專利名稱：蘋(píng)果多酚在制備護(hù)肝藥物、保健食品或食品中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蘋(píng)果多酚的新用途，特別是涉及蘋(píng)果多酚在制備護(hù)肝藥物、保健食品或食品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：
蘋(píng)果多酚(AP)是蘋(píng)果中天然存在的一類重要生物活性物質(zhì)。AP包括多種酚類物質(zhì)，可分為酚酸(如綠原酸)及其羥基酸酯類、糖類衍生物和黃酮類化合物(如兒茶素、表兒茶素、原花青素、二羥基查耳酮、黃酮醇配糖體等)。一般來(lái)說(shuō)，蘋(píng)果的品種不同，各主要成分的含量也有差異。另外，未成熟的蘋(píng)果與成熟蘋(píng)果相比，成分組成相似，但成分含量上有很大的差異，特別是多酚類物質(zhì)的含量高出成熟蘋(píng)果含量的10倍以上。研究還發(fā)現(xiàn)果皮中的多酚含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于果肉中的，這也解釋了在蘋(píng)果加工過(guò)程中去掉果皮會(huì)減輕褐變的現(xiàn)象。
蘋(píng)果多酚的來(lái)源例如，天津市尖峰天然產(chǎn)物研究開(kāi)發(fā)有限公司生產(chǎn)。
主要理化指標(biāo)蘋(píng)果多酚(UV)20.0～90.0％，根皮苷(HPLC)1.0～20.0％，綠原酸(HPLC)1.0～30.0％，原花青素B2(HPLC)1.0～30.0％。
AP的制備，目前主要集中在有機(jī)溶劑提取上，也有關(guān)于用吸附分離及用超臨界二氧化碳流體萃取的研究。
AP具有較強(qiáng)的抗氧化、清除自由基的能力。其抗氧化特性是通過(guò)多種途徑體現(xiàn)出來(lái)的。AP以大量的酚羥基作為氫供體，對(duì)多種活性氧具有清除作用，減少氧自由基產(chǎn)生的可能性，同時(shí)也是各種自由基有效的清除劑；其次AP以鄰位二酚羥基與金屬離子螯合，減少金屬離子對(duì)氧化反應(yīng)的催化；再者對(duì)于有氧化酶存在的體系，如體內(nèi)主要的氧自由基生成的源頭，AP對(duì)其有顯著的抑制能力；AP還能與VC和VE等抗氧化劑之間產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，具有增效劑的作用。研究結(jié)果證明，AP的許多生理活性比茶多酚高100倍以上，其抗氧化能力是VE的50倍、VC的20倍。
以縮合丹寧為主體的AP對(duì)微生物具有廣譜抗性(包括對(duì)絲狀真菌、酵母、細(xì)菌、病毒的抑制)。其作用機(jī)理可能是多種因素共同作用的結(jié)果，如對(duì)蛋白質(zhì)的高度結(jié)合能力、通過(guò)與細(xì)胞膜結(jié)合改變微生物的代謝以及對(duì)金屬的絡(luò)合作用等。
AP對(duì)生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖的結(jié)合特性以及與金屬離子的絡(luò)合特性等化學(xué)性質(zhì)使其具有多種生物活性，而這些生物活性最本質(zhì)的方面體現(xiàn)在多酚對(duì)酶促反應(yīng)的影響上。
另外，AP還能抑制血管緊張素轉(zhuǎn)移酶(ACE)，防止血管收縮，血壓升高；AP對(duì)食品或環(huán)境來(lái)源的苯并芘等致癌物的致癌性有抑制作用；還具有抗突變作用；由于多酚類具有較高的紫外線吸收特征，特別是對(duì)能量高、破壞能力大的紫外區(qū)有更強(qiáng)的吸收，可作為抗衰老和防曬劑的有效成分。
由于AP具有多種藥理、保健功能，可開(kāi)發(fā)延緩衰老、預(yù)防腫瘤、有效抑制高血壓、高血脂及心腦血管疾病的醫(yī)療保健品及多種保健食品；AP能有效抑制組胺的游離，因而被作為抗變異藥物使用，用于特異性皮炎等病癥的預(yù)防和治療；還可以將AP作為添加劑用于牙膏中，既有防齲齒作用又有潔齒作用。日本最新研究發(fā)現(xiàn)，從蘋(píng)果的提取物中制成促進(jìn)頭發(fā)生長(zhǎng)的藥劑——藥用毛活林PB，對(duì)治療脫發(fā)有特殊效果，這一發(fā)現(xiàn)提高了AP的高附加值。
由于AP有抗氧化、消臭、保鮮、保香、護(hù)色、防止維生素?fù)p失等作用，目前它在食品工業(yè)中可應(yīng)用于水產(chǎn)制品、畜肉制品、干香腸制品、面包制品、油脂或含有油脂食品、清涼飲料等的加工制造，可顯著提高其產(chǎn)品質(zhì)量及保質(zhì)期。還用于口香糖中抑制口臭。
另外，AP還有減肥和美白的功效，在護(hù)膚中起到多重作用(如抗衰老、抗輻射、增白、保濕、阻礙紫外線吸收等)，對(duì)多種因素造成的皮膚老化都有獨(dú)特的功效。目前國(guó)際上已研制出多種抗衰老防輻射的綠色化妝品。
AP作為一類具有生物活性的天然化合物，對(duì)人們?cè)趶?qiáng)身健體、防病治病、延年益壽等各方面均有顯著作用。
目前，蘋(píng)果多酚在制備護(hù)肝藥物、保健食品或食品中的應(yīng)用未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。
蘋(píng)果這一資源豐富的水果開(kāi)發(fā)還有待于進(jìn)一步研究，以期開(kāi)發(fā)出新的藥物和保健品，使其在醫(yī)療、保健等方面有更多應(yīng)用。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供蘋(píng)果多酚在制備護(hù)肝藥物、保健食品或食品中的應(yīng)用。
本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下 蘋(píng)果多酚在制備護(hù)肝藥物、保健食品或食品中的應(yīng)用。
所述藥物、保健食品或食品的劑型為硬膠囊劑、軟膠囊劑、散劑、顆粒劑、片劑、丸劑、蜜膏劑、口服液、酒劑、注射劑或茶劑。
所述食品為飲料、糖果、大米制品、面粉制品、肉制品、魚(yú)制品或食用油。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明蘋(píng)果多酚(AP)具有肝臟保護(hù)作用，對(duì)多種化學(xué)性物質(zhì)，如CCl4、乙醇、D-GalN和順鉑(CP)等所致肝損傷模型具有顯著的保護(hù)作用，且具有利膽作用，AP對(duì)免疫性肝損傷也具有保護(hù)作用。



圖1為CCl4急性肝損傷模型小鼠肝組織光鏡下病理學(xué)觀察。(肝組織HE染色光鏡下觀察的病理圖片(×400)(A)空白組，(B)0.1％CCl4組，(C)BP(聯(lián)苯雙酯滴丸)200mg/kg+0.1％CCl4組，(D)AP200mg/kg+0.1％CCl4組，(E)AP 400mg/kg+0.1％CCl4組，(F)800mg/kg+0.1％CCl4組) 圖2為D-GalN急性肝損傷模型小鼠肝組織光鏡下病理學(xué)觀察。(肝組織HE染色光鏡下觀察的病理圖片(×400)(A)空白組，(B)D-GalN(600mg/kg)組，(C)BP(聯(lián)苯雙酯滴丸)200mg/kg+D-GalN(600mg/kg)組，(D)AP 200mg/kg+D-GalN(600mg/kg)組，(E)AP 400mg/kg+D-GalN(600mg/kg)組，(F)AP800mg/kg+D-GalN(600mg/kg)組) 圖3為乙醇急性肝損傷模型小鼠肝組織光鏡下病理學(xué)觀察。(肝組織HE染色光鏡下觀察的病理圖片(×400)(A)空白組，(B)乙醇(4.8g/kg)組，(C)BP(聯(lián)苯雙酯滴丸)200mg/kg+乙醇(4.8g/kg)組，(D)AP 200mg/kg+乙醇(4.8g/kg)組，(E)AP 400mg/kg+乙醇(4.8g/kg)組，(F)AP 800mg/kg+乙醇(4.8g/kg)組) 圖4為CP急性肝損傷模型小鼠肝組織光鏡下病理學(xué)觀察。(肝組織HE染色光鏡下觀察的病理圖片(×400)(A)空白組，(B)CP(3.5mg/kg)組，(C)BP(聯(lián)苯雙酯滴丸)200mg/kg+CP(3.5mg/kg)組，(D)AP 200mg/kg+CP(3.5mg/kg)組，(E)AP 400mg/kg+CP(3.5mg/kg)組，(F)AP 800mg/kg+CP(3.5mg/kg)組)
具體實(shí)施例方式 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
蘋(píng)果多酚的來(lái)源 主要理化指標(biāo)蘋(píng)果多酚(UV，g/100g)20.0～90.0，根皮苷(HPLC，g/100g)1.0～20.0，綠原酸(HPLC，g/100g)1.0～30.0，原花青素B2(HPLC，g/100g)1.0～30.0。
實(shí)驗(yàn)表明蘋(píng)果多酚的理化指標(biāo)在下述范圍中對(duì)肝損傷細(xì)胞都具有較好的保護(hù)作用。
實(shí)施例6.AP抗肝微粒體自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化作用 大鼠自由飲食飲水適應(yīng)一周，禁食不禁水12h后，斷頭處死，迅速取肝置于冰冷的生理鹽水中，沖洗3次，洗去表面殘血，濾紙吸干，稱重。加入生理鹽水，低溫勻漿，制成10％(0.1g肝組織0.9ml生理鹽水)的勻漿液后，3000r/min離心10min，取上清液，儲(chǔ)存于冰箱-80℃冷凍室備用。用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白含量。臨用時(shí)，根據(jù)蛋白含量，用生理鹽水稀釋成蛋白含量為4mg/ml的肝勻漿供試液。
實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組，AA組(抗壞血酸，陽(yáng)性對(duì)照組)以及AP實(shí)驗(yàn)組。空白對(duì)照組加入1ml雙蒸水，其余各給藥組均加入不同濃度的藥物溶液1ml。各組分別加入1ml肝勻漿，50μl FeSO4和20μl L-Cys，加藥后37℃水浴孵育30min，各組加入20％醋酸2ml，終止反應(yīng)。3000r/min離心15min，取上清液3ml，加入0.67％TBA 1ml，沸水浴10min后流水冷卻。點(diǎn)板，應(yīng)用酶標(biāo)儀在532nm下檢測(cè)其吸光度值，并計(jì)算清除率及IC50值。
清除率＝(A空白對(duì)照組-A待測(cè)藥物組)/A空白對(duì)照組×100％ 結(jié)果表明，在本實(shí)驗(yàn)條件下，當(dāng)AP的濃度在0.014-10mg/ml(本文中AP濃度均以蘋(píng)果多酚計(jì)，以此類推)時(shí)，對(duì)FeSO4-L-Cys誘導(dǎo)的大鼠肝微粒體自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化生成MDA有較好的抑制效果，并呈現(xiàn)出一定的劑量依賴性(表1)。即AP具有抑制自發(fā)氧化條件下的脂質(zhì)過(guò)氧化作用，IC50＝0.1063mg/ml。
表1 AP對(duì)FeSO4-L-Cys誘導(dǎo)的 大鼠肝微粒體自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化生成MDA的抑制作用
*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與空白組相比。
實(shí)施例7.AP對(duì)2，2-二苯基-1-苦肼基(2，2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl，以下簡(jiǎn)稱DPPH)自由基的清除作用 取不同濃度的試驗(yàn)樣品溶液100μl與1×10-4mol/L的DPPH乙醇溶液900μl快速混勻后分別于0、5、10、15、20、25、30、40min......用酶標(biāo)儀在517nm處測(cè)定其吸光度，直至吸光度相對(duì)穩(wěn)定。取穩(wěn)定時(shí)樣品的吸光度值，按下式計(jì)算清除率及IC50值 清除率(％)＝[Ac-(Ai-Aj)]/Ac×100％ 注Ac-DPPH溶液與樣品溶劑(雙蒸水)的吸光度； Ai-DPPH溶液與樣品溶液的吸光度； Aj-DPPH溶劑(無(wú)水乙醇)與樣品溶液的吸光度； 結(jié)果表明，當(dāng)反應(yīng)進(jìn)行120min以后，體系的吸光度變化不大，則認(rèn)為該體系達(dá)到平衡。
表2反映的是體系反應(yīng)120分鐘時(shí)，各個(gè)濃度的AP溶液對(duì)DPPH自由基的清除率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)AP的濃度在10-4-10mg/ml時(shí)表現(xiàn)出明顯的清除DPPH自由基的能力，并呈一定的劑量依賴關(guān)系。計(jì)算得到AP清除DPPH自由基的IC50＝2.46×10-3mg/ml，而陽(yáng)性藥AA的IC50＝2.26mg/ml。
表2 AP對(duì)DPPH自由基清除率的影響(時(shí)間＝120分鐘)
每個(gè)數(shù)值是三次實(shí)驗(yàn)的平均值，*p＜0.05與只含DPPH和溶劑的空白組相比 實(shí)施例8.AP對(duì)CCl4所致小鼠急性肝損傷細(xì)胞的保護(hù)作用 小鼠60只，隨機(jī)分成6組，每組10只空白對(duì)照組、CCl4組、陽(yáng)性藥組(聯(lián)苯雙酯滴丸，BP，200mg/kg)、AP給藥組(200、400、800mg/kg)。BP組及AP給藥組每天灌胃給藥，給藥體積為0.2ml/10g，空白及CCl4組每天i.g.相同體積的蒸餾水。每天給藥一次，連續(xù)給藥7天。末次給藥1h后，除空白對(duì)照組外，每組分別i.p.0.1％CCl4大豆油溶液，給藥體積0.1ml/10g，空白對(duì)照組i.p.相同體積的食用大豆油。禁食不禁水16h后動(dòng)物稱重，摘眼球取血，處死動(dòng)物，取肝臟并稱重。所測(cè)指標(biāo)有肝體比，血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)含量，并取肝臟右小葉放入10％甲醛中固定，冰凍切片，做常規(guī)HE染色，光鏡下進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。
結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，i.p.0.1％CCl4使小鼠的肝比重明顯增加，血清中ALT和AST的含量明顯升高，說(shuō)明模型成功。AP 200、400和800mg/kg均可以顯著地減小CCl4引起的肝比重增加，AP 800mg/kg還可以明顯抑制CCl4引起的血清中ALT、AST活性的升高，AP 400mg/kg能夠顯著抑制AST的升高，而對(duì)ALT的影響沒(méi)有顯著性。結(jié)果見(jiàn)表3。
表3AP對(duì)CCl4所致小鼠急性肝損傷肝比重，血清ALT，AST含量的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差，n＝10)
##P＜0.01，###P＜0.001與空白組相比；*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與CCl4組相比。
病理組織學(xué)觀察 ①肝組織的肉眼觀察 空白對(duì)照組肝外觀顏色紅潤(rùn)，表面光滑，質(zhì)脆柔軟。
CCl4組肝臟體積明顯增大，顏色暗紅或呈土黃色，表面粗糙，肝邊緣鈍，質(zhì)地較韌。
AP給藥組肝臟在色澤、質(zhì)地、大小及表面光滑度較CCl4組有明顯改善。
②肝組織切片的病理組織學(xué)觀察 病理圖片見(jiàn)圖1。光鏡下檢查結(jié)果如下 空白對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)完整清晰，肝細(xì)胞索以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝血竇清晰，肝細(xì)胞形態(tài)正常，胞漿豐富。
CCl4組肝小葉結(jié)構(gòu)模糊，顯示以中央靜脈為中心的出血和變性壞死，多以點(diǎn)狀壞死為主，可見(jiàn)少數(shù)小片狀壞死。小葉內(nèi)大多數(shù)肝細(xì)胞腫脹，細(xì)胞質(zhì)疏松，有的呈氣球樣變，可見(jiàn)廣泛的空泡壞死、點(diǎn)狀壞死和灶性壞死。壞死區(qū)被脂肪變性細(xì)胞所包繞，壞死區(qū)內(nèi)有較多淋巴細(xì)胞和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，細(xì)胞核明顯大小不等，呈不同程度的固縮。
AP組肝小葉結(jié)構(gòu)基本清晰，肝細(xì)胞形態(tài)較正常，肝細(xì)胞腫脹、充血明顯減輕，少見(jiàn)壞死，少量肝細(xì)胞脂肪變性，較少的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。隨著AP劑量的增大，對(duì)肝細(xì)胞的保護(hù)作用也隨之增強(qiáng)。
實(shí)施例9.AP對(duì)D-GalN所致小鼠急性肝損傷細(xì)胞的保護(hù)作用 末次給藥1h后，除空白對(duì)照組外，每組分別i.p.D-GalN 600mg/kg，給藥體積0.2ml/10g，空白對(duì)照組i.p.給予相同體積的生理鹽水。其它實(shí)驗(yàn)方法同上。
結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，D-GalN組小鼠血清中ALT和AST活性明顯升高，而肝比重未發(fā)生顯著性變化，說(shuō)明造模成功。與D-GalN組比較，AP 800mg/kg可以顯著地抑制由D-GalN引起的血清中ALT和AST的活性升高；AP 400mg/kg對(duì)ALT活性有顯著性降低作用，而對(duì)血清中AST的活性沒(méi)有顯著性影響；AP200mg/kg對(duì)血清中ALT和AST都未產(chǎn)生明顯地影響。結(jié)果見(jiàn)表4。
表4AP對(duì)D-GalN所致小鼠急性肝損傷肝比重，血清ALT，AST含量的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差，n＝10)
###P＜0.001與空白組相比；*P＜0.05，**P＜0.01與D-GalN組相比。
病理組織學(xué)觀察 ①肝組織的肉眼觀察 空白對(duì)照組肝外觀顏色紅潤(rùn)，表面光滑，質(zhì)脆柔軟。
D-GalN組肝臟色澤較暗，部分有明顯白色壞死灶。
AP組肝臟色澤較暗，仍有白色壞死小點(diǎn)。
②肝組織切片的病理組織學(xué)觀察 病理圖片見(jiàn)圖2。光鏡下檢查結(jié)果如下 空白對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)完整清晰，肝細(xì)胞束以中央靜脈為中心呈放射狀排列，匯管區(qū)無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
D-GalN組肝組織均出現(xiàn)病變，肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，小葉內(nèi)肝細(xì)胞排列紊亂，大多數(shù)肝細(xì)胞腫脹，細(xì)胞質(zhì)疏松化，肝竇枯否氏細(xì)胞增生及肝細(xì)胞變性，有的呈氣球樣變，可見(jiàn)廣泛的空泡壞死點(diǎn)，點(diǎn)狀壞死和灶狀壞死，并且匯管區(qū)出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，纖維結(jié)締組織增生，增生的纖維組織有向肝小葉延伸的傾向。
AP組肝小葉結(jié)構(gòu)存在，肝細(xì)胞變性壞死程度呈不同程度的減輕，肝細(xì)胞束呈放射狀排列，輕度顆粒樣變性，肝血竇清晰，但仍可見(jiàn)到單個(gè)壞死肝細(xì)胞和嗜酸性變性肝細(xì)胞，匯管區(qū)局部炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，提示AP對(duì)D-GalN所致小鼠急性肝損傷細(xì)胞有一定的保護(hù)作用。
實(shí)施例10.AP對(duì)乙醇所致小鼠急性肝損傷細(xì)胞的保護(hù)作用 末次給藥1h后，除空白對(duì)照組外，每組分別i.g.50％(v/v)乙醇，給藥體積0.12ml/10g(相當(dāng)于乙醇4.8g/kg)，空白對(duì)照組i.g.給與相同體積的蒸餾水。其它實(shí)驗(yàn)方法同上。
結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，乙醇模型組小鼠的肝比重、血清中ALT和AST含量均顯著升高，說(shuō)明小鼠乙醇急性肝損傷模型復(fù)制成功。與乙醇組比較，AP 200、400和800mg/kg三個(gè)劑量組能夠劑量依賴地降低乙醇急性肝損傷小鼠血清中ALT的含量，AP 400、800mg/kg可以顯著降低血清中AST的含量，而只有AP 800mg/kg對(duì)乙醇引起的肝比重增加有顯著性降低作用。結(jié)果見(jiàn)表5。
表5AP對(duì)乙醇所致小鼠急性肝損傷肝比重，血清ALT，AST含量的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差，n＝10)
##P＜0.01，###P＜0.001與空白組相比；*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與乙醇組相比。
病理組織學(xué)觀察 ①肝組織的肉眼觀察 動(dòng)物給予乙醇后，出現(xiàn)明顯的醉酒現(xiàn)象，如反應(yīng)遲鈍，嗜睡，亢奮等。
空白對(duì)照組肝臟顏色鮮紅，表面光滑，質(zhì)脆柔軟。
乙醇組體積增大，表面暗紅或呈土黃色，表面粗糙，質(zhì)地較韌。
AP組肝臟在色澤、質(zhì)地、大小及表面光滑度較乙醇模型組有明顯改善。
②肝組織切片的病理組織學(xué)觀察 病理圖片見(jiàn)圖3。光鏡下檢查結(jié)果如下 空白對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞條索排列規(guī)則有序，偶見(jiàn)脂肪滴，但未見(jiàn)炎癥與壞死現(xiàn)象。
乙醇組肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞中度脂肪變性，少量呈點(diǎn)狀或凝固性壞死灶，間質(zhì)中有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
AP組肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，與乙醇模型組比較，肝組織仍可見(jiàn)肝細(xì)胞脂肪變性或氣球樣變性，有輕度濁腫現(xiàn)象，但未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及肝細(xì)胞壞死。
實(shí)施例11.AP對(duì)CP所致小鼠肝損傷細(xì)胞的保護(hù)作用 小鼠60只，隨機(jī)分成6組，每組10只空白對(duì)照組、CP組、BP組(200mg/kg)、AP給藥組(200、400、800mg/kg)。給藥后第3天，在繼續(xù)給藥的同時(shí)，除空白對(duì)照組外，i.p.CP 3.5mg/kg，連續(xù)5天。藥物與CP給藥間隔6h，以保證藥物在CP注射前能被充分吸收。CP停藥后，繼續(xù)i.g.藥物2天(藥物共給藥9天，CP共給藥5天)。空白對(duì)照組在此期間i.g.相同體積的蒸餾水，i.p.相同體積的生理鹽水。末次給藥后24h，取血取肝，測(cè)定指標(biāo)有體重變化，肝重，血清中ALT、AST，病理組織學(xué)檢查。
結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，CP模型組小鼠的體重減少量、血清中ALT和AST含量均顯著升高，而肝比重未發(fā)生明顯的變化，說(shuō)明CP小鼠肝損傷模型復(fù)制成功。與CP模型組比較，AP 800mg/kg可以顯著降低CP肝損傷小鼠血清中ALT的含量，而對(duì)CP引起的體重下降和血清中AST的含量沒(méi)有顯著性影響；AP 200、400mg/kg對(duì)CP引起的體重降低和血清中ALT、AST的含量升高均無(wú)顯著性影響。結(jié)果見(jiàn)表6。
表6AP對(duì)順鉑所致小鼠急性肝損傷肝比重，血清ALT，AST含量的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差，n＝10)
###P＜0.001與空白組相比；*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與順鉑組相比。
病理組織學(xué)觀察 ①肝組織的肉眼觀察 空白對(duì)照組肝臟顏色鮮紅，表面光滑，質(zhì)脆柔軟。
CP組肝臟出現(xiàn)明顯的萎縮現(xiàn)象，表面暗紅。
AP組肝臟在色澤、質(zhì)地、大小及表面光滑度較CP組有一定程度的改善。
②肝組織切片的病理組織學(xué)觀察 病理圖片見(jiàn)圖4。光鏡下檢查結(jié)果如下 空白對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)完整清晰，肝細(xì)胞索以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝血竇清晰，肝細(xì)胞形態(tài)正常，胞漿豐富。
CP組肝小葉結(jié)構(gòu)模糊，顯示以中央靜脈為中心的出血和變性壞死，多以點(diǎn)狀壞死為主，也可見(jiàn)小片狀壞死。小葉內(nèi)大多數(shù)肝細(xì)胞腫脹，細(xì)胞質(zhì)疏松，有的呈氣球樣變，可見(jiàn)廣泛的空泡壞死、點(diǎn)狀壞死和灶性壞死。壞死區(qū)有較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，細(xì)胞核明顯大小不等，呈不同程度的固縮。
AP組肝小葉結(jié)構(gòu)基本清晰，肝細(xì)胞腫脹、充血有減輕，仍可見(jiàn)壞死、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象。
權(quán)利要求
1.蘋(píng)果多酚在制備護(hù)肝藥物、保健食品或食品中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘋(píng)果多酚在制備護(hù)肝藥物、保健食品或食品中的應(yīng)用，其特征是所述藥物、保健食品或食品的劑型為硬膠囊劑、軟膠囊劑、散劑、顆粒劑、片劑、丸劑、蜜膏劑、口服液、酒劑、注射劑或茶劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘋(píng)果多酚在制備護(hù)肝藥物、保健食品或食品中的應(yīng)用，其特征在于所述食品為飲料、糖果、大米制品、面粉制品、肉制品、魚(yú)制品或食用油。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了蘋(píng)果多酚在制備護(hù)肝藥物、保健食品或食品中的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明蘋(píng)果多酚具有肝臟保護(hù)作用，對(duì)多種化學(xué)性物質(zhì)如CCl4、乙醇、D-GalN和順鉑等所致肝損傷模型具有顯著的保護(hù)作用，且具有利膽作用。AP對(duì)免疫性肝損傷也具有保護(hù)作用。
文檔編號(hào)A61K36/73GK101810697SQ20101017114
公開(kāi)日2010年8月25日 申請(qǐng)日期2010年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月13日
發(fā)明者於洪建, 吳春福 申請(qǐng)人:天津市壹杯紅生物技術(shù)有限公司