專利名稱：*酮類化合物在制備治療膽汁淤積的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明及_酮類化合物在制備藥物中的運(yùn)用，更具體的說涉及_酮類化合物在制備治療膽汁淤積的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
正常生理情況下，膽汁的形成有賴于肝細(xì)胞血竇面基底膜上的Na+-牛磺酸 共轉(zhuǎn)運(yùn)多月太[sodium-taurocholate cotransporting polypeptide, NTCP/Ntcp (按國 際統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)NTCP為人類種屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，Ntcp為嚙齒類動(dòng)物種屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，下同)]， 有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(organicanion transportingprotein, 0ATP/0atp)，多耐藥才目 關(guān)蛋白 3(muhidrugresistance. associated protein3, MRm/Mrp3),多耐藥才目關(guān)蛋 白 4(multidrug resistance-associated protein4, MRP4/Mrp4)禾口 小膽管側(cè)月干細(xì) 胞毛細(xì)膽管膜上分布的膽鹽輸出泵(canalicularbiIe salt-export pump, BSEP/ Bsep),多耐藥才目關(guān)蛋白 2 (muhidrugresistance-associated protein, MRP2/Mrp2), 多耐藥糖蛋白 1 (muhidrug resistance-lP-glycoprotein, MDRl/Mdrl)，多耐藥糖蛋 白 2(muhidrug resistance-2P-glycoprotein, MDR2/Mdr2), ^ H S S 3(muhidrug resistance-3P-slycoprotein, MDR3/Mdr3)等多禾中轉(zhuǎn)運(yùn)體來完成。內(nèi)毒素血癥、藥物性肝臟損害、原發(fā)性膽汁性肝硬化、原發(fā)性硬化性膽管炎、膽道 梗阻、肝移植、肝葉切除等內(nèi)外科疾病常并發(fā)膽汁淤積的病理改變。轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后調(diào)控失常 引發(fā)的上述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在胞膜上表達(dá)、定位的異常在膽汁淤積的發(fā)生中起了關(guān)鍵作用。對(duì)肝 細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的深人研究以揭示上述疾病中膽汁淤積發(fā)生的分子學(xué)機(jī) 制是近年來的研究熱點(diǎn)。膽汁酸是膽汁的主要成分，具有重要的生理功能，也是膽汁淤積狀態(tài)下致機(jī)體損 失的主要因素。機(jī)體內(nèi)膽汁酸在正常狀態(tài)下處于穩(wěn)定狀態(tài)。而這種穩(wěn)態(tài)的維持主要依靠 肝細(xì)胞膜上的膽酸相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。膽汁淤積發(fā)生時(shí)，肝細(xì)胞膜膽酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白會(huì)發(fā)生適應(yīng)性 改變，如與膽酸攝入相關(guān)的小管面膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NTCP表達(dá)下降，與膽酸排泌相關(guān)的基地側(cè)膜 MRP3、MRP4表達(dá)上調(diào)。其中，MRP3、MRP4的適應(yīng)性表達(dá)上調(diào)，能夠促進(jìn)肝細(xì)胞內(nèi)膽汁酸、膽 紅素等從基地側(cè)膜排泌至體循環(huán)血液，最后經(jīng)由尿液排除體外，被認(rèn)為是膽汁淤積狀態(tài)下 機(jī)體自我防御的主要機(jī)制。大量證據(jù)表明，若干肝細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)是受轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的， 肝細(xì)胞池內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多種歸巢信號(hào)刺激其由胞內(nèi)向胞膜上定位及功能性表達(dá)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就在于提供_酮類化合物在制備治療膽汁淤積的藥物中的應(yīng)用。所述的_酮類化合物為8-0- [ β -D-吡喃木糖-(1 -6) - β -D-批喃葡萄糖]-1， 7- 二羥基-3-甲氧基丨酮、1，7，8-三羥3-甲氧基□山酮、1，8- 二羥基_3，5- 二甲氧基P山酮、 1-羥基_2，3，4，8四甲氧基Π山酮、1-基_2，3，8三甲氧基_酮、1-基_2，3，4，5四甲氧基□山酮 和1-羥基_2，3，5三甲氧_酮中的一種或一種以上的組合；
其中，8-0-[ β -D-吡喃木糖_ (1-6) - β -D-吡喃葡萄糖]_1，7_ 二羥基_3_甲氧基 口山酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 7,8-三羥基-3-甲氧基_酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 1，8-二羥基-3，5-二甲氧基_酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 1-羥基-2，3，4，8四甲氧基Π山酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 1-羥基_2，3，8三甲氧基_酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 1-羥基-2，3，4，5四甲氧基_酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 1-羥基-2，3，5三甲氧基P山酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為
本發(fā)明的有益技術(shù)效果是通過體外實(shí)驗(yàn)顯示_酮類化學(xué)成分對(duì)于肝細(xì)胞膜膽酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白會(huì)發(fā)生適應(yīng)性改變具有活性，可用于治療內(nèi)毒素血癥、藥物性肝臟損害、原發(fā)性膽 汁性肝硬化、原發(fā)性硬化性膽管炎、膽道梗阻等病癥。
具體實(shí)施例方式將藏茵陳藥材粉粹成粗粉，用不同濃度乙醇梯度滲漉，回收溶劑至稠膏狀，稠膏加 水混懸，分別用三氯甲烷、正丁醇萃取，各部分分別回收溶劑。再通過萃取、結(jié)晶、柱層析等 方法進(jìn)行分離純化。得到8-0-[ β -D-吡喃木糖_(1-6)-β -D-吡喃葡萄糖]-1，7_ 二羥 基-3-甲氧基Π山酮、1，7，8-三羥基-3-甲氧基口山酮、1，8-二羥基-3，5-二甲氧基_酮、 1-基_2，3，4，8四甲氧基口山1-羥基_2，3，8三甲氧基_酮、羥基_2，3，4，5四甲氧基口山 酮和1-羥基_2，3，5三甲氧基_酮等幾種_酮類化學(xué)成分。實(shí)驗(yàn)?zāi)康谋緦?shí)驗(yàn)?zāi)康木褪菣z測下述相關(guān)各樣品對(duì)H印G2細(xì)胞基地側(cè)膜MRP3、MRP4表達(dá)變化 的影響，篩選出對(duì)MRP3、MRP4表達(dá)上調(diào)最明顯的藥物。實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)分組為藥物處理組、UDCA陽性對(duì)照組、陰性對(duì)照組(DMS0、乙醇對(duì)照組)。 !fepG2細(xì)胞以1X10/L的密度接種于96孔板中.同時(shí)每孔加藥物。藥物處理組采用 8-0-[ β -D-吡喃木糖-(1-6) - β -D-吡喃葡萄糖]-1，7- 二羥基-3-甲氧基_酮、1，7，8-三 羥基-3-甲氧基_酮、1，8- 二羥基-3，5- 二甲氧基_酮、1-羥基-2，3，4，8四基_酮、1-羥 基-2，3，8三甲_酮、1-羥基-2，3，4，5四甲氧基_酮和1_羥基_2，3，5三甲氧基_酮分別 配置濃度為50mg/ml的水溶液，每種藥物平行6孔，對(duì)照組加入等體積培養(yǎng)液；同時(shí)處理三 批!fepG2細(xì)胞72h時(shí)后，將相同藥物處理組的細(xì)胞收集在一起，然后提取總RNA、總膜蛋白， 進(jìn)行RT-PCR以及Western-blot，檢測上述各樣品對(duì)H印G2基地側(cè)膜膜膽酸相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 MRP3、MRP4表達(dá)變化的影響。篩選對(duì)MRP3、MRP4作用最為明顯的藥物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果在mRNA水平檢測了各樣品對(duì)H印G2細(xì)胞基地側(cè)膜MRP3、MRP4的表達(dá)變化。1) MRP4mRNA水平的表達(dá)變化情況8-0- [ β -D-吡喃木糖-(1-6) - β -D-吡喃葡萄糖]-1，7- 二羥基-3-甲氧基口山 酮、1，7，8-三羥基-3-甲氧基_酮、1，8- 二羥基-3，5- 二甲氧基_酮能夠上調(diào)IfepG2細(xì) 胞基地側(cè)膜MRP4mRNA的表達(dá)。其中，1，7，8-三羥基-3-甲氧基_酮、1，8-二羥基-3， 5- 二甲氧基_酮刺激H印G2細(xì)胞基地側(cè)膜MRP4mRNA表達(dá)增高約3倍；8_0_[ β -D-吡喃 木糖-(1-6) -D-吡喃葡萄糖]-1，7_ 二羥基-3-甲氧基OlJj酮刺激IfepG2細(xì)胞基地側(cè)膜 MRP4mRNA表達(dá)增高約2倍。
1-羥基_2，3，4，8四甲氧_酮、1-羥基_2，3，8三甲氧基_酮和1_羥基_2，3，5 三甲氧基_酮能夠上調(diào)H印G2細(xì)胞基地側(cè)膜MRP4mRNA的表達(dá)，而1-羥基-2，3，4，5四甲氧 基_酮對(duì)MRP4mRNA表達(dá)無明顯變化。其中，1-羥基-2，3，4，8四甲氧基_酮、刺激!fepG2細(xì) 胞基地側(cè)膜MRPmRNA表達(dá)增高約3倍；1_羥基_2，3，8三甲氧基_酮和1_羥基_2，3，5三 甲氧基_酮刺激HepG2細(xì)胞基地側(cè)膜MRP4mRNA表達(dá)增高約2倍。UDCA對(duì)MRP4mRNA表達(dá)無明顯變化。
陰性對(duì)照組M4mRNA表達(dá)無變化。2) MRP3mRNA水平的表達(dá)變化情況8-0- [ β -D-吡喃木糖_ (1-6) - β -D-吡萄萄糖]_1，7_ 二羥基_3_甲氧基_酮、1， 7,8-三羥基-3-甲氧基_酮、1，8- 二羥基-3，5- 二甲氧基_酮對(duì)MRP3mRNA表達(dá)無明顯變 化。1-羥基-2，3，4，8四甲氧基_酮、1-羥基-2，3，8三甲氧基O山酮和1_羥基_2，3，4， 5四甲氧基_酮能夠上調(diào)H印G2細(xì)胞基地側(cè)膜MRP3mRNA的表達(dá)，而1_羥基_2，3，5三甲氧 基_酮對(duì)MRP3mRNA表達(dá)無明顯變化。其中，1_羥基_2，3，4，8四甲氧基_酮、1-羥基-2，3， 8三甲氧基_酮、1-羥基-2，3，4，5四甲氧基_酮和刺激H印G2細(xì)胞基地側(cè)膜MRP3mRNA表 達(dá)增高約1.5倍。UDCA對(duì)MRP3mRNA表達(dá)無明顯變化。陰性對(duì)照組MRP3mRNA表達(dá)無變化。傳統(tǒng)藏醫(yī)學(xué)中藏茵陳藥材為全草入藥，即藥材中的所有化學(xué)成分都被人體吸收； 所以從藏茵陳藥材所取得藥理性質(zhì)相近的_酮化學(xué)成分一種以上的任意組合均具有生物 活性。
權(quán)利要求
酮類化合物在制備治療膽汁淤積藥物中的應(yīng)用。FSA00000123857200011.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的_酮類化合物為8-0-[i3-D-吡喃 木糖_ (1-6) - β -D-吡喃葡萄糖]-1，7- 二羥基-3-甲氧基_酮、`1,7,8-三羥基-3-甲氧基 口山酮、1，8-二羥基-3，5-二甲氧基_酮、1-羥基-2，3，4，8四甲氧基_酮、1-羥基-2，3，8三 甲氧基_酮、1-羥基_2，3，4，5四甲氧基_酮和1-羥基_2，3，5三甲氧基Π山酮中的一種或 一種以上的組合；其中，8-0-[ β -D-吡喃木糖-(1-6) - β -D-吡喃葡萄糖]-1，7- 二羥基-3-甲氧基P山酮 的化學(xué)結(jié)構(gòu)式 為 `1，7，8-三羥基-3-甲氧基_酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 `1,8- 二羥基-3，5- 二甲氧基_酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 1-羥基-2，3，4，8四甲氧基_酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 1-羥基-2，3，8三甲氧基_酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 1-羥基-2，3，4，5四甲氧基_酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 1-羥基-2，3，5三甲氧基_酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為
全文摘要
本發(fā)明公開了酮類化合物在制備治療膽汁淤積的藥物中的應(yīng)用，通過體外實(shí)驗(yàn)顯示酮類化學(xué)成分對(duì)于肝細(xì)胞膜膽酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白會(huì)發(fā)生適應(yīng)性改變具有活性，可用于治療內(nèi)毒素血癥、藥物性肝臟損害、原發(fā)性膽汁性肝硬化、原發(fā)性硬化性膽管炎、膽道梗阻等病癥。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK101843628SQ20101017612
公開日2010年9月29日 申請(qǐng)日期2010年5月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月19日
發(fā)明者馮婷婷, 周華容, 柴進(jìn), 羅維早, 舒抒, 鐘國躍, 陽勇, 陳文生, 黃思行 申請(qǐng)人:重慶市中藥研究院