專利名稱：：一種天然腦蛋白水解物注射劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥品
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是一種天然腦蛋白水解物注射劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：腦蛋白水解物是由健康豬腦組織經(jīng)現(xiàn)代控制水解技術(shù)制備的低分子肽類神經(jīng)營養(yǎng)藥物。低分子肽具有生物活性，能調(diào)節(jié)人體腦代謝、神經(jīng)傳遞及神經(jīng)生長，能提高葡萄糖分解酶活性，增加腦對葡萄糖的無氧能量代謝。降低腦內(nèi)乳酸的濃度，在缺血缺氧時對神經(jīng)細胞的線粒體有保護作用。臨床主要用于顱腦外傷、腦血管病后遺證、老年性癡呆癥等?，F(xiàn)有腦蛋白水解物注射劑原料均是采用豬腦提取后，外源性“補加”或“修飾”氨基酸而得，并非天然提取氨基酸。而外源性“補加”或“修飾”的氨基酸都是屬于生物發(fā)酵氨基酸和部分石油副產(chǎn)品合成氨基酸，和動物蛋白質(zhì)的水解氨基酸有很大的區(qū)別。用其專屬性指標“比旋度”測定天然提取物和添加物有極大差異(P<0.001)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服在腦蛋白水解物注射劑中外源性“補加”或“修飾”氨基酸的做法，提供一種產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可控的經(jīng)天然提取腦蛋白水解物注射劑及其制備方法。本發(fā)明是在原腦蛋白水解物原料提取工藝的基礎(chǔ)上進行了創(chuàng)新性的改進。具體技術(shù)方案為本發(fā)明的腦蛋白水解物注射劑原料是以豬腦中經(jīng)控制水解獲得的淡黃色至棕黃色液體，有效成份為小分子多肽和游離氨基酸，為天然水解物。是一種不含蛋白質(zhì)的腦組織水解物，腦多肽分子量小于10000的占15%，游離氨基酸占85%，包括各種必需和非必需以及其它特殊氨基酸，其氨基酸的恒定比例為天然豬腦組織的恒定比例。上述腦蛋白水解物注射劑原料的制備方法按以下步驟進行1、粗提取1)胃蛋白酶水解豬腦組織加入等量水勻漿，5090°C保溫3050分鐘，冷卻至2050°C攪拌加入豬腦重量15%[按28005000Eu/g計(活性要求)]的胃蛋白酶，3050°C攪拌，加入鹽酸調(diào)pH3.05.0，攪拌3050°C保溫15小時后停止攪拌，再3050°C保溫14小時，收集上清液，沉淀離心，合并上清液；2)高溫滅活上清液減壓濃縮到豬腦重1/41/2的量，100125°C滅活36小時，加水至豬腦重，調(diào)pH值5.07.0，布袋過濾，加入活性炭(IKg豬腦加入1020g)，微沸1030分鐘，冷卻至4060°C脫炭，調(diào)pH值6.77.5；3)再酶解上述脫炭液加入豬腦重量13%(按20003500Eu/g計)的胰酶，3545°C保溫14小時，調(diào)pH值2.04.5，靜置1016小時，取上清液，沉淀過濾，合并上清液；2、精提取1)柱層析上述上清液上柱后，用水沖洗至pH值2.04.0，用lmol/L氨水洗脫，收集洗脫液，PH值在8.012.0,每公斤豬腦加入1.03.Og氫氧化鈉減壓濃縮去氨水，濃縮至豬腦重1/51/3的量，過夜，去除沉淀，得原液，-20°C凍結(jié)保存；2)超濾調(diào)配前解凍超濾，用10000分子量超濾膜超濾，收集過濾液，定容，按原液標準檢定含量后即為調(diào)配用原液；3)上述原液的檢定(1)性狀為淺黃色至棕黃色液體；(2)鑒別供試品溶液色譜圖與對照品溶液色譜圖基本一致；(3)pH值8·010.0；(4)16種游離氨基酸含量應(yīng)符合標準規(guī)定；(在不添加氨基酸的情況下，總N5.496.71mg/ml時，16種氨基酸總量為28.0842.14mg/ml,)3、調(diào)配根據(jù)檢測結(jié)果計算需加入原液量，計算方法如下原液加入量(ml)=藥液總量(ml)X35.6mg/ml+原液氨基酸含量(mg/ml)量取上述計算量的原液，加注射用水至藥液總量的90%，混勻，用鹽酸溶液調(diào)pH值至6.97.5，加藥液總量0.035%的亞硫酸氫鈉，加注射用水至藥液總量，混勻，即可。4、灌封用安瓿洗烘灌聯(lián)動機組灌裝，每支灌裝10.Oml05、滅菌將已灌封的腦蛋白水解物注射液放入滅菌柜內(nèi)，115°C滅菌30min；6、燈檢。7、包裝。本發(fā)明的腦蛋白水解物注射劑原料及其制備方法有以下特點1.通過工藝改進，得到天然水解的游離氨基酸，而不是外源性“添加”或“修飾”的氨基酸。2.雖然創(chuàng)新的工藝與原工藝相比發(fā)生變化，但其藥品標準完全符合國家對該產(chǎn)品的標準要求，且質(zhì)量更穩(wěn)定可靠。3.在原標準的基礎(chǔ)上增加了異常毒性、高分子物質(zhì)等安全性指標，更加保證了產(chǎn)品的臨床用藥安全。4.在原標準基礎(chǔ)上增加比旋度測定專屬性指標，以區(qū)分天然提取氨基酸和添加氨基酸。專屬性試驗及標準確定如下1).專屬性試驗取本發(fā)明的腦蛋白水解物注射液(規(guī)格10ml)各13批，按中國藥典2005年版二部附錄VIE中的方法測定比旋度，測定結(jié)果如下<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>結(jié)果表明本發(fā)明產(chǎn)品與現(xiàn)有的產(chǎn)品有明顯區(qū)別，其中現(xiàn)有產(chǎn)品比旋度在-0.574°-0.644°之間，本發(fā)明產(chǎn)品比旋度在-0.419°-0.464°之間。現(xiàn)有產(chǎn)品比旋度與本發(fā)明產(chǎn)品比旋度進行組間比較，其P<0.001，有非常顯著性差異。2).標準確定取本發(fā)明產(chǎn)品13批腦蛋白水解物注射液(規(guī)格10ml)，按照檢測方法進行檢測，結(jié)果均在-0.40°-0.5°之間，平均偏差為1.57%，結(jié)果如下故規(guī)定本品比旋度的范圍為-0.40°至-0.50°。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>本發(fā)明的藥理毒理本發(fā)明的藥品為大腦所特有的肽能神經(jīng)營養(yǎng)藥物，能以多種方式作用于中樞神經(jīng)，調(diào)節(jié)和改善神經(jīng)元的代謝，促進突觸的形成，誘導(dǎo)神經(jīng)元的分化，并進一步保護神經(jīng)細胞免受各種缺血和神經(jīng)毒素的損害。本品可通過血腦屏障，促進腦內(nèi)蛋白質(zhì)的合成，影響呼吸鏈，具有抗缺氧的保護能力，改善腦內(nèi)能量代謝。激活腺苷酸環(huán)化酶和催化其它激素系統(tǒng)，提供神經(jīng)遞質(zhì)、肽類激素及輔酶前體。藥代動力學(xué)本品可透過血腦屏障進入神經(jīng)細胞，氨基酸在腦內(nèi)迅速代謝，半衰期(Τ1/2)由數(shù)秒至數(shù)小時。適應(yīng)癥用于顱腦外傷、腦血管病后遺癥伴有記憶減退及注意力集中障礙的癥狀改善。用法用量每一療程最好連續(xù)注射，參考病人年齡，病情以決定療程長短及劑量，皮下注射不超過2ml，肌肉注射不超過5ml，靜脈滴注一般使用IOml，稀釋于250ml生理鹽水中緩慢滴注，每日一次。約60-120分鐘滴完，可連續(xù)使用10-14天為一療程。具體實施例方式實施例1本發(fā)明的藥品按以下工藝步驟制得1、粗提取1)胃蛋白酶水解豬腦組織加入等量水勻漿，5090°C保溫3050分鐘，冷卻至2050°C攪拌加入豬腦重量(按28005000Eu/g計)的胃蛋白酶，3060°C攪拌，加入鹽酸調(diào)PH3.05.0，攪拌3050°C保溫15小時后停止攪拌，再3050°C保溫14小時，收集上清液，沉淀離心，合并上清液；2)高溫滅活上清液減壓濃縮到豬腦重1/41/2的量，100125°C滅活36小時，加水至豬腦重，調(diào)PH值5.0，布袋過濾，每公斤豬腦加入IOg活性炭，微沸1030分鐘，冷卻至4060°C脫炭，調(diào)pH值6.7。3)再酶解上述脫炭液加入豬腦重量1%(按20003500Eu/g計)的胰酶，3545°C保溫14小時，調(diào)pH值2.0，靜置1016小時，取上清液，沉淀過濾，合并上清液。2、精提取1)柱層析上述上清液上柱后，用水沖洗至pH值2.0，用lmol/L氨水洗脫，收集洗脫液，PH值在8.0，每公斤豬腦加入1.Og氫氧化鈉減壓濃縮去氨水，濃縮至豬腦重1/51/3的量，過夜，去除沉淀，得原液，-20°C凍結(jié)保存；2)超濾調(diào)配前解凍超濾，用10000分子量超濾膜超濾，收集過濾液，定容，按原液標準檢定含量后即為調(diào)配用原液；3)上述原液的檢定(1)性狀為淺黃色至棕黃色液體；(2)鑒別供試品溶液色譜圖與對照品溶液色譜圖基本一致；(3)口!1值8.0;(4)16種游離氨基酸含量應(yīng)符合標準規(guī)定；3、調(diào)配按生產(chǎn)腦蛋白水解物注射液1000支計算，藥液總量為10000ml，若原液氨基酸含量為120mg/ml，則原液加入量為10000mlX35.6mg/ml+120mg/ml=2967ml量取2967ml的原液，加注射用水至藥液總量的90%，S卩加注射用水至9000ml，混勻，用鹽酸溶液調(diào)PH值至6.9，加3.5g的亞硫酸氫鈉，加注射用水至藥液總量，混勻，即可。4、灌封用安瓿洗烘灌聯(lián)動機組灌裝，每支灌裝10.Oml05、滅菌將已灌封的腦蛋白水解物注射液放入滅菌柜內(nèi)，115°C滅菌30min；6、燈檢。7、包裝。實施例2:1、粗提取1)胃蛋白酶水解豬腦組織加入等量水勻漿，5090°C保溫3050分鐘，冷卻至2050°C攪拌加入豬腦重量5%(按28005000Eu/g計)的胃蛋白酶，3060°C攪拌，加入鹽酸調(diào)PH5.0，攪拌3050°C保溫15小時后停止攪拌，再3050°C保溫14小時，收集上清液，沉淀離心，合并上清液；2)高溫滅活上清液減壓濃縮到豬腦重1/41/2的量，100125°C滅活36小時，加水至豬腦重，調(diào)pH值7.0，布袋過濾，每公斤豬腦加入活性炭20g，微沸1030分鐘，冷卻至4060°C脫炭，調(diào)pH值7.5；3)再酶解上述脫炭液加入豬腦重量3%(按20003500Eu/g計)的胰酶，35451保溫14小時，調(diào)？!1值4.5，靜置1016小時，取上清液，沉淀過濾，合并上清液。2、精提取1)柱層析上述上清液上柱后，用水沖洗至pH值4.0，用lmol/L氨水洗脫，收集洗脫液，PH值在12.0，每公斤豬腦加入3.Og氫氧化鈉減壓濃縮去氨水，濃縮至豬腦重1/51/3的量，過夜，去除沉淀，得原液，-20°C凍結(jié)保存；2)超濾調(diào)配前解凍超濾，用10000分子量超濾膜超濾，收集過濾液，定容，按原液標準檢定含量后即為調(diào)配用原液；3)上述原液的檢定(1)性狀為淺黃色至棕黃色液體；(2)鑒別供試品溶液色譜圖與對照品溶液色譜圖基本一致；(3)!1值10.0;(4)16種游離氨基酸含量應(yīng)符合標準規(guī)定；以下步驟與實施例1相同。權(quán)利要求一種天然腦蛋白水解物注射劑的制備方法，其特征是按以下步驟制取(1)粗提?、傥傅鞍酌杆庳i腦組織加入等量水勻漿，50～90℃保溫30～50分鐘，冷卻至20～50℃攪拌加入豬腦重量1～5％的胃蛋白酶，30～60℃攪拌，加入鹽酸調(diào)pH3.0～5.0，攪拌30～50℃保溫1～5小時后停止攪拌，再30～50℃保溫1～4小時，收集上清液，沉淀離心，合并上清液；②高溫滅活上清液減壓濃縮到豬腦重1/4～1/2的量，100～125℃滅活3～6小時，加水至豬腦重，調(diào)pH值5.0～7.0，布袋過濾，每公斤豬腦加入10～20g活性炭，微沸10～30分鐘，冷卻至40～60℃脫炭，調(diào)pH值6.7～7.5；③再酶解上述脫炭液加入豬腦重量1～3％的胰酶，35～45℃保溫1～4小時，調(diào)pH值2.0～4.5，靜置10～16小時，取上清液，沉淀過濾，合并上清液；(2)精提取①柱層析上述上清液上柱后，用水沖洗至pH值2.0～4.0，用1mol/L氨水洗脫，收集洗脫液，pH值在8.0～12.0，每公斤豬腦加入1.0～3.0g氫氧化鈉減壓濃縮去氨水，濃縮至豬腦重1/5～1/3的量，過夜，去除沉淀，得原液，-20℃凍結(jié)保存；②超濾上述原液解凍后超濾，用10000分子量超濾膜超濾，收集過濾液，定容，按原液標準檢定含量后即為調(diào)配用原液；③上述原液的檢定(3)調(diào)配根據(jù)檢測結(jié)果計算需加入的同上原液量，計算方法如下同上原液加入量(ml)＝藥液總量(ml)×35.6mg/ml÷原液氨基酸含量(mg/ml)，量取上述計算量的原液，加注射用水至藥液總量的90％，混勻，用鹽酸溶液調(diào)pH值至6.9～7.5，加藥液總量0.035％的亞硫酸氫鈉，加注射用水至藥液總量，混勻，即可。2.一種用權(quán)利要求1所述天然腦蛋白水解物注射劑的制備方法制備的天然腦蛋白水解物注射劑。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述天然腦蛋白水解物注射劑，其特征在于該注射劑總氮含量5.496.71mg/ml,16種游離氨基酸含量28.0842.14mg/ml，其專屬性指標比旋度測定值為-0.4°-0.5°。全文摘要本發(fā)明是一種天然腦蛋白水解物注射劑及其制備方法。該注射劑經(jīng)過粗提取的胃蛋白酶水解、高溫滅活、再酶解，所得上清液進行精提取，經(jīng)過柱層析、超濾、原液的檢定后，進行藥液的調(diào)配得到天然腦蛋白水解物注射劑。用本發(fā)明的制備工藝能得到天然水解的游離氨基酸，而不是外源性“添加”或“修飾”的氨基酸。本品可通過血腦屏障，促進腦內(nèi)蛋白質(zhì)的合成，影響呼吸鏈，具有抗缺氧的保護能力，改善腦內(nèi)能量代謝。激活腺苷酸環(huán)化酶和催化其它激素系統(tǒng)，提供神經(jīng)遞質(zhì)、肽類激素及輔酶前體。本發(fā)明增加了異常毒性、高分子物質(zhì)等安全性指標，更加保證了產(chǎn)品的臨床用藥安全。并增加比旋度測定專屬性指標，以區(qū)分天然提取氨基酸和添加氨基酸。文檔編號A61P25/28GK101829050SQ201010176378公開日2010年9月15日申請日期2010年5月19日優(yōu)先權(quán)日2010年5月19日發(fā)明者彭長福,陳先東申請人:云南盟生藥業(yè)有限公司