一氧化氮供體型法尼基硫代水楊酸衍生物、其制備方法及其醫(yī)藥用途的制作方法

文檔序號：1182891閱讀：192來源：國知局

專利名稱：一氧化氮供體型法尼基硫代水楊酸衍生物、其制備方法及其醫(yī)藥用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及藥物領域，具體涉及一類一氧化氮供體型法尼基硫代水楊酸衍生物及其藥學上可接受的鹽，它們的制備方法，含有這些衍生物的藥用組合物以及它們的醫(yī)藥用途，特別是在制備抗腫瘤藥物中的應用。

背景技術：
全反式法尼基硫代水楊酸(簡稱FTA，商品名Salirasib)作為新的基于法尼基轉移酶的Ras蛋白抑制劑，能夠競爭性取代F-Ras和F-Ras突變蛋白與半乳凝素結合，抑制由Ras引發(fā)下游信號通路(包括Raf和P13K信號通路)和mTOR(腫瘤發(fā)生的刺激器，它能夠依靠或者獨立地打開P13K信號通路)，從而抑制腫瘤細胞的生長。研究表明，F(xiàn)TA可以抑制多種腫瘤(腦膠質瘤、肝癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、結腸癌等)細胞增殖及遷移(Haklai，R.；Elad-Sfadia，G.；Egozi，Y.et al.Cancer Chemother Pharmacol，2008，61(1)89-96；Tsimberidou，A.M.；Rudek，M.A.；Hong，D.et al.Cancer Chemother Pharmacol，2009，65(2)235-241；Zundelevich，A.；Elad-Sfadia，G.；Haklai，R.et al.Mol Cancer Ther，2007，6(6)1765-1773)。目前FTA治療肺癌和胰腺癌的II期臨床研究正在進行中。

法尼基硫代水楊酸(FTA，Salirasib) 一氧化氮(NO)是哺乳動物體內重要的信使物質及效應分子。近年來，NO在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和死亡中的作用已成為腫瘤研究與治療的熱點之一(Mocellin S.Curr Cancer DrugTargets，2009，9(2)214-236；Coulter JA，McCarthy HO，Xiang J，et al.Nitric Oxide，2008，19(2)192-198)。大量研究表明，體內持續(xù)低濃度的NO可以促進細胞的生長，抑制細胞凋亡；而高濃度的NO則產(chǎn)生細胞毒性，誘導腫瘤細胞凋亡，阻止腫瘤細胞的擴散和轉移(Huerta S，Chilka S，Bonavida B.Int J Oncol，2008，33(5)909-927)。
NO供體是指一類在體內經(jīng)酶或非酶作用釋放一定量NO的化合物。呋咱氮氧化物(Furoxan)是一類重要的NO供體，由其產(chǎn)生的高濃度NO具有抗腫瘤活性(Chen L，Zhang Y，Kong X，et al.J Med Chem，2008，51(15)4834-4838)。
為獲得比FTA抗腫瘤活性更優(yōu)的化合物，我們開展了FTA的結構修飾研究。本發(fā)明公開了一類具有藥用價值的呋咱氮氧化物類NO供體型FTA衍生物及其藥學上可接受的鹽，目前尚未見對此類化合物的任何報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明首次公開了一類具有抗腫瘤活性的呋咱氮氧化物類NO供體型FTA衍生物及其藥學上可接受的鹽、其制備方法及其醫(yī)藥用途。藥理實驗結果表明，本發(fā)明的FTA衍生物能保留FTA的Ras蛋白抑制活性，同時釋放高濃度NO，誘導細胞凋亡，增強對癌細胞增殖的抑制作用，較FTA具有更優(yōu)良的抗腫瘤活性，因此，該類化合物可能適用于治療臨床上多種惡性腫瘤。
本發(fā)明公開的新化合物是通式I、II所示的FTA衍生物及其藥學上可接受的鹽
通式I中X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)CH2-，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-，-PhCH2-，-(CH2CH2OH)CH2CH2-，-(CH2)2NH(CH2)2-，-(CH2)2NBoc(CH2)2-，-(CH3)CH2CH2-，-(CH2CH2)2NCH2CH2-，-(CH2CH2)2CH(CH2)n-，n＝0～2，-(CH2CH2CH2)CHCH2-，-CH2CH＝CHCH2-或-CH2C≡CCH2-；
通式II中-NH-A-CO-代表甘氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、L-或D-型丙氨酸、L-或D-型纈氨酸、L-或D-型亮氨酸、L-或D-型異亮氨酸、L-或D-型甲硫氨酸、L-或D-型半胱氨酸、L-或D-型苯丙氨酸、L-或D-型酪氨酸、L-或D-型色氨酸、L-或D-型精氨酸、L-或D-型脯氨酸、L-或D-型組氨酸殘基；X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)CH2-，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-，-PhCH2-，-(CH2CH2OH)CH2CH2-，-(CH2)2NH(CH2)2-，-(CH2)2NBoc(CH2)2-，-(CH3)CH2CH2-，-(CH2CH2)2NCH2CH2-，-(CH2CH2)2CH(CH2)n-，n＝0～2，-(CH2CH2CH2)CHCH2-，-CH2CH＝CHCH2-或-CH2C≡CCH2-。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物為通式I中所示的FTA衍生物及其醫(yī)學上可接受的鹽X代表-O-，-N-或-NH-；R 代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-，-(CH2CH2OH)CH2CH2-，-(CH2)2NH(CH2)2-，-(CH2)2NBoc(CH2)2-，-(CH3)CH2CH2-，-(CH2CH2)2CH-，-(CH2CH2)2NCH2CH2-，-(CH2CH2CH2)CHCH2-，-CH2CH＝CHCH2-或-CH2C≡CCH2-。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物為通式II中所示的FTA衍生物及其醫(yī)學上可接受的鹽-NH-A-CO-代表甘氨酸、β-丙氨酸、L-或D-型丙氨酸、L-或D-型苯丙氨酸、L-或D-型脯氨酸、L-或D-型亮氨酸殘基；X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-，-CH2CH＝CHCH2-或-CH2C≡CCH2-。
本發(fā)明進一步優(yōu)選的化合物為通式I中所示的FTA衍生物及其醫(yī)學上可接受的鹽X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-，-(CH2CH2OH)CH2CH2-，-(CH2)2NH(CH2)2-，-(CH2)2NBoc(CH2)2-，-(CH3)CH2CH2-，-(CH2CH2)2NCH2CH2-，-(CH2CH2)2CH-，-(CH2CH2CH2)CHCH2-或-CH2C≡CCH2-；本發(fā)明進一步優(yōu)選的化合物為通式II中所示的FTA衍生物及其醫(yī)學上可接受的鹽 -NH-A-CO-代表甘氨酸、β-丙氨酸、L-丙氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸或L-亮氨酸殘基；X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-或-CH2C≡CCH2-。
具體的講，通式I、II中所示的FTA衍生物優(yōu)選自下列化合物 N-{2-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙基}法尼基硫代水楊酸酰胺 (化合物編號I1，下同) N-{[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}哌嗪基法尼基硫代水楊酸亞酰胺(I2) {4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔基}法尼基硫代水楊酸丁酯(I3) N-{4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]哌啶基}法尼基硫代水楊酸亞酰胺(I4) N-{3-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙基}法尼基硫代水楊酸酰胺(I5) N-{N-甲基-2-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙基}法尼基硫代水楊酸亞酰胺(I6) {1-甲基-3-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]}法尼基硫代水楊酸丙酯(I7) N-{2-{[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]甲氧基}吡咯烷基}法尼基硫代水楊酸亞酰胺(I8) 2-{N-叔丁氧羰基-2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙胺基}法尼基硫代水楊酸乙酯(I9) 2-{[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙胺基}法尼基硫代水楊酸乙酯(I10) N-{N-[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]羥乙基}法尼基硫代水楊酸乙酰胺(I11) N-{乙酸-1-甲基-3-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II1) N-{乙酸-4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II2) N-{乙酸-4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II3) N-{乙酸-4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙酰胺}法尼基硫代水楊酸酰胺(II4) N-{2-丙酸-1-甲基-3-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II5) N-{2-丙酸-2-[[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II6) N-{2-四氫吡咯甲酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯}法尼基硫代水楊酸亞酰胺(II7) N-{2-丙酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II8) N-{2-丙酸-4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II9) N-{2-苯丙酸-2-[[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II10) N-{2-四氫吡咯甲酸-1-甲基-3-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯}法尼基硫代水楊酸亞酰胺(II11) N-{2-四氫吡咯甲酸-4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯}法尼基硫代水楊酸亞酰胺(II12) N-{2-四氫吡咯甲酸-2-[[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水楊酸亞酰胺(II13) N-{乙酸-2-[[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II14) N-{N′-[2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙基]-2-丙酰胺}法尼基硫代水楊酸酰胺(II15) N-{2-異己酸-1-甲基-3-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II16) N-{丙酸-2-[[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II17) 本發(fā)明的另一目的在于提供本發(fā)明通式I、II所述化合物的制備方法。
通式I中所示的FTA衍生物通過下列方式制備2-氧-3，4-二苯磺?；?1，2，5-噁二唑在氫氧化鈉作用下與烴基二醇或烴基醇胺反應生成呋咱氮氧化物(1)，F(xiàn)TA在N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和DMAP作用下與呋咱氮氧化物(1)反應制得通式I化合物，其合成路線如下
其中，X和R的定義如前所述。
呋咱氮氧化物(1)參考文獻(藥學學報，2001，36(11)821-826)制備。反應所采用的有機溶劑選自二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、1，2-二氯乙烷、苯、甲苯、二氧六環(huán)、DMF或上述溶劑的混合物，優(yōu)先采用無水二氯甲烷或無水四氫呋喃。
通式II中所示的FTA衍生物通過下列方式制備在DCC和DMAP作用下，呋咱氮氧化物(1)與Boc保護的氨基酸(2)反應生成中間體(3)，經(jīng)三氟乙酸(TFA)脫Boc得到化合物(4)，在1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)和DMAP作用下，與FTA反應制得，其合成路線如下
其中，X和R的定義如前所述。
反應所采用的有機溶劑選自二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、1，2-二氯乙烷、苯、甲苯、二氧六環(huán)、DMF或上述溶劑的混合物，優(yōu)先采用無水二氯甲烷、無水四氫呋喃或DMF。
本發(fā)明的再一目的是提供本發(fā)明通式I、II化合物在制備治療腫瘤藥物中的應用。
本發(fā)明的進一步目的在于提供一種含有效劑量的本發(fā)明通式I、II化合物和藥學上可接受的載體或輔料的藥物組合物。
本發(fā)明化合物可以單獨或與一種或一種以上的藥學上可接受的載體組合制成制劑以供給藥。例如，溶劑、稀釋劑等，可以用口服劑型給藥，如片劑、膠囊、可分散粉末、顆粒劑等。本發(fā)明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學領域中熟知的方法進行制備。這些藥用制劑中可以含有與載體組合的例如0.05％～90％重量的活性成分，更常見約15％～60％之間重量的活性成分。本發(fā)明化合物劑量可以是0.005～5000mg/kg/天，也可根據(jù)疾病嚴重程度或劑型的不同使用劑量超出此劑量范圍。
本發(fā)明化合物可以與其他抗腫瘤藥物例如烷化劑(如環(huán)磷酰胺或順鉑)、抗代謝藥(如5-氟尿嘧啶或羥基脲)、拓撲異構酶抑制劑(如喜樹堿)、有絲分裂抑制劑(如紫杉醇或長春堿)、DNA插入劑(如阿霉素)聯(lián)合應用，另外還可以與放射治療聯(lián)合應用。這些其他抗腫瘤藥物或放射治療可以與本發(fā)明化合物同時或在不同時間給予。這些聯(lián)合治療可以產(chǎn)生協(xié)同作用從而有助于改善治療效果。
下面是本發(fā)明化合物的部分藥理試驗及結果藥理試驗部分的化合物代號對應的結構見表1和表2。

表1式I部分化合物代號及其對應的結構

表2式II部分化合物代號及其對應的結構

1、體外抗腫瘤活性研究 1.1四甲基氮唑藍比色法體外抗腫瘤試驗按常規(guī)采用四甲基氮唑藍比色法(MTT)評價了本發(fā)明化合物對13種人癌細胞株的抗增殖活性。MTT法已廣泛用于大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感測定等。索拉菲尼(Sorafenib)是目前臨床上廣泛使用的抗腫瘤藥物，其作用靶標就是Ras信號途徑，因此選擇它作為陽性對照藥。
人癌細胞株乳腺癌細胞MCF-7、MDA-MB-231、肝癌細胞Hep G2、Hep 3B、BEL-7402、腎癌細胞786-O、OS-RC-2、肺癌細胞A549、H460、H520、腦癌細胞U251、U87、胃癌細胞SGC-7901。
實驗方法如下取處于指數(shù)生長期狀態(tài)良好的細胞一瓶，加入0.25％胰蛋白酶消化，使貼壁細胞脫落，制成每毫升含2×104～4×104個細胞的懸液。取細胞懸液接種于96孔板上，每孔180μL，置恒溫CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。換液，加入受試化合物(化合物用DMSO溶解后用PBS稀釋，受試化合物濃度分別為1×10-7，1×10-6，1×10-5 mol/L)，每孔20μL，培養(yǎng)48小時。將MTT加入96孔板中，每孔20μL，培養(yǎng)箱中反應4小時。吸去上清液，加入DMSO，每孔150μL，平板搖床上振搖5分鐘。用酶聯(lián)免疫檢測儀在波長為570nm處測定每孔的吸收度，計算細胞抑制率。實驗結果如表3-4所示。
細胞抑制率＝(陰性對照組OD值-受試物組OD值)/陰性對照組OD值×100％。
表3本發(fā)明化合物對部分腫瘤細胞增殖的抑制活性(IC50，μmol/L)

Sorafenib索拉菲尼；NA無活性. 表4本發(fā)明化合物對部分腫瘤細胞增殖的抑制活性(IC50，μmol/L)

Sorafenib索拉菲尼；NA無活性. 經(jīng)過一系列腫瘤細胞測試，發(fā)現(xiàn)這些化合物對腎癌細胞作用較強，特別是OS-RC-2人腎癌細胞，大部分目標化合物細胞活性比先導化合物FTA強，很多化合物IC50值均小于1μmol/L，其中化合物I1、I2、I4、II1、II3、II6、II12、II13、II14活性比陽性對照藥索拉菲尼強，其IC50值均小于0.25μmol/L；從786-O人腎癌細胞測試情況看，I1、I4、II12、II13、II14細胞活性均比母體化合物FTA活性強，并且與陽性對照藥索拉菲尼活性相當，而且大部分化合物活性均超過先導物FTA；在人腦膠質瘤細胞U87和U251中，化合物I2、II12、II13、II14的IC50值和索拉菲尼在一個數(shù)量級，大部分化合物活性均超過母體化合物FTA；對于人乳腺癌細胞MCF7，化合物I4、II3、II6、II12活性與陽性對照藥索拉菲尼活性相當，而人乳腺癌細胞MDA-MB-231，化合物I2、II6、II12、II13活性比陽性對照藥索拉菲尼稍強或者相當，大部分化合物活性均超過母體化合物FTA；對于人肺癌細胞A549、H460和H520，整體化合物活性趨勢比較一致，化合物在人肺癌細胞A549活性比H460和H520較弱些，其中化合物I2、II12和II13比陽性對照藥索拉菲尼稍強或者相當，大部分化合物活性均超過母體化合物FTA；對于人肝癌細胞Hep3B，化合物I2、II3、II6、II12和II13的IC50值和索拉菲尼在一個數(shù)量級，而人胃癌細胞SGC-7901，I2、II12和II13比陽性對照藥索拉菲尼稍強或者相當，大部分化合物活性均超過母體化合物FTA。
從化合物整體抗瘤譜來看，在呋咱氮氧化物修飾的FTA衍生物系列化合物中，中間連接氨基酸的呋咱氮氧化物整體活性要比沒有連接氨基酸活性要好，而且連接基團氨基酸的種類對活性有影響，其對細胞毒活性的影響順序為脯氨酸＞甘氨酸、丙氨酸＞苯丙氨酸。而對于含相同氨基酸的化合物，呋咱氮氧化物供體連接基團碳鏈長度同樣影響活性，以4個碳原子較好。如均含有丙氨酸但所連碳鏈不同的化合物活性順序為II6＞II9＞II5＞II8。
藥理實驗結果表明，本發(fā)明化合物對人類腫瘤細胞的增殖具有不同程度的抑制作用，多數(shù)化合物抗腫瘤活性與陽性對照藥索拉菲尼相當或優(yōu)于索拉菲尼，且顯著強于FTA。
1.2對正常肝細胞生長的影響受試藥物呋咱氮氧化物修飾的FTA衍生物系列一活性較好目標化合物I1、I2、I4、II1、II3、II6、II12、II13、II14，全反式法尼基硫代水楊酸(FTA)作為對照藥物，共10個化合物。
材料、試劑及方法方法同前，人正常肝細胞為LO2，培養(yǎng)液為含10％熱滅活胎牛血清，青霉素100u/mL和鏈霉素100u/mL的RPMI1640細胞培養(yǎng)基，藥物處理時間為48小時，濃度選取見圖7。
結果部分呋咱氮氧化物修飾的FTA衍生物I2，II12，II6，I4在小于12.5μmol/L(對Hep3B細胞生長有效抑制濃度范圍內，見圖7)濃度下，無明顯的LO2細胞毒性，25-100μmol/L濃度范圍內可見顯著的細胞毒性。由此可見，I2，I4，II6，II12對肝癌Hep3B細胞具有一定的選擇性，而且選擇性順序為I2＞II12＞II6＞I4，其中I2和II12對人正常肝細胞LO2的IC50值比它們對人肝腫瘤細胞Hep3B的IC50值約大兩個數(shù)量級(見圖1)。
1.3體外NO釋放檢測選擇目標化合物I1，I3，II3，II6和II12～II14在乳腺癌細胞MCF-7、MDA-MB-231、胃癌細胞SGC-7901、肺癌細胞A549和腦癌細胞U251、U87內進行NO釋放量的測定取處于指數(shù)生長期狀態(tài)良好的細胞一瓶，加入0.25％胰蛋白酶消化，使貼壁細胞脫落，制成每毫升含2×104～4×104個細胞的懸液。取細胞懸液接種于96孔板上，每孔180μL，置恒溫CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。換液，加入受試化合物(化合物用DMSO溶解后用PBS稀釋，受試物濃度為10-4mol/L。于300min時間點離心沉淀取上清液2mL與500μLGriess試劑混合，室溫放置10分鐘，在540nm處測吸收值，根據(jù)標準曲線計算NO濃度。NO的釋放量以其相當于硝酸鹽(NO3-)/亞硝酸鹽(NO2-)的量表示(見圖2)。
體外NO釋放研究結果表明，化合物II3，II6和II12～II14之間的NO釋放量相差不大，但比I1，I3大得多，NO最大釋放量達到1.6μmol/L。結果提示，具有細胞毒活性的化合物釋放NO的量相對較大，而活性較弱或無活性的化合物釋放NO的量較低，此結果與文獻(Megson IL，WebbDJ.Expert Opin Investig Drugs，2002，11(5)587-601)報道的高濃度NO對腫瘤細胞具有較強細胞毒作用的結論是一致的。
1.4Ras抑制活性測試采用Western印跡法檢測目標化合物II6對腫瘤細胞MDA-MB-231的Ras抑制活性。取處于指數(shù)生長期狀態(tài)良好的細胞制成每毫升含1.5×105個細胞的懸液，接種于96孔板上，置恒溫CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。換液，加入1μM，5μM受試化合物II6，陰性對照加等量PBS，繼續(xù)培養(yǎng)8h。胰酶消化，PBS清洗兩遍。樣品重懸于PBS中，棄上清，細胞置于2mL EP管中加入蛋白質裂解液，200μL/管，反復吹打后于冰浴反應30min，離心取上清液2mL EP管中，采用SDS-PAGE(膠濃度為12％)分離并且轉移到硝化纖維膜上。將膜放于現(xiàn)配的5％的脫脂奶粉封閉液中，封閉結束用少量Blot wash將殘余奶粉漂洗干凈，一抗用TBST稀釋至工作濃度，500μL/條，室溫搖床反應1h，其后可置4℃過夜。反應結束后剪開自封袋，廢棄抗體，將各條膜置于皿中用TBST清洗4遍。用TBST稀釋過氧化酶標記的二抗至工作液濃度，500μL/條。按前法封袋和搖床反應，反應結束后棄二抗，用TBST清洗4遍。PIERCE發(fā)光液A液+B液等體積混勻灌入制好的自封袋中，反應5min后將膜轉移至在BIO-RAD凝膠成像儀暗盒中曝光成像(見圖3)。
我們考察了目標物II6是否保留FTA原有Ras抑制活性，采用空白組和不同濃度的II6對MDA-MB-231細胞相關的Ras下游信號通路的影響進行免疫印跡分析(見圖3)，發(fā)現(xiàn)II6在1μM和5μM濃度下可以顯著抑制Akt，ERK，Raf分子的磷酸化，提示NO供體與FTA雜合后仍保留了對Ras蛋白抑制活性。
2、體內活性研究 2.2I2急性毒性實驗目的本實驗采用小鼠單次腹腔注射供試品方法，觀察供試品造成的小鼠急性毒性反應和死亡情況。
實驗材料供試品名稱I2(中國藥科大學新藥研究中心提供)。
對照品即溶媒，為無水乙醇和葡萄糖注射液。
動物清潔級小鼠，5-6周齡，體重18-22g，性別雌雄各半。
實驗方法劑量設計與藥物配置根據(jù)預試結果，正式試驗劑量設為585.9、468.8、375.0、300.0和240.0mgg/kg，劑量間距為1∶0.8。同時設溶媒對照組。藥物先加20％的無水乙醇溶解，再加葡萄糖注射液稀釋，得終濃度分別為195.3mg/ml、156.2mg/ml、125.0mg/ml、100mg/ml、80mg/ml的溶液。
給藥方法與途徑采用腹腔注射給藥途徑。小鼠一次腹腔注射給藥，給藥體積0.6ml/20g體重，腹腔注射速度0.6ml/60Sec。
檢測方法與數(shù)據(jù)記錄給藥前動物禁食2-4小時。詳細記錄動物給藥時間，毒性反應時間以及毒性反應癥狀。根據(jù)動物死亡數(shù)據(jù)采用Bliss法計算半數(shù)致死量LD50值及95％可信限(見表5)。
實驗結果 585.9mg/kg劑量組給藥后8只小鼠出現(xiàn)痙攣、抽搐，其中2只即刻死亡；468.8mg/kg劑量組給藥后4只小鼠出現(xiàn)痙攣、抽搐；375.0/kg劑量組給藥后2只小鼠活動減少；300.0mg/kg劑量組給藥后1只小鼠活動減少；240.0mg/kg劑量組給藥后小鼠活動減少，10分鐘后行為活動逐漸恢復正常。
表5、小鼠腹腔注射I2溶液的LD50試驗結果
2.2I2腹腔給藥對人肝細胞性肝癌SMMC-7721裸小鼠移植瘤的實驗治療作用目的根據(jù)SFDA新藥臨床前研究指導原則的要求，測試I2對人肝癌SMMC-7721裸鼠異種移植瘤有無生長抑制作用及作用強度。
受試物 I2注射液由中國藥科大學藥研究中心提供，批號100117。陽性對照藥為索拉菲尼(Sorafenib)，上海北卡醫(yī)藥技術有限公司生產(chǎn)，批號091105。
移植瘤選用人肝細胞性肝癌SMMC-7721裸小鼠移植瘤，由人肝細胞性肝癌SMMC-7721細胞株接種于裸小鼠皮下而建立。細胞接種量為2×107，接種形成移植瘤后再在裸小鼠體內傳3代后使用。
動物雌性BALB/cA裸小鼠，日齡35-40天，體重18-22g，由中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所提供(實驗動物生產(chǎn)許可證SCXK(軍)2007-004)。動物分組如下空白對照組(溶劑對照) 12只陽性對照組(FTA 16mg/kg i.p.) 6只陽性對照組(Sorafenib 20mg/kg i.p.)6只藥物治療組(I260mg/kg i.p.)6只藥物治療組(I230mg/kg i.p.)6只藥物治療組(I215mg/kg i.p.)6只試驗方法取生長旺盛期的瘤組織剪切成1.5mm3左右，在無菌條件下，接種于裸小鼠右側腋窩皮下。裸小鼠移植瘤用游標卡尺測量移植瘤直徑，待腫瘤生長至100～300mm3后將動物隨機分組。使用測量瘤徑的方法，動態(tài)觀察被試物抗腫瘤的效應。腫瘤直徑的測量次數(shù)為每周3次，每次測量同時還需稱鼠重。給藥組每周靜脈給藥3次，給藥體積0.4mL/只。陽性對照組每周靜脈給藥3次，陰性對照組同時給等量生理鹽水。
檢測指標及計算方法 (1)腫瘤體積(tumor volume，TV)，計算公式為 TV＝1/2×a×b2 其中a、b分別表示長寬。
(2)相對腫瘤體積(relative tumor volume，RTV)，計算公式為 RTV＝TVt/TV0。
其中TV0為分籠給藥時(即d0)腫瘤體積，TVt為每一次測量時的腫瘤體積。
(3)相對腫瘤增殖率T/C(％)，計算公式為 T/C(％)＝(TRTV/CRTV)×100 TRTV治療組RTV；CRTV陰性對照組RTV。
試驗結果以相對腫瘤增殖率T/C(％)作為抗腫瘤活性的評價指標。
實驗結果和討論 I2對人肝癌SMMC-7721裸小鼠移植瘤的實驗性治療結果見表6和圖4。實驗結果如下，待測藥物I2(60mg/kg)，I2(30mg/kg)，I2(15mg/kg)，陽性藥物FTA(16mg/kg)，Sorafenib(20mg/kg)均以腹腔注射給藥，每天1次，共給藥21次；給藥21天后，給藥21天后，空白對照組平均瘤體積為1378mm3，F(xiàn)TA對照組平均瘤體積為664mm3，Sorafenib組為397mm3，I2高劑量組為479mm3，I2中劑量組為732mm3，I2低劑量組為793mm3，對人肝癌SMMC-7721裸小鼠移植瘤的T/C(％)分別為59.56％，28.46％，43.38％，52.56％，58.95％。同時未發(fā)現(xiàn)I2對實驗動物的體重有明顯抑制作用。
表6.I2對裸鼠移植瘤SMMC-7721生長體積變化的影響(X±SD，腫瘤體積單位mm3)

圖1.I2，I4，II6，II12對肝癌Hep3B細胞和人正常肝細胞LO2的選擇性圖2部分化合物在腫瘤細胞中NO釋放圖3II6對腫瘤細胞MDA-MB-231的Ras抑制活性圖4.I2對人肝癌SMMC-7721裸鼠異種移植腫瘤腫瘤體積的影響
具體實施例方式 為了進一步闡明本發(fā)明，下面給出一系列實施例，這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發(fā)明具體描述，不應當理解為對本發(fā)明的限制。本發(fā)明所用FTA為實驗室制備，含量＞98％。
實施例1 2-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙胺(1a)的制備將3mL(50mmol)乙醇胺和1.85g(5mmol)2-氧-3，4-二苯磺?；?1，2，5-噁二唑溶于20mLTHF中，冰浴冷卻，滴入2.5mol/LNaOH溶液2mL，室溫反應0.5h，補加2.5mol/LNaOH溶液1mL，繼續(xù)攪拌直至原料反應完全，倒入80mL水，二氯甲烷(3×20mL)萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮，甲醇/水重結晶，得白色固體(1a)0.93g，收率66％，mp102～104℃。
N-{2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙基}法尼基硫代水楊酸酰胺(I1)的制備將18.0g(0.50mmol)FTA和14.0mg(0.65mmol)DCC溶解于15mL無水CH2Cl2中，室溫攪拌30分鐘，加入0.18g(0.60mmol)1a和催化量的DMAP，室溫反應24小時，過濾，濃縮，柱層析[乙酸乙酯∶石油醚(60～90℃)＝1∶3(V∶V)]分離得無色透明油狀物0.21g，收率67％，IR(KBr，cm-1)v2922，1713，1654，1618，1551，1454，1374，1164；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.02(d，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.70(m，2H，Ar-H)，7.55(t，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.36(m，2H，Ar-H)，7.18(m，1H，Ar-H)，7.20(m，1H，Ar-H)，5.25(m，1H，SCH2CH)，5.08(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，4.64(t，2H，J＝4.8Hz，CH2O)，3.96(m，2H，NCH2CH2)，3.53(d，2H，J＝7.2Hz，SCH2)，3.35(m，1H，NCH2)，1.89-2.02(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)626[M+H]+. 實施例2 N-{[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}哌嗪(1b)的制備參照1a的制備方法，由羥乙基哌嗪制得淡黃色固體，收率55％，mp90～92℃。
3-{4-[3-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙氧基]-1，4-二氧代丁氧基}法尼基硫代水楊酸甲酯(I2)的制備 N-{[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}哌嗪基法尼基硫代水楊酸亞酰胺(I2)的制備參照I1的制備方法，由FTA與1b反應制得，無色透明油狀物，收率61％。IR(KBr，cm-1)v2926，1731，1648，1551，1454，1371，1167；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.05(d，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.75(m，1H，Ar-H)，7.61(m，2H，Ar-H)，7.38(m，H，Ar-H)，7.28(m，3H，Ar-H)，5.28(m，1H，SCH2CH)，5.08(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，4.58(t，2H，J＝5.1Hz，CH2O)，3.84(d，2H，J＝4.5Hz，NCH2)，3.56(m，2H，SCH2)，2.91(m，4H，CONCH2CH2)，2.63(m，4H，2×CH2NCH2)，1.89-2.04(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.67(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)695[M+H]+；實施例3 4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-丁炔-1-醇(1c)的制備參照1a的制備方法，由2-丁炔二醇制得白色固體，收率63％，mp110～112℃。
{4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔基}法尼基硫代水楊酸丁酯(I3)的制備參照I1的制備方法，由FTA與1c反應制得，無色透明油狀物，收率65％，IR(KBr，cm-1)v2934，1724，1618，1548，1453，1357，1167；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.06(d，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，8.01(d，1H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.74(t，1H，J＝7.2Hz，Ar-H)，7.62(m，2H，Ar-H)，7.47(t，1H，Ar-H)，7.33(m，1H，Ar-H)，7.20(m，1H，Ar-H)，5.33(m，1H，SCH2CH)，5.12(m，4H，2×CH2CH＝CCH3，COOCH2)，5.00(s，2H，OCH2)，3.60(d，2H，J＝7.2Hz，SCH2)，1.88-2.04(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.48-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)651[M+H]+. 實施例4 4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]哌啶(1d)的制備參照1a的制備方法，由4-羥基哌啶制得白色固體，收率79％，mp70～72℃。
N-{4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]哌啶基}法尼基硫代水楊酸亞酰胺(I4)的制備參照I1的制備方法，由FTA與1d反應制得，無色透明油狀物，收率68％，IR(KBr，cm-1)v2932，1721，1616，1553，1453，1371，1165；H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.05(m，2H，Ar-H)，7.77(t，1H，J＝7.2Hz，Ar-H)，7.63(m，2H，Ar-H)，7.40(m，H，Ar-H)，7.26(m，3H，Ar-H)，5.27(m，1H，SCH2CH)，5.18(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，5.08(m，1H，OCH)，3.88(m，2H，SCH2)，3.47(m，4H，N(CH2)2)，1.89-2.02(m，12H，2×CHCH2CH2CH，CH(CH2)2)，1.50-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)666[M+H]+. 實施例5 3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙胺(1e)的制備參照1a的制備方法，由丙醇胺制得白色固體，收率70％，mp57～59℃。
N-{3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙基}法尼基硫代水楊酸酰胺(I5)的制備參照I1的制備方法，由FTA與1e反應制得，無色透明油狀物，收率67％，IR(KBr，cm-1)v2952，1733，1656，1616，1552，1434，1386，1164；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.00(d，2H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.74(t，1H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.61(m，3H，Ar-H)，7.40(m，2H，Ar-H)，7.30(m，1H，Ar-H)，5.26(m，1H，SCH2CH)，5.07(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，4.59(t，2H，J＝6.0Hz，OCH2)，3.71(d，2H，J＝7.8Hz，SCH2)，3.55(d，2H，J＝7.5Hz，NCH2)，2.26(m，2H，NCH2CH2)，1.89-2.02(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)630[M+H]+；實施例6 N-甲基-2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙胺(2f)的制備參照1a的制備方法，由N甲基乙醇胺制得白色固體，收率50％，直接投入下一步反應。N-{N-甲基-2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙基}法尼基硫代水楊酸亞酰胺(I6)的制備參照I1的制備方法，由FTA與2c反應制得，無色透明油狀物，收率65％，IR(KBr，cm-1)v2956，1733，1618，1454，1359，1157；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.07(d，J＝7.5Hz，2H，Ar-H)，7.94(m，1H，Ar-H)，7.76(m，1H，Ar-H)，7.59(m，3H，Ar-H)，7.31(m，2H，Ar-H)，5.30(m，1H，SCH2CH)，5.07(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，4.77(m，2H，OCH2)，4.06(d，2H，J＝7.8Hz，SCH2)，3.53(m，2H，NCH2)，3.02(m，3H，NCH3)，1.89-2.02(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)630[M+H]+；實施例7 1-甲基-3-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙醇(1g)的制備參照1a的制備方法，由1，3-丁二醇制得白色固體，收率88％，mp101～103℃。
{1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]}法尼基硫代水楊酸丙酯(I7)的制備參照I1的制備方法，由FTA與1g反應制得，無色透明油狀物，收率65％，IR(KBr，cm-1)v2947，1730，1616，1552，1454，1380，1164；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.08(d，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.93(d，1H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.73(m，1H，Ar-H)，7.64(m，2H，Ar-H)，7.43(t，1H，J＝7.2Hz，Ar-H)，7.30(m，1H，Ar-H)，7.16(m，1H，Ar-H)，5.40(m，1H，SCH2CH)，5.31(m，2H，OCH)，5.08(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，4.56(t，2H，J＝6.0Hz，OCH2)，3.56(d，2H，J＝7.2Hz，SCH2)，2.28(m，2H，CHCH2)，1.89-2.02(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)，1.47(d，3H，J＝6.3Hz，CHCH3)；ESI-MS(m/z)655[M+H]+；實施例8 2-{[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]甲氧基}吡咯烷(1h)的制備參照1a的制備方法，由L-脯氨醇制得淡黃色固體，收率88％，直接進行下一步反應。
N-{2-{[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]甲氧基}吡咯烷基}法尼基硫代水楊酸亞酰胺(I8)的制備參照I1的制備方法，由FTA與1h反應制得，無色透明油狀物，收率65％。IR(KBr，cm-1)v2933，1730，1616，1552，1454，1380，1164；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.05(m，2H，Ar-H)，7.93(m，1H，Ar-H)，7.76(m，1H，Ar-H)，7.61(m，2H，Ar-H)，7.43(t，1H，J＝7.2Hz，Ar-H)，7.39(m，1H，Ar-H)，7.29(m，1H，Ar-H)，5.19(m，1H，SCH2CH)，5.07(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，4.90(m，1H，NCH)，4.65(m，2H，OCH2)，3.51(d，2H，J＝7.8Hz，SCH2)，3.30(m，2H，NCH2)，1.89-2.02(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)，1.50-1.67(m，4H，CHCH2CH2)；ESI-MS(m/z)666[M+H]+；實施例9 2-{[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙胺基}乙醇(1i)的制備參照1a的制備方法，由二乙醇胺制得淡黃色固體，收率65％，直接投入下一步反應。
N-羥乙基{N-[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙基}碳酸叔丁酯(1i-1)的制備在0.33g(1.00mmol)1i和0.2mL三乙胺的10mL無水CH2Cl2中，緩慢加入0.26g(1.20mmol)二碳酸二叔丁酯，室溫攪拌過夜，將反應液分別用10mL水和飽和NaCl萃取，CH2Cl2層用無水硫酸鈉干燥，旋干得到0.39g產(chǎn)品1i-1直接投下一步反應，收率91％。
2-{N-叔丁氧羰基-2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙胺基}法尼基硫代水楊酸乙酯(I9)的制備參照I1的制備方法，由FTA與1i-1反應制得，無色透明油狀物，收率70％，mp82～84℃。IR(KBr，cm-1)v2952，1728，1618，1550，1452，1352，1164；1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.05(d，2H，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.70(m，1H，Ar-H)，7.58(m，2H，Ar-H)，7.40(m，2H，Ar-H)，7.23(m，2H，Ar-H)，5.24(t，1H，J＝7.5Hz，SCH2CH)，5.06(t，2H，J＝6.9Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.35(m，2H，OCH2)，3.84(m，2H，OCH2)，3.73(m，4H，CH2NCH2)，3.58(d，2H，J＝7.2Hz，SCH2)，1.89-2.02(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)；1.38(s，9H，3CH3)；ESI-MS(m/z)870[M+H]+. 實施例10 2-{[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙胺基}法尼基硫代水楊酸乙酯(I10)的制備將上一步產(chǎn)品0.38g(0.50mmol)I9溶于4mL CH2Cl2中，冰浴冷卻，緩慢滴加2mL三氟乙酸，升至室溫，反應2h，減壓蒸除溶劑和未反應的三氟乙酸，再加入10mL CH2Cl2，緩慢滴加1.5mL三乙胺，滴完攪拌30min，將反應液分別用10mL水和飽和NaCl洗滌，CH2Cl2層用無水硫酸鈉干燥，旋干得到0.39g產(chǎn)品I10無色透明油狀物0.42g，收率62.8％。IR(KBr，cm-1)v2958，1731，1652，1622，1552，1454，1377；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.96(d，1H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.91(d，2H，J＝7.2Hz，Ar-H)，7.62(t，1H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.49(m，2H，Ar-H)，7.30(m，2H，Ar-H)，7.16(m，1H，Ar-H)，6.22(brs，1H，NH)，5.33(m，3H，SCH2CH，2×CH2CH＝CCH3)，4.37(m，4H，CH2O)，3.73(m，4H，CH2NHCH2)，3.58(d，2H，J＝7.2Hz，SCH2)，1.89-2.02-(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)770[M+H]+. 實施例11 N-{N-[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]羥乙基}法尼基硫代水楊酸乙酰胺(I11)的制備將0.36g(1.00mmol)FTA溶于10mL無水CH2Cl2中，滴加0.5mL草酰氯，室溫反應4h，減壓蒸除溶劑和未反應得草酰氯，再用制的法尼基硫代水楊酰氯用10mL無水CH2Cl2溶解，在冰浴下緩慢滴入到含有0.33g(1.00mmol)1i和0.2mL三乙胺的10mL無水CH2Cl2中，在室溫攪拌12h，過濾，濃縮，柱層析[乙酸乙酯∶石油醚(60～90℃)＝1∶5(V∶V)]分離得無色透明油狀物0.42g，收率62.8％。IR(KBr，cm-1)v2958，1731，1652，1622，1552，1454，1377；1H NMR(CDCl3，300MHz)8.05(d，2H，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.70(m，1H，Ar-H)，7.58(m，2H，Ar-H)，7.40(m，2H，Ar-H)，7.23(m，2H，Ar-H)，5.25(t，1H，J＝6.6Hz，SCH2CH)，5.06(m，4H，2×CH2CH＝CCH3，NCH2)，4.55(m，2H，OCH2)，4.12(m，1H，OH)3.84(m，2H，HOCH2)，3.15(m，2H，NCH2)，3.54(d，2H，J＝7.2Hz，SCH2)，2.92(t，2H，J＝5.1Hz，HOCH2CH2)，1.89-2.00(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.51-1.65(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)770[M+H]+. 實施例12 N-Boc-甘氨酸-1-甲基-3-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯(3-1g)的制備將0.37g(1.1mmol)1g溶于15mL無水CH2Cl2中，加入0.18g(1.0mmol)N-叔丁氧羰基甘氨酸，0.26g(1.25mmol)DCC和催化量的DMAP，室溫反應24h，過濾，濃縮，柱層析[乙酸乙酯∶石油醚(60～90℃)＝1∶3(V∶V)]分離得白色固體0.29g，收率60％，mp84～86℃。ESI-MS(m/z)471.6[M+H]+；IR(KBr，cm-1)v3436，2977，2937，1747，1714，1616，1552，1514，1452，1367，1166；1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.35～1.37(m，3H，CH3，)，1.43(s，9H，3CH3)，3.89～3.90(d，2H，NCH2)，4.46～4.50(t，2H，OCH2，J＝6.0Hz)，5.01(brs，1H，NH)，5.19～5.25(m，1H，OCH)，7.60～7.66(m，2H，ArH)，7.74～7.76(m，1H，ArH)，8.05～8.08(m，2H，ArH). 甘氨酸-1-甲基-3-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯三氟乙酸鹽(4-1g)的制備將0.25g(0.52mmol)3-1g溶于10mL CH2Cl2中，冰浴冷卻，緩慢滴加2mL三氟乙酸，升至室溫，反應2h，減壓蒸除溶劑和未反應的三氟乙酸，得到4-1g，ESI-MS(m/z)372.1[M+H]+。
N-{乙酸-1-甲基-3-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II1)的制備將上述制備的4-1g溶于15mL DMF中，加入0.20g(1.60mmol)DMAP，攪拌30分鐘，加入0.20g(0.43mmol)FTA，0.25g(1.30mmol)EDC，室溫反應24h，傾入200mL水，乙酸乙酯(3×50mL)萃取，合并有機層，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，柱層析[乙酸乙酯∶石油醚(60～90℃)＝1∶2(V∶V)]分離，得無色透明油狀物0.15g，收率45％。IR(KBr，cm-1)3424，2927，1753，1629，1552，1450，1371，1168；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.05(d，2H，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.70(m，1H，Ar-H)，7.58(m，2H，Ar-H)，7.40(m，2H，Ar-H)，7.29(m，2H，Ar-H)，5.25(t，1H，J＝6.6Hz，SCH2CH)，5.06(m，4H，2×CH2CH＝CCH3，NCH2)，4.48(t，2H，J＝6.0Hz，CH2O)，4.25(m，1H，OCH)，3.54(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，2.20(m，2H，OCHCH2)，1.98-2.05(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.51-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)，1.39(d，3H，J＝6.3Hz，CHCH3)；MS(ESI)m/z＝712[M+1]+. 實施例13 4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁醇(1j)的制備參照1a的制備方法，由1，4-丁二醇制得白色固體，收率89％，mp70～72℃。
N-Boc-甘氨酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯(3-1j)的制備參照3-1g的制備方法，由1j制得白色固體，收率78％，mp60～62℃。ESI-MS(m/z)471.8[M+H]+；IR(KBr，cm-1)v3357，2977，2933，1726，1685，1623，1558，1525，1454，1371，1163；1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.45(s，9H，3CH3)，1.85～1.87(m，2H，CH2)，1.95～1.99(m，2H，CH2)，3.92～3.94(d，2H，NCH2)，4.23～4.27(t，2H，OCH2，J＝6.0Hz)，4.44～4.48(t，2H，OCH2，J＝6.0Hz)，5.06(brs，1H，NH)，7.61～7.66(m，2H，ArH)，7.77～7.79(m，1H，ArH)，8.04～8.07(m，2H，ArH). 甘氨酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯三氟乙酸鹽(4-1j)的制備參照4-1g的制備方法，由3-1j制得，ESI-MS(m/z)372.4[M+H]+。
N-{乙酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II2)的制備參照II1的制備方法，由FTA與4-1j反應制得，無色透明油狀物，收率50％，IR(KBr，cm-1)3259，2928，1727，1621，1559，1450，1163；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.04(d，2H，J＝7.2Hz，Ar-H)，7.73(m，2H，Ar-H)，7.58(m，2H，Ar-H)，7.36(m，2H，Ar-H)，7.27(m，1H，Ar-H)，5.24(t，1H，J＝7.5Hz，SCH2CH)，5.06(t，2H，J＝6.9Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.79(m，2H，NCH2)，4.45(t，2H，J＝6.0Hz，COOCH2CH2CH2CH2O)，4.28(m，4H，NCH2COOCH2CH2)，3.55(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，1.99(m，10H，2×CHCH2CH2CH，COOCH2CH2CH2)，1.51-1.69(m，14H，4×CH＝CCH3，COOCH2CH2)；MS(ESI)m/z＝712[M+1]+. 實施例14 N-Boc-甘氨酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯(3-1c)的制備參照3-1g的制備方法，由1c制得白色固體，收率68％，mp88～90℃。IR(KBr，cm-1)v3434，2979，1758，1704，1620，1548，1450，1359，1163；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.38(s，9H，3CH3)，3.70～3.75(m，2H，NCH2)，4.88(s，2H，OCH2)，5.22(s，2H，OCH2)，7.28(brs，1H，-NH-)，7.73～7.75(m，2H，ArH)，7.88～7.93(m，1H，ArH)，8.00～8.03(m，2H，ArH)；ESI-MS(m/z)467.9[M+H]+. 甘氨酸-4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯三氟乙酸鹽(4-1c)的制備參照4-1g的制備方法，由3-1c制得，ESI-MS(m/z)368.3[M+H]+. N-{乙酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II3)的制備參照II1的制備方法，由FTA與4-1c反應制得，無色透明油狀物，收率55％，IR(KBr，cm-1)3418，2928，1758，1617，1548，1451，1361，1169；1H NMR(CDCl3-d6)δ8.06(d，2H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.74(m，2H，Ar-H)，7.61(t，2H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.30(m，3H，Ar-H)，5.24(m，H，SCH2CH)，5.06(m，4H，2×CH2CH2CH＝CCH3，CH2O)，4.86(s，2H，COOCH2)，4.31(d，2H，J＝5.4Hz，NCH2)，3.55(d，H，J＝7.8Hz，SCH2)，1.98-2.12(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.42-1.67(m，12H，4×CH3)；MS(ESI)m/z＝708[M+1]+. 實施例15 N-Boc-甘氨酸-4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙酰胺(3-1a)的制備參照3-1g的制備方法，由1a反應制得，白色固體，收率50.2％，mp107～111℃。
N-{乙酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙酰胺}法尼基硫代水楊酸酰胺(II4)的制備參照II1的制備方法，3-1a脫保護基后與FTA反應制得，無色透明油狀物，收率49.4％，IR(KBr，cm-1)v3406，2927，1724，1654，1550，1452，1388，1186；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.04(d，2H，J＝7.2Hz，Ar-H)，7.73(m，2H，Ar-H)，7.58(m，2H，Ar-H)，7.36(m，2H，Ar-H)，7.27(m，1H，Ar-H)，6.64(m，1H，CONH)，5.24(t，1H，J＝7.5Hz，SCH2CH)，5.06(t，2H，J＝6.9Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.52(m，2H，OCH2)，4.28(m，4H，NCH2，COOCH2CH2)，3.55(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，1.99(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.51-1.69(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)683[M+H]+；實施例16 N-Boc-L-丙氨酸-1-甲基-3-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯(3-2g)的制備參照3-1g的制備方法，由N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸與1g反應制得，白色固體，收率72.3％，mp98～101℃。
N-{2-丙酸-1-甲基-3-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II5)的制備參照II1的制備方法，3-2g脫保護基后與FTA反應制得，無色透明油狀物，收率41％，[α]25D-8.1；IR(KBr，cm-1)3297，2924，1737，1633，1555，1450，1356，1168；1H NMR(CDCl3-d6)δ8.06(d，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.71(m，2H，Ar-H)，7.59(m，2H，Ar-H)，7.51(m，1H，Ar-H)，7.38(m，2H，Ar-H)，5.18(m，2H，SCH2CH，NCH)，5.08(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，4.74(m，1H，OCH)，4.46(t，2H，J＝6.0Hz，OCH2CH2)，3.54(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，2.17(m，2H，OCH2CH2)，1.98(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.59-1.67(m，12H，4×CH＝CCH3)，1.51(d，2H，J＝7.2Hz，NCHCH3)，1.38(d，2H，J＝6.0Hz，OCHCH3)；MS(ESI)m/z＝726[M+1]+. 實施例17 2-{[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}乙醇(1k)的制備參照1a的制備方法，由一縮乙二醇制得白色固體，收率70％，mp57～59℃。
N-Boc-L-丙氨酸-2-{[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}乙酯(3-2k)的制備參照3-1g的制備方法，由N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸與1k反應制得，淡黃色固體，收率53.3％，mp127～129℃。
N-{2-丙酸-2-[[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II6)的制備參照II1的制備方法，3-2k脫保護基后與FTA反應制得，無色透明油狀物，收率52.8％，[α]15D-19.2；IR(KBr，cm-1)3421，2928，1739，1640，1614，1554，1452，1356，1168；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.04(d，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.70(m，2H，Ar-H)，7.59(m，3H，Ar-H)，7.34(m，2H，Ar-H)，5.27(t，1H，J＝7.2Hz，SCH2CH)，5.05(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，4.84(m，1H，NCH)，4.54(m，2H，COOCH2CH2OCH2CH2O)，4.38(m，2H，COOCH2CH2)，3.93(m，2H，COOCH2CH2OCH2)，3.83(t，2H，J＝4.2Hz，COOCH2CH2)，3.54(d，2H，J＝7.8Hz，SCH2)，2.01(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.52-1.67(m，12H，4×CH＝CCH3)，1.38(d，3H，J＝7.5Hz，NCHCH3)；MS(ESI)m/z＝742[M+1]+. 實施例18 N-Boc-L-脯氨酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯(3-3j)的制備參照3-1g的制備方法，由Boc-L-脯氨酸與1j反應制得，淡黃色油狀物，收率60.2％。
N-{2-四氫吡咯甲酸-4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯}法尼基硫代水楊酸亞酰胺(II7)的制備參照II1的制備方法，3-3j脫保護基后與FTA反應制得，無色透明油狀物，收率34.8％，[α]24D-14.5；IR(KBr，cm-1)3437，2926，1743，1619，1552，1449，1365，1169；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.04(d，2H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.75(m，1H，Ar-H)，7.60(m，2H，Ar-H)，7.34(m，1H，Ar-H)，7.32(m，2H，Ar-H)，7.20(m，1H，Ar-H)，5.27(t，1H，J＝7.5Hz，SCH2CH)，5.05(t，2H，J＝5.1Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.67(m，1H，NCH)，4.47(t，2H，J＝6.0Hz，COOCH2CH2CH2CH2O)，4.29(m，2H，COOCH2CH2)，3.57(d，2H，J＝7.8Hz，SCH2)，3.35(m，1H，NCH2)，2.02(m，10H，CH2CHCOO，2×CHCH2CH2CH)，1.90(m，2H，COOCH2CH2CH2)，1.53-1.67(m，16H，4×CH＝CCH3，COOCH2CH2，NCH2CH2)；MS(ESI)m/z＝752[M+1]+. 實施例19 N-Boc-L-丙氨酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯(3-2j)的制備參照3-1g的制備方法，由N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸與1j反應制得，白色固體，收率61.9％，mp107～109℃。
N-{2-丙酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II8)的制備參照II1的制備方法，3-2j脫保護基后與FTA反應制得，無色透明油狀物，收率51.7％，[α]24D-3.9；IR(KBr，cm-1)3262，2927，1730，1625，1555，1450，1372，1167；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.04(d，2H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.69(m，2H，Ar-H)，7.60(m，2H，Ar-H)，7.54(d，1H，J＝6.6Hz，Ar-H)，7.41(d，1H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.29(m，1H，Ar-H)，5.24(t，1H，J＝7.5Hz，SCH2CH)，5.05(t，2H，J＝6.9Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.79(m，1H，NCH)，4.44(t，2H，J＝6.0Hz，COOCH2CH2CH2CH2O)，4.26(t，2H，J＝6.0Hz，COOCH2CH2)，3.54(d，2H，J＝7.8Hz，SCH2)，1.99(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.88(m，2H，COOCH2CH2CH2)，1.51-1.69(m，17H，4×CH＝CCH3，COOCH2CH2，NCHCH3)；MS(ESI)m/z＝726[M+1]+. 實施例20 N-Boc-L-丙氨酸-4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯(3-2c)的制備參照3-1g的制備方法，由N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸與1c反應制得，黃色固體，收率53.7％，mp113～115℃。
N-[2-丙酸-4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯]法尼基硫代水楊酸酰胺(II9)的制備參照II1的制備方法，3-2c脫保護基后與FTA反應制得，無色透明油狀物，收44.1％，[α]15D-15.8；IR(KBr，cm-1)3421，2926，1749，1622，1548，1451，1362，1169；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.06(d，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.72(m，2H，Ar-H)，7.61(m，3H，Ar-H，NH)，7.44(m，1H，Ar-H)，7.33(m，1H，Ar-H)，7.29(m，1H，Ar-H)，5.24(t，1H，J＝7.5Hz，SCH2CH)，5.05-5.13(m，4H，2×CH2CH＝CCH3，COOCH2)，4.90(m，3H，NCH，CH2O)，3.54(d，2H，J＝7.8Hz，SCH2)，1.98(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.69(m，15H，4×CH＝CCH3，NCHCH3)；MS(ESI)m/z＝722[M+1]+. 實施例21 N-Boc-苯丙氨酸-2-{[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}乙酯(3-4k)的制備參照3-1g的制備方法，由Boc-L-苯丙氨酸與1k反應制得，白色固體，收率58％，mp108～109℃。
N-{2-苯丙酸-2-[[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II10)的制備參照II1的制備方法，3-4k脫保護基后與FTA反應制得無色透明油狀物，收率60％，[α]26D-2.5；IR(KBr，cm-1)3286，2923，1737，1642，1612，1552，1453，1355，1157；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.03(d，2H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.71(m，2H，Ar-H)，7.57(m，3H，Ar-H)，7.48(m，1H，Ar-H)，7.26-7.41(m，6H，Ar-H)，5.16-5.22(m，3H，3×CH2CH＝CCH3)，4.52(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2)，4.27(m，3H，NCH，OCH2)，3.89-3.96(m，4H，OCH2CH2OCH2)，3.21-3.36(m，4H，SCH2，CHCH2)，2.01(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.47-1.67(m，12H，4×CH＝CCH3)；MS(ESI)m/z＝818[M+1]+. 實施例22 N-Boc-L-脯氨酸-1-甲基-3-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯(3-3g)的制備參照3-1g的制備方法，由Boc-L-脯氨酸與1g反應制得，淡黃色油狀物，收率58.7％。
N-{2-四氫吡咯甲酸-1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯}法尼基硫代水楊酸亞酰胺(II11)的制備參照II1的制備方法，3-3g脫保護基后與FTA反應制得，淡黃色固體，收率37.2％，[α]25D-18.6；IR(KBr，cm-1)3326，2927，1743，1626，1552，1449，1368，1169；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.07(d，2H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.71(m，1H，Ar-H)，7.61(m，2H，Ar-H)，7.34(m，2H，Ar-H)，7.22(m，2H，Ar-H)，5.22(t，1H，J＝6.3Hz，SCH2CH)，5.08(t，2H，J＝5.1Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.67(m，1H，NCH)，4.65-4.50(m，2H，NCH，OCH)，3.80(m，2H，OCH2)，3.52(d，2H，J＝7.2Hz，SCH2)，3.30(m，2H，NCH2)，2.29(m，2H，OCHCH2)，1.98(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.52-1.67(m，16H，NCHCH2，4×CH＝CCH3，NCH2CH2)，1.24(d，3H，J＝6.3Hz，CHCH3)；MS(ESI)m/z＝752[M+1]+. 實施例23 N-Boc-L-脯氨酸-4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯(3-3c)的制備參照3-1g的制備方法，由Boc-L-脯氨酸與1c反應制得，淡黃色油狀物，收率60.0％。
N-{2-四氫吡咯甲酸-4-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯}法尼基硫代水楊酸亞酰胺(II12)的制備參照II1的制備方法，3-3c脫保護基后與FTA反應制得，無色透明油狀物，收率46.1％，[α]25D-30.3；IR(KBr，cm-1)3439，2926，1752，1618，1548，1450，1362，1169；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.07(d，2H，J＝7.2Hz，Ar-H)，7.74(m，1H，Ar-H)，7.61(m，2H，Ar-H)，7.37(m，2H，Ar-H)，7.28(m，2H，Ar-H)，5.24(t，1H，J＝7.5Hz，SCH2CH)，5.08(m，4H，2×CH2CH＝CCH3，COOCH2)，4.82(m，2H，CH2O)，4.71(t，1H，J＝3.9Hz，NCH)，3.57(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，3.30(m，2H，NCH2)，2.29(m，2H，OCHCH2)，1.98(m，10H，2×CHCH2CH2CH，NCHCH2)，1.58-1.75(m，14H，4×CH＝CCH3，NCH2CH2)；MS(ESI)m/z＝748[M+1]+. 實施例24 N-Boc-L-脯氨酸-2-{[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}乙酯(3-3k)的制備參照3-1g的制備方法，由Boc-L-脯氨酸與1k反應制得，無色油狀物，收率81.8％。
N-{2-四氫吡咯甲酸-2-[[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水楊酸亞酰胺(II13)的制備參照II1的制備方法，3-3k脫保護基后與FTA反應制得，無色透明油狀物，收率48.3％，[α]25D-19.1；IR(KBr，cm-1)3434，2917，1744，1628，1552，1448，1360，1170；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.04(d，2H，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.73(m，2H，Ar-H)，7.61(m，2H，Ar-H)，7.23-7.39(m，3H，Ar-H)，5.27(t，1H，J＝6.3Hz，SCH2CH)，5.08(t，2H，J＝5.1Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.57(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2)，4.39(t，3H，J＝4.5Hz，CH2OCN)，4.11(m，1H，NCH)，3.93(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2CH2O)，3.83(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2OCH2)，3.55(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，3.33(m，2H，NCH2)，1.96-2.04(m，10H，NCHCH2，2×CHCH2CH2CH)，1.52-1.67(m，14H，4×CH3，NCH2CH2)；MS(ESI)m/z＝768[M+1]+. 實施例25 N-Boc-甘氨酸-2-{[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}乙酯(3-1k)的制備參照3-1g的制備方法，由1k制得白色固體，收率80％，mp89～91℃。IR(KBr，cm-1)v3359，2979，2941，1755，1681，1625，1562，1529，1456，1363，1164；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.37(s，9H，3CH3)，3.63～3.71(m，4H，OCH2，NCH2)，3.79～3.82(m，2H，OCH2)，4.18～4.21(m，2H，OCH2)，4.50～4.53(m，2H，OCH2)，7.19(brs，1H，NH)，7.72～7.77(m，2H，ArH)，7.88～7.93(m，1H，ArH)，8.01～8.03(m，2H，ArH)；ESI-MS(m/z)487.7[M+H]+. 甘氨酸-2-{[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}乙酯三氟乙酸鹽(4-1k)的制備參照4-1g的制備方法，由3-1k制得，ESI-MS(m/z)388.1[M+H]+. N-{乙酸-2-[[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II14)的制備參照II1的制備方法，由FTA與4-1k反應制得，無色透明油狀物0.22g，收率53％，IR(KBr，cm-1)3422，2927，1749，1628，1553，1449，1362，1168；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.05(d，2H，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.73(m，2H，Ar-H)，7.62(m，2H，Ar-H)，7.39-7.42(m，4H，Ar-H)，5.27(t，1H，J＝6.3Hz，SCH2CH)，5.08(t，2H，J＝5.4Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.56(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2)，4.40(t，3H，J＝4.5Hz，CH2OCN)，4.31(s，1H，NCH2)，3.93(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2CH2O)，3.84(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2OCH2)，3.54(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，2.01(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.47-1.67(m，12H，4×CH3)；MS(ESI)m/z＝728[M+1]+. 實施例26 N-Boc-{N′-2-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙基}-L-丙氨酰胺(3-3e)的制備參照3-1g的制備方法，由N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸與1e反應制得，白色固體，收率50.2％，mp127～131℃。
N-{N′-[2-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙基]-2-丙酰胺}法尼基硫代水楊酸酰胺(II15)的制備參照II1的制備方法，3-3e脫保護基后與FTA反應制得，無色透明油狀物，收率39.4％，IR(KBr，cm-1)v3402，2907，1714，1624，1550，1452，1388；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.03(d，2H，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.72(m，2H，Ar-H)，7.60(m，2H，Ar-H)，7.21-7.35(m，3H，Ar-H)，6.64(m，1H，CONH)，6.29(d，1H，J＝9.0Hz，NH)，5.27(t，1H，J＝6.3Hz，SCH2CH)，5.08(t，2H，J＝5.1Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.56(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2)，4.31(m，2H，NCH2)，3.73(m，2H，COOCH2CH2)，3.54(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，2.01(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.45-1.64(m，12H，4×CH3)，1.50(d，2H，J＝7.2Hz，NCHCH3)；ESI-MS(m/z)711[M+H]+. 實施例27 N-Boc-L-亮氨酸-1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯(3-5g)的制備參照3-1g的制備方法，由Boc-L-亮氨酸與1g反應制得，無色油狀物，收率90.1％。
N-{2-異己酸-1-甲基-3-[(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II16)的制備參照II1的制備方法，3-5g脫保護基后與FTA反應制得，無色透明油狀物，收率51.2％，IR(KBr，cm-1)v3413，2846，1717，1616，1551，1515，1454，1380，1169；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.05(d，2H，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.70(m，1H，Ar-H)，7.58(m，2H，Ar-H)，7.40(m，2H，Ar-H)，7.29(m，2H，Ar-H)，5.25(t，1H，J＝6.6Hz，SCH2CH)，5.06(m，3H，2×CH2CH＝CCH3，NCH)，5.13～5.21(m，1H，OCH)，4.45～4.50(t，2H，J＝6.0Hz，OCH2)，3.54(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，2.20(m，2H，OCHCH2)，1.91-2.05(m，10H，CHCH2CH，2×CHCH2CH2CH)，1.56-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)，1.37-1.51(m，4H，OCHCH3，CH3CHCH3)，0.80～1.08(m，6H，2CH3)；.ESI-MS(m/z)768[M+H]+. 實施例28 N-Boc-β-丙氨酸-2-{[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}乙酯(3-6k)的制備參照3-1g的制備方法，由Boc-β-丙氨酸與1k反應制得，無色油狀物，收率29.9％。
N-{丙酸-2-[[2-(4-苯磺?；?5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水楊酸酰胺(II17)的制備參照II1的制備方法，3-6k脫保護基后與FTA反應制得，無色透明油狀物，收率35.7％，IR(KBr，cm-1)v3415，2935，1731，1650，1550，1454，1388，1186；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.04(d，2H，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.72(m，2H，Ar-H)，7.61(m，2H，Ar-H)，7.39-7.41(m，4H，Ar-H)，6.22(brs，1H，NH)，5.25(t，1H，J＝6.3Hz，SCH2CH)，5.07(t，2H，J＝5.4Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.56(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2)，4.40(t，3H，J＝4.5Hz，CH2OCN)，4.30(s，1H，NCH2)，3.93(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2CH2O)，3.82(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2OCH2)，3.54(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，1.96-2.01(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.47-1.66(m，12H，4×CH3)；ESI-MS(m/z)742[M+H]+.
權利要求
1.通式I、II所示的法尼基硫代水楊酸衍生物及其醫(yī)學上可接受的鹽
通式I中X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)CH2-，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-，-PhCH2-，-(CH2CH2OH)CH2CH2-，-(CH2)2NH(CH2)2-，-(CH2)2NBoc(CH2)2-，-(CH3)CH2CH2-，-(CH2CH2)2NCH2CH2-，-(CH2CH2)2CH(CH2)n-，n＝0～2，-(CH2CH2CH2)CHCH2-，-CH2CH＝CHCH2-或-CH2C≡CCH2-；
通式II中-NH-A-CO-代表甘氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、L-或D-型丙氨酸、L-或D-型纈氨酸、L-或D-型亮氨酸、L-或D-型異亮氨酸、L-或D-型甲硫氨酸、L-或D-型半胱氨酸、L-或D-型苯丙氨酸、L-或D-型酪氨酸、L-或D-型色氨酸、L-或D-型精氨酸、L-或D-型脯氨酸、L-或D-型組氨酸殘基；X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)CH2-，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-，-PhCH2-，-(CH2CH2OH)CH2CH2-，-(CH2)2NH(CH2)2-，-(CH2)2NBoc(CH2)2-，-(CH3)CH2CH2-，-(CH2CH2)2NCH2CH2-，-(CH2CH2)2CH(CH2)n-，n＝0～2，-(CH2CH2CH2)CHCH2-，-CH2CH＝CHCH2-或-CH2C≡CCH2-。
2.根據(jù)權利要求1所述的法尼基硫代水楊酸衍生物及其醫(yī)學上可接受的鹽，其特征在于通式I中X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-，-(CH2CH2OH)CH2CH2-，-(CH2)2NH(CH2)2-，-(CH2)2NBoc(CH2)2-，-(CH3)CH2CH2-，-(CH2CH2)2CH-，-(CH2CH2)2NCH2CH2-，-(CH2CH2CH2)CHCH2-或-CH2C≡CCH2-。
3.根據(jù)權利要求1所述的法尼基硫代水楊酸(FTA)衍生物及其醫(yī)學上可接受的鹽，其特征在于，通式II中-NH-A-CO-代表甘氨酸、β-丙氨酸、L-型丙氨酸、L-型苯丙氨酸、L-型脯氨酸、或L-型亮氨酸殘基；X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-或-CH2C≡CCH2-。
4.權利要求1所述的法尼基硫代水楊酸衍生物的制備方法，其特征在于
通式I中所示的法尼基硫代水楊酸(FTA)衍生物通過下列方式制備2-氧-3，4-二苯磺?；?1，2，5-噁二唑在氫氧化鈉作用下與烴基二醇或烴基醇胺反應生成呋咱氮氧化物(1)，法尼基硫代水楊酸(FTA)在N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和DMAP作用下與呋咱氮氧化物(1)反應制得通式I化合物，其合成路線如下
其中，X和R的定義如權利要求1所述。
通式II中所示的法尼基硫代水楊酸(FTA)衍生物通過下列方式制備在DCC和DMAP作用下，呋咱氮氧化物(1)與Boc保護的氨基酸(2)反應生成中間體(3)，經(jīng)三氟乙酸(TFA)脫Boc得到化合物(4)，在1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)和DMAP作用下，與法尼基硫代水楊酸(FTA)反應制得，其合成路線如下
其中，-NH-A-CO-、X和R的定義如權利要求1所述。
5.一種藥物組合物，由治療上有效劑量的權利要求1所述的通式I、II化合物和藥學上可接受的載體或輔料組成。
6.權利要求1所述的通式I、II化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
7.權利要求6的用途，其中腫瘤疾病是肝癌、腎癌、肺癌、乳腺癌、腦癌、胃癌、結腸癌、卵巢癌、子宮癌、膀胱癌、前列腺癌、胰腺癌、口腔癌、喉癌、食管癌、皮膚癌或白血病。
全文摘要
本發(fā)明公開了一氧化氮(NO)供體型的法尼基硫代水楊酸(FTA)衍生物及其藥學上可接受的鹽、其制備方法及其醫(yī)藥用途。該類FTA衍生物是由NO供體呋咱氮氧化物與Ras蛋白抑制劑FTA通過酯鍵或酰胺鍵進行雜合得到的化合物。藥理實驗結果表明，本發(fā)明的FTA衍生物能保留FTA的Ras蛋白抑制活性，同時釋放高濃度NO，誘導腫瘤細胞凋亡，增強對癌細胞增殖的抑制作用，較FTA具有更優(yōu)良的抗腫瘤活性，因此，該類化合物可能適用于治療臨床上多種惡性腫瘤。
文檔編號A61P35/00GK101812059SQ201010146029
公開日2010年8月25日申請日期2010年4月14日優(yōu)先權日2010年4月14日
發(fā)明者張奕華, 凌勇, 賴宜生, 葉小磊, 季暉, 彭司勛申請人:中國藥科大學

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