專利名稱：一種治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥品的質(zhì)量檢測方法，特別是一種治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方 法，確切的說是金馬肝泰片或膠囊的質(zhì)量檢測方法，屬于藥品的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
金馬肝泰片和金馬肝泰膠囊，其主要成分為馬蹄金、鐵包金、馬鞭草、防己、敗醬 草、淫羊藿、黃芪、赤芍和丹參等共九味中藥材，作為民族藥具有清熱解毒，健脾利濕，活血 化瘀的功效，主要用于肝膽濕熱，氣滯血瘀所致的急、慢性肝炎等。現(xiàn)有劑型為顆粒劑，已被 列入國家中成藥標準匯編內(nèi)科肝膽分冊，其質(zhì)量標準相對較為簡單，僅對處方中的防己進 行質(zhì)量控制，因而不能很好地確保其臨床用藥的有效性及安全性，需要進一步研究，提高其 質(zhì)量控制標準。根據(jù)我國藥品管理法的相關(guān)規(guī)定，改變劑型或工藝作為新藥研究管理，金馬 肝泰片和金馬肝泰膠囊作為一種新藥，目前還沒有有效的質(zhì)量控制方法。發(fā)明人對金馬肝 泰片和金馬肝泰膠囊進行了研究，以期探索如何有效控制金馬肝泰片和金馬肝泰膠囊的質(zhì) 量，從而確保其臨床療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法， 所制定的質(zhì)量檢測方法能全面有效地控制金馬肝泰片和金馬肝泰膠囊的質(zhì)量，從而確保了 金馬肝泰片和金馬肝泰膠囊的臨床療效。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案治療肝炎的藥物制劑的質(zhì) 量檢測方法。這種治療肝炎的藥物制劑這樣制備馬蹄金288. 2g、鐵包金153. 3g、馬鞭草 115g、防已191. 6g、敗醬草115g、淫羊藿153. 3g、黃芪153. 3g、赤芍153. 3g、丹參230g,以上 九味藥材，加水煎煮兩次，每次1. 5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至90 95°C時測相對 密度為1. 14 1. 16的清膏，冷至室溫，加2倍量乙醇，攪拌均勻，放置48小時，濾過，濾液 回收乙醇，藥液濃縮至50 60°C時相對密度為1. 34 1. 40的稠膏；稠膏加入適當輔料制 成1000份片劑或膠囊劑，所述的質(zhì)量檢測方法包括性狀、鑒別、檢查和含量測定，其中鑒別 是采用薄層色譜法對制劑中黃芪、赤芍和丹參的鑒別，含量測定是用高效液相色譜法測定 制劑中淫羊藿苷的含量或用高效液相色譜法在同一色譜條件下同時測定制劑中粉防己堿 和防己諾林堿的含量。上述的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法中，所述的鑒別包括
(1)丹參鑒別取本品0. lg 10g，加甲醇1ml 150ml，加熱回流0. lh 2h，濾過， 濾液蒸干，殘渣加水1ml 50ml使溶解，用乙酸乙酯振搖提取1 5次，每次1ml 50ml， 合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶解，作為供試品溶液；另取原兒茶醛對 照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄 VI B薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液0. 5 1 y 1、供試品溶液2 5 y 1，分別點于同一硅 膠G薄層板上，以體積比為1. 9 2. 9 1.5 2. 5 0. 5 1. 5 0.4 0.8的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1 1的1%三氯化 鐵水溶液-1%鐵氰化鉀水溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色 的斑點；
(2)赤芍鑒別取本品0.lg 10g，加甲醇1ml 150ml，加熱回流5min 60min，放 冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水1ml 50ml使溶解，用乙醚振搖提取1 4次，每次1ml 50ml，棄去乙醚液，水層用水飽和的正丁醇提取1 5次，每次1ml 30ml，合并正丁醇液， 正丁醇液用氨試液3ml 50ml洗滌，棄去氨試液，再用3ml 50ml水洗滌，棄去水液，取正 丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加甲 醇制成每1ml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色 譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2 5 y 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為6 10 0.8 1.2 2 6 0.8 1.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨溶液為展開 劑，展開，取出，晾干，噴以濃度為3% 10%的香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試 品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；
(3)黃芪鑒別取本品5g 50g，加甲醇5ml 200ml，加熱回流0.5h 2h，濾過，濾液 濃縮至約1ml 5ml，加于中性氧化鋁柱上，用濃度為30% 50%的甲醇50ml 200ml洗 脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水5ml 50ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取1 5次， 每次5ml 50ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌1 4次，每次5ml 50ml，再用正丁醇飽 和的水洗滌1 4次，每次5ml 50ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶 解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作為對照品溶 液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5 10 iU， 分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為50 80 25 45 5 15的三氯甲烷-甲 醇_水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以濃度為5% 25%的硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色 清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。前述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法中，所述鑒別(2)赤芍鑒別中，顯色時 加熱的溫度為100°C 120°C ；鑒別(3)黃芪鑒別中，所用的展開劑為三氯甲烷-甲醇-水 10°C以下放置后的下層溶液；顯色時加熱的溫度為100°C 120°C。前述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法中，所述的含量測定是通過高效液相 色譜法測定制劑中淫羊藿苷的含量；以淫羊藿苷為對照，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑， 以體積比乙腈水=15 45:55 85為流動相進行含量測定。前述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法中，具體的講，所述淫羊藿苷的含量 測定方法包括以下步驟
(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗儀器Agilent色譜儀；色譜柱為Diamonsil(R)C18 色譜柱，以乙腈_水=15 45 55 85為流動相，柱溫20 30°C，流速1. OmL/min,檢測波 長255 285nm ；進樣量10 yl，理論塔板數(shù)不低于1500 ；
(2)對照品溶液的制備精密稱取淫羊藿苷對照品適量，置容量瓶中，加入甲醇溶解并 稀釋至刻度，搖勻，制得濃度為彡lmg/ml的溶液，即得對照品溶液；
(3)供試品溶液的制備取本品適量，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入適量稀乙 醇，稱定重量，超聲提取30min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，取上清 液，濾過，取續(xù)慮液，即得供試品溶液；(4)測定方法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 iU，注入液相色譜儀，按 照步驟(1)所述色譜條件測定，即得。前述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法中，準確的說，所述淫羊藿苷的含量 測定方法包括以下步驟
(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗儀器Agilent色譜儀；色譜柱為Diamonsil(R)C18 色譜柱，以乙腈_水=15 45 55 85為流動相，柱溫20 30°C，流速1. OmL/min,檢測波 長255 285nm ；進樣量10 yl，理論塔板數(shù)不低于1500 ；
(2)對照品溶液的制備精密稱取淫羊藿苷對照品9.64mg，置10ml容量瓶中，加入甲醇 溶解精密至刻度，作為儲備液；精密量取儲備液1ml置10ml容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即 得濃度為0. 0964mg/ml對照品溶液；
(3)供試品溶液的制備取本品0.5g，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶中，精密加入稀乙 醇20ml，稱定重量，超聲提取30min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，取 上清液，濾過，取續(xù)慮液，即得供試品溶液；
(4)測定方法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10yl，注入液相色譜儀，按 照步驟(1)所述色譜條件測定，即得。前述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法中，所述的含量測定還可以是通過高 效液相色譜法在同一色譜條件下同時測定制劑中粉防己堿和防己諾林堿的含量；以粉防己 堿和防己諾林堿混合溶液為對照，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比乙腈甲醇 水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5為流動相進行含量測定；每100ml流動 相中含十二烷基磺酸鈉0. 2g 1. 0g。上述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法中，具體的說，所述粉防己堿和防己 諾林堿的含量測定方法包括以下步驟
(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗儀器島津LC-lOAtvp高效液相色譜儀；色譜柱為 DiamonsilC18 ；以體積比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5 為流動相，柱溫為10°C 40°C ；檢測波長230nm 350nm ；進樣量5 u L ；理論塔板數(shù)不低于 4000 ；
(2)對照品溶液的制備分別稱取粉防己堿和防己諾林堿對照品適量，精密稱定，分置 于容量瓶中超聲，完全溶解后精密至刻度，作為儲備液；儲備液各取適量置于同一容量瓶 中，稀釋至刻度，搖勻即得；
(3)供試品溶液的制備取本品適量，精密稱定，精密加入0.5 5%鹽酸甲醇溶液適量， 稱定重量，加熱回流15 45min，放冷，再稱定重量，用0. 5 5%鹽酸甲醇溶液補足減失的 重量，濾過；精密量取續(xù)濾液適量，置容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得；
(4)測定方法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5iU，注入液相色譜儀，按照 步驟(1)所述色譜條件測定，即得。前述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法中，準確的說，所述粉防己堿和防己 諾林堿的含量測定方法包括以下步驟
(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗儀器島津LC-lOAtvp高效液相色譜儀；色譜柱為 DiamonsilC18 ；以體積比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5 為流動相，柱溫為10°C 40°C ；檢測波長230nm 350nm ；進樣量5 u L ；理論塔板數(shù)不低于4000 ；
(2)對照品溶液的制備稱取粉防己堿對照品12mg，防己諾林堿對照品9mg，精密稱定， 分置于25ml容量瓶中超聲，完全溶解后精密至刻度，作為儲備液；儲備液各取2ml置于同一 10ml容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻即得；
(3)供試品溶液的制備取本品lg，精密稱定，精密加入2%鹽酸甲醇溶液25ml，稱定重 量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用2%鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，濾過；精密量 取續(xù)濾液5ml，置10ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得；
(4)測定方法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5u 1，注入液相色譜儀，按照 步驟(1)所述色譜條件測定，即得。前述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法中，所述的性狀和檢查包括，對于片 劑(1)性狀本品為薄膜衣片，除去薄膜衣后顯灰棕色至棕褐色；氣香，味苦；(2)檢查符 合中國藥典2005年版一部附錄ID中片劑項下的各項規(guī)定；
對于膠囊劑(1)性狀本品為硬膠囊，內(nèi)容物為棕色至棕褐色顆粒及粉末；氣香，味 苦；(2)檢查符合中國藥典2005年版一部附錄IL中膠囊劑項下的各項規(guī)定。為了確保本發(fā)明的含量測定方法科學、合理、可行，申請人對其進行了一系列的試 驗研究和考察，具體如下
(一)單獨測定淫羊藿苷。1、藥品與試劑淫羊藿苷對照品110737-200415 (中國藥品生物制品檢定所)，甲醇 、乙腈為色譜醇，水為重蒸餾水。2、儀器分析條件儀器AngilentllOO高效液相色譜儀；7725i型手動進樣器； 1100VWD型紫外檢測器；HT-230A柱溫箱；HP化學工作站；電子天平(BP211D) ；CX-250型超
聲波清洗器。3、色譜條件色譜柱Diamonsil(R)C18 色譜柱(250_X4. 6mm，5iim)；乙腈-水 (30:70)為流動相；柱溫:25°C ；檢測波長:270歷。4、溶液制備
4. 1對照品溶液的制備
精密稱取淫羊藿苷對照品9. 64mg,置10ml容量瓶中，加入甲醇溶解精密至刻度，作為 儲備液；精密量取儲備液1ml置10ml容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0. 0964mg/ ml對照品溶液。4. 2供試品溶液的制備
取本品約0. 5g，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，稱定重量，超 聲提取30min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，取上清液，濾過，取續(xù)慮 液，即得供試品溶液。5、系統(tǒng)適用性實驗
采用 Diamonsil(R)C18 色譜柱(250mmX4. 6mm, 5 u m),乙腈-水(30 70)為流動相， 檢測波長270nm，柱溫25°C。取供試樣品、淫羊藿陰性樣品各0. 5g，精密稱定，以供試品溶 液制備方法制得供試品溶液和陰性樣品溶液，分別精密吸取上述兩種溶液和對照品溶液各 10 yl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，從色譜圖中可以看出，供試樣品在淫羊藿苷出峰處有 對應(yīng)峰，陰性樣品則在淫羊藿苷出峰處無對應(yīng)峰，說明陰性樣品無假陽性峰。供試樣品中淫羊藿苷的理論塔板數(shù)為3818，故暫定淫羊藿苷理論塔板數(shù)不低于1500，分離度應(yīng)符合要
求。測定結(jié)果見表1。 表1淫羊藿苷系統(tǒng)適用性試驗
6、線性關(guān)系試驗
分別精密量取對照品溶液2、4、6、8、10、12iU，依次進樣。在上述色譜條件下測定淫羊 藿苷對照品峰面積，以峰面積(Y)對測定量(X，yg)線性回歸，得回歸方程Y = 2260. 3X-50. 727(r = 0.9999)。結(jié)果見表2，結(jié)果表明，淫羊藿苷在0. 5784 1. 928 y g范圍內(nèi)線性 關(guān)系良好。 表2淫羊藿苷線性關(guān)系考察
7、精密度試驗
精密量取淫羊藿苷對照品溶液(9. 640 y g/ml)，在上述色譜條件下，重復進樣5次，記 錄色譜，結(jié)果見表3，淫羊藿苷RSD為0. 88%，說明有良好的精密度。
表3淫羊藿苷精密度試驗
8、穩(wěn)定性試驗
取金馬肝泰膠囊約0. 5g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法進行制備，分別在0、2、 4、6、8h按上述色譜條件測定，記錄色譜，結(jié)果見表4，淫羊藿苷RSD為0. 88%，說明有穩(wěn)定性 良好。 表4淫羊藿苷穩(wěn)定性試驗
9、重復性試驗
取同一批金馬肝泰膠囊按供試品溶液制備方法制備5份供試品溶液，分別進樣，記錄 色譜圖，計算，結(jié)果見表5，淫羊藿苷RSD為1. 06%，說明有良好的重復性。
表5淫羊藿苷重復性試驗
10、回收率試驗
稱取5份金馬肝泰膠囊(其中淫羊藿苷含量0. 6811%)0. 2g，精密稱定，分別精密加入對 照品儲備液1ml，按照供試品溶液制備方法制備，按上述測定方法測定，記錄色譜圖，計算， 結(jié)果見表6。 表6淫羊藿苷回收率試驗
11、樣品含量測定
取3個批號的金馬肝泰膠囊0. 5g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法進行制備，即得 樣品溶液。精密量取10ul注入液相色譜儀進行測定，另取淫羊藿苷對照品(0. 0964mg/ml), 同法測定，按外標法以峰面積計算，結(jié)果見表7。
表7金馬肝泰膠囊含量測定結(jié)果
(二)同時測定粉防己堿和防己諾林堿的含量
1、藥品與試劑粉防己堿對照品110711-200406 (中國藥品生物制品檢定所)，防己諾 林堿對照品110793-200605 (供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所)，甲醇、乙腈為色譜 醇，鹽酸、冰乙酸為分析純，重蒸水。2、儀器分析條件島津LC-lOAtvp高效液相色譜儀，CL-10Avp系統(tǒng)控制器， LC-10Atvp輸液泵，SPD-10Avp紫外檢測器，7725i型手動進樣器，Class-VP5. 0工作站數(shù)據(jù) 處理系統(tǒng)，CT0-10Asvp恒溫柱箱；BP211D電子天平(德國)，CX-250型超聲波清洗器。3、色譜條件色譜柱迪馬 DiamonsilC18(4. 6mmX 250mm，5 ii m);乙腈一甲醇一水一 冰乙酸為流動相；檢測波長280nm ；柱溫25°C ；
4、溶液制備
4. 1對照品溶液的制備
稱取粉防己堿和防己諾林堿對照品各12mg和9mg，精密稱定，分置于25ml容量瓶中超 聲，完全溶解后精密至刻度，作為儲備液；儲備液各取2ml置于同一 10ml容量瓶中，稀釋至 刻度，搖勻即得。4. 2供試品溶液的制備
取本品約lg，精密稱定，精密加入2%鹽酸甲醇溶液25ml，稱定重量，加熱回流30min，放 冷，再稱定重量，用2%鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，濾過。精密量取續(xù)濾液5ml，置10ml 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。5、系統(tǒng)適用性實驗
采用迪馬DiamonsilC18 (4. 6mmX 250mm，5 y m)色譜柱，乙腈一甲醇一水一冰乙酸(40 50 30 1)(每100ml含十二烷基磺酸鈉0. 41g)為流動相，檢測波長280nm，柱溫25°C。取 供試樣品、防己陰性樣品，以供試品溶液制備方法制得供試品溶液和陰性樣品溶液，分別精 密吸取上述兩種溶液和對照品溶液各5 yl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，從色譜圖中可以 看出，供試樣品在粉防己堿和防己諾林堿出峰處有對應(yīng)峰，陰性樣品則在粉防己堿和防己 諾林堿出峰處無對應(yīng)峰，說明陰性樣品無假陽性峰。供試樣品中粉防己堿和防己諾林堿的 理論塔板數(shù)分別為6546和5939，二者的分離度為2. 53，故暫定粉防己堿和防己諾林堿苷理 論塔板數(shù)均不低于4000，分離度應(yīng)符合要求。測定結(jié)果見表8。表8粉防己堿和防己諾林堿系統(tǒng)適用性試驗
結(jié)果可知，陰性對照樣品與供試品及對照品溶液相比較，在粉防己堿和防己諾林堿的 相應(yīng)保留時間內(nèi)無吸收峰，故陰性樣品中的成分不會影響供試品中粉防己堿和防己諾林堿 的測定結(jié)果。6、線性關(guān)系考察
分別精密吸取對照品溶液(其中粉防己堿0. 0961mg/ml，防己諾林堿0. 0719mg/ml) 2、 4、6、8、10iU進樣，測定，記錄色譜圖。分別以粉防己堿和防己諾林堿峰面積為縱坐標， 以進樣量(？ g)為橫坐標，經(jīng)線性回歸得粉防己堿和防己諾林堿回歸方程分別為(n=5): Y=640399X + 7980. 5 (r = 0. 9997)，Y=635343X + 7435. 1 (r = 0. 9984)。結(jié)果表明粉防 己堿在0. 1922 0. 961 u g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，防己諾林堿在0. 1438 0. 7190 y g范圍 內(nèi)線性關(guān)系良好。表9粉防己堿和防己諾林堿線性關(guān)系考察
7、精密度試驗
取同一份供試品溶液(20080101)重復進樣5次，記錄色譜，結(jié)果見表10，粉防己堿和防 己諾林堿RSD分別為1. 33%和3. 01%,說明有良好的精密度。
表10粉防己堿和防己諾林堿精密度試驗
8、重復性試驗
取同一樣品(20050308)按供試品溶液制備方法制備5份供試品溶液，分別進樣，記錄 色譜，計算，結(jié)果見表11和表12，粉防己堿和防己諾林堿RSD分別為0. 84%和1. 26%，說明 有良好的重復性。 表11粉防己堿重復性試驗
表12防己諾林堿重復性實驗
9、穩(wěn)定性試驗
精密稱取供試品(20080101 )lg，照供試品溶液制備方法制得供試品溶液。將供試品溶 液于室溫下放置0、4、8、12、24h后，按上述色譜條件依次精密吸取各時間段該溶液5 yl，進 樣，記錄色譜圖，計算，結(jié)果見表13，粉防己堿和防己諾林堿RSD分別為1. 12%和1. 13%，說 明有良好的穩(wěn)定性。 表13粉防己堿和防己諾林堿穩(wěn)定性試驗
10、回收率試驗
稱取5份金馬肝泰片樣品(其中粉防己堿和防己諾林堿含量分別為0. 5724%和 0. 3185%) 0. 2g，精密稱定，分置于5個25ml容量瓶中，分別精密加入對照品儲備液各2ml， 按照供試品溶液制備方法制備，按上述測定方法測定，記錄色譜圖，計算，結(jié)果見表14和表 15。
表14粉防己堿回收率試驗
表15防己諾林堿回收率試驗
11、樣品含量測定按供試品溶液制備方法及色譜條件，測定三批樣品中粉防己堿和防 己諾林堿的含量，測定結(jié)果見表16、表17。表16三批樣品同時測定粉防己堿和防己諾林堿含量中粉防己堿的測定結(jié)果
表17三批樣品同時測定粉防己堿和防己諾林堿含量中防己諾林堿的測定結(jié)果
本發(fā)明的有益效果與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明建立了治療肝炎的金馬肝泰片和金馬肝 泰膠囊的質(zhì)量檢測方法，該方法采用薄層色譜法分別對黃芪、赤芍和丹參進行定性定量鑒 另IJ，達到多成分同時控制，另外，在原有含量測定項目的基礎(chǔ)上增加了對淫羊藿苷、粉防己 堿和防己諾林堿項目的測定，利用高效液相色譜測定淫羊藿苷或同時測定粉防己堿和防己 諾林堿的含量，能夠進一步有效控制金馬肝泰片和膠囊的質(zhì)量，從而最大限度的確保產(chǎn)品 質(zhì)量。本發(fā)明所采用的質(zhì)量檢測方法科學合理，準確度高，重現(xiàn)性好，能全面有效地控制和 確保治療肝炎的金馬肝泰片和金馬肝泰膠囊的質(zhì)量穩(wěn)定、可控、高效和安全，確保該制劑的 臨床療效，更好的滿足醫(yī)療的需要。下面結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明進行進一步的說明。
具體實施例方式實施1。治療肝炎的金馬肝泰膠囊的質(zhì)量控制方法如下
性狀本品為硬膠囊，內(nèi)容物為棕色至棕褐色顆粒及粉末；氣香，味苦； 鑒別(1)丹參鑒別取金馬肝泰膠囊內(nèi)容物3g，加甲醇25ml，加熱回流1小時，濾過， 濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振搖提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸 干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取原兒茶醛對照品，加甲醇制成每Iml含 Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗，吸 取對照品溶液0. 5 1 μ 1、供試品溶液2 5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲 烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸(2.4 2 1 0.6)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三 氯化鐵水溶液-1%鐵氰化鉀水溶液(1 1)(臨用新配)。供試品色譜中，在與對照品色譜 相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。(2)赤芍鑒別取金馬肝泰膠囊內(nèi)容物4g，加甲醇25ml，加熱回流30分鐘，放冷， 濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用乙醚振搖提取2次，每次20ml，棄去乙醚液，水層 用水飽和的正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，正丁醇液用氨試液30ml洗滌，棄去 氨試液，再用30ml水洗滌，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品 溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜 法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各2 5 μ 1，分別點于同一 硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨溶液(8 1 4 1)為展開劑，展 開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與 對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
(3)黃芪鑒別取金馬肝泰膠囊內(nèi)容物20g，加甲醇25ml，加熱回流1小時，濾過，濾液濃縮至約2ml，加于中性氧化鋁柱(200 300目，5g，內(nèi)徑10 15mm)上，用40%甲醇IOOml洗 脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并 正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次20ml，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20ml，合并正丁醇 液，蒸干，殘漁加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每Iml含 Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述 兩種溶液各5 10 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65 35 10) 10°C以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至 斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。檢查符合中國藥典2005年版一部附錄IL中膠囊劑項下的各項規(guī)定。含量測定以淫羊藿苷為對照，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比乙腈 水=15 45:55 85為流動相進行含量測定。(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗儀器=Agilent色譜儀；色譜柱為Diamonsil (R) C18色譜柱(250mmX 4. 6讓，5 μ m)，以乙腈-水=15 45 55 85為流動相，柱溫20 30°C， 流速1. OmL/min，檢測波長255 285nm ；進樣量10 μ 1，理論塔板數(shù)不低于1500。(2)對照品溶液的制備精密稱取淫羊藿苷對照品9. 64mg，置IOml容量瓶中，加入 甲醇溶解精密至刻度，作為儲備液；精密量取儲備液Iml置IOml容量瓶中，稀釋至刻度，搖 勻，即得濃度為0. 0964mg/ml對照品溶液。(3)供試品溶液的制備取本品0. 5g，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶中，精密加入 稀乙醇20ml，稱定重量，超聲提取30min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖 勻，取上清液，濾過，取續(xù)慮液，即得供試品溶液；
(4)測定方法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，按 照步驟(1)所述色譜條件測定，即得。功能主治清熱解毒，健脾利濕，活血化瘀。用于肝膽濕熱，氣滯血瘀所致的急、慢 性肝炎。用法用量口服。一次2粒，一日3次。規(guī)格每片重0. 5g。貯藏密封。實施2。治療肝炎的金馬肝泰片的質(zhì)量控制方法如下
性狀本品為薄膜衣片，除去薄膜衣后顯灰棕色至棕褐色；氣香，味苦； 鑒別(1)丹參鑒別取金馬肝泰片，除去薄膜衣，研細，取約3g，加甲醇25ml，加熱回流 1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振搖提取3次，每次20ml，合并 乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取原兒茶醛對照品，加甲醇 制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄 VI B)試驗，吸取對照品溶液0. 5 1 μ 1、供試品溶液2 5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層 板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸(2. 4 2 1 0.6)為展開劑，展開，取出，晾 干，噴以1%三氯化鐵水溶液-1%鐵氰化鉀水溶液(1 1)(臨用新配)。供試品色譜中，在 與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。(2)赤芍鑒別取金馬肝泰片，除去薄膜衣，研細，取約4g，加甲醇25ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用乙醚振搖提取2次，每次20ml，棄 去乙醚液，水層用水飽和的正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，正丁醇液用氨試液 30ml洗滌，棄去氨試液，再用30ml水洗滌，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇Iml使 溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品 溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述溶液各2 5 μ 1， 分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨溶液(8 1 4 1) 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品 色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。(3)黃芪鑒別取金馬肝泰片，除去薄膜衣，研細，取約20g，加甲醇25ml，加熱回流 1小時，濾過，濾液濃縮至約2ml，置中性氧化鋁柱(200 300目，5g，內(nèi)徑10 15mm)上， 用40%甲醇IOOml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖 提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次20ml，再用正丁醇飽和的水洗 滌2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取黃 芪甲苷對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥 典2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 10 μ 1，分別點于同一硅膠G薄 層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65 35 10) 10°C以下放置的下層溶液為展開劑，展開， 取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對 照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。檢查符合中國藥典2005年版一部附錄ID中片劑項下的各項規(guī)定。含量測定以粉防己堿和防己諾林堿混合溶液為對照，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5為流動相 進行含量測定；每IOOml流動相中含十二烷基磺酸鈉0. 2g 1. 0g。(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗儀器島津LC-IOAtvp高效液相色譜儀；色譜柱 為DiamonsilC18 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)；以體積比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5為流動相，柱溫為10°C 40°C ；檢測波長230nm 350nm ；進樣量 5 μ L ；理論塔板數(shù)不低于4000 ；
(2)對照品溶液的制備分別稱取粉防己堿和防己諾林堿對照品各12mg和9mg，精密稱 定，分置于25ml容量瓶中超聲，完全溶解后精密至刻度，作為儲備液；儲備液各取2ml置于 同一 IOml容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻即得。(3)供試品溶液的制備取本品lg，精密稱定，精密加入2%鹽酸甲醇溶液25ml，稱 定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用2%鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，濾過；精 密量取續(xù)濾液5ml，置IOml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。(4)測定方法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5μ 1，注入液相色譜儀， 按照步驟(1)所述色譜條件測定，即得。功能主治清熱解毒，健脾利濕，活血化瘀。用于肝膽濕熱，氣滯血瘀所致的急、慢 性肝炎。用法用量口服。一次2片，一日3次。規(guī)格每片重0. 55g。貯藏密封。
權(quán)利要求
一種治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述的質(zhì)量檢測方法包括性狀、鑒別、檢查和含量測定，其中鑒別是采用薄層色譜法對制劑中黃芪、赤芍和丹參的鑒別，含量測定是用高效液相色譜法測定制劑中淫羊藿苷的含量或用高效液相色譜法在同一色譜條件下同時測定制劑中粉防己堿和防己諾林堿的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述的 鑒別包括丹參鑒別取本品0. Ig 10g，加甲醇Iml 150ml，加熱回流0. Ih 2h，濾過，濾液蒸 干，殘渣加水Iml 50ml使溶解，用乙酸乙酯振搖提取1 5次，每次Iml 50ml，合并乙 酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶解，作為供試品溶液；另取原兒茶醛對照品， 加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VIB薄層 色譜法試驗，吸取對照品溶液0. 5 1 μ 1、供試品溶液2 5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層 板上，以體積比為1.9 2. 9 1.5 2. 5 0. 5 1. 5 0. 4 0. 8的三氯甲烷-乙酸乙 酯-甲苯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1 1的1%三氯化鐵水溶液-1% 鐵氰化鉀水溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；赤芍鑒別取本品0. Ig 10g，加甲醇Iml 150ml，加熱回流5min 60min，放冷，濾 過，濾液蒸干，殘渣加水Iml 50ml使溶解，用乙醚振搖提取1 4次，每次Iml 50ml，棄 去乙醚液，水層用水飽和的正丁醇提取1 5次，每次Iml 30ml， 合并正丁醇液，正丁醇 液用氨試液3ml 50ml洗滌，棄去氨試液，再用3ml 50ml水洗滌，棄去水液，取正丁醇液 蒸干，殘渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每 Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗， 吸取上述兩種溶液各2 5μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為6 10 0.8 1.2 2 6 0.8 1.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨溶液為展開劑，展開，取出， 晾干，噴以濃度為3% 10%的香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與 對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；黃芪鑒別取本品5g 50g，加甲醇5ml 200ml，加熱回流0. 5h 2h，濾過，濾液濃 縮至約Iml 5ml，加于中性氧化鋁柱上，用濃度為30% 50%的甲醇50ml 200ml洗脫， 收集洗脫液，蒸干，殘渣加水5ml 50ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取1 5次，每 次5ml 50ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌1 4次，每次5ml 50ml，再用正丁醇飽和 的水洗滌1 4次，每次5ml 50ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇0. 5ml 5ml使溶 解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶 液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5 10 μ 1， 分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為50 80 25 45 5 15的三氯甲烷-甲 醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以濃度為5% 25%的硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色 清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述鑒 另|J(2)赤芍鑒別中，顯色時加熱的溫度為100°C 120°C ；鑒別(3)黃芪鑒別中，所用的展 開劑為三氯甲烷-甲醇_水10°C以下放置后的下層溶液；顯色時加熱的溫度為100°C 120°C。
4 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述的含量測定是通過高效液相色譜法測定制劑中淫羊藿苷的含量；以淫羊藿苷為對照，十八烷 基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比乙腈水=15 45:55 85為流動相進行含量測定。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述淫 羊藿苷的含量測定方法包括以下步驟色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗儀器Agilent色譜儀；色譜柱為Diamonsil (R) C18色 譜柱，以乙腈_水=15 45 55 85為流動相，柱溫20 30°C，流速1. OmL/min，檢測波長 255 285nm ；進樣量10 u 1，理論塔板數(shù)不低于1500 ；(2)對照品溶液的制備精密稱取淫羊藿苷對照品適量，置容量瓶中，加入甲醇溶解并 稀釋至刻度，搖勻，制得濃度為彡lmg/ml的溶液，即得對照品溶液；(3)供試品溶液的制備取本品適量，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入適量稀乙 醇，稱定重量，超聲提取30min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，取上清 液，濾過，取續(xù)慮液，即得供試品溶液；(4)測定方法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10y I，注入液相色譜儀，按 照步驟(1)所述色譜條件測定，即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述淫 羊藿苷的含量測定方法包括以下步驟色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗儀器Agilent色譜儀；色譜柱為Diamonsil (R) C18色 譜柱，以乙腈_水=15 45 55 85為流動相，柱溫20 30°C，流速1. OmL/min,檢測波長 255 285nm ；進樣量10 yl，理論塔板數(shù)不低于1500 ；對照品溶液的制備精密稱取淫羊藿苷對照品9. 64mg，置10ml容量瓶中，加入甲醇溶 解精密至刻度，作為儲備液；精密量取儲備液1ml置10ml容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得 濃度為0. 0964mg/ml對照品溶液；(3)供試品溶液的制備取本品0.5g，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶中，精密加入稀乙 醇20ml，稱定重量，超聲提取30min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，取 上清液，濾過，取續(xù)慮液，即得供試品溶液；(4)測定方法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10y I，注入液相色譜儀，按 照步驟(1)所述色譜條件測定，即得。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述的 含量測定是通過高效液相色譜法在同一色譜條件下同時測定制劑中粉防己堿和防己諾林 堿的含量；以粉防己堿和防己諾林堿混合溶液為對照，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以 體積比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5為流動相進行含量 測定；每100ml流動相中含十二烷基磺酸鈉0. 2g 1. 0g。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述粉 防己堿和防己諾林堿的含量測定方法包括以下步驟色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗儀器島津LC-lOAtvp高效液相色譜儀；色譜柱為 DiamonsilC18 ；以體積比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5 為流動相，柱溫為10°C 40°C ；檢測波長230nm 350nm ；進樣量5 u L ；理論塔板數(shù)不低于 4000 ；(2)對照品溶液的制備分別稱取粉防己堿和防己諾林堿對照品適量，精密稱定，分置于容量瓶中超聲，完全溶解后精密至刻度，作為儲備液；儲備液各取適量置于同一容量瓶 中，稀釋至刻度，搖勻即得；(3)供試品溶液的制備取本品適量，精密稱定，精密加入0.5 5%鹽酸甲醇溶液適量， 稱定重量，加熱回流15 45min，放冷，再稱定重量，用0. 5 5%鹽酸甲醇溶液補足減失的 重量，濾過；精密量取續(xù)濾液適量，置容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得；(4)測定方法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5μ I，注入液相色譜儀，按照 步驟(1)所述色譜條件測定，即得。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述粉 防己堿和防己諾林堿的含量測定方法包括以下步驟色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗儀器島津LC-IOAtvp高效液相色譜儀；色譜柱為 DiamonsilC18 ；以體積比乙腈甲醇水冰乙酸=35 45 45 55 25 35 0. 5 1. 5 為流動相，柱溫為10°C 40°C ；檢測波長230nm 350nm ；進樣量5 μ L ；理論塔板數(shù)不低于 4000 ；(2)對照品溶液的制備稱取粉防己堿對照品12mg，防己諾林堿對照品9mg，精密稱定， 分置于25ml容量瓶中超聲，完全溶解后精密至刻度，作為儲備液；儲備液各取2ml置于同一 IOml容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻即得；(3)供試品溶液的制備取本品lg，精密稱定，精密加入2%鹽酸甲醇溶液25ml，稱定重 量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用2%鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，濾過；精密量 取續(xù)濾液5ml，置IOml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得；(4)測定方法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5μ I，注入液相色譜儀，按照 步驟(1)所述色譜條件測定，即得。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述的 性狀和檢查包括，對于片劑(1)性狀本品為薄膜衣片，除去薄膜衣后顯灰棕色至棕褐色；氣香，味苦； (2)檢查符合中國藥典2005年版一部附錄ID中片劑項下的各項規(guī)定；對于膠囊劑(1)性狀本品為硬膠囊，內(nèi)容物為棕色至棕褐色顆粒及粉末；氣香，味苦；(2)檢查符合中國藥典2005年版一部附錄IL中膠囊劑項下的各項規(guī)定
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療肝炎的藥物制劑的質(zhì)量檢測方法，該質(zhì)量檢測方法包括性狀、鑒別、檢查和含量測定，其中鑒別是采用薄層色譜法對制劑中黃芪、赤芍和丹參的鑒別，含量測定是用高效液相色譜法測定制劑中淫羊藿苷的含量或用高效液相色譜法在同一色譜條件下同時測定制劑中粉防己堿和防己諾林堿的含量。本發(fā)明所采用的質(zhì)量檢測方法科學合理，準確度高，重現(xiàn)性好，能全面有效地控制和確保治療肝炎的金馬肝泰片和金馬肝泰膠囊的質(zhì)量穩(wěn)定、可控、高效和安全，確保該制劑的臨床療效，更好的滿足醫(yī)療需要。
文檔編號A61P1/16GK101837072SQ20101016086
公開日2010年9月22日 申請日期2010年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月29日
發(fā)明者張秋生, 高翔 申請人:貴州益康制藥有限公司