以通過任何適當(dāng)?shù)耐緩交蛉魏芜m當(dāng)?shù)乃醽磉M(jìn)行。優(yōu)選是使用磷酸 來獲得的，例如85%的或稀釋的55%或33%的磷酸。過氧化倌(P0V)上述微生物油的P0V優(yōu)選為從4至8或12，尤其是對(duì)粗制的油而言。然而，該P(yáng)0V 可以不超過3. 0，2. 5或2.0。但是，使用本發(fā)明的方法還可以獲得更低得多的P0V，這些值可 以低于1. 5或低于1. 0。低于0. 8或0. 6以及甚至低于0. 4的P0V也是能夠獲得的。(來 自于實(shí)施方式的)數(shù)值變動(dòng)于1.3(或0.8)至0.4之間。(P0V的)單位通常是meq/kg。茴香胺倌(AnV)該值表示對(duì)醛類含量的測量。上述微生物油的茴香胺值優(yōu)選為從5、6、7或10至 15、20或25，尤其是對(duì)粗制的油而言。AnV適于不超過20，例如不超過15。它可以不超過 10或者甚至不超過5。優(yōu)選地，P0V和/或AnV是就粗制的而非經(jīng)過精煉的油而言的。AnV 值(在優(yōu)選的實(shí)驗(yàn)中)在15至5之間變化，可以是在12至7之間。粗制油與精煉油的對(duì)比下面展示了上述兩種油之間的一些區(qū)別。每種粗制的或精煉的油都可能具有下表 中恰當(dāng)對(duì)應(yīng)于粗制或精煉油的一種或多種特征。粗制的油通常含有抗氧化劑(例如生育 酚、抗壞血酸棕櫚酸)。
10 適當(dāng)?shù)?，本發(fā)明中的粗制油可以具有以下特征中的一個(gè)或數(shù)個(gè)(a)未皂化物含量從2. 0%至3. 5% (w/w)；(b)溶劑(例如己烷)含量從 10ppm、50ppm 或 lOOppm 至 lOOOppm、ISOOppm 或 2000ppm ；(c)游離脂肪酸含量從0. 或0.2%至1%，例如0.2% -0. 6%或0. 3% -0. 5%；(d)P0V 從 2、3、4 或 6 至 10 ；(e)含磷量為至少2、3或5mg/kg ；(f)含硅量為 50ppm 或 lOOppm 至 500ppm ；和 / 或(g)水分含量少于或從0.5%至或2%。油及PUFA的用途
本發(fā)明的第六方面涉及一種組合物，其中包含第五方面所述的油以及如果合適的 話，還具有一種或多種(額外的)物質(zhì)。該組合物可以是為動(dòng)物或人類提供的食品和/或 食物添加劑。在本發(fā)明的多種供人類消耗的實(shí)施方式中，可以對(duì)上述的油進(jìn)行加工，使其適 合人類消耗，典型地是對(duì)從微生物中獲得的油進(jìn)行精煉或提純。上述組合物可以是嬰兒配方食品或(人類)食品。此處的配方食品的成分可以經(jīng) 過調(diào)節(jié)，使其中各種油脂或PUFA的含量與正常母乳相似。這可以包括將本發(fā)明的微生物油 與其它油類摻合，以獲得合適的組合物。上述組合物可以是動(dòng)物或海產(chǎn)飼料的組合物或添加劑。上述飼料和添加劑可以供 給任何的養(yǎng)殖動(dòng)物，特別是綿羊、牛和家禽。此外，上述飼料或添加劑還可以供給被養(yǎng)殖的 海產(chǎn)生物，例如魚和有殼水生動(dòng)物。上述組合物因此還可以包括一種或多種適于上述動(dòng)物 的飼料物質(zhì)或成分。本發(fā)明的油可以作為油直接售賣，也可以被包納于合適的包裝中，典型地，是一種 內(nèi)部涂上環(huán)氧酚紫膠漆(印oxy phenolic lacquer)并且經(jīng)過充氮的鋁瓶。上述的油可能 含有一種或多種抗氧化劑(例如，生育酚、維生素E、棕櫚酸)，每種的濃度例如為50ppm至 800ppm,比如從 lOOppm 至 700ppm。合適的組合物可以包括藥用或動(dòng)物治療用的(veterinary)組合物，例如，口服或 化妝品用途的組合物。所述的油可以按照所述的方式被使用，或者還可以被裝入膠囊，例如 在一種殼(shell)里，因此可以成為膠囊的形式。所述的殼或膠囊可以包含明膠和/或甘 油。所述的組合物可以含有其它成分，例如調(diào)味料(比如檸檬或酸橙香料)或者一種藥用 或動(dòng)物治療可接受的載體或賦形劑。本發(fā)明中一個(gè)方面的優(yōu)選特征和特性在進(jìn)行必要的修正后同樣可適用于另一個(gè)方面。現(xiàn)在將采用舉例的方式通過下述的實(shí)施例來對(duì)本發(fā)明進(jìn)行描述，下述的實(shí)施例通 過闡述對(duì)本發(fā)明提供支持，而并非欲對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限制。實(shí)施例1含有PUFA的微生物油在生產(chǎn)過程中的氧化，被認(rèn)為是由酶活性導(dǎo)致的。巴氏消毒 被當(dāng)作一種在處理微生物細(xì)胞以獲得微生物油的過程中穩(wěn)定(stabilising)氧化的方法。 現(xiàn)發(fā)現(xiàn)，這種穩(wěn)定的程度取決于巴氏消毒的條件。為此，我們開展了若干項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，來確定巴氏消毒的哪些條件會(huì)影響到油的氧化水 平特別是其過氧化值(P0V)。過氧化值采用AOCS :Cd8-53中詳細(xì)描述的標(biāo)準(zhǔn)方案來測定。上述實(shí)驗(yàn)遵循以下方案發(fā)酵；貯藏；巴氏消毒；(微生物油的)提取；對(duì)油的分 析。真菌Mortierella alpina被培養(yǎng)于發(fā)酵罐中。發(fā)酵持續(xù)了大約148小時(shí)。 Malpina生產(chǎn)名為花生四烯酸(ARA)的PUFA。上述生物物質(zhì)被移出發(fā)酵罐，并被貯藏(于 低于-18°C的溫度)。當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)液還處于發(fā)酵罐中時(shí)，就將Malpina生物質(zhì)的樣品從發(fā)酵培養(yǎng)液中 移出，而且立刻將其冷凍起來。我們嘗試了多種巴氏消毒方案。巴氏消毒被進(jìn)行于三種不同的溫度，即40°C、7(TC 和85°C。上述方案遵循一種三階段方法，其具有迅速加熱的第一階段，接著為處于期望溫度也即是所使用的最高溫度的平臺(tái)(第二或中間階段)。然后是迅速冷卻的(第三)階段。 不同的生物物質(zhì)樣品經(jīng)歷了具有三種不同時(shí)間的中間(平臺(tái))階段，即一個(gè)、兩個(gè)和24個(gè) 小時(shí)。巴氏消毒之后，采用濕法提取(wet extraction)技術(shù)來獲得微生物油。生物物質(zhì) 樣品被過濾、(在壓力下)壓榨，油被提取出來。然后對(duì)微生物油進(jìn)行分析，首先是用A0CS方法來分析過氧化值(P0V)。一些樣品 中的ARA含量也被測定。分析顯示，獲得的每kg微生物油具有大約420g的ARA。詳細(xì)方案發(fā)酵和樣品提取從發(fā)酵罐容器中移出一升的發(fā)酵培養(yǎng)液，并將其過濾(Seitz兩升過濾器， F-FA10)。得到的壓濾渣用600ml的去離子水漂洗。上述濕壓濾渣被風(fēng)吹干燥一分鐘，然后 在 400bar 進(jìn)行壓榨(使用 HAFIC0 裝置，酊壓(tincture press)，C-0A021，300_400Atm)。 再用Ultra Turrax 儀器，在室溫(20°C至25°C )下用500ml的己烷(Merck)對(duì)濕的壓出 物進(jìn)行一小時(shí)的萃取以得到微生物油。然后將己烷移走。再用250ml新鮮的己烷在室溫對(duì) 剩下的壓濾渣進(jìn)行漂洗(攪拌下30分鐘)。移走己烷，并將其加入到前次萃取后的己烷中。然后將一種玻璃過濾器和一種GFA玻璃過濾器聯(lián)合使用來過濾萃取物。再使用 Rotavapor 儀器，使己烷于50°C左右從澄清的萃取物中揮發(fā)約15分鐘。上述的油被轉(zhuǎn)移 至氣密性杯中，然后對(duì)每只樣品杯充氮30秒。再將上述樣品杯關(guān)好并貯藏于_18°C。巴氏消毒方案我們試驗(yàn)了三種不同的方案(A、B和C)。每種都由三個(gè)階段組成，即第一加熱階 段，(處于最高溫度的)第二平臺(tái)階段和第三冷卻階段。下表1顯示了這三種巴氏消毒模 式的方案。表1 所述的三種巴氏消毒模式A、B和C還另外以繪圖方式展現(xiàn)于圖1中?？梢哉J(rèn)識(shí)到， 對(duì)每種模式中的三個(gè)步驟的每一個(gè)而言，其在溫度(T，°C)對(duì)時(shí)間(t，分鐘)曲線圖下的 面積都能被計(jì)算出來，然后將它們加合，就能給出三種模式中每一種在曲線圖下的總面積。 此類計(jì)算還顯示于上表1中。從經(jīng)歷A、B和C三種巴氏消毒方案后的細(xì)胞中萃取得到的油，其過氧化值(P0V) 被測定。所述萃取的油的？0￥分別為8.7、14.3和2.4。模式B的加熱和冷卻速率緩慢，其 僅作為對(duì)照出現(xiàn)。它的P0V最高，為14.3。與之相反，模式A和C都是本發(fā)明的內(nèi)容。模式A比模式B在第一和第三階段的 加熱和冷卻速率都更快。在本發(fā)明中，加熱和冷卻速率優(yōu)選為至少和模式A中所示的一樣 快。模式A給出的P0V為8. 7。但是，使用模式C才獲得了最好的結(jié)果，其P0V僅為2. 4。如圖1所示，它具有一個(gè) 非常迅速的加熱階段和快速的冷卻(第三)階段。實(shí)施例2我們進(jìn)行了與實(shí)施例1類似的實(shí)驗(yàn)，區(qū)別只在于此處巴氏消毒的溫度變化更寬， 即為40°C (用作對(duì)照)、70°C和85°C。溫度(°C)對(duì)時(shí)間(分鐘)的曲線顯示于下面的圖2 和表2中。所有樣品的曲線都基本一樣，當(dāng)然除了其適當(dāng)具有巴氏消毒平臺(tái)的延伸(一個(gè) 小時(shí)到4或24小時(shí))。表2 對(duì)來自兩次不同長度的不同的發(fā)酵的樣品(均為Malpina)進(jìn)行檢測。樣品號(hào)11 至20。表3是一次略為長一點(diǎn)的發(fā)酵，其中有約兩升的培養(yǎng)液被轉(zhuǎn)移至一個(gè)接種體發(fā)酵罐， 發(fā)酵延續(xù)了 48小時(shí)，其中沒有任何額外的葡萄糖的加入。巴氏消毒后對(duì)上述樣品進(jìn)行加工，先是在大約lbar氮?dú)獾膲毫ο逻M(jìn)行過濾。得 到的壓濾渣再被工藝用水(process water，大約為初始的培養(yǎng)液體積的0. 6倍)漂洗。使 用水果壓榨機(jī)在300至400bar的活塞壓力下完成脫水。接著加入500ml新鮮的己烷，使 用Ultra-turrax儀來混合一分鐘。然后在環(huán)境溫度下進(jìn)行大約一小時(shí)的萃取。過濾后，用 250ml新鮮的己烷對(duì)得到的壓濾渣進(jìn)行漂洗，得到的溶劑于60°C至70°C在真空下?lián)]發(fā)。然 后充氮，再貯藏于-18°C。表3中顯示了上述結(jié)果，包括第一次和第二次測量的過氧化值，以及這兩個(gè)數(shù)值 的平均值，還有茴香胺值(AnV)。圖3和圖4(分別對(duì)應(yīng)較短和較長的發(fā)酵)中還示出了 P0V 和AnV的降低。表3 從上述結(jié)果中看到，沒有巴氏消毒時(shí)，卩(^為5.6或5.7。40°C下的巴氏消毒降低 了 P0V，但在該巴氏消毒溫度，需要相對(duì)較長的一段時(shí)間(例如24小時(shí))來將P0V降低至可 接受的數(shù)值2.1。更高的溫度則要成功得多。例如，在70°C僅進(jìn)行1小時(shí)的巴氏消毒，就能得到2. 2 的P0V，相比之下在40°C要24小時(shí)才能獲得2. 1的P0V。在更高的溫度上還獲得了甚至更 好的數(shù)值，85°C進(jìn)行1小時(shí)得到的P0V僅為1.2。(上述數(shù)據(jù)只是較短發(fā)酵的，雖然從在較 長的發(fā)酵中生長的細(xì)胞上也能獲得類似的結(jié)果)。圖3和圖4以圖的形式展示了 P0V和AnV值是怎樣隨不同的巴氏消毒時(shí)間而變化 的。同預(yù)計(jì)一樣，較長的巴氏消毒時(shí)間給出了較低的AnV和P0V值。然而，更為重要的是， 在巴氏消毒期間使用相對(duì)高的溫度。當(dāng)巴氏消毒溫度(！^肖.)增加至70°C時(shí)，就能發(fā)現(xiàn)AnV 和P0V有了顯著的降低，在85°C時(shí)還能發(fā)現(xiàn)甚至更低的數(shù)值。(以十字形、實(shí)心圓和星號(hào)表示的頂部三條線顯示了 AnV，而以菱形、方形和三角形表示的較低的三條線則給出了 P0V)。下表4顯示了九個(gè)不同的巴氏消毒方案(三個(gè)不同的平臺(tái)溫度以及持續(xù)三段不同 的時(shí)間)的計(jì)算乘積tT(°C 分鐘)。該乘積能有效地代表(加熱階段之后、但早于冷卻階 段的)平臺(tái)階段的(時(shí)間，t，分鐘對(duì)溫度，T，°C的)曲線圖下的面積。表 4 實(shí)施例3如前例，用真菌Ealpina進(jìn)行生產(chǎn)規(guī)模的發(fā)酵，然后用發(fā)酵培養(yǎng)液來進(jìn)行更多的 巴氏消毒試驗(yàn)。將未經(jīng)過巴氏消毒的培養(yǎng)液(800升)轉(zhuǎn)移出來并貯藏于4°C。再將該培養(yǎng) 液轉(zhuǎn)移至一個(gè)700升的攪動(dòng)容器中，并展開10種不同的巴氏消毒方案。首先，于五種不同的(最高)溫度，即1401、1201、1001、801和601，進(jìn)行巴氏 消毒，(在最高溫度)持續(xù)(平臺(tái))時(shí)間為8秒。此外，還在140°c、120°c、10(rc、8(rc和 60°c，進(jìn)行于最高溫度持續(xù)(平臺(tái))時(shí)間*為300秒的巴氏消毒。將樣品(2升)取出并直接冷凍于-18°c。消毒后的樣品(200ml)被取出后冷凍， 然后采用下述方案從樣品中回收得到粗制的花生四烯酸油。在lbar的N2下過濾發(fā)酵培養(yǎng)液的樣品(1. 7升)。用0. 6倍體積的冷凝水漂洗壓 濾渣，再在400kg/cm2下進(jìn)行約5分鐘的壓榨。然后，將正己烷(500ml)加入到濕的壓濾渣 中，使用Ultra Turrax儀在24，OOOrpm進(jìn)行粉碎。在環(huán)境溫度(約21°C )下對(duì)油進(jìn)行超過 約110分鐘的萃取。使用GF/A Whatman過濾介質(zhì)對(duì)懸浮液進(jìn)行真空過濾。再用250ml新 的己烷來漂洗壓濾渣。己烷在溫度為大約60°C至70°C的水浴中揮發(fā)15分鐘。然后將得到 的油轉(zhuǎn)移至氣密性的樣品杯中，充氮30秒，接著將其關(guān)好并在分析前貯藏于_18°C。圖5、6和7提供了分析后的數(shù)據(jù)。圖6和7顯示了上述兩套實(shí)驗(yàn)的時(shí)間對(duì)溫度曲 線，分別為在五種溫度設(shè)置，一是平臺(tái)(持續(xù))時(shí)間為8秒，二是平臺(tái)(持續(xù))時(shí)間為5分 鐘。如上述的圖所示，中間的水平線(代表8秒或5分鐘)顯示平臺(tái)階段。圖5顯示了全部10種巴氏消毒體系下獲得的P0V和AnV。如圖所示，隨著溫度逐 漸變得更高，獲得的P0V則更低；并且較長的持續(xù)時(shí)間(5分鐘)給出了最低的P0V。
1權(quán)利要求
一種對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行巴氏消毒的方法，所述方法包括在不超過30分鐘內(nèi)在包括從40℃至70℃的溫度加熱細(xì)胞，或以大于0.5℃/分鐘的速率加熱細(xì)胞。
2.一種對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行巴氏消毒的方法，所述方法包含三個(gè)階段，即(第一)加熱階 段，(第二)平臺(tái)階段(其間細(xì)胞被維持于一個(gè)恒定的溫度)以及(第三)冷卻階段。
3.一種對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行巴氏消毒的方法，所述方法包含使用一種巴氏消毒方案加 熱細(xì)胞，從而使時(shí)間(分鐘)對(duì)溫度(V )曲線圖下的面積小于`13，000°C ·分鐘。
4.一種對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行巴氏消毒的方法，所述方法包含加熱細(xì)胞，然后在平臺(tái)階 段將細(xì)胞在提高的溫度(T，V )下維持一段時(shí)間(t，分鐘)，其中的乘積tT為從140°C·分 鐘至100，80(TC ·分鐘。
5.一種如權(quán)利要求2或4所述的方法，其中(a)所述平臺(tái)為最高溫度；(b)所述巴氏消毒方案在時(shí)間(t)對(duì)溫度(T)曲線圖上的形狀為梯形；(c)所述加熱和/或冷卻是線性的；和/或(d)所述細(xì)胞被加熱自低于40°C的溫度，和/或被加熱至高于70°C的溫度；和/或(e)所述細(xì)胞含有或產(chǎn)生PUFA或(可以含有PUFA的)微生物油。
6.一種如前述任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中微生物細(xì)胞在不超過15分鐘內(nèi)被 從40°C加熱至70°C，和/或以至少0. 6°C /分鐘或1. O0C /分鐘的速率加熱細(xì)胞。
7.一種如前述任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中(a)以至少2V/分鐘的速率加熱所述的微生物細(xì)胞；(b)所述巴氏消毒(或平臺(tái))溫度從70°C至100°C，最適為從70°C至85°C；(c)所述細(xì)胞以至少-0.6°C /分鐘或-1. 6°C /分鐘的速率被冷卻；和/或(d)所述時(shí)間(分鐘)對(duì)溫度(°C)曲線圖下的面積小于10，000°C·分鐘或8，000°C·分鐘。
8.—種從微生物細(xì)胞中獲得PUFA或微生物油的方法，所述方法包含按照前述任意一 項(xiàng)權(quán)利要求所述，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行巴氏消毒，再從經(jīng)過了巴氏消毒的細(xì)胞中提取或分離出PUFA 或微生物油。
9.一種微生物油，含有至少90%的甘油三酯，其過氧化值(POV)低于1.5(或1.0)，和 /或其茴香胺值(AnV)低于15，可選地，低于12。
10.一種如權(quán)利要求9所述的油，其中(a)所述的PUFA包含C18、C20,C22 Ω -3或Ω -6的脂肪酸；(b)所述的PUFA含量為至少40%；(c)所述的PUFA包含花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸 (DHA)；和 / 或(d)所述的油是粗制的或未經(jīng)過精煉的油。
全文摘要
本發(fā)明公開了用于微生物細(xì)胞和微生物油的巴氏消毒方法。本發(fā)明公開了一種改良的巴氏消毒方案，用以對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行巴氏消毒。所述方案具有三個(gè)階段，即第一加熱階段，第二平臺(tái)階段，其間細(xì)胞被保持于(最高且)恒定的溫度，以及第三冷卻階段。加熱和冷卻階段都是迅速的，加熱階段中，細(xì)胞的溫度在不超過30分鐘內(nèi)經(jīng)歷從40℃至80℃。加熱速率為至少0.5℃/分鐘，冷卻期間為至少-0.5℃/分鐘。平臺(tái)最高溫度為70℃至85℃。通過將巴氏消毒方案繪制成時(shí)間(t，分鐘)對(duì)溫度(T，℃)的曲線圖，能獲得一個(gè)面積小于13,000℃·分鐘的梯形。這不僅僅使得能量輸入更少(而且成本因此而降低)，而且還能得到過氧化值(POV)低于1.5且茴香胺值(AnV)低于1.0的質(zhì)量更好(和更少被氧化)的油。
文檔編號(hào)A61K35/74GK101837136SQ20101014161
公開日2010年9月22日 申請(qǐng)日期2003年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月19日
發(fā)明者艾伯特·沙普, 迪尼埃爾·韋爾科埃爾騰 申請(qǐng)人:帝斯曼知識(shí)產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司