專(zhuān)利名稱(chēng)：牛角瓜葉提取物的制備及抗腫瘤藥物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種牛角瓜葉提取物的制備及抗腫瘤藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
牛角瓜葉為蘿蘑科(Ascl印iadaceae)，屬(Calotropis)植物牛角瓜(Calotropis gigantea L.)的葉。牛角瓜屬約有6種，廣泛分布于亞洲和非洲的熱帶亞熱帶地區(qū)。我國(guó)盛 產(chǎn)其中的兩種，一種為牛角瓜(Calotropis giganteal.)，分布于海南、廣東、四川和云南， 另一種為白花牛角瓜(CalotropisproceraL.)，在廣東、廣西、云南有零星分布。牛角瓜屬植物，在民間具有廣泛的藥用價(jià)值，其根、莖、葉、果及各部位的白色汁液 均可藥用，具有抗菌、消炎、驅(qū)蟲(chóng)、化痰、解毒等作用，用于哮喘、咳嗽、麻瘋病、潰瘍、痔瘡、腫 瘤等疾病的治療。國(guó)外學(xué)者對(duì)牛角瓜的化學(xué)成分進(jìn)行了深入系統(tǒng)的研究，從其根和葉中已 經(jīng)分離鑒定了 10多種強(qiáng)心苷，強(qiáng)心苷大多顯示強(qiáng)抗腫瘤活性(《Chemical Pharmaceutical Bulletin)), 1998. 46B 528 ； ((Journal of Natural Products)), 2006,69 (18) :1249)。國(guó)內(nèi)， 僅中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所報(bào)道了從牛角瓜中分離得到的3個(gè)強(qiáng)心苷及 其體外抗腫瘤活性(《Modern Pharmaceutical Research)), 2008,1 (2) :49·)。中國(guó)專(zhuān)利公 開(kāi)號(hào)CN1414010A公開(kāi)了 “一種治療癌癥的強(qiáng)心苷類(lèi)化合物及其制備方法”涉及牛角瓜根 中強(qiáng)心苷類(lèi)化合物提取工藝等；專(zhuān)利“牛角瓜及其提取物在制備抗腫瘤藥物中的新應(yīng)用”涉 及牛角瓜根乙醇提取物經(jīng)大孔樹(shù)脂純化的強(qiáng)心苷提取物的抗腫瘤用途；專(zhuān)利“牛角瓜中的 強(qiáng)心苷化合物的抗腫瘤新用途”涉及牛角瓜根中分離得到的強(qiáng)心苷化合物的抗腫瘤用途。 這些專(zhuān)利均是以牛角瓜根為研究對(duì)象的，而未涉及對(duì)牛角瓜葉的研究和應(yīng)用，有關(guān)牛角瓜 葉的提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，至今未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道和專(zhuān)利公開(kāi)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供的一種牛角瓜葉提取物的制備及抗 腫瘤藥物的應(yīng)用，它采用低極性有機(jī)溶劑從牛角瓜葉中回流提取具有抗腫瘤的活性物質(zhì)， 應(yīng)用于抗腫瘤的治療作用顯著，為腫瘤治療提供了一種新的藥物。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種牛角瓜葉提取物的制備，其特點(diǎn)是以牛角瓜葉 為原料，經(jīng)提取、濃縮得具有強(qiáng)心苷活性組分的牛角瓜葉提取物，具體制備包括下述步驟a、一次提取以甲醇或低極性有機(jī)溶劑為提取溶劑、干燥的牛角瓜葉為原料，經(jīng)粉碎后置于提 取罐，用提取溶劑回流提取2 3次，提取液經(jīng)減壓回收溶劑后，將提取物分散在水中成懸 濁液，然后經(jīng)低極性有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，剩下的水液經(jīng)濃縮后得具有強(qiáng)心苷活性組分的牛 角瓜葉提取物A，提取溶劑與原料按重量比為8 10 1，回流提取時(shí)間為2小時(shí)/次；b、二次提取將上述提取后的藥渣，用甲醇提取2 3次，提取液經(jīng)減壓回收甲醇后得具有強(qiáng)心苷活性組分的牛角瓜葉提取物B，甲醇與藥渣按重量比為8 10 1，提取時(shí)間為2小時(shí)/次。所述低極性有機(jī)溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷或正己烷。一種牛角瓜葉提取物制備抗腫瘤藥物的應(yīng)用，其特點(diǎn)是將具有強(qiáng)心苷活性組分的 牛角瓜葉提取物按常規(guī)的制劑工藝添加適量的藥用輔料應(yīng)用在抗腫瘤藥物中，制成片劑、 膠囊、顆粒劑、滴丸劑、口服液或注射劑對(duì)腫瘤具有一定的抑制。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有抗腫瘤的活性物質(zhì)提取方便，操作簡(jiǎn)單，成本低，對(duì)于 抗腫瘤的治療作用顯著，為腫瘤治療提供了一種新的藥物。


圖1為提取物A對(duì)K562和293細(xì)胞生長(zhǎng)影響曲線(xiàn)2為提取物A對(duì)K562和293細(xì)胞生長(zhǎng)影響曲線(xiàn)3為提取物B對(duì)K562和293細(xì)胞生長(zhǎng)影響曲線(xiàn)4為提取物B對(duì)KB和PC-3細(xì)胞生長(zhǎng)影響曲線(xiàn)圖
具體實(shí)施例方式下面以具體制備和應(yīng)用的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1a、一次提取取牛角瓜葉干燥品5. OKg為原料，40. OKg的正己烷為提取溶劑，牛角瓜葉經(jīng)粉碎 后置于提取罐，用提取溶劑回流提取3次，2小時(shí)/次，提取液經(jīng)減壓回收正己烷后，將提取 物分散在水中成懸濁液，然后經(jīng)二氯甲烷有機(jī)溶劑萃取，剩下的水液經(jīng)濃縮后得具有強(qiáng)心 苷活性組分的牛角瓜葉提取物A。b、二次提取將上述提取后的藥渣，用30. OKg的甲醇提取2次，2小時(shí)/次，提取液經(jīng)減壓回收 甲醇后得具有強(qiáng)心苷活性組分的牛角瓜葉提取物B。c、制劑將上述具有強(qiáng)心苷活性組分的牛角瓜葉提取物A或B加入適量淀粉和微晶纖維素 混勻，然后制成1000片后干燥即可。實(shí)施例2a、一次提取取牛角瓜葉干燥品2. 5Kg為原料，20. OKg的甲醇為提取溶劑，牛角瓜葉經(jīng)粉碎后 置于提取罐，用提取溶劑回流提取2次，2小時(shí)/次，提取液經(jīng)減壓回收甲醇后，將提取物分 散在水中成懸濁液，然后經(jīng)正己烷萃取，剩下的水液經(jīng)濃縮后得具有強(qiáng)心苷活性組分的牛 角瓜葉提取物A。b、制劑將上述具有強(qiáng)心苷活性組分的牛角瓜葉提取物A加入適量乳糖和羧甲基淀粉鈉 混勻，用聚維酮K30制成1000粒，干燥、整粒后裝入膠囊即可。采用MTT法測(cè)試了本發(fā)明的牛角瓜葉提取物A和提取物B進(jìn)行慢性骨髓性白血病細(xì)胞K562、人口腔表皮癌細(xì)胞KB、前列腺癌細(xì)胞PC-3及人腎上皮細(xì)胞癌293細(xì)胞株的體外 抑瘤活性篩選試驗(yàn)，活性測(cè)試方法如下(1)將牛角瓜葉提取物A 95mg溶于0.2ml DMSO (475mg/ml)中，牛角瓜葉提取物 B144mg溶于0.2ml DMSO (720mg/ml)中，依次配成8個(gè)5倍稀釋的濃度，為書(shū)寫(xiě)方便，最高濃 度定為1，其它7個(gè)深度按照濃度的減低依次定為2、3、4、5、6、7、8。(2)PC_3細(xì)胞需要用F12DMEM加10 % FBS培養(yǎng)，各細(xì)胞用臺(tái)盼藍(lán)排染法計(jì)數(shù)，以 5000/孔或10000/孔的細(xì)胞密度接種于96孔板中，每孔加細(xì)胞懸液99ul，接種于96孔板 &B2-B11、C2-C11、D2-D11、E2-E11、F2-F11、G2-G11，A2-A11 只加培養(yǎng)液不加細(xì)胞，作為調(diào) 零孔；其余孔加入等體積PBS，以避免培養(yǎng)基蒸發(fā)致結(jié)果誤差增大。(3)細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)后加藥，每孔加Iul藥液，每個(gè)濃度6個(gè)復(fù)孔。(4)細(xì)胞在37°C，100%相對(duì)濕度，5% CO2的培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，然后每孔 加入IOul MTT (PBS配制)，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。(5)離心，吸去上清。每孔加入150ul DMSO,輕輕震蕩，15分鐘后在570nm波長(zhǎng)處 測(cè)OD值，按下列公式計(jì)算生長(zhǎng)抑制率生長(zhǎng)抑制率(％ )=(用藥組平均OD值/陰性對(duì)照組平均OD值)X %(6)以樣品濃度為橫坐標(biāo)，以抑制率為縱坐標(biāo)，作圖求出抑制率為50%時(shí)樣品的 濃度IC5tl，樣品活性結(jié)果即以半數(shù)抑制濃度(IC50)表示。牛角瓜葉提取物A和提取物B對(duì)K562、KB、PC-3,293腫瘤細(xì)胞株的毒性作用見(jiàn)下 表1，表1
細(xì)胞系 來(lái)源IC50 (ug/ml)
A B
~HB人上皮性口腔癌 3. 330. 401
293人腎上皮細(xì)胞系 0. 3153.45
PC-3 人前列腺癌細(xì)胞 2. 047. 28 K-562 人白血病0. 0880.044以 IC50 < 20ug/ml 為有效參閱附圖1 附圖4，牛角瓜葉提取物A和提取物B對(duì)不同腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)的影 響，本發(fā)明的提取物A和提取物B經(jīng)體外抗腫瘤活性篩選，統(tǒng)計(jì)處理結(jié)果顯示具有較好的抗 腫瘤活性。以上只是對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，并非用以限制本專(zhuān)利，凡為本發(fā)明等效實(shí)施， 均應(yīng)包含于本專(zhuān)利的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
一種牛角瓜葉提取物的制備，其特征在于以牛角瓜葉為原料，經(jīng)提取、濃縮得具有強(qiáng)心苷活性組分的牛角瓜葉提取物，具體制備包括下述步驟a、一次提取以甲醇或低極性有機(jī)溶劑為提取溶劑、干燥的牛角瓜葉為原料，經(jīng)粉碎后置于提取罐，用提取溶劑回流提取2～3次，提取液經(jīng)減壓回收溶劑后，將提取物分散在水中成懸濁液，然后經(jīng)低極性有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，剩下的水液經(jīng)濃縮后得具有強(qiáng)心苷活性組分的牛角瓜葉提取物A，提取溶劑與原料按重量比為8～10∶1，回流提取時(shí)間為2小時(shí)/次；b、二次提取將上述提取后的藥渣，用甲醇提取2～3次，提取液經(jīng)減壓回收甲醇后得具有強(qiáng)心苷活性組分的牛角瓜葉提取物B，甲醇與藥渣按重量比為8～10∶1，提取時(shí)間為2小時(shí)/次。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述牛角瓜葉提取物的制備，其特征在于所述低極性有機(jī)溶劑為二 氯甲烷、氯仿或正己烷。
3.一種牛角瓜葉提取物制備抗腫瘤藥物的應(yīng)用，其特征在于將具有強(qiáng)心苷活性組分的 牛角瓜葉提取物按常規(guī)的制劑工藝添加適量的藥用輔料應(yīng)用在抗腫瘤藥物中，制成片劑、 膠囊、顆粒劑、滴丸劑、口服液或注射劑對(duì)腫瘤具有一定的抑制。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種牛角瓜葉提取物的制備及抗腫瘤藥物的應(yīng)用，其特點(diǎn)是以牛角瓜葉為原料，經(jīng)提取、濃縮得具有強(qiáng)心苷活性組分的牛角瓜葉提取物，將提取物按常規(guī)的制劑工藝，制成片劑、膠囊、顆粒劑、滴丸劑、口服液或注射劑在抗腫瘤藥物的應(yīng)用。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有抗腫瘤的活性物質(zhì)提取方便，操作簡(jiǎn)單，成本低，對(duì)于抗腫瘤的治療作用顯著，為腫瘤治療提供了一種新的藥物。
文檔編號(hào)A61K36/27GK101829173SQ20101019050
公開(kāi)日2010年9月15日 申請(qǐng)日期2010年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月1日
發(fā)明者王玉芹, 肖繁花, 黃惠民 申請(qǐng)人:黃惠民;王玉芹;肖繁花