專利名稱：一種larotaxel磷脂復(fù)合物的脂質(zhì)微球注射液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切地說(shuō)它是一種Larotaxel磷脂復(fù)合物及含有該磷脂復(fù)合物的脂質(zhì)微球注射液的制備。
背景技術(shù)：
癌癥嚴(yán)重威脅著人類的生命與健康，隨著工業(yè)化程度的提高、環(huán)境污染的加重與人類壽命的普遍延長(zhǎng)，癌癥的發(fā)病率還將上升。全世界每年約有1000萬(wàn)人新患癌癥，有600 萬(wàn)人死亡.中國(guó)每年約有170萬(wàn)人新患癌癥，有120萬(wàn)人喪生。癌癥已成為城市和農(nóng)村第一和第三位的死亡原因。無(wú)疑，占世界人口 1/4的中國(guó)正面臨著盡快擺脫癌癥威脅，征服腫瘤的艱巨任務(wù)。紫杉醇是20世紀(jì)天然藥物化學(xué)發(fā)展中抗癌活性研究與開(kāi)發(fā)最富成果、最令人激動(dòng)的重大發(fā)現(xiàn)。1991年，美國(guó)腫瘤信息服務(wù)部門宣布紫杉醇治療卵巢癌、乳腺癌效果良好，治療前列腺癌、上胃腸道癌、小細(xì)胞和非小細(xì)胞癌前景良好。1992年底被美國(guó)FDA批準(zhǔn)作為抗癌新藥上市。NCI會(huì)長(zhǎng)Brode將紫杉醇譽(yù)為20世紀(jì)發(fā)現(xiàn)的最重要的抗癌新藥。并且大膽預(yù)測(cè)在今后10 15年內(nèi)，紫杉醇將成為主要的抗癌藥物之一。目前，紫杉醇在臨床上已廣泛用于卵巢癌、乳腺癌、小細(xì)胞和非小細(xì)胞癌、食道癌、頭頸癌、抗化療白血病等多種癌癥的化療。獨(dú)特的作用機(jī)理、確切的療效、巨大的市場(chǎng)、毒性限制劑量限制療效、耐藥性，以及染色體紊亂理論的確認(rèn)等多種因素，掀起了前所未有的多學(xué)科、多層次的紫杉烷類研究熱潮，內(nèi)容涉及紫杉醇新資源的尋找、開(kāi)發(fā)、結(jié)構(gòu)優(yōu)化，到以其為先導(dǎo)物追求更簡(jiǎn)單、更有效的抗癌新藥研究。目前，紫杉烷產(chǎn)業(yè)呈現(xiàn)兩種明顯的發(fā)展趨勢(shì)1、強(qiáng)化產(chǎn)業(yè)鏈形成，以提高產(chǎn)量、降低成本和增加供給；2、提高藥效降低毒性以增強(qiáng)核心競(jìng)爭(zhēng)力。近20年來(lái)，紫杉烷的構(gòu)效關(guān)系和結(jié)構(gòu)優(yōu)化研究取得了顯著的進(jìn)展。研究表明 13位側(cè)鏈的結(jié)構(gòu)與藥效、毒性和基于微管蛋白變異的耐藥性相關(guān)，2，4，7，10位的側(cè)鏈結(jié)構(gòu)與藥效，毒性和基于Pgp的耐藥性相關(guān)。在此基礎(chǔ)上研發(fā)的新一代紫杉烷第二代紫杉烷，藥效和毒性與第一代紫杉烷(紫杉醇和多西紫杉醇)相當(dāng)，但具有抗藥性；第三代紫杉烷不僅具有顯著的抗耐藥性，而且藥效比第一代紫杉烷高1 2個(gè)數(shù)量級(jí)，毒性也顯著降低。至2006年止，進(jìn)入或經(jīng)過(guò)臨床評(píng)價(jià)的新一代紫杉烷有DJ927、XRP-6258、 XRP-9881、IDN5109、BMS184467、BMS188797、BMS275183、MAC-321。遺憾的是第三代紫杉燒并沒(méi)有在人體上再現(xiàn)其在小鼠上表現(xiàn)的巨大潛力，目前最有希望成藥的僅有第二代紫杉烷 XRP9881 (Iarotaxel)，其具有抗PgP耐藥性，可口服給藥，毒性與紫杉醇相當(dāng)，對(duì)耐藥患者的有效率為19%，對(duì)非耐藥患者的有效率為42%，可用于紫杉醇治療后復(fù)發(fā)或/和轉(zhuǎn)移的

研究發(fā)現(xiàn)，Iarotaxel的水溶性和脂溶性都較差，水中溶解度比Iarotaxel還小。 同為紫杉烷類藥物，其在結(jié)構(gòu)上和紫杉醇及多西他賽極為相似，但紫杉醇及多西他賽市售注射液主藥是通過(guò)加入助溶劑Cremophor EL和聚山梨酯80。臨床研究表明=CremophorEL不僅具有誘導(dǎo)超敏反應(yīng)和神經(jīng)毒性，而且給紫杉醇帶來(lái)極為不利的藥代動(dòng)力學(xué)改變，又由于嚴(yán)重的外周神經(jīng)毒，使用劑量上受到限制。而用聚山梨酯80作為潛溶劑增溶多西他賽，發(fā)現(xiàn)其和多種毒性反應(yīng)有關(guān)，其中文獻(xiàn)報(bào)道較多的包括有嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)及周圍神經(jīng)病變。因此，在臨床使用時(shí)，劑量也受到極大的限制，患者需提前口服皮質(zhì)激素和抗組織胺類藥物加以預(yù)防，且需謹(jǐn)慎監(jiān)測(cè)整個(gè)用藥過(guò)程，對(duì)已發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)的患者給予注射腎上腺素對(duì)癥治療。加之紫杉醇是耐藥蛋白PgP的底物；對(duì)于紫杉醇和多西他賽，PgP作為藥物流出泵而發(fā)揮作用。其中，PgP是由多藥抗藥基因編碼的，經(jīng)紫杉醇治療后多數(shù)腫瘤均產(chǎn)生耐藥性，并且紫杉醇的耐藥性還涉及微管蛋白變異。但在Iarotaxel的臨床前的研究中發(fā)現(xiàn)=Iarotaxel僅很小程度的被PgP識(shí)別，所以預(yù)期larotaxe能對(duì)一下腫瘤發(fā)揮作用自身含有大量抗藥基因和PgP的腫瘤，例如結(jié)腸癌，腎癌，胰腺癌等，以及抗多西他賽的腫瘤。另外，這個(gè)化合物能穿過(guò)血腦屏障，這可能是由于Iarotaxel被PgP減少識(shí)別造成的。目前，關(guān)于Iarotaxel的研究國(guó)外很多，但在國(guó)內(nèi)還沒(méi)見(jiàn)到相關(guān)的報(bào)道，國(guó)外對(duì)其在臨床上的推薦給藥計(jì)量和給藥方式，常見(jiàn)的毒性反應(yīng)以及解決辦法都進(jìn)行的深入系統(tǒng)的研究，如臨床推薦給藥計(jì)量為60mg/m2，最大耐受計(jì)量為 75mg/m2，給藥方式為1小時(shí)靜脈輸注給藥，三個(gè)星期為以療程，臨床用藥常見(jiàn)毒性為血液學(xué)方面的，如嗜中性白血球減少癥，血小板減少癥，高膽紅素血癥等，而非血液學(xué)方面的毒性一般是較輕微的，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)疲勞、惡心，嘔吐，非特異性發(fā)燒等。磷脂特殊的理化特性和低毒性決定了其可以作為脂溶性藥物，特別是抗癌藥物的良好載體，而近些年對(duì)磷脂復(fù)合物的相關(guān)研究也日益廣泛和深入，磷脂復(fù)合物是藥物和磷脂分子通過(guò)電荷遷移作用而形成的較為穩(wěn)定的化合物或絡(luò)合物。由于磷脂分子的兩親性， 其不僅是非常有效的乳化劑，更是細(xì)胞膜的重要組成部分。藥物通過(guò)與磷脂的極性基團(tuán)相互作用而被固定，而磷脂的2個(gè)長(zhǎng)脂肪酸鏈不參與復(fù)合反應(yīng)，可自由移動(dòng)，包裹了磷脂的極性部位，形成一個(gè)親脂性的表面。因此，磷脂復(fù)合物能夠增強(qiáng)母體藥物的水溶性和脂溶性， 增加生物膜親和性和透過(guò)性，從而顯著提高生物利用度。水溶解性能的改變與復(fù)合物的無(wú)定形特征及磷脂在水中形成膠束有關(guān)；而脂溶性的改變，不僅與復(fù)合物的無(wú)定形有關(guān)，還與復(fù)合物中藥物的極性端與磷脂相互作用而受到一定的掩蔽有關(guān)。通過(guò)磷脂復(fù)合物來(lái)改善母體藥物的某些理化性質(zhì)而達(dá)到預(yù)期目的的實(shí)例很多，如在燈盞花素的結(jié)構(gòu)中，羧基上的氧以及酚羥基上的氧均具有負(fù)電性，均可與卵磷脂中帶正電性的季胺氮產(chǎn)生偶極一偶極作用力形成復(fù)合物；葛根素和卵磷脂通過(guò)極性部位間的范德華力而結(jié)合形成磷脂復(fù)合物。藥物與磷脂形成復(fù)合物后，理化性質(zhì)、生物學(xué)活性等都會(huì)發(fā)生很大程度的改變。理化性質(zhì)的改變?nèi)缰苄悦黠@增強(qiáng)，熔點(diǎn)、吸收系數(shù)、光譜特征等也會(huì)發(fā)生明顯變化等。生物學(xué)活性的改變?nèi)缌字瑥?fù)合物的活性一般比母體藥物更強(qiáng)、生物利用度更高、毒副作用更小。在本研究中，磷脂作為主要的乳化劑，能將藥物包裹于脂肪乳劑的脂質(zhì)核心部分， 由于該結(jié)構(gòu)亦類似于微球，因此脂質(zhì)微球(Lipid Microsphere,LM)的名稱也應(yīng)運(yùn)而生。一般認(rèn)為脂質(zhì)微球是通過(guò)將藥物溶于脂肪油中，并經(jīng)磷脂乳化分散于水相后制成，是一種以脂肪油為軟基質(zhì)而被磷脂膜包封的微粒分散體系，平均粒徑在200nm左右。LM中藥物部分包裹于油相或界面膜中，避免了與體液的直至接觸，因而降低了藥物自身可能產(chǎn)生的局部及血管刺激性。另外，藥物在體內(nèi)是由油相中緩慢釋放，可避免藥物在注射用時(shí)由于初期濃度過(guò)高而引起的不良反應(yīng)。粒徑在200nm左右的小微粒能被機(jī)體的網(wǎng)狀組織系統(tǒng)的吞噬細(xì)
5胞所吞噬而滯留在網(wǎng)狀組織系統(tǒng)(如肝臟、肺等)中，具有靶向性，這種特點(diǎn)對(duì)于抗腫瘤藥物提高藥效、降低毒副作用尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決紫杉醇和多西他賽所面臨的問(wèn)題以進(jìn)一步提高療效降低毒性，全球的科學(xué)家進(jìn)行了廣泛深入的研究，內(nèi)容涉及紫杉醇新資源的尋找、開(kāi)發(fā)、結(jié)構(gòu)優(yōu)化、制劑改革等。 其中1、新一代紫杉烷Iarotaxel具有抗Pgp耐藥性，藥效和毒性與紫杉醇相當(dāng)，可用于紫杉醇和多西他賽治療后復(fù)發(fā)或/和轉(zhuǎn)移的患者；2、亞微乳劑是紫杉烷類抗癌藥目前交加的給藥形式，由于亞微乳劑和脂質(zhì)體均按淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)，可有效的提高主要臟器的血藥濃度， 減少患者刺激性增加耐受性。本發(fā)明的目的在于提供一種含有l(wèi)arotaxel磷脂復(fù)合物的脂質(zhì)微球注射液，其理化性質(zhì)符合靜脈用藥要求，不僅能進(jìn)行高溫滅菌而且長(zhǎng)期儲(chǔ)存物理化學(xué)穩(wěn)定性良好，并且血管刺激性小，提高患者順應(yīng)性，且提供一種Iarotaxel磷脂復(fù)合物以及其制造方法，該方法簡(jiǎn)單可行。其中，該注射液由Iarotaxel磷脂復(fù)合物、注射用油、乳化劑、穩(wěn)定劑、抗氧劑、 金屬螯合劑、等滲調(diào)節(jié)劑及注射用水組成，所述Iarotaxel磷脂復(fù)合物由larotaxel和注射用磷脂組成。本發(fā)明還提供了一種Iarotaxel磷脂復(fù)合物的制備方法，即將Iarotaxel和注射用磷脂加入到反應(yīng)溶劑中，加熱回流反應(yīng)，至溶液澄清透明，然后蒸發(fā)除去反應(yīng)溶劑，得到 Iarotaxel磷脂復(fù)合物。將Iarotaxel與適當(dāng)比例的磷脂制成磷脂復(fù)合物后，通過(guò)Iarotaxel和磷脂極性部位的結(jié)合，磷脂的碳鏈自由轉(zhuǎn)動(dòng)并包裹著Iarotaxel及磷脂的極性部分，這種結(jié)構(gòu)大大提高了 larotaxel脂質(zhì)微球注射液的穩(wěn)定性。經(jīng)高速攪拌和高壓均質(zhì)乳化制成脂質(zhì)微球注射液，藥物被包裹于油相或界面膜中，可以避免與血管內(nèi)壁直接接觸，從而降低藥物在注射部位所產(chǎn)生的刺激性及由此而引發(fā)的全身毒性，并且有類似脂質(zhì)體的靶向性和體內(nèi)分布特征，既降低血液及其他組織中的藥物濃度，又提高了療效，還可以降低其全身副作用。本發(fā)明通過(guò)將Iarotaxel脂質(zhì)微球注射液的pH控制在4_6，在此范圍內(nèi)藥物穩(wěn)定性良好，利于制劑的長(zhǎng)期放置。本發(fā)明通過(guò)將larotaxel和磷脂制備成磷脂復(fù)合物，使得Iarotaxel的脂溶性得以提高，載藥量增加的同時(shí)毒性降低，而且提高了制劑的穩(wěn)定性，所制備的Iarotaxel脂質(zhì)微球注射液在121°C高壓蒸汽滅菌IOmin后，物理、化學(xué)穩(wěn)定性均良好，三批樣品經(jīng)6士2°C 留樣6個(gè)月后，所考察項(xiàng)均符合要求。本發(fā)明提供了一種含有Iarotaxel磷脂復(fù)合物的脂質(zhì)微球注射液及其制備工藝， 工藝簡(jiǎn)單可行，同時(shí)也提高了制劑的穩(wěn)定性，利于臨床上的應(yīng)用及工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明提供了一種含有Iarotaxel磷脂復(fù)合物的脂質(zhì)微球注射液，其中，該注射液由larotaxel磷脂復(fù)合物、注射用油、乳化劑、穩(wěn)定劑、抗氧劑、等滲調(diào)節(jié)劑及注射用水組成，所述Iarotaxel磷脂復(fù)合物由Iarotaxel和注射用磷脂組成；該注射液組成的重量百分比為=Iarotaxel 0. 001% _1%、注射用磷脂1_7%、注射用油5-25%、乳化劑0. 2-0. 8%、 穩(wěn)定劑0. 02-0. 2%、抗氧劑0. 01-0. 5 %、等滲調(diào)節(jié)劑1. 5-3. 5 %，其余為注射用水；優(yōu)選為IarotaxelO. 05-0. 5%、注射用磷脂2-4. 5%、注射用油10-20%、乳化劑0. 2-0. 5%、穩(wěn)定劑 0. 05-0. 1%、抗氧劑0. 02-0. 1%、等滲調(diào)節(jié)劑2-3%，其余為注射用水。根據(jù)所述的脂質(zhì)微球注射液，所述注射用磷脂為大豆磷脂、蛋黃卵磷脂和合成磷脂中的一種或幾種的混合物。根據(jù)所述的脂質(zhì)微球注射液，所述注射用油為長(zhǎng)鏈甘油三酯和中鏈甘油三酯中的一種或幾種的混合物，優(yōu)選自大豆油、紅花油、沙棘油、月見(jiàn)草油、玉米油、鴉膽子油、椰子油、紫蘇油、葡萄籽油、橄欖油、蓖麻油、茶油、棉籽油和棕櫚油中的一種或幾種。根據(jù)所述的脂質(zhì)微球注射液，所述乳化劑為磷脂，吐溫(Tween)或普朗尼克 (poloxamer)，其中磷脂優(yōu)選為大豆磷脂、蛋黃卵磷脂、合成磷脂；吐溫優(yōu)選為吐溫20，吐溫 40，吐溫60，吐溫80，吐溫85或者是以上不同規(guī)格的任意比例混合物；普朗尼克優(yōu)選為普朗尼克F68根據(jù)所述的脂質(zhì)微球注射液，所述穩(wěn)定劑為油酸。根據(jù)所述的脂質(zhì)微球注射液，所述等滲調(diào)節(jié)劑為注射用甘油。根據(jù)所述的脂質(zhì)微球注射液，所述抗氧劑為L(zhǎng)-半胱氨酸、抗壞血酸、dl-α-生育酚、亞硫酸鈉和無(wú)水亞硫酸氫鈉中的一種或幾種的混合物。本發(fā)明還提供了一種Iarotaxel磷脂復(fù)合物的制備方法，其中，將Iarotaxel和注射用磷脂加入到反應(yīng)溶劑中，加熱回流反應(yīng)，至溶液澄清透明，然后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或冷凍干燥除去反應(yīng)溶劑，得到Iarotaxel磷脂復(fù)合物。根據(jù)所述的制備方法，所述的larotaxel磷脂復(fù)合物中，Iarotaxel與注射用磷脂的質(zhì)量比為1 1-1 50，優(yōu)選為1 20-1 40，在此范圍內(nèi)能夠確保形成穩(wěn)定的磷脂復(fù)合物；所述反應(yīng)溶劑優(yōu)選為無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚、氯仿和乙酸乙酯中的一種或幾種， 進(jìn)一步優(yōu)選為無(wú)水乙醇；反應(yīng)溫度優(yōu)選為20-60°C ；更優(yōu)選為20-40°C ；反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為 0. 5-2. Ohr，更優(yōu)選為0. 5-1. ^ir,通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法或真空干燥法來(lái)除去有機(jī)溶劑。本發(fā)明還提供了一種含有l(wèi)arotaxel磷脂復(fù)合物的脂質(zhì)微球注射液的制備方法， 該方法包括下述工藝步驟①將水溶性乳化劑、等滲調(diào)節(jié)劑加入到適量注射用水中，加熱至60-80°C，攪拌分散均勻得水相；②將處方量的Larotaxel的磷脂復(fù)合物、注射用油、油溶性乳化劑、穩(wěn)定劑和抗氧劑在60-80°C溫度下加熱攪拌分散均勻得澄清的含藥油相；③在組織搗碎機(jī)攪拌下，將載藥油相緩慢加入水相中或?qū)⑺嗉尤氲接拖嘀?，待完全加入后，?000 20,000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢? 5分鐘，即得初乳。④將初乳冷卻至室溫，用注射用水定容至全量，用氫氧化鈉或鹽酸溶液來(lái)調(diào)節(jié)PH 值至4-6，轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中，在600 1200bar，30°C 60°C條件下均質(zhì)5 10次。⑤裝瓶，充氮?dú)?，軋蓋密封，121°C高壓蒸汽滅菌10分鐘，然后在冷水浴中迅速冷卻。優(yōu)選的制備工藝包括如下步驟①將水溶性乳化劑、等滲調(diào)節(jié)劑加入到適量注射用水中，加熱至75°C，攪拌分散均勻得水相；②將處方量的Larotaxel的磷脂復(fù)合物、注射用油、油溶性乳化劑、穩(wěn)定劑和抗氧劑在75°C溫度下加熱攪拌分散均勻得澄清的含藥油相；③在組織搗碎機(jī)攪拌下，將載藥油相緩慢加入水相中或?qū)⑺嗉尤氲接拖嘀?，待完全加入后，?5000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢? 5分鐘，即得初乳。④將初乳冷卻至室溫，用氫氧化鈉或鹽酸溶液來(lái)調(diào)節(jié)pH值至5. 0左右，用注射用水定容至全量，轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中，在700 800bar，30°C 45°C條件下均質(zhì)5 10次。⑤裝瓶，充氮?dú)?，軋蓋密封，121°C高壓蒸汽滅菌10分鐘，然后在冷水浴中迅速冷卻。本發(fā)明的特點(diǎn)是所述制劑是使Larotaxel與磷脂復(fù)合形成磷脂復(fù)合物，以提高 Larotaxel的脂溶性和水溶性，將其載入磷脂層中，實(shí)現(xiàn)界面膜載藥，然后通過(guò)做成脂質(zhì)微球來(lái)達(dá)到藥物的傳遞，和市售傳統(tǒng)注射液相比，不但載藥量增加，毒性顯著降低，而且制劑穩(wěn)定性顯著提高，利于臨床應(yīng)用。脂質(zhì)微球(Lipidmicrosphere，LM)是通過(guò)將藥物溶解于脂肪油中，經(jīng)磷脂乳化分散于水相后制成的脂質(zhì)乳劑，是一種以脂肪油為軟基質(zhì)而被磷脂膜包封的水包油型微粒體分散系，其平均粒徑在200nm左右。具有許多物理化學(xué)以及生物學(xué)上的優(yōu)點(diǎn)1、是脂溶性藥物的良好載體。臨床很多藥物水溶性差，必須依靠有機(jī)溶劑或者潛溶劑才能發(fā)揮作用，而有機(jī)溶劑和潛溶劑不僅本身具有一定得毒性，還可能干擾藥物作用， 影響藥物療效。2、能夠有效增加藥物的穩(wěn)定性。含藥脂質(zhì)微球中有相當(dāng)一部分藥物分布在油相或油水界面膜中，避免了直接與水接觸。對(duì)于易于水解或?qū)H變化敏感的藥物，這種隔離起到了增加穩(wěn)定性的作用。3、LM中藥物部分包裹于油相或界面膜中，避免了與體液的直接接觸，因而降低了藥物自身可能產(chǎn)生的局部及血管刺激性，增加了臨床用藥的安全性。另外，藥物在體內(nèi)是從油相中緩慢釋放，可避免藥物在注射用時(shí)由于初期濃度過(guò)高而引起的不良反應(yīng)，達(dá)到緩釋的效果。4、粒徑在200nm左右的小微粒能夠被機(jī)體的網(wǎng)狀組織系統(tǒng)的吞噬細(xì)胞所吞噬而滯留在網(wǎng)狀組織系統(tǒng)(如肝臟、肺等)中，具有靶向性，這種特點(diǎn)對(duì)于抗腫瘤藥物提高藥效， 降低毒副作用尤為重要。本發(fā)明是利用上述原理，先將Iarotaxel與適當(dāng)比例的磷脂制成磷脂復(fù)合物，通過(guò)larotaxel和磷脂極性部位的結(jié)合，磷脂的碳鏈自由轉(zhuǎn)動(dòng)并包裹著Iarotaxel及磷脂的極性部分而使其穩(wěn)定，然后制備成脂質(zhì)微球注射液，達(dá)到了預(yù)期的效果。Ularotaxel與磷脂形成復(fù)合物后，提高了 Iarotaxel的溶解性和分散性，提高其親脂性，最終脂質(zhì)微球注射液的包封率和穩(wěn)定性都得到顯著提高。2、磷脂復(fù)合物的制備顯著提高了 Iarotaxel的載藥量由于Iarotaxel與磷脂之間的相互作用，在一定程度上改變了其原有的性質(zhì)，界面膜載藥，溶解度的增加，所以載藥量和同類的市售注射液相比，有很大的提高，這不僅便于臨床使用，更重要的是顯著降低毒性。3、磷脂復(fù)合物的制備也顯著提高了制劑的物理和化學(xué)穩(wěn)定性。本發(fā)明所制備的 Iarotaxel脂質(zhì)微球注射液在121 °C高壓蒸汽滅菌IOmin后，物理、化學(xué)穩(wěn)定性均良好，樣品經(jīng)6個(gè)月6士2°C留樣試驗(yàn)，各項(xiàng)指標(biāo)物理、化學(xué)穩(wěn)定性均未發(fā)生顯著改變。
4、處方及制備工藝的優(yōu)化，使制得的制劑平均粒徑在170nm左右，容易被機(jī)體的網(wǎng)狀組織系統(tǒng)的吞噬細(xì)胞所吞噬而滯留在網(wǎng)狀組織系統(tǒng)(如肝臟、肺等)中，具有靶向性， 這種特點(diǎn)對(duì)于抗腫瘤藥物提高藥效，降低毒副作用尤為重要。而且，藥物在體內(nèi)是從油相中緩慢釋放，可避免藥物在注射用時(shí)由于初期濃度過(guò)高而引起的不良反應(yīng)，達(dá)到緩釋的效果。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1磷脂復(fù)合物的制備制備Ilarotaxel-蛋黃卵磷脂復(fù)合物取larotaxel lg,蛋黃卵磷脂20g，緩慢加入氯仿20ml，使磷脂和藥物浸沒(méi)在氯仿中，在40°C條件下加熱回流反應(yīng)2小時(shí)，得到澄清反應(yīng)溶液，減壓干燥除去氯仿，即得載藥磷脂復(fù)合物，密閉包裝，放入冰箱冷藏保存。制備21arotaxel-大豆卵磷脂復(fù)合物取larotaxel lg，大豆磷脂50g，加入乙酸乙酯25ml，使磷脂和藥物浸沒(méi)在乙酸乙酯中，40°C條件下加熱回流反應(yīng)0.5小時(shí)后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙酸乙酯，即得載藥大豆磷脂復(fù)合物，密閉包裝，放入冰箱冷藏保存。制備31arotaxel-大豆卵磷脂復(fù)合物取larotaxel lg，大豆磷脂40g，加入無(wú)水乙醇30ml，使磷脂和藥物浸沒(méi)在無(wú)水乙醇中，60°C條件下加熱回流反應(yīng)1小時(shí)后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去無(wú)水乙醇，即得載藥大豆磷脂復(fù)合物，密閉包裝，放入冰箱冷藏保存。制備41arotaxel-合成磷脂復(fù)合物取larotaxel lg，合成磷脂lg，加入乙醚30ml，使磷脂和藥物浸沒(méi)在乙醚中，20°C 復(fù)合1小時(shí)后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醚，即得載藥合成磷脂復(fù)合物，密閉包裝，放入冰箱冷藏保存。實(shí)施例2 =Iarotaxel脂質(zhì)微球注射液(規(guī)格0. 01mg/ml)Larotaxel磷脂復(fù)合物(以 Larotaxel if )大豆油蛋黃卵磷脂(供注射用)甘油油酸F68注射用水制備方法Larotaxel磷脂復(fù)合物的制備將Larotaxel Ig與大豆卵磷脂30g置于圓底燒瓶中，緩慢加入乙醚，使磷脂和藥物浸沒(méi)在乙醚中，在60°C條件下加熱回流反應(yīng)2小時(shí)，得到澄清反應(yīng)溶液，蒸發(fā)揮干溶劑， 即得Larotaxel磷脂復(fù)合物。Larotaxel脂質(zhì)微球注射液制備工藝步驟如下(1)將注射用甘油、F68分散于適量注射用水中，至磁力攪拌器中加熱至75°C攪拌
0. 001% 5% 1. 0% 1. 5% 0. 02% 0. 2% 加至100%
9至全部溶解；(2)將處方量的油相及油酸加入到Iarotaxel磷脂復(fù)合物中，在75°C下攪拌至完全溶解，得到澄清的載藥油相。(3)將油相加入至水相中，置于高速組織搗碎機(jī)中，以15000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?-5分鐘。(4)以0. Imol · L—1鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至5. 0，注射用水定容至全量， 轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中，40°C下，以800bar壓力均質(zhì)6 10次。(5)裝瓶，封罐氮?dú)猓?21°C滅菌lOmin，冰水浴迅速降溫即得。實(shí)施例3 Iarotaxel脂質(zhì)微球注射液(規(guī)格10mg/ml)Larotaxel 磷脂復(fù)合物(以 Larotaxel 計(jì))油相(大豆油MCT= 7. 5 2. 5)25%
蛋黃卵磷脂(供注射用) 7 %油酸0.2%F680. 8%甘油3.5%注射用水加至100%制備方法Larotaxel磷脂復(fù)合物的制備取larotaxel lg,蛋黃卵磷脂35g，緩慢加入氯仿20ml，使磷脂和藥物浸沒(méi)在氯仿中，在60°C條件下加熱回流反應(yīng)2小時(shí)，得到澄清反應(yīng)溶液，減壓除去氯仿，即得載藥磷脂復(fù)合物，密閉包裝，放入冰箱冷藏保存。(1)將注射用甘油、F68分散于適量注射用水中，至磁力攪拌器中加熱至75°C攪拌至全部溶解；(2)將處方量的油相及油酸加入到larotaxel磷脂復(fù)合物中，在75°C下攪拌至完全溶解，得到澄清的載藥油相。(3)將油相加入至水相中，置于高速組織搗碎機(jī)中，以10000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?-5分鐘。(4)以0. Imol · L—1鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至5. 0，注射用水定容至全量， 轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中，40°C下，以800bar壓力均質(zhì)6 10次。(5)裝瓶，封罐氮?dú)猓?21°C滅菌lOmin，冰水浴迅速降溫即得。
實(shí)施例4 =Iarotaxel制劑的處方制備工藝(規(guī)格:2mg/ml)
Larotaxel磷脂復(fù)合物(以 Larotaxel 計(jì))0· 2%
油相(大豆油MCT = 5 5)10%
豆磷脂4. 0%
甘油2. 5%
油酸0. 05%
F680. 4%
注射用水加至100%
制備方法
Larotaxel磷脂復(fù)合物的制備
取larotaxel lg，大豆磷脂35g，加入無(wú)水乙醇30ml，使磷脂和藥物浸沒(méi)在無(wú)水乙醇中，40°C復(fù)合1小時(shí)后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去無(wú)水乙醇，即得載藥大豆磷脂復(fù)合物。(1)將注射用甘油、F68分散于適量注射用水中，至磁力攪拌器中加熱至75°C攪拌至全部溶解；(2)將處方量的油相及油酸加入到Iarotaxel磷脂復(fù)合物中，在75°C下攪拌至完全溶解，得到澄清的載藥油相。(3)將油相加入至水相中，置于高速組織搗碎機(jī)中，以12000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?-5分鐘。(4)以0. Imol -L"1鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至5. 0，注射用水注射用水定容至全量，轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中，40°C下，以800bar壓力均質(zhì)6 10次。(5)裝瓶，封罐氮?dú)猓?21°C滅菌lOmin，冰水浴迅速降溫即得。實(shí)施例5 =Iarotaxel脂質(zhì)微球注射液(規(guī)格lmg/ml)
0111]Larotaxel 磷脂復(fù)合物(以0.
0112]Larotaxel if )
0113]油相(大豆油MCT= 2. 57.5) 10%
0114]卵磷脂3.5%
0115]甘油2.5%
0116]油酸0.05%
0117]F680. 4%
0118]注射用水加至100%
0119]制備方法
0120]Larotaxel磷脂復(fù)合物的制備取larotaxel lg，合成磷脂35g，加入乙酸乙酯30ml，使磷脂和藥物浸沒(méi)在乙酸乙酯中，60°C復(fù)合1小時(shí)后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙酸乙酯，即得載藥合成磷脂復(fù)合物(1)將注射用甘油、F68分散于適量注射用水中，至磁力攪拌器中加熱至75°C攪拌至全部溶解；(2)將處方量的油相及油酸加入到larotaxel磷脂復(fù)合物中，在75°C下攪拌至完全溶解，得到澄清的載藥油相。(3)將油相加入至水相中，置于高速組織搗碎機(jī)中，以15000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?-5分鐘。(4)以0. Imol · L—1氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至5. 0，注射用水定容至全量， 轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中，40°C下，以800bar壓力均質(zhì)6 10次。
0126](5)裝瓶，封罐氮?dú)猓?21°C滅菌lOmin，冰水浴迅速降溫即得。0127]實(shí)施例6 =Iarotaxel脂質(zhì)微球注射液(規(guī)格:2mg/ml)0128]larotaxel 1磷脂復(fù)合物(以0. 2%0129]Larotaxel if )0130]油相(大豆油MCT = 2. 5 7. 5)10%0131]豆磷脂3. 0%0132]甘油2. 5%0133]油酸0. 06%0134]F680. 4%0135]注射用水加至100%
制備方法Larotaxel磷脂復(fù)合物的制備將Larotaxel Ig與合成磷脂30g置于圓底燒瓶中，緩慢加入40ml乙醚，使磷脂和藥物浸沒(méi)在乙醚中，在20°C條件下加熱回流反應(yīng)2. Ohr，得到澄清反應(yīng)溶液，真空干燥除去乙醚，即得Larotaxel磷脂復(fù)合物.(1)將注射用甘油、F68分散于適量注射用水中，至磁力攪拌器中加熱至75°C攪拌至全部溶解；(2)將處方量的油相及油酸加入到Iarotaxel磷脂復(fù)合物中，在75°C下攪拌至完全溶解，得到澄清的載藥油相。(3)將油相加入至水相中，置于高速組織搗碎機(jī)中，以18000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?-5分鐘。(4)以0. Imol · L—1氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至5. 0，注射用水定容至全量， 轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中，40°C下，以800bar壓力均質(zhì)6 10次。(5)裝瓶，封罐氮?dú)猓?21°C滅菌lOmin，冰水浴迅速降溫即得。實(shí)施例7 =Iarotaxel脂質(zhì)微球注射液(規(guī)格2mg/ml)Larotaxel 1 磷脂復(fù)合物(以0.2%Larotaxel 計(jì))油相(大豆油紅花油=5 5)10%豆磷脂3.5%甘油2.5%油酸0.06%F680. 4%注射用水加至100%制備方法Larotaxel磷脂復(fù)合物的制備取larotaxellg，大豆磷脂18g，加入無(wú)水乙醇20ml，使磷脂和藥物浸沒(méi)在無(wú)水乙醇中，60°C復(fù)合1小時(shí)后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去無(wú)水乙醇，即得載藥大豆磷脂復(fù)合物。(1)將注射用甘油、F68分散于適量注射用水中，至磁力攪拌器中加熱至75°C攪拌至全部溶解；(2)將處方量的油相及油酸加入到larotaxel磷脂復(fù)合物中，在75°C下攪拌至完全溶解，得到澄清的載藥油相。(3)將油相加入至水相中，置于高速組織搗碎機(jī)中，以20000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?-5分鐘；(4)以0. Imol · L—1氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至5. 0，注射用水定容至全量， 轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中，40°C下，以800bar壓力均質(zhì)6 10次；(5)裝瓶，封罐氮?dú)猓?21°C滅菌lOmin，冰水浴迅速降溫即得。實(shí)施例8 =Iarotaxel脂質(zhì)微球注射液(規(guī)格％ig/ml)larotaxel 1 磷脂復(fù)合物(以0.4%Larotaxel if )油相(大豆油MCT= 2. 5 7.5)10%卵磷脂3.5%
甘油 2. 5%油酸0. 06%F68 0. 2% 注射用水
加至100%制備方法Iarotaxel磷脂復(fù)合物的制備將larotaxel Ig與合成磷脂35g置于圓底燒瓶中，緩慢加入丙酮，使磷脂和藥物浸沒(méi)在丙酮中，在40°C條件下加熱回流反應(yīng)ljhr，得到澄清反應(yīng)溶液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮干丙酮，即得larotaxel磷脂復(fù)合物。含有l(wèi)arotaxel磷脂復(fù)合物的脂質(zhì)微球注射液的制備(1)將注射用甘油、F68分散于適量注射用水中，至磁力攪拌器中加熱至75°C攪拌至全部溶解；(2)將處方量的油相及油酸加入到larotaxel磷脂復(fù)合物中，在75°C下攪拌至完全溶解，得到澄清的載藥油相。(3)將油相加入至水相中，置于高速組織搗碎機(jī)中，以15000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?-5分鐘；(4)以0. Imol · L—1氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7. 0，注射用水定容至全量， 轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中，40°C下，以800bar壓力均質(zhì)6 10次；(5)裝瓶，封罐氮?dú)猓?21°C滅菌lOmin，冰水浴迅速降溫即得。實(shí)施例9 =Iarotaxel脂質(zhì)微球注射液(規(guī)格％ig/ml)larotaxel 1 磷脂復(fù)合物(以0.4%Larotaxel 計(jì))油相(大豆油MCT= 2. 5 7.5)10%卵磷脂3.5%甘油2.5%油酸0.06%F680. 4%注射用水加至100%制備方法larotaxel磷脂復(fù)合物的制備將larotaxel Ig與卵磷脂35g置于圓底燒瓶中，緩慢加入無(wú)水乙醇，使磷脂和藥物浸沒(méi)在無(wú)水乙醇中，在60°C條件下加熱回流反應(yīng)》ir，得到澄清反應(yīng)溶液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮干無(wú)水乙醇，即得多西他賽磷脂復(fù)合物。含有l(wèi)arotaxel磷脂復(fù)合物的脂質(zhì)微球注射液的制備(1)將注射用甘油、F68分散于適量注射用水中，至磁力攪拌器中加熱至75°C攪拌至全部溶解；(2)將處方量的油相及油酸加入到larotaxel磷脂復(fù)合物中，在75°C下攪拌至完全溶解，得到澄清的載藥油相。(3)將油相加入至水相中，置于高速組織搗碎機(jī)中，以18000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?-5分鐘；(4)以0. Imol · L—1氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7. 5，注射用水定容至全量，轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中，40°C下，以800bar壓力均質(zhì)6 10次；(5)裝瓶，封罐氮?dú)猓?21°C滅菌lOmin，冰水浴迅速降溫即得。實(shí)施例10 =Iarotaxel脂質(zhì)微球注射液的穩(wěn)定性試驗(yàn)采用長(zhǎng)期放置的方法來(lái)考察Iarotaxel脂質(zhì)微球注射液(采用實(shí)施例4，6和8) 的穩(wěn)定性，將制得的Iarotaxel脂質(zhì)微球注射液放置于溫度6 士 2°C的藥物穩(wěn)定試驗(yàn)箱中， 在試驗(yàn)期間分別于第O個(gè)月、1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月取樣一次，按藥典中的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢查供試品的外觀、粒徑、含量、PH值、包封率及有關(guān)物質(zhì)情況。結(jié)果見(jiàn)表1，2，3.表1 實(shí)施例4制得的Iarotaxel脂質(zhì)微球注射液加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種含有Larotaxel磷脂復(fù)合物的脂質(zhì)微球注射液，其特征在于該注射液由 Larotaxel磷脂復(fù)合物、注射用油、乳化劑、穩(wěn)定劑、抗氧劑、等滲調(diào)節(jié)劑及注射用水組成， 所述Larotaxel磷脂復(fù)合物由Iarotaxel和注射用磷脂組成；該注射液組成的重量百分比為L(zhǎng)arotaxel 磷脂復(fù)合物(以 Larotaxel 計(jì))0· 001% _1%、注射用磷脂1_7%、注射用油5-25%、乳化劑0. 2-0. 8%,穩(wěn)定劑 0. 02-0. 2%,抗氧劑 0. 01-0. 5%,等滲調(diào)節(jié)劑1. 5-3. 5%其余為注射用水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球注射液，特征在于所述注射用磷脂為大豆磷脂、蛋黃卵磷脂和合成磷脂中的一種或幾種的混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球注射液，特征在于所述注射用油為長(zhǎng)鏈甘油三酯和中鏈甘油三酯中的一種或幾種的混合物；所述乳化劑為磷脂，吐溫(Tween)或普朗尼克 (poloxamer)；所述的穩(wěn)定劑為油酸；所述的等滲調(diào)節(jié)劑為注射用甘油；所述的抗氧劑為 L-半胱氨酸、抗壞血酸、dl-α-生育酚、亞硫酸鈉和無(wú)水亞硫酸氫鈉中的一種或幾種的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的脂質(zhì)微球注射液，特征在于所述注射用油為選自由大豆油、 紅花油、沙棘油、月見(jiàn)草油、玉米油、鴉膽子油、椰子油、紫蘇油、葡萄籽油、橄欖油、蓖麻油、 茶油、棉籽油和棕櫚油中的一種或幾種；所述磷脂選自大豆磷脂、蛋黃卵磷脂、合成磷脂； 吐溫選自吐溫20，吐溫40，吐溫60，吐溫80，吐溫85，或者是以上不同規(guī)格的任意比例混合物；所述的普朗尼克為普朗尼克F68。
5.一種Larotaxel磷脂復(fù)合物的制備方法，特征在于按照處方量稱取Larotaxel和磷脂，將其加到有機(jī)溶劑中，20 60°C加熱回流0. 5 2小時(shí)，至溶液澄清透明。取出溶液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或真空干燥以除去有機(jī)溶劑，即得Larotaxel磷脂復(fù)合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，特征在于所述的Larotaxel磷脂復(fù)合物中， Larotaxel與注射用磷脂的質(zhì)量比為1 1_1 50。反應(yīng)溶劑為無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚、氯仿和乙酸乙酯中的一種或幾種；反應(yīng)溫度為20-60°C ；反應(yīng)時(shí)間0. 5-2. O小時(shí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，特征在于所述的Larotaxel磷脂復(fù)合物中， Larotaxel與注射用磷脂的質(zhì)量比優(yōu)選為1 20_1 40。反應(yīng)溶劑優(yōu)選為無(wú)水乙醇；反應(yīng)溫度優(yōu)選為20-40°C ；反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為0. 5-1. 5小時(shí)。
8.—種權(quán)利要求1所述的含有Iarotaxel磷脂復(fù)合物的脂質(zhì)微球注射液的制備方法， 其特征在于，該方法包括下述工藝步驟①將水溶性乳化劑、等滲調(diào)節(jié)劑加入到適量注射用水中，加熱至60-80°C，攪拌分散均勻得水相；②將處方量的Larotaxel的磷脂復(fù)合物、注射用油、油溶性乳化劑、穩(wěn)定劑和抗氧劑在 60-80°C溫度下加熱攪拌分散均勻得澄清的含藥油相；③在組織搗碎機(jī)攪拌下，將載藥油相緩慢加入水相中或?qū)⑺嗉尤氲接拖嘀?，待完全加入后，?000 20，000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢? 5分鐘，即得初乳。④將初乳冷卻至室溫，用注射用水定容至全量，用氫氧化鈉或鹽酸溶液來(lái)調(diào)節(jié)PH值至 4-6，轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中，在600 1200bar，30°C 60°C條件下均質(zhì)5 10次。⑤裝瓶，充氮?dú)?，軋蓋密封，121°C高壓蒸汽滅菌10分鐘，然后在冷水浴中迅速冷卻。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含有Larotaxel磷脂復(fù)合物的脂質(zhì)微球注射液及其制備方法。本發(fā)明注射液由Larotaxel磷脂復(fù)合物、注射用油、乳化劑、穩(wěn)定劑、抗氧劑、等滲調(diào)節(jié)劑及注射用水組成，所述Larotaxel磷脂復(fù)合物由larotaxel和注射用磷脂組成；該注射液組成的重量百分比為larotaxel 0.001％-1％、注射用磷脂1-7％、注射用油5-25％、乳化劑0.2-0.8％、穩(wěn)定劑0.02-0.2％、抗氧劑0.01-0.5％、等滲調(diào)節(jié)劑1.5-3.5％，其余為注射用水。本發(fā)明所述的Larotaxel脂質(zhì)微球注射液采用磷脂復(fù)合物為載藥形式，明顯提高了載藥量，且藥物90％以上被包裹在脂質(zhì)微球的油相及油水接面膜中，同時(shí)也提高了藥物在制劑中的溶解性能和穩(wěn)定性，還降低了藥物的靜脈刺激性和毒性，并增強(qiáng)了其抗腫瘤療效。本制劑作為一種抗腫瘤的制劑，靜脈輸注給藥，具有低刺激性、低毒性、高效性、靶向性。
文檔編號(hào)A61K47/48GK102210652SQ201010143679
公開(kāi)日2011年10月12日 申請(qǐng)日期2010年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月6日
發(fā)明者劉軍鋒, 劉珂, 唐星, 李國(guó)飛 申請(qǐng)人:山東靶點(diǎn)藥物研究有限公司