專利名稱：：一種含有櫻草苷和苯乙酮苷類成分組合物的制備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種來自蒙藥原料藥的櫻草苷和苯乙酮苷類提取物，尤其涉及來自胭脂花原料藥的含有櫻草苷的苯乙酮苷類提取物。
背景技術(shù)：
：蒙藥胭脂花(又名段報(bào)春、胭脂報(bào)春)為報(bào)春花科報(bào)春花屬植物胭脂花PrimulamaximowicziiRegel的全草(蒙藥名薩都克納克福)，生于亞高山草甸上或山地林下、林緣及潮濕腐殖質(zhì)豐富的地方，在我國分布于東北、內(nèi)蒙古、河北、山西、陜西、甘肅、青海等地，具有止痛、祛風(fēng)的作用，主治癲癇、頭痛等癥。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人在對胭脂花中的櫻草苷和苯乙酮苷類提取物進(jìn)行研究中，發(fā)現(xiàn)所得到的含有櫻草苷和系列苯乙酮苷類提取物，因而完成了本發(fā)明的內(nèi)容。本發(fā)明提供的蒙藥櫻草苷和苯乙酮苷類提取物，尤其是蒙藥胭脂花中提取的含有櫻草苷和苯乙酮苷類提取物。本發(fā)明提供了一種來自蒙藥原料藥的櫻草苷和苯乙酮苷類提取物，其中至少含有櫻草苷成分，該提取物中櫻草苷的含量以重量百分?jǐn)?shù)計(jì)至少不低于5%，優(yōu)選30%，但不超過95%。本發(fā)明還提供了來自胭脂花原料藥的上述提取物的提取方法，以得到櫻草苷和苯乙酮苷含量較高的提取物。根據(jù)本發(fā)明提供的蒙藥櫻草苷和苯乙酮苷類提取物，其中至少含有櫻草苷，每克提取物中含有的櫻草苷和苯乙酮苷類成分以櫻草苷計(jì)不少于500毫克。尤其是，每克提取物中含有櫻草苷不少于50毫克。本發(fā)明的提取物可以來自任何含有所述櫻草苷和苯乙酮苷成分的原料藥，優(yōu)選來自胭脂花原料藥中櫻草苷和苯乙酮苷類成分。通過對成分的試驗(yàn)摸索，本發(fā)明尤其提供了應(yīng)用大孔吸附樹脂和聚酰胺吸附精制的提取方法得到的胭脂花提取物，具有比較高的櫻草苷和苯乙酮苷類有效成分含量，并且保持了天然原料的成分。本發(fā)明所稱“苯乙酮苷類”是指以苯乙酮為母核的不同糖為取代基的化合物。根據(jù)前面所述，本發(fā)明的提取物來自蒙藥胭脂花，除含有櫻草苷外，還可以包括任何苯乙酮苷類部位，例如其成分還包括選自2-櫻草糖基-4-甲氧基-苯乙酮、4-0-β-D-葡萄糖基-苯乙酮、4-羥基-苯乙酮、2-0-β-D-葡萄糖基-4-甲氧基_苯甲酸甲酯、4-櫻草糖基-苯乙酮、2-櫻草糖基-5-甲氧基_苯乙酮等中的一種或數(shù)種。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選方案，該提取物來自胭脂花原料藥中櫻草苷和苯乙酮苷類成分。本發(fā)明的提取物可以是通過任何可行的方法得到，優(yōu)選地可以是采用大孔吸附樹脂和聚酰胺吸附精制得到，使產(chǎn)物具有比較高的純度和收率。本發(fā)明可采用原料生藥，也可采用加工后的飲片。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的方法，采用胭脂花飲片或未加工的胭脂花生藥為原料，如果是未加工的胭脂花生藥，可進(jìn)行清洗、晾曬和切片等加工作為前期處理，提取方法如下胭脂花藥材粉碎，有機(jī)溶媒(例如乙醇)提取，回收溶劑，濃縮沉淀，濾過，濾液上大孔吸附樹脂，用有機(jī)溶媒(例如醇，優(yōu)選乙醇)梯度洗脫，收集10%-90%濃度洗脫下來的成分，優(yōu)選20%-50%濃度洗脫下來的成分，更優(yōu)選20%-40%濃度洗脫下來的成分，上聚酰胺柱，以20%-35%乙醇洗脫，得到化合物櫻草苷和苯乙酮苷類成分為主的組分。結(jié)構(gòu)鑒定化合物1:2_櫻草糖基-4-甲氧基-苯乙酮棕黃色粉末，UVλmaxMe0Hnm:224，262。1H-NMR數(shù)據(jù)顯示此化合物結(jié)構(gòu)中存在ABX偶合系統(tǒng)δ7.65(1H，d，J=8.5Hz,Η-6)，6·78(1H,d,J=2.OHz,Η_3)，6·66(1Η,dd,J=8.5,2.OHz,Η_5)和1個(gè)甲氧基δ3.83(3Η,s，H-9)，l個(gè)甲基δ2.57(3H，s，Η-8)以及2個(gè)糖的端基氫δ5.03(1Η，d，J=7·5Ηζ，Η-Γ)，4·15(lH，d，J=7.5Ηζ，Η-1”)，表明2個(gè)單糖均為β構(gòu)型。13C-NMR數(shù)據(jù)顯示有20個(gè)碳的信號，包括1個(gè)酮基碳[δ197.21(C_7)]、1個(gè)甲氧基碳[δ56.09(C-9)]、1個(gè)甲基碳[δ32.52(C-8)]；并且糖鏈結(jié)構(gòu)為櫻草糖=D-木糖(1—6)D-葡萄糖[D-glucoseδ100.94(C-1，)，73.70(C-2，)，76.89(C-3，)，70.09(C-4，)，76.14(C-5，)，69.28(C_6，)；D_xyloseδ104.63(C_l”)，73.54(C_2”)，76.89(C-3，，)，69.85(C-4”)，66.08(C_5”)]。將該化合物與文獻(xiàn)[1]報(bào)道的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，確定化合物1為2-櫻草糖基-4-甲氧基-苯乙酮?；衔?4-羥基_苯乙酮白色粉末，UVλmaxMe0Hnm211，260。1H-NMR數(shù)據(jù)顯示此化合物結(jié)構(gòu)中存在AB偶合系統(tǒng)δ7.86(2H，d，J=8.1Ηζ，Η_2，6)，6·87(2Η,d,J=8.IHz,Η_3，5)禾口1個(gè)甲基δ2.53(3Η,s,Η-8)。13C-NMR數(shù)據(jù)顯示有8個(gè)碳的信號，包括1個(gè)酮基碳[δ195.15(C-7)]、1個(gè)甲基碳[δ25.29(C-8)]。綜合以上數(shù)據(jù)，與化合物3的波譜數(shù)據(jù)進(jìn)行比較(表1)并檢索文獻(xiàn)[2]，確定化合物2為4-羥基-苯乙酮。Table1NMRdataforcompounds2，3and5(δinDMS0_d6)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>化合物34-0-β-D-葡萄糖基_苯乙酮淡黃色粉末，UVλmaxMe0Hnm:215，洲7。1H-NMR數(shù)據(jù)顯示此化合物結(jié)構(gòu)中存在AB偶合系統(tǒng)δ7.92(2H，d，J=8.5Hz，H_2，6)，7.11(2H，d，J=9.OHz,H_3，5)和1個(gè)甲基δ2.53(3H，s，H_8)；同時(shí)1個(gè)糖的端基氫[δ5.01(1Η,d,J=7.5Ηζ,Η-1')]表明此單糖為β構(gòu)型。13C-NMR數(shù)據(jù)顯示有14個(gè)碳的信號，包括1個(gè)酮基碳[δ196.95(C-7)]、1個(gè)D-葡萄糖[δ100.23(C-1，)，73.49(C-2，)，77.54(C_3，)，69.96(C_4，)，76.81(C_5，)，60.96(C-6')]以及1個(gè)甲基碳[δ26.93(C-8)]。將該化合物與文獻(xiàn)[3]報(bào)道的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，確定化合物3為4-0-β-D-葡萄糖基-苯乙酮，俗稱云杉素(picein)?；衔?2-0-β-D-葡萄糖基-4-甲氧基-苯甲酸甲酯淡黃色粉末，UVλmaxMe0Hnm-.220,24801H-NMR數(shù)據(jù)顯示此化合物結(jié)構(gòu)中存在ABX偶合系統(tǒng)δ7.68(1H，d，J=8.5Hz,H-6)，6·83(1H,d,J=2.3Hz,H_3)，6·67(1H,dd,J=8.5,2.3Hz,H_5)和2個(gè)甲氧基δ3.81(3Η,s，Η-9)，3.77(3Η，s，Η_8)以及1個(gè)糖的端基氫[δ4.91(1Η,d，J=7.3Hz，H-I‘)]，表明此糖為β構(gòu)型。13C-NMR數(shù)據(jù)顯示有15個(gè)碳的信號，包括1個(gè)羰基碳[δ166.35(C_7)]、2個(gè)甲氧基碳[δ55.82(C-9)，52.43(C-8)];同時(shí)可能存在1分子葡萄糖[D-glucoseδ101.74(C-1，)，73·71(C_2，)，76.75(C_3，)，70.23(C_4，)，76.26(C_5，),61.08(C_6，)]。綜合以上數(shù)據(jù)，推測此化合物結(jié)構(gòu)為2-0-β-D-葡萄糖基-4-甲氧基-苯甲酸甲酯。通過檢索CA，僅有文獻(xiàn)⑷提到此結(jié)構(gòu)，但未報(bào)道其NMR數(shù)據(jù)。因此，通過與櫻草苷的NMR數(shù)據(jù)進(jìn)行比較(表2)，對化合物4的1H和13C信號進(jìn)行了歸屬。Table2NMRdataforcompounds4and6(δinDMS0_d6)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>a)Theassignmentofthesesignalswasundertheaidsof2D-NMR化合物54-櫻草糖基_苯乙酮淡黃色粉末，UVλmaxMe0Hnm209,264.1H-NMR數(shù)據(jù)顯示此化合物結(jié)構(gòu)中存在AB偶合系統(tǒng)δ7.93(2H，d，J=9.0Hz，H_2，6)，7.15(2H，d，J=8.5Hz,H_3，5)和1個(gè)甲基δ2.53(3H，s，H_8)；同時(shí)2個(gè)糖的端基氫[δ4.95(1Η,d，J=7.0Hz，Η_Γ)，4·17(1H，d，J=7.5Hz，H-I")]表明2個(gè)單糖均為β構(gòu)型。13C-NMR數(shù)據(jù)顯示有19個(gè)碳的信號，包括1個(gè)酮基碳[δ196.85(C-7)]、1個(gè)甲基碳[S26.04(C-8)]；糖鏈結(jié)構(gòu)為櫻草糖D-木糖(1—6)D_葡萄糖[D-glucoseδ99.45(C-1，),72.58(C_2，)，75.90(C_3，),69.04(C_4，),75.60(C_5，),67.67(C_6，)；D-xyloseδ103.34(C_1，，)，72.84(C_2，，)，75.94(C_3，，)，69.04(C_4，，)，65.10(C_5，，)]。綜合以上數(shù)據(jù)，并與化合物3的波譜數(shù)據(jù)進(jìn)行比較(表1)以及檢索文獻(xiàn)[5]，確定此化合物結(jié)構(gòu)為4-櫻草糖基-苯乙酮。化合物62-櫻草糖基-4-甲氧基-苯甲酸甲酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>30(1H,m)30(1H,m)20(1H，m)60(1H，ra)95(1H,d,9.60(1H,m)15(1H,95(1H,08(1H,26(1H,5Hz)，<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>白色粉末，UVXmaxMe°Hnm:222，253。ESI_MS譜給出準(zhǔn)分子離子峰m/z499.2[M+Na]+，515.1[M+K]+的峰，結(jié)合t-NMR和13C_NMR譜數(shù)據(jù)，推測其分子量為476，分子式為C2(1H28013。i-NMR數(shù)據(jù)顯示此化合物結(jié)構(gòu)中存在ABX偶合系統(tǒng)S7.68(1H，d，J=8.7Hz,H-6)，6.81(1H，d,J=1.7Hz,H_3)，6.66(1H，dd,J=8.7,1.7Hz,H_5)和2個(gè)甲氧基63.82(3H,s),3.77(3H,s)；以及糖鏈結(jié)構(gòu)2個(gè)糖的端基氫[84.92(1H,d，J=6.5Hz，H-l，)，S4.15(lH，d，J=7.5Hz，H-l”)]表明2個(gè)單糖均為3構(gòu)型。通過HMQC譜可以得到與糖鏈2個(gè)端基質(zhì)子相對應(yīng)的2個(gè)端基碳:8101.35(c-l，)，104.63(c-l，，)。13C_NMR數(shù)據(jù)顯示結(jié)構(gòu)中存在1個(gè)羰基碳S166.18(C_7)，并且糖鏈可能包括1分子葡萄糖[673.71(C-2'),76.73(C-3'),70.11(C_4，)，76.16(C_5，)，69.16(C_6，)]以及1分子木糖[873.84(C-2”)，77.04(C-3”)，69.97(C-4”)，66.11(C_5”)]，而在HMBC譜中可以找到H-l”(64.15)與C-6’(669.16)有相關(guān)點(diǎn)。因此確定糖鏈結(jié)構(gòu)為D-木糖(1—6)D-葡萄糖，即櫻草糖(primverose)。該化合物與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的t-NMR和13C_NMR數(shù)據(jù)一致(表3)，因此確定化合物6為2-櫻草糖基-4-甲氧基-苯甲酸甲酯，俗稱櫻草苷(primeverin)。Table3NMRdataforcompound6(8inDMS0_d6)Theassignmentofthesesignalswasundertheaidsof2D-NMR化合物72-櫻草糖基-5-甲氧基-苯乙酮棕黃色粉末，UV入maxMe°Hnm:221，259。HRESI-MS給出分子式C2QH28012Na(實(shí)測值483.1480，計(jì)算值483.1478)，結(jié)合t-NMR和13C_NMR數(shù)據(jù)，確定其分子量為460，分子式為C20H28012,說明該化合物有7個(gè)不飽和度。i-NMR數(shù)據(jù)提示此化合物結(jié)構(gòu)中存在ABX偶合系統(tǒng)57.32(1H，d，J=9.0Hz,H-3)，7.12(1H,dd,J=9.0，3.0Hz,H_4)，7.08(1H,d,J=3.0Hz,H_6)和1個(gè)甲氧基53.74(3扎8，11-9)，1個(gè)甲基S2.62(3H，s，H-8)以及2個(gè)糖的端基氫S4.83(1H，d，J=7.0Hz,H-l')，4.19(lH，d，J=7.5Hz，H-l”)，表明2個(gè)單糖均為3構(gòu)型。13C-NMR數(shù)據(jù)顯示有20個(gè)碳的信號，包括1個(gè)酮基碳[S199.38(C_7)]、1個(gè)甲氧基碳[S55.96(C-9)]、1個(gè)甲基碳[S32.47(C-8)]；并且糖鏈結(jié)構(gòu)為:D-glucose8101.97(C-1，),73.76(C-2，)，76.96(C_3，)，70.10(C_4，)，76.82(C_5，),68.74(C_6，)；D-xylose8104.31(C_1”)，73.70(C_2”)，76.53(C_3”)，69.94(C_4”)，66.05(C_5”)。在HMBC譜中可以找到H-l，，(64.19)與C_6，(668.74)有相關(guān)點(diǎn)，同時(shí)，將化合物26糖鏈結(jié)構(gòu)的13C-NMR數(shù)據(jù)與化合物6進(jìn)行比較，兩者一致，因此推測糖鏈結(jié)構(gòu)為D-木糖(1—6)D-葡萄糖，即櫻草糖。同時(shí)，N0ESY譜顯示83.74(3H，s)與57.12(1H，dd,J=9.0,3.0Hz)有相關(guān)點(diǎn)，表明甲氧基氫與苯環(huán)中處于鄰、間位雙重偶合的氫在同側(cè)。綜合以上數(shù)據(jù)并通過2D-NMR對其丸13C信號進(jìn)行歸屬(見表4)，確定此化合物的結(jié)構(gòu)為2-櫻草糖基-5-甲氧基-苯乙酮。經(jīng)檢索文獻(xiàn)，未見相關(guān)報(bào)道，化合物7為一新化合物。Table4NMRdataandkeycorrelationsforcompound7(8inDMS0-d6)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>Theassignmentofthesesignalswasundertheaidsof2D-NMR；a,b,cAssignmentsmaybeinterchangeable.參考文獻(xiàn)[1]Kuwajima,Hiroshi；Shibano，Naoka；Baba，Toshifumi；etal.，AnacetophenoneglycosidefromExacumaffine，Phytochemistry，1996，41(1):289_92.[2]Srebotnik,Ewald；Jensen，KennethA.,Jr.；Kawai,Shingo；etal.，EvidencethatCeriporiopsissubvermisporadegradesnonphenolicligninstructuresbyaone-electronoxi-dationmechanism.AppliedandEnvironmentalMicrobiology，1997，63(11):4435-40.[3]Schroeder，Cornelia；Lutterbach，Ralf；Stoeckigt，Joachim.Preparativebiosynthesissofnaturalglucosidesandfluorogenicsubstratesfor^-glucosidasesfollowedbyinvivo13C~NMRwithhighdensityplantcellcultures.Tetrahedron,1996，52(3):925_34.[4]Wagner,G.；Kuhmstedt，H.Phenolglycosides.XVI11.Fermentativehydrolysisof旦-D-glucopyranosidesoftheresorcylicacidseries.ArchivderPharmazie，1960，29(3):428_41.[5]Li，Jun；Kadota，Shigetoshi；Kawata，Yukio；etal.，ConstituentsoftherootsofCynanchumbungeiDecne.Isolationandstructuresoffournewglucosides，bungeisideA，B，C，andD.Chemical&PharmaceuticalBulletin，1992，40(12):3133_7.[6]AndreaMiiller，MarkusGanzeraandHermannStuppner.Analysisof9phenolicglycosidesandsaponinsinPrimulaelatiorandPrimulaveris(primularoot)by1iquidchromatography,evaporativelightscatteringdetectionandmassspectrometry,JournalofChromatographyA,2006,1112218-223.胭脂花中櫻草苷和苯乙酮苷部位的制備1.大孔吸附樹脂的處理1.1預(yù)處理取AB-8型大孔吸附樹脂，用丙酮加熱回流洗脫，洗脫至洗脫液蒸干后無殘留物。1.2裝柱以乙醇濕法裝柱，繼續(xù)用乙醇沖柱，不時(shí)檢查流出液，至與水混合不呈白色混濁為止(乙醇液水=15)。然后以大量的蒸餾水洗去乙醇，備用。1.3再生樹脂使用一次后，一般用95%的乙醇洗脫至無色時(shí)，樹脂柱即已再生，然后以大量水洗去乙醇，即可進(jìn)行下一次的分離。經(jīng)反復(fù)使用后，吸附樹脂顏色變深，吸附效果下降時(shí)，可用0.0.5%NaOH和HC1進(jìn)行酸堿交替處理或浸泡適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，至樹脂接近原顏色為宜，繼續(xù)用水洗至中性即可再用。2.藥材的提取取藥材胭脂花，粉碎成粗粉，用50%乙醇回流提取3次(8倍量，2小時(shí)；6倍量，1小時(shí)；6倍量，1小時(shí))，濾過，合并濾液，低溫減壓回收乙醇至無醇味，以水調(diào)節(jié)至每毫升藥液相當(dāng)于1.0g生藥。2.1洗脫溶媒的定性選擇取提取液加到已處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱上，依次用蒸餾水、30%、50%、90%乙醇梯度洗脫，分段收集，減壓回收乙醇加以濃縮，聚酰胺薄層色譜及其HPLC色譜定性檢查櫻草苷和苯乙酮苷類成分，結(jié)果顯示30%中含有苯乙酮苷。因此確定提取液在AB-8型大孔吸附樹脂吸附后，水洗脫除去水溶性雜質(zhì)，30%乙醇洗脫富集胭脂花中苯乙酮苷類成分。2.230%乙醇洗脫量的確定取樣品溶液20ml上柱，靜置后，先用蒸餾水洗脫至無色，再用30%乙醇洗脫，每50ml為一份，每份稍加濃縮，薄層色譜法定性檢測櫻草苷，結(jié)果顯示第5份時(shí)檢測不出櫻草苷，故確定洗脫溶媒用量為200mL。2.3富集程度考察取樣品液20ml，按上述條件上柱洗脫，收集水洗脫液濃縮干燥至恒重，收集30%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，并減壓干燥至恒重。另取提取液20ml減壓干燥至恒重，分別測定總固物的含量。并按含量測定法測定上柱前和上柱后的含量，結(jié)果見下表。<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>結(jié)果表明，以AB-8型大孔吸附樹脂為吸附劑，上樣與洗脫前后的總固型物和櫻草苷的含量為指標(biāo)，AB-8型大孔吸附樹脂可以有效的去除雜質(zhì)，使櫻草苷和苯乙酮苷類成分的含量大幅度提高，而且的保留率接近，說明AB-8型大孔吸附樹脂可用于胭脂花中櫻草苷和苯乙酮苷類成分的富集。以櫻草苷為指標(biāo)評價(jià)AB-8型大孔吸附樹脂富集胭脂花中櫻草苷和苯乙酮苷類成分的上樣量，結(jié)果表明大孔吸附樹脂20mL最大吸附量為20ml胭脂花藥液，即20g胭脂花生藥為佳。3.聚酰胺的處理3.1預(yù)處理取60-90目聚酰胺，用乙醇加熱回流洗脫，洗脫至洗脫液蒸干后無殘留物。3.2裝柱以30%乙醇濕法裝柱，繼續(xù)用30%乙醇沖柱，備用。3.3再生樹脂使用一次后，一般用95%的乙醇洗脫至無色時(shí)，聚酰胺柱即已再生，然后再用30%乙醇洗脫，即可進(jìn)行下一次的分離。經(jīng)反復(fù)使用后，吸附聚酰胺顏色變深，吸附效果下降時(shí)，可用0.0.5%NaOH和HC1進(jìn)行酸堿交替處理或浸泡適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，至聚酰胺接近原顏色為宜，繼續(xù)用水洗至中性即可再用。3.4洗脫溶媒的定性選擇取2中大孔吸附樹脂30%乙醇洗脫液部分，濃縮至lml溶液相當(dāng)于10g生藥，加到已處理好的聚酰胺柱上，用10%、30%、50%、90%乙醇梯度洗脫，分段收集，減壓回收乙醇加以濃縮，聚酰胺薄層色譜及其HPLC色譜定性檢查櫻草苷和苯乙酮苷類成分，結(jié)果顯示30%中含有櫻草苷和苯乙酮苷類。因此確定30%大孔吸附樹脂洗脫液再經(jīng)聚酰胺吸附后，30%乙醇洗脫富集胭脂花中櫻草苷和苯乙酮苷類成分。3.530%乙醇洗脫量的確定取樣品溶液20ml上柱，用30%乙醇洗脫，每20ml為一份(1個(gè)柱體積)，每份稍加濃縮，薄層色譜法定性檢測櫻草苷，結(jié)果顯示第6份時(shí)檢測不出櫻草苷，故確定洗脫溶媒用量為120mL。3.6富集程度考察取樣品液20ml，按上述條件上柱洗脫，收集30%乙醇洗脫液，回收乙醇，并干燥至恒重。另取提取液20ml減壓干燥至恒重，分別測定總固物的含量。并按含量測定法測定上柱前和上柱后的含量，結(jié)果見下表。項(xiàng)目總固體物(g)櫻草苷量(mg)櫻草苷含量(％)上柱前4.3043.861.0230%乙醇洗脫0.7639.985.26櫻草苷洗脫率(％)-91.15一結(jié)果表明，以聚酰胺為吸附劑，上樣與洗脫前后的總固型物和櫻草苷的含量為指標(biāo)，聚酰胺可以有效的去除黃酮類，使櫻草苷和苯乙酮苷類成分的含量大幅度提高，而且的保留率接近，說明聚酰胺可用于胭脂花中櫻草苷和苯乙酮苷類成分的富集。以櫻草苷為指標(biāo)評價(jià)聚酰胺富集胭脂花中櫻草苷和苯乙酮苷類成分的上樣量，結(jié)果表明聚酰胺20g最大吸附量為200g胭脂花為佳。除以上所述，實(shí)施本發(fā)明方法的過程中所涉及的其它操作，例如提取液的揮發(fā)，可以采用加溫?fù)]發(fā)，也可以直接常溫自然揮發(fā)或其它可行的方法，分取和揮干過程的具體操作屬于本領(lǐng)域的基本技能，而涉及到的蒙藥飲片加工、粉碎、過篩和萃取等，均可采用本領(lǐng)域常規(guī)操作或其它可行的操作，本發(fā)明沒有特別限定。得到的提取物可以通過任何常規(guī)的11檢測分析方法得知其是否符合要求，如薄層色譜法、紫外分光光度法以及其他如《中國藥典》2005年版一部附錄所收載的分析方法，以上屬于本領(lǐng)域常規(guī)操作，本發(fā)明亦沒有特別限定。從胭脂花藥材中分離精制的苯乙酮苷及其主要成分櫻草苷，因此作為胭脂花的物質(zhì)作用部位和主要成分之一。本文建立分離效果好，方法快速準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好的HPLC方法，檢測了胭脂花中櫻草苷和苯乙酮苷類部位成分。含有櫻草苷和苯乙酮苷類成分分析1儀器與試劑HP-1100系列高效液相色譜儀；甲醇(色譜純)，乙腈(色譜純)，均購自FisherScientific；市售純水。2樣品制備對照品溶液的制備精密稱取2-櫻草糖基-4-甲氧基-苯乙酮對照品、4-0-0-D-葡萄糖基-苯乙酮對照品、2-0-0-D-葡萄糖基-4-甲氧基-苯甲酸甲酯對照品、4-櫻草糖基_苯乙酮對照品、櫻草苷對照品、2-櫻草糖基-5-甲氧基_苯乙酮對照品適量，加甲醇制成每1ml含20iig的溶液，即得。供試品溶液的制備取上述制備部位樣品0.lg，精密稱定，置100mL錐形瓶中，加入70%甲醇50mL，稱重，超聲(功率250W，頻率50KHZ)處理40分鐘，放至室溫，加70%甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測定，即得。3色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)DiamonsilC18(5um,150X4.6mm)色譜柱；甲醇(A)_水(B)為流動(dòng)相，按照下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長為254nm；柱溫30°C；流速lmL/min。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>4樣品測定取1所述供試品溶液，以2所述色譜條件分別進(jìn)行測定。通過各個(gè)單體化合物的保留時(shí)間對其在部位的峰中的位置進(jìn)行定位，分析結(jié)果見表，HPLC色譜圖見圖15。對照品與樣品色譜峰對應(yīng)表<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>在上述研究基礎(chǔ)上，本發(fā)明還提供了可用于櫻草苷和苯乙酮苷類的藥物組合物，包括蒙藥櫻草苷和苯乙酮苷類提取物及藥劑學(xué)中可接受的藥物輔劑，其中櫻草苷和苯乙酮苷類提取物在組合物中重量比至少不低于10%，優(yōu)選不低于30%，更優(yōu)選50%以上，不超過95%。上述藥物組合物包括藥學(xué)可接受的任何劑型，如注射劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑和口服液等，上述藥物輔劑也包括藥學(xué)可接受的任何輔料，以及各劑型的制備工藝均為本領(lǐng)域常規(guī)操作，在此不加贅述。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，該櫻草苷和苯乙酮苷類部位還可與其它蒙藥成分復(fù)配達(dá)到更好的治療效果，所述成分可以是例如葛根、人參、銀杏、三七、燈盞花、丹參等原料藥中的有效成分，其可來自任何提取方法。圖1櫻草苷對照品HPLC色譜2胭脂花藥材HPLC色譜圖(p櫻草苷)圖3含櫻草苷和苯乙酮苷部位的HPLC色譜4化合物3(4-0-0-D-葡萄糖基_苯乙酮)和化合物5(4_櫻草糖基-苯乙酮)對照品HPLC色譜5化合物7(2-櫻草糖基-5-甲氧基_苯乙酮)、化合物1(2-櫻草糖基_4_甲氧基-苯乙酮)、化合物6(2-櫻草糖基-4-甲氧基-苯甲酸甲酯(櫻草苷))和化合物4(2-0-0-D-葡萄糖基-4-甲氧基-苯甲酸甲酯)對照品HPLC色譜6櫻草苷和苯乙酮苷類化合物結(jié)構(gòu)式圖72-櫻草糖基-4-甲氧基-苯乙酮的i-NMR光譜82-櫻草糖基-4-甲氧基-苯乙酮的13C_NMR光譜94-羥基-苯乙酮的1H-NMR光譜104-羥基-苯乙酮的13C_WR光譜114-0-3-D-葡萄糖基-苯乙酮的i-NMR光譜124-0-3-D-葡萄糖基-苯乙酮的13C_NMR光譜132-O-0-D-葡萄糖基-4-甲氧基-苯甲酸甲酯的^-NMR光譜142-0-3-D-葡萄糖基-4-甲氧基-苯甲酸甲酯的13C_NMR光譜154-櫻草糖基_苯乙酮的t-NMR光譜164-櫻草糖基-苯乙酮的13C_NMR光譜17櫻草苷的ESI-MS光譜18櫻草苷的wH-NMR光譜19櫻草苷的13C_NMR光譜20櫻草苷的HMQC光譜21櫻草苷的HMBC光譜222-櫻草11基-5-甲氧基_苯乙酮的HRESI-MS光譜圖圖232-櫻草11基-5-甲氧基_苯乙酮的1H-NMR光譜圖圖242-櫻草11基-5-甲氧基_苯乙酮的13C-NMR光譜圖圖252-櫻草11基-5-甲氧基_苯乙酮的屯-屮COSY光譜圖圖262-櫻草11基-5-甲氧基_苯乙酮的HMQC光譜圖圖272-櫻草11基-5-甲氧基_苯乙酮的HMBC光譜圖圖282-櫻草糖基-5-甲氧基-苯乙酮的NOESY光譜圖具體實(shí)施例方式關(guān)于本發(fā)明的具體實(shí)施和治療效果，將結(jié)合優(yōu)選實(shí)施例及附圖進(jìn)行詳細(xì)闡述，需要說明的是本發(fā)明所采用的術(shù)語“苯乙酮苷類提取物”、“苯乙酮苷類部位”的含義是相同的。藥物組合物實(shí)施例1注射劑含有櫻草苷和苯乙酮苷類提取物400g苯甲醇0.Ig注射用水加至IOOOml共制成注射劑1000ml。藥物組合物實(shí)施例2片劑含有櫻草苷和苯乙酮苷類提取物40g淀粉20g糖粉20g糊精20g常規(guī)壓片，壓制1000片，每片0.lg。藥物組合物實(shí)施例3膠囊劑含有櫻草苷和苯乙酮苷類提取物40g糊精20g糖粉20g淀粉20g共制成1000粒。藥物組合物實(shí)施例4顆粒劑含有櫻草苷和苯乙酮苷類提取物50g糊精I(xiàn)Og糖粉20g淀粉20g常規(guī)方法制成顆粒劑100g，裝袋，每袋5g。以上描述了本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式，然其并非用以限定本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員對在此公開的實(shí)施方案可進(jìn)行不偏離本發(fā)明范疇和精神的改進(jìn)和變化。權(quán)利要求櫻草苷和苯乙酮苷類提取物，其特征在于所述提取物至少含有櫻草苷，每克提取物中含有的櫻草苷和苯乙酮苷類成分以櫻草苷計(jì)不少于500毫克。2.如權(quán)利要求1所述的櫻草苷和苯乙酮苷類提取物，其中，每克提取物中含有櫻草苷不少于50毫克。3.如權(quán)利要求2所述的櫻草苷和苯乙酮苷類提取物，其中含有櫻草苷和苯乙酮苷類提取物來自胭脂花原料藥。4.如權(quán)利要求3所述的櫻草苷和苯乙酮苷類提取物，其中所述的櫻草苷和苯乙酮苷類提取物為胭脂花中提取的每克提取物含有櫻草苷不少于50毫克的具有如圖3所顯示的指紋圖譜的含有櫻草苷的苯乙酮苷類提取物。5.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的櫻草苷和苯乙酮苷類提取物的制備方法，其中依次為醇提水沉、上大孔吸附樹脂和聚酰胺柱，10%40%醇洗脫，吸附除雜、濃縮、干燥。6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其中用20%35%的乙醇洗脫。7.藥物組合物，包括權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)中的櫻草苷和苯乙酮苷類提取物及藥劑學(xué)中可接受的藥物輔劑。8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其中櫻草苷和苯乙酮苷類提取物的重量比例至少不低于10%。9.如權(quán)利要求7或8所述的藥物組合物，其中櫻草苷和苯乙酮苷類提取物的重量比例為10%95%。全文摘要本發(fā)明提供了一種來自蒙藥原料藥的含有櫻草苷和苯乙酮苷類提取物。本發(fā)明尤其提供了來自胭脂花原料藥中櫻草苷和苯乙酮苷類提取物，和該提取物的提取方法。本發(fā)明還提供了利用該提取物的藥物組合物。本發(fā)明的提取方法簡單實(shí)用，提純效果良好。文檔編號A61P25/08GK101817852SQ20101015907公開日2010年9月1日申請日期2010年4月29日優(yōu)先權(quán)日2010年4月29日發(fā)明者孔德云,張海鳴,方睿,曲功霖,曹杰,杜樹山,楊洪武申請人:北京師范大學(xué)