專(zhuān)利名稱(chēng)：一種小薊有效部位提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的說(shuō)涉及以植物藥小薊為原料提取含有總黃酮和總咖啡酸酯的活性提取物。本發(fā)明還涉及該活性提取物的制備方法和用途。
背景技術(shù)：
出血為許多外科和內(nèi)科疾病的重要臨床癥狀，并多系臨床危、急、重癥。出血過(guò)多時(shí)可導(dǎo)致休克，引發(fā)生命危險(xiǎn)，同時(shí)，出血還伴有疼痛、炎癥等。如果出血不能及時(shí)止血，則會(huì)在體內(nèi)淤積，引發(fā)其它疾病。因此，止血是處理臨床出血性危急重癥的重要手段，此外，從軍事醫(yī)學(xué)角度考慮，止血藥是戰(zhàn)備戰(zhàn)略性藥物的重要內(nèi)容之一，因此，止血藥物具有廣泛的用途。目前止血藥物從獲取的途徑上區(qū)分有中藥、合成藥和生物工程藥物三大類(lèi)。合成藥與生物工程藥物多為單一化合物或酶制劑，作用于單一靶點(diǎn)，或?yàn)檠苁湛s劑或?yàn)榇倌幬?，由于其作用靶點(diǎn)單一，所以對(duì)于不同原因及不同機(jī)制的出血性疾病難以獲得廣泛而滿意的療效，并且易產(chǎn)生毒副作用，如血壓急劇上升、血栓形成、誘發(fā)心腦血管疾病等。中藥止血藥具有多靶點(diǎn)、多組分、協(xié)同作用的特點(diǎn)，可作用于血管、血液的各個(gè)環(huán)節(jié)，尤其是含有多種凝血因子激活物，凝血過(guò)程呈“鏈鎖式”及“瀑布式”反應(yīng)，增大了凝血活性，降低了毒副作用，大大增強(qiáng)了臨床用藥的安全有效性。小薊為菊科植物剌兒菜Cirsium setosum(ffilld. )MB.的干燥地上部分。其味甘、 苦，性涼；歸心、肝經(jīng)。具有涼血止血，祛瘀消腫的功效。用于衄血，吐血，尿血，便血，崩漏下血，外傷出血，癰腫瘡毒。有關(guān)小薊的臨床應(yīng)有在歷代文獻(xiàn)中均有記載，《食療本草》“取菜煮食之，除風(fēng)熱。根，主崩中，又女子月候傷過(guò)，搗汁半升服之；金瘡血不止，葉封之；夏月熱，煩悶不止，搗葉取汁半升服之?！薄侗静菔斑z》“破宿血，止新血，暴下血，血痢，金瘡出血， 嘔吐等，絞汁溫服?！薄侗静輬D經(jīng)》“生搗根絞汁服，以止吐血，嘔血，下血。”現(xiàn)有制劑血立止片、血立止膠囊和血立止顆粒均是由中藥小薊制備得到，在臨床上被廣泛應(yīng)用，具有活血止痛，化瘀止血的功效。但這幾種制劑均是由小薊藥材采用藥材全粉制備得到，均存在活性成分不明確，服用量大的缺點(diǎn)。限制了該藥的臨床應(yīng)用和市場(chǎng)規(guī)模。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有小薊制劑的活性成分不明確，服用量大的缺點(diǎn)，開(kāi)發(fā)利用小薊有效部位制成療效確切，服用量少的現(xiàn)代中藥新藥。本發(fā)明在對(duì)小薊止血有效部位進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)該植物中所包含的黃酮類(lèi)和咖啡酸酯類(lèi)成分具有明顯的止血作用。本發(fā)明提供了小薊提取物在制備預(yù)防和/或治療出血性疾病的藥物中的用途，出血性疾病包括吐血，尿血，便血，衄血，崩漏下血，外傷出血等。具體來(lái)說(shuō)，上述小薊包含一種或多種選自黃酮類(lèi)和咖啡酸酯類(lèi)的化合物。優(yōu)選地，一種或多種選自黃酮和咖啡酸酯類(lèi)化合物之和的重量占小薊提取物重量的50%以上。黃酮類(lèi)化合物主要包括蒙花苷、蘆丁、刺槐素和槲皮素等?？Х人狨ヮ?lèi)化合物主要包括3-0-咖啡酰基奎寧酸、5-0-咖啡?；鼘幩?、咖啡酸禾口 1-(3' ,4' -dihydroxycinnamoyl)-cyclopenta-2,3-diol 等。小薊提取物中各種成分的含量測(cè)定方法如下(1)總黃酮的測(cè)定(分光光度法)對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取干燥恒重的蒙花苷對(duì)照品適量，用甲醇溶解制成每 Iml含15 μ g的溶液，即得。供試品溶液的制備精密稱(chēng)取本品粉末50mg，置IOml量瓶中，加蒸餾水溶解至刻度，搖勻，濾過(guò)。沉淀連濾紙置于IOOml具塞錐形瓶中，加甲醇50ml，精密稱(chēng)定重量，超聲處理30min，再次稱(chēng)重，加甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。取續(xù)濾液Iml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取蒙花苷對(duì)照品溶液(0. 13mg/ml)1.0、2.0、3.0、4.0、 5. 0、6. 0ml，分別置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以甲醇為空白，在326mn波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸收度(A)為縱坐標(biāo)，濃度C^yg·!!^1)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定法取供試品溶液，以甲醇為空白，按照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)，在326nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。(2)總咖啡酸酯的測(cè)定(分光光度法)對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取綠原酸對(duì)照品適量，用30% (體積)甲醇水溶液溶解制成每Iml含10 μ g的溶液，即得。供試品溶液的制備精密稱(chēng)取本品粉末50mg，置IOml量瓶中，加蒸餾水溶解至刻度，搖勻，濾過(guò)。精密吸取續(xù)濾液lml，置50ml量瓶中，加30% (體積)甲醇水溶液至刻度， 搖勻，即得供試品溶液。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取綠原酸對(duì)照品溶液(0. 21mg/ml)0. 2,0. 5、1. 0、1. 5、 2. 0、2. 5ml，分別置25ml量瓶中，加30% (體積)甲醇水溶液至刻度，搖勻，以30%甲醇(體積)水溶液為空白，在324nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸收度(A)為縱坐標(biāo)，濃度C( μ g ^Γ1) 為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定法取供試品溶液，以30% (體積)甲醇水溶液為空白，按照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)，在324nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。在上述用途中，小薊提取物可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本領(lǐng)域公知的任何方法來(lái)制備，包括但不局限于下述制備方法。一種小薊提取物的制備方法包括以下步驟(1)取小薊藥材經(jīng)溶劑提??；(2)將小薊提取溶液濃縮至適當(dāng)體積后，靜置，離心，分離沉淀和上清液，備用；(3)將上述(2)中上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，用水、低濃度的甲醇或乙醇水溶液洗脫，棄去洗脫液；(4)用高濃度甲醇或乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，回收溶劑并干燥，即得總咖啡酸酯提取物；(5)將上述(2)中沉淀用有機(jī)溶劑提取，除去低極性雜質(zhì)，即得總黃酮提取物；
(6)把總黃酮提取物和總咖啡酸酯提取物合并，即得小薊止血有效部位。其中，步驟(1)中的溶劑可以選自水、甲醇、乙醇和丙酮中的一種或多種，提取方法可以為溫浸、熱回流和/或滲漉；步驟O)中的低濃度甲醇或乙醇水溶液優(yōu)選為5% 20% (體積)的甲醇或乙醇水溶液；步驟(3)中的高濃度甲醇或乙醇水溶液優(yōu)選為30% 95% (體積)甲醇或乙醇水溶液。該制備方法簡(jiǎn)單易行、提取效果好、易于工業(yè)推廣應(yīng)用。上述藥物可以為包含小薊提取物的膠囊劑、片劑、顆粒劑、滴丸、軟膠囊劑、分散片、口腔崩解片、緩釋片、控釋片、注射液、輸液或注射用無(wú)菌粉末。可以采用常規(guī)方法將小薊提取物與任何一種或一種以上藥用輔料，如淀粉、糊精、乳糖、微晶纖維素、羥丙甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚維酮、羧甲基淀粉鈉、聚乙二醇、硬脂酸鎂、微粉硅膠、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、甘氨酸等混合制成上述劑型。對(duì)本發(fā)明的藥物的藥效學(xué)部分進(jìn)行了初步研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的藥物能明顯縮短正常小鼠出血時(shí)間和凝血時(shí)間，能顯著縮短熱盛胃出血小鼠模型的出血時(shí)間，減少小鼠胃出血點(diǎn)個(gè)數(shù)。在上述藥理活性試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，小薊提取物在臨床可用于吐血，尿血，便血， 衄血，崩漏下血，外傷出血等出血性疾病的預(yù)防和治療。本發(fā)明的藥物原料來(lái)源易得，易于產(chǎn)業(yè)化，可以根據(jù)需要制成各種劑型，為臨床提供了使用更加方便、療效更加有效、質(zhì)量更加可控的現(xiàn)代中藥，為患者帶來(lái)更多的益處，從而產(chǎn)生了巨大的社會(huì)效益。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1取小薊藥材10kg，用10倍量80% (體積)乙醇提取三次，每次1小時(shí)。收集提取液，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至適當(dāng)體積，放置至室溫，離心，沉淀經(jīng)石油醚脫脂，干燥備用(A)；上清液加鹽酸調(diào)pH至2-3，通過(guò)HPD-300型大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫至無(wú)色， 除去溶于極性溶劑的雜質(zhì)，棄去，再用4BVBV:Bed Volume縮寫(xiě)，樹(shù)脂床體積50% (體積) 的乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液，將回收乙醇后的洗脫液減壓干燥(B) ；A與B合并，即得小薊提取物。按小薊提取物的總重量計(jì)，總黃酮含量為42. 7% (重量)，總咖啡酸酯含量為 12. 1% (重量)。實(shí)施例2取小薊藥材10kg，用70% (體積)乙醇滲漉提取，收集滲漉液25倍體積，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至適當(dāng)體積，放置至室溫。離心，沉淀經(jīng)石油醚脫脂，干燥備用(A)； 上清液過(guò)HPD-100型大孔吸附樹(shù)脂，依次用水和10% (體積)乙醇洗脫至無(wú)色，除去溶于極性溶劑的雜質(zhì)，棄去，再用3BV 70% (體積)的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，將回收乙醇后的洗脫液減壓干燥(B) ；A與B合并，即得小薊提取物。按小薊提取物的總重量計(jì)，總黃酮含量 ^ 43. 5% (重量)，總咖啡酸酯含量為10.9% (重量)。實(shí)施例3取小薊藥材10kg，用10倍量80% (體積)乙醇提取三次，每次2小時(shí)，收集提取液，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至適當(dāng)體積，放置至室溫。離心，沉淀經(jīng)甲醇超聲處理，抽濾，棄去甲醇液，沉淀干燥備用(A)；上清液通過(guò)D-101型大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫至無(wú)色，除去溶于極性溶劑的雜質(zhì)，棄去，再用4BV 30% (體積)的乙醇洗脫，收集30% (體積) 乙醇洗脫液，將回收乙醇后的洗脫液減壓干燥(B) ；A與B合并，即得小薊提取物。按小薊提取物的總重量計(jì)，總黃酮含量為45. 9% (重量)，總咖啡酸酯含量為17.2% (重量)。實(shí)施例4取小薊藥材10kg，用10倍量80% (體積)甲醇提取三次，每次1小時(shí)，收集提取液，減壓回收甲醇，并濃縮至適當(dāng)體積，放置至室溫。離心，沉淀經(jīng)甲醇索氏提取，棄去甲醇液，沉淀干燥備用㈧；上清液過(guò)AB-8型大孔吸附樹(shù)脂，依次用水和10%甲醇洗脫至無(wú)色， 除去溶于極性溶劑的雜質(zhì)，棄去，再用:3BV 70% (體積)的甲醇洗脫，收集70% (體積)甲醇洗脫液，將回收甲醇后的洗脫液減壓干燥(B) ；A與B合并，即得小薊提取物。按小薊提取物的總重量計(jì)，總黃酮含量為41. 2% (重量)，總咖啡酸酯含量為11.2% (重量)。實(shí)施例5取小薊提取物100g，微粉硅膠適量，混合均勻，采用膠囊制備工藝制備，即得小薊提取物膠囊。實(shí)施例6取小薊提取物100g，加到200g熔融的聚乙二醇6000中，采用滴丸制備工藝制備， 即得小薊提取物滴丸。實(shí)施例7取小薊提取物100g，糊精200g，混合均勻，制粒，過(guò)蹄，干燥，即得小薊提取物的顆粒劑；或?qū)⒅频玫念w粒經(jīng)進(jìn)一步壓片，干燥，即得小薊提取物的片劑。實(shí)施例8 取小薊提取物100g，羥丙基甲基纖維素100g，羧甲基纖維素鈉60g，乳糖40g，混合均勻，制粒，干燥，壓片，即得小薊提取物的緩釋片劑。實(shí)施例9取小薊提取物100g，微晶纖維素120g，羧甲基纖維素鈉30g，微粉硅膠lg，混合均勻，壓片，即得小薊提取物的分散片。實(shí)施例10取小薊提取物100g，植物油250g，混勻，用明膠作囊殼材料，壓制成軟膠囊，即得小薊提取物的軟膠囊。實(shí)施例11取小薊提取物100g，溶于500ml注射用水中，采用現(xiàn)有注射用無(wú)菌粉末制備工藝制備，即得小薊提取物注射用無(wú)菌粉末劑型。實(shí)施例12取小薊提取物100g，溶于1000ml注射用水中，采用注射劑制備工藝，即得小薊提取物注射液(含輸液)。試驗(yàn)例1本發(fā)明藥物的療效由以下藥效學(xué)試驗(yàn)證明1、試驗(yàn)材料1. 1藥物及試劑
小薊提取物棕色粉末，46. 9g生藥/g。由天津藥物研究院中藥現(xiàn)代研究室提供， 用生理鹽水配成合適濃度的溶液供試驗(yàn)用。止血寶膠囊0. 3g/粒含原藥材3g，批號(hào)090910，西安高科技陜西金方藥業(yè)公司
女口
廣 PFt ο斷血流每片含斷血流干浸膏0. 3g，含4. 5g生藥/片，批號(hào)091017，安慶乘岡制藥有限公司產(chǎn)品。1. 2 動(dòng)物小鼠昆明種，雌雄兼用，體重18_22g，購(gòu)自北京華埠康生物科技股份有限公司， 許可證編號(hào)SCXK京2009-0004。1. 3試驗(yàn)儀器恒溫水浴TDA_8002型，天津市中環(huán)實(shí)驗(yàn)電爐有限公司產(chǎn)品。血小板聚集儀 PNA-3型，江蘇丹陽(yáng)無(wú)線電廠產(chǎn)品。凝血因子分析儀=LG-PABER型，北京世帝科學(xué)儀器公司
權(quán)利要求
1.一種小薊有效部位提取物，其特征在于，所述小薊提取物包含一種或多種選自黃酮類(lèi)和咖啡酸酯類(lèi)的化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小薊有效部位提取物，其特征在于，所述一種或多種選自黃酮類(lèi)和咖啡酸酯類(lèi)化合物的重量之和占小薊提取物重量的50%以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1至2中任一項(xiàng)所述的小薊有效部位提取物，其特征在于，所述小薊提取物的制備方法包括以下步驟(1)取小薊藥材經(jīng)溶劑提??；(2)將提取液減壓濃縮至適當(dāng)體積，放至室溫，離心，得沉淀和上清液，備用；(3)將O)中上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，用水、低濃度的甲醇或乙醇水溶液洗脫，棄去洗脫液；(4)用高濃度甲醇或乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，回收溶劑并干燥，得到提取物A；(5)將O)中沉淀用有機(jī)溶劑提取脫脂后，棄去有機(jī)層，沉淀干燥后得提取物B。(6)將⑷中提取物A與(5)中提取物B合并，即得小薊提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的小薊有效部位提取物，其特征在于，所述步驟(1)中的溶劑選自水、甲醇、乙醇和丙酮中的一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的小薊有效部位提取物，其特征在于，所述步驟(1)中的提取方法為溫浸、熱回流和/或滲漉。
6.根據(jù)權(quán)利要求3至5中任一項(xiàng)所述的小薊有效部位提取物，其特征在于，所述步驟 (3)中的大孔吸附樹(shù)脂包括HPD100、HPD300、AB-8和DlOl。
7.根據(jù)權(quán)利要求3至6中任一項(xiàng)所述的小薊有效部位提取物，其特征在于，所述步驟(3)中的低濃度甲醇或乙醇水溶液為5% 20%(體積)的甲醇或乙醇水溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求3至7中任一項(xiàng)所述的小薊有效部位提取物，其特征在于，所述步驟(4)中的高濃度甲醇或乙醇水溶液為30% 95%(體積)甲醇或乙醇水溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的小薊有效部位提取物，其特征在于，所述藥物為包含小薊有效部位提取物的膠囊劑、片劑、顆粒劑、滴丸、軟膠囊劑、分散片、口腔崩解片、緩釋片、控釋片、注射液、輸液或注射用無(wú)菌粉末。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的小薊有效部位提取物，在制備預(yù)防和/或治療出血性疾病的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種小薊有效部位提取物和它的制備方法及其在制備藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的小薊有效部位中有效物質(zhì)純度較高，黃酮類(lèi)和咖啡酸酯類(lèi)化合物的重量之和占小薊有效部位提取物重量的50％以上，同時(shí)本發(fā)明制備預(yù)防和治療吐血、尿血、便血、衄血、崩漏下血、外傷出血等出血性疾病的藥物。本發(fā)明質(zhì)量可控，制備工藝易于產(chǎn)業(yè)化，可以根據(jù)需要制成各種劑型，為臨床提供了使用更加方便、療效更加有效、質(zhì)量穩(wěn)定的現(xiàn)代中藥。
文檔編號(hào)A61K36/28GK102232982SQ201010161890
公開(kāi)日2011年11月9日 申請(qǐng)日期2010年5月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月4日
發(fā)明者侯坤, 岳南, 張鐵軍, 許浚 申請(qǐng)人:天津藥物研究院