專利名稱：一種3，4-二氫-4-芳基香豆素類化合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化工領(lǐng)域，特別涉及一種3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物及其制備 方法和用途。
背景技術(shù)：
芳基香豆素(arylcoumarin，芳基_2Η_1_苯并吡喃_2_酮)主要包括3_芳基 香豆素和4-芳基香豆素兩大類，是一些天然產(chǎn)物的基本結(jié)構(gòu)。由于它與眾多活性天然產(chǎn) 物如異黃酮、二苯乙烯類化合物等具有相似的骨架結(jié)構(gòu)，因而受到研究人員的關(guān)注。研究 表明，芳基香豆素類化合物具有多種有益的生理活性，如抗白血病(LeuLRes. 2008,32 1914 ； J. Med. Chem, 2003,46 5437 ；Exp.Hema,2008,36 1625),抗真菌(Life. Sci. 2002， 711449 ；Microbiology,2005,151 1691),抗凝血(Bioorg. Med. Chem. Lett,2006,16 257)，抗氧化(Bioorg. Med. Chem, 2007，15 1516)，抗病毒(Nat. Prod. Res. 2002，17 (2) 91)、抗炎(Nat. Prod. Res, 2007, 21 (12) 1104 ；Immu. Inve. 2007,36 203)及抗糖尿病活性 (Phytochemistry，2007，68 :2087)等。2003 年，日本東京大學(xué)的 Minpei Kuroda 等人發(fā) 現(xiàn)了多個(gè)具有PPAR- Y配體結(jié)合活性的3-芳基香豆素，這些3-芳基香豆素可以通過激活 PPAR- γ受體從而降低糖尿病小鼠的血糖水平(Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003,13 :4267)。 同年，Christian Bailly等人證實(shí)4_芳基香豆素類化合物具有明顯的細(xì)胞毒性，能抑制微 管蛋白的組裝，從而使腫瘤細(xì)胞死亡(J. Med. Chem. 2003. 46 5437)。然而，3，4_ 二氫-4-芳基香豆素類化合物作為一種氫化的4-芳基香豆素衍生 物，關(guān)于其生物活性的研究報(bào)道較少。2005年，Ajit Kumar發(fā)現(xiàn)4-芳基香豆素可以作為 蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶底物時(shí)提到3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物作用與4-芳基香豆素相 似(Bioorg. Med. Chem. 2005，13 4300)。同年 Frederik Roelens 等人發(fā)現(xiàn) 4-(4，-羥基苯 基)-5，7- 二羥基-8-烷基-3，4- 二氫香豆素具有雌激素樣活性(Eur. J. Med. Chem. 2005， 40:1042)。3，4-二氫-4-芳基香豆素類化合物在結(jié)構(gòu)上與Combretastatin A-4、鬼臼毒 素具有一定的相似性，因而其生物活性研究和進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)修飾工作非常值得關(guān)注?，F(xiàn)有 的3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物的制備方法多數(shù)都存在反應(yīng)條件劇烈，產(chǎn)率不高等缺 點(diǎn)，而此類分子在劇烈條件下并不穩(wěn)定，這使得現(xiàn)有的多數(shù)方法在使用上受到限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)，提供一種3，4- 二氫-4-芳基香豆 素類化合物。本發(fā)明的另一目的在于提供一種上述3，4_ 二氫-4-芳基香豆素類化合物的制備 方法。本發(fā)明的再一目的在于提供一種上述3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物的用途。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)
一種3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物，其結(jié)構(gòu)式為式1 式1 中，禮、R2、R3> R4>R5>R7 為 H、OCH3 或 0H，禮、R2、R3、R4> R5> R7 可以相同也可以不 同；r6 為 och3。上述3，4_ 二氫-4-芳基香豆素類化合物的制備方法，包括下述步驟(1)在吡啶和六氫吡啶存在條件下，丙二酸和取代苯甲醛發(fā)生Perkin縮合和脫羧 反應(yīng)，再經(jīng)分離純化，得到取代苯基丙烯酸類化合物；(2)在三氯氧磷(POCl3)和三氟化硼乙醚(BF3-Et2O)存在條件下，所述取代苯基丙 烯酸類化合物和酚類化合物發(fā)生環(huán)合反應(yīng)，再經(jīng)分離純化，得到3，4- 二氫-4-芳基香豆素 類化合物。步驟1中，丙二酸與取代苯甲醛的摩爾比為(1 1.5) 1，優(yōu)選為1.2 1 ；吡啶 與六氫吡啶的摩爾比為20 (1 6)；吡啶與丙二酸的摩爾比為(1 5) 1;反應(yīng)溫度為 70 90°C，反應(yīng)時(shí)間為4 12小時(shí)。步驟1中，所述分離純化是將步驟1的反應(yīng)產(chǎn)物冷卻IOmin 30min，加入1 5M 鹽酸溶液，放置時(shí)間不少于2小時(shí)，抽濾，用水洗滌沉淀，得到取代苯基丙烯酸類化合物粗 品；再用無水乙醇重結(jié)晶，得到純化后的取代苯基丙烯酸類化合物。步驟2中，取代苯基丙烯酸類化合物酚類化合物三氯氧磷三氟化硼乙醚的 摩爾比為1 (1 1.2) (2 3) (3 6)；所述環(huán)合反應(yīng)的溫度為0 40°C，反應(yīng)時(shí) 間為4 18小時(shí)。步驟2中，所述分離純化是將步驟2的反應(yīng)液倒入冰水中，用乙醚萃取，旋干除去 乙醚，得3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物粗品；再用丙酮_水或乙酸乙酯-石油醚重結(jié) 晶粗品，得到純化后的3，4_二氫-4-芳基香豆素類化合物；也可以用硅膠柱層析分離粗品， 洗脫液為石油醚乙酸乙酯=1 1，得到純化后的3，4_ 二氫-4-芳基香豆素類化合物。所述3，4_ 二氫-4-芳基香豆素類化合物的制備方法，可采用下述反應(yīng)式表示 一種藥物組合物，活性組分是上述3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物，還含有一 種或多種惰性無毒可藥用的載體。上述3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物的用途，是在制備抗腫瘤、抗血管異常增 生、抗氧化、抗菌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)和效果(1)本發(fā)明提供的3，4-二氫-4-芳基香豆素類化合物，具有與順式二苯乙烯類化 合物、鬼白毒素等類似的化學(xué)結(jié)構(gòu)及相關(guān)生物活性。(2)本發(fā)明的制備方法，操作簡(jiǎn)單，收率高。(3)本發(fā)明提供的3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物可用于制備抗腫瘤、抗血管 異常增生、抗菌、抗氧化藥物。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例13，4_ 二甲氧基苯基丙烯酸的制備在IOOml 的雙口 反應(yīng)瓶中加入 2. 08g(0. 02mol)丙二酸，2. 8g(0. 017mol) 3，4_ 二甲 氧基苯甲醛，3ml(0. 037mol)吡啶，0. 3ml (0. 003mol)六氫吡啶，加熱至95°C后回流3h，反應(yīng) 完畢，冷卻lOmin，加入50ml3mol/L鹽酸溶液，放置2h，抽濾，用200ml水洗滌沉淀，得到粗 品；粗品用無水乙醇重結(jié)晶，得純品3，4_ 二甲氧基苯基丙烯酸3. lg，收率88. 3%。實(shí)施例23-羥基-4-甲氧基苯基丙烯酸的制備在IOOml 的雙口 反應(yīng)瓶中加入 12. 98g(0. 125mol)丙二酸，12. 65g (0. 083mol) 3_羥 基-4-甲氧基苯甲醛，15ml (0. 168mol)吡啶，1. 5ml (0. 015mol)六氫吡啶，加熱至95°C后回 流3h，反應(yīng)完畢，冷卻lOmin，加入50ml3mol/L鹽酸溶液，放置2h，抽濾，用IOOOml水洗滌沉 淀，得到粗品；粗品用無水乙醇重結(jié)晶，得純品3-羥基-4-甲氧基苯基丙烯酸14. 63g，收率 90. 6%。實(shí)施例34-(3，，4，- 二甲氧基苯基)-7-羥基-3，4-二氫香豆素的制備將IOOml的雙口反應(yīng)瓶置于冰浴中，然后加入2. 08g(0. Olmol) 3，4_ 二甲氧基苯基 丙烯酸，1. lg(O.Olmol)間苯二酚，3g(0.02mol)三氯氧磷，5. 6g(0. 04mol)三氟化硼乙醚， 攪拌均勻，IOmin后撤去冰浴，常溫?cái)嚢?15-30°C )，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程(展開劑石油醚 乙酸乙酯=2 l)，12h后停止反應(yīng)，倒入冰水中，用乙醚萃取，旋干除去乙醚，得粗品；用丙酮和水重結(jié)晶得純品4-(3’，4’_ 二甲氧基苯基)-7_羥基-3，4-二氫香豆素1.82g，產(chǎn)率 60. 7%。IR :3429(0H)，1761 (CO)，1626，1597，1516，1462，1419，1335，1271，1244，1159， 1103，1024，991，847and 812cm_11HNMR(400MHz, CDCl3) δ 2. 98 (2Η, m, C-3H)，3· 79and 3. 84(6H,2s,3H and 3H each, 2 X OCH3) ,4. 20 (1H, t, J = 6.0Hz，C-4H) ,6. 56 (1H, dd, 2. 4and 8. 4Hz, C-6H) 6. 63-6. 67 (3H, m, C_6，H, C_5，H, C-5H)，6. 80and 6. 82 (2H, 2 X d，J = 2. 4Hz，C-8H and C-2， H).Ms :m/Z 300 (M+)，282 (M+-H2O)，267 (M+-CH3-H2O)，257，243，227，190，163，129.實(shí)施例44_(3，，4，，5，-三甲氧基苯基)-6_羥基-3，4_ 二氫香豆素的制備 將IOOml的雙口反應(yīng)瓶置于冰浴中，然后加入4. 76g (0. 02mol) 3,4,5-三甲氧基苯 基丙烯酸，2. 2g(0. 02mol)間苯二酚，6g(0. 04mol)三氯氧磷，11. 2g(0. 08mol)三氟化硼乙 醚，攪拌均勻，IOmin后撤去冰浴，常溫?cái)嚢?15-30°C )，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程(展開劑石油 醚乙酸乙酯=2 l)，18h后停止反應(yīng)，倒入冰水中，用乙醚萃取，旋干除去乙醚，得粗品； 用丙酮和水重結(jié)晶得純品4-(3，，4，，5，-三甲氧基苯基)-6-羥基-3，4-二氫香豆素4.7化， 產(chǎn)率71. 4%。IR:3421(OH)，1757(CO)，1504，1454，1232，1195and 1122cm-11HNMR(400MHz, CDCl3) δ :2· 98 (2Η，m，C-3H)，3· 77and 3. 80(9H,2s,6H and 3H each, 3 X OCH3) ,4. 17 (1H, t, J = 6. 4Hz, C-4H)，6. 33 (2H, s, C_2，H and C_6，H) ,6. 55 (1H, dd, J = 2. 4Hz and 8. 6Hz, C-6H)，6. 64 (1H, d, J = 2. 4Hz, C-8H)，6. 85 (1H, d, J = 8. 6Hz, C-5H)Ms :m/Z 330 (M+)，312 (M+-H2O)，297 (M+-H2O-CH3)，257，213，181，128.實(shí)施例54-(3’ -羥基-4’ -甲氧基苯基)-7-羥基-3，4-二氫香豆素的制備將IOOml的雙口反應(yīng)瓶置于冰浴中，然后加入1. 94g(0. Olmol) 3_羥基_4_甲氧基 苯基丙烯酸，1. Ig (0. Olmo)間苯二酚，3g(0.02mol)三氯氧磷，5. 6g (0. 04mol)三氟化硼乙 醚，攪拌均勻，IOmin后撤去冰浴，常溫?cái)嚢?15-30°C )，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程(展開劑石油 醚乙酸乙酯=2 l)，12h后停止反應(yīng)，倒入冰水中，用乙醚萃取，旋干除去乙醚，得粗品； 粗品用硅膠柱層析分離，洗脫液石油醚乙酸乙酯=1 1，得純品4-(3’_羥基-4’-甲氧 基苯基)-7-羥基-3，4- 二氫香豆素1. 58g，產(chǎn)率55. 2 %。IR :3513 (OH)，3334，1733(CO)，1627，1597，1513，1450，1300，1273，1223，1151， 815CHT11HNMR(400MHz, CDCl3) δ :2· 98 (2Η, m, C—3H)，3· 86 (3Η, s, OCH3), 4. 16 (1Η, t, J = 6. 4Hz, C-4H)，6. 54and 6. 59 (2Η, 2 Xdd, J = 2. 4Hz and 8. 4HzC_6，H and C-6H)，6. 6land 6. 69 (2Η, 2 X d，J = 2. 4Hz，C-2，H and C-8H)，6. 77-6. 83 (2H, 2 X d，J = 8. 4Hz，C_5，H and C-5H)Ms :m/Z 286 (M+)，268 (M+-H2O)，253 (M+-CH3-H2O)，243，227，213，176. 115.實(shí)施例6
6
4-(3’ -羥基-4’ -甲氧基苯基)_7，8-二羥基-3，4-二氫香豆素的制備將IOOml的雙口反應(yīng)瓶置于冰浴中，然后加入1. 94g(0. Olmol) 3_羥基_4_甲氧基 苯基丙烯酸，1. 26g(0. Olmol)連苯三酚，4g(0. 026mol)三氯氧磷，5. 6g(0. 04mol)三氟化硼 乙醚，攪拌均勻，IOmin后撤去冰浴，常溫?cái)嚢?15-30°C)，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程(展開劑石油 醚乙酸乙酯=2 l)，12h后停止反應(yīng)，倒入冰水中，陳化4h后直接抽濾，得粗品；再用石 油醚與乙酸乙酯重結(jié)晶得純品4-(3’ -羥基-4’ -甲氧基苯基)-7，8- 二羥基-3，4- 二氫香 豆素2. lg，產(chǎn)率69. 5%0IR :3498(OH),3417，1753(CO)，1516，1468，1271，1198，1174 and 1126cm-11HNMR(400MHz, CDCl3) δ :2· 99 (2Η, m, C—3H)，3· 86 (3Η, s, OCH3), 4. 19 (1Η, t, J = 6. 4Ηζ，C-4H)，6. 43and 6. 65 (2Η, 2 X d，J = 8. 4Hz，C_6，H andC-5，H)，6. 59and 6. 78 (2H, 2Xd, J = 8Hz, C-6H and C-5H)，6. 69 (1H, s, C-2H)，Ms :m/Z 302 (M+)，284 (M+-H2O)，269 (M+-CH3_H20)，259，243，229，194. 179.實(shí)施例74-(3’，4’ - 二甲氧基苯基)-7，8-二羥基-3，4-二氫香豆素的制備將100ml的雙口反應(yīng)瓶置于冰浴中，然后加入2. 08g (0. Olmol) 3，4_ 二甲氧基苯 基丙烯酸，1.26g(0. Olmol)連苯三酚，4g(0. 026mol)三氯氧磷，5. 6g(0. 04mol)三氟化硼乙 醚，攪拌均勻，IOmin后撤去冰浴，常溫?cái)嚢?15-30°C )，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程(展開劑石油 醚乙酸乙酯=2 l)，12h后停止反應(yīng)，倒入冰水中，陳化4h后直接抽濾，得粗品；再用石 油醚與乙酸乙酯重結(jié)晶得純品4-(3’，4’ - 二甲氧基苯基)-7，8_ 二羥基-3，4-二氫香豆素 2. 3g，產(chǎn)率 72. 8%。IR 3423(OH)，1755(CO)，1516，1468，1275，1238，1192，1169and 1020cm-11HNMR (400MHz, CDCl3) δ 3. 03 (2Η, m, C—3H)，3· 81and 3. 85 (6H, s，3H and 3H each, 2 X OCH3) ,4. 24 (1H, dd, J = 7. 6Hz and 6. 4Hz，C-4H)，6. 41，6. 66and 6. 80(4H，4Xd， J = 8. 4Hz, C-6，H, C-5，H, C-6H and C-5H)，6. 64 (1H, s, C-2H)Ms :m/Z 316 (M+)，298 (M+-H2O)，283 (M+-CH3_H20)，273，259，243，190.實(shí)施例84-(3，，4，，5，-三甲氧基苯基)-7，8_ 二羥基-3，4_ 二氫香豆素的制備將100ml的雙口反應(yīng)瓶置于冰浴中，然后加入1. 19g (0. 005mol) 3，4，5_三 甲氧基苯基甲氧基丙烯酸，0.63g(0.005mol)連苯三酚，2. 3g(0.015mol)三氯氧磷， 2. 8g(0. 02mol)三氟化硼乙醚，攪拌均勻，IOmin后撤去冰浴，常溫?cái)嚢?，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程 (展開劑石油醚乙酸乙酯=2 l)，12h后停止反應(yīng)，倒入冰水中，陳化4h后直接抽濾， 得粗品；再用石油醚與乙酸乙酯重結(jié)晶得純品4-(3’，4’，5’ -三甲氧基苯基)-7，8_ 二羥 基-3，4- 二氫香豆素0. 91g，產(chǎn)率52. 6%。IR3471(OH)，1751(CO)，1597，1512，1466，1311，1246，1122and 1007cm-11HNMR(400MHz, CDCl3) δ 3. 03 (2Η, m, C—3H)，3· 78 (6Η，s, 2 X OCH3) ,3. 82 (3H, s, OCH3)，4. 22 (2H，dd, J = 6Hz and 7. 6Hz)，6. 33 (2H，s，2，H and6，H)，6. 45and 6. 67 (2H, 2Xd，J = 8. 8Hz，C-5H and C-6H).Ms :m/Z :346 (M+)，328 (M+-H2O)，313 (M+-CH3-H2O)，273，257，243，229，181，115.實(shí)施例9
4-(4’ -甲氧基苯基)_7，8-二羥基-3，4-二氫香豆素的制備將IOOml的雙口反應(yīng)瓶置于冰浴中，然后加入0.89g(0.005mol)4-甲氧基苯基丙 烯酸，0. 63g(0. 05mol)連苯三酚，2. 3g(0. 015mol)三氯氧磷，2. 8g (0. 02mol)三氟化硼乙 醚，攪拌均勻，IOmin后撤去冰浴，常溫?cái)嚢?，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程(展開劑石油醚乙酸乙酯 =2 l)，12h后停止反應(yīng)，倒入冰水中，陳化4h后直接抽濾，得粗品；再用石油醚與乙酸乙 酯重結(jié)晶得純品4-(4’-甲氧基苯基)-7，8- 二羥基-3，4- 二氫香豆素0. 89g，產(chǎn)率62. 2%。IR 3413(OH)，1751(CO)，1612，1514，1311，1284，1247，1180，1144andl007cm_11HNMR(400MHz, CDCl3) δ 3. 01 (2Η, m, C—3H)，3· 78 (3H，s, OCH3) ,4. 24 (1H, t, J = 6. 8Hz，C-4H)，6. 39(2H，2Xd，J = 8. 4Hz，C-5H and C-6H)，6. 85and 7. 04 (4H，2 X d，J = 8. 8Hz, C-2’ H, C-6’ H, C_3’ H and C_5’ H).Ms :m/Z 286 (M+)，268 (M+-H2O)，243，229，200，115.實(shí)施例10本發(fā)明合成的3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物的抗腫瘤活性的測(cè)定樣品用DMSO溶解后，用培養(yǎng)液(含10%小牛血清和雙抗的RPMI-1640培養(yǎng) 液)按一定濃度稀釋，實(shí)驗(yàn)DMSO的濃度控制在1.5% (V/V)之內(nèi)。取96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每 孔中加50 μ 1含約5000個(gè)腫瘤細(xì)胞(胃癌細(xì)胞BGC823)的培養(yǎng)液，在37°C 5% CO2的飽和 水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2小時(shí)讓細(xì)胞帖壁。每孔加50 μ 1 —定濃度的樣品，每個(gè)樣品 3個(gè)重復(fù)孔。對(duì)照孔6個(gè)3個(gè)陽性對(duì)照孔，每孔加50 μ 1氯氨鉬(10 μ g/ml)，3個(gè)陰性對(duì) 照孔每孔加50 μ 1培養(yǎng)液。在37°C 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。每 孔加10 μ 1 MTT(5mg/ml)染液。在37°C 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h后 加入IOOyl 10% (W/V)SDS，過夜培養(yǎng)，測(cè)其在570nm下的吸光度值。根據(jù)下式計(jì)算出樣品 對(duì)細(xì)胞增殖的抑制率(IR) =IR= l-0Dr/0Dc (ODr :實(shí)驗(yàn)組；ODc 陰性對(duì)照組)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線 計(jì)算樣品的IC5tl，測(cè)定結(jié)果用又土 SD表示，如表1所示表1 抗腫瘤活性的測(cè)定結(jié)果 從表1中可以看出，3，4_ 二氫-4-芳基香豆素類化合物對(duì)胃癌細(xì)胞具有不同程 度的殺傷活性。其中4-(4’ -甲氧基苯基)-7，8_ 二羥基-3，4-二氫香豆素，4-(3’ -羥 基-4’ -甲氧基苯基)-7，8-二羥基_3，4-二氫香豆素等化合物抗腫瘤活性較強(qiáng)。實(shí)施例11本發(fā)明合成的3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物的抗氧化活性的測(cè)定稱量DPPH(WaKo公司生產(chǎn))5mg，定容到50ml無水乙醇中，實(shí)驗(yàn)時(shí)稀釋到10 μ g/ mL，吸取100 μ 1加入96孔板中，并與等體積用無水乙醇按一定濃度配制的樣品混合，在酶 標(biāo)儀中每隔Imin測(cè)定一次517nm波長(zhǎng)下的吸光度值，陰性對(duì)照加入100 μ 1無水乙醇，每組 實(shí)驗(yàn)做三個(gè)重復(fù)，抗壞血酸鈉(Vc)設(shè)置為陽性對(duì)照組。樣品在某一時(shí)刻對(duì)DPPH自由基的 清除率⑴按下式計(jì)算Y(% ) = [(ODc-ODs)/ODc] X 100 (ODc 陰性對(duì)照在517nm處的吸 光度值；ODs 樣品在517nm處的吸光度值)，根據(jù)樣品在30min處的清除率，計(jì)算樣品的半 數(shù)抑制劑量EC5tl，測(cè)定結(jié)果用用又土SD表示，如表2所示表2 清除DPPH自由基的活性 表2數(shù)據(jù)顯示，3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物具有不同程度的清除自由基能 力。其中以4-(3，，4，，5，-三甲氧基苯基)-7，8_ 二羥基-3，4-二氫香豆素的活性為最強(qiáng)。實(shí)施例12本發(fā)明合成的3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物的抗菌活性的測(cè)定將每毫升含IO6細(xì)菌或孢子的菌液均勻涂布于固體細(xì)菌培養(yǎng)基表面，將經(jīng)過滅菌 的0. 5cm直徑的濾紙片置于培養(yǎng)基表面，滴加2. 5 μ 1 100 μ g/ μ 1的待測(cè)樣品溶液，于37°C 培養(yǎng)18-20h，觀察抑菌圈形成與否，有抑菌圈形成的表明有抗菌活性。供試菌包括大腸桿 菌 Escherichia coli (ATCC25922)，金黃色葡萄球菌 Staphylococcus aureus (ATCC2592)， 枯草芽孢桿菌Bacillus dysenteriae,以及白色念珠菌Candida albicans (ATCC43300)。測(cè) 定結(jié)果如表3所示表3 抑菌活性的測(cè)定結(jié)果 注“_”表示沒有抑菌圈；“ + ”表示抑菌圈大小0 0. 2cm之內(nèi)；“++”表示抑菌圈 大小在0. 2 0. 5cm范圍內(nèi)；“+++”表示抑菌圈大于0. 5cm。表3數(shù)據(jù)說明，3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物具有不同程度的抗菌活性。選 取表3中有抑菌圈的樣品測(cè)定其最小抑菌濃度和最小殺菌濃度。供試菌在LB培養(yǎng)液中37°C過夜培養(yǎng)后，用無菌LB液稀釋成105CUF/ml菌體濃度， 取190 μ 1種在96孔板中，加入10 μ 1用DMSO 二倍稀釋的樣品(濃度在48 25000 μ g/ ml范圍)。37°C培養(yǎng)24h，對(duì)微生物生長(zhǎng)產(chǎn)生明顯抑制作用的最低樣品濃度記為最小抑菌濃 度MIC (Minimumlnhibitory Concentration)，吸取10 μ 1樣品處理后的菌液，滴加在LB平 板上，觀察是否有菌落形成，37°C培養(yǎng)48h后沒有菌落形成或者只有一個(gè)菌落形成的最低 樣品濃度記為最低殺菌濃度MBC(Minimum BactericidalConcentration)。陰性對(duì)照為5% (v/v)DMS0,陽性對(duì)照為加入10 μ 1用DMSO配制的氨芐青霉素和氯霉素(Amresco)，每次試 驗(yàn)在96孔板的四個(gè)角各設(shè)計(jì)一個(gè)無菌驗(yàn)證孔(200 μ 1的LB培養(yǎng)基)。MICs結(jié)果用有抑菌 效果孔和相鄰的無效孔對(duì)應(yīng)的樣品濃度的均值顯示，MICs和MBCs結(jié)果見表4。表4.樣品的抑菌試驗(yàn) 從表4可以看出，3，4_ 二氫-4-芳基香豆素類化合物具有不同程度的抗菌活性。 其中4-(4’_甲氧基苯基)-6-羥基-3，4-二氫香豆素等化合物對(duì)枯草芽孢桿菌具有很強(qiáng)抑 制作用，尤為值得關(guān)注。實(shí)施例13 藥物組合物制備每片含有IOmg活性組分的100片片劑的配方(1) 4-(3，，4，- 二甲氧基苯基)-7，8-二羥基-3，4-二氫香豆素 l.Og(2)羥丙基纖維素0.2g(3)小麥淀粉l.Og(4)乳糖10. Og(5)硬脂酸鎂0.3g(6)滑石粉0.3g實(shí)施例14 劑型為散劑將4- (3’，4’- 二甲氧基苯基)-7，8- 二羥基_3，4_ 二氫香豆素100克 和乳糖100克經(jīng)研磨、100目過篩、混合均勻后分裝成1000包(每包200毫克，含活性物質(zhì) 100毫克)。
權(quán)利要求
一種3，4 二氫 4 芳基香豆素類化合物，其結(jié)構(gòu)式為其中，R1、R2、R3、R4、R5、R7為H、OCH3或OH，R1、R2、R3、R4、R5、R7可以相同也可以不同；R6為OCH3。FSA00000148921600011.tif
2.—種權(quán)利要求1所述的3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物的制備方法，其特征在于 包括下述步驟 (1)在吡啶和六氫吡啶存在條件下，丙二酸和取代苯甲醛發(fā)生Perkin縮合和脫羧反 應(yīng)，再經(jīng)分離純化，得到取代苯基丙烯酸類化合物；(2)在三氯氧磷和三氟化硼乙醚存在條件下，所述取代苯基丙烯酸類化合物和酚類化 合物發(fā)生環(huán)合反應(yīng)，再經(jīng)分離純化，得到3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的3，4-二氫-4-芳基香豆素類化合物的制備方法，其特征在 于步驟1中，丙二酸與取代苯甲醛的摩爾比為(1 1.5) 1 ；吡啶與六氫吡啶的摩爾比 為20 (1 6)；吡啶與丙二酸的摩爾比為(1 5) 1 ；反應(yīng)溫度為70 90°C，反應(yīng)時(shí) 間為4 12小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的3，4-二氫-4-芳基香豆素類化合物的制備方法，其特征在 于步驟1中，所述分離純化是將步驟1的反應(yīng)產(chǎn)物冷卻IOmin 30min，加入1 5M鹽酸 溶液，放置時(shí)間不少于2小時(shí)，抽濾，用水洗滌沉淀，得到取代苯基丙烯酸類化合物粗品；再 用無水乙醇重結(jié)晶，得到純化后的取代苯基丙烯酸類化合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的3，4-二氫-4-芳基香豆素類化合物的制備方法，其特征在 于步驟2中，取代苯基丙烯酸類化合物酚類化合物三氯氧磷三氟化硼乙醚的摩爾 比為1 (1 1.2) (2 3) (3 6)；所述環(huán)合反應(yīng)的溫度為0 40°C，反應(yīng)時(shí)間為 4 18小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的3，4-二氫-4-芳基香豆素類化合物的制備方法，其特征在 于步驟2中，所述分離純化是將步驟2的反應(yīng)液倒入冰水中，用乙醚萃取，旋干除去乙醚， 得3，4- 二氫-4-芳基香豆素類化合物粗品；再用丙酮-水或乙酸乙酯-石油醚重結(jié)晶粗 品，得到純化后的3，4_二氫-4-芳基香豆素類化合物；或用硅膠柱層析分離粗品，洗脫液為 石油醚乙酸乙酯=1 1，得到純化后的3，4_ 二氫-4-芳基香豆素類化合物。
7.—種藥物組合物，其特征在于活性組分是權(quán)利要求1所述的3，4-二氫-4-芳基香 豆素類化合物，以及一種或多種惰性無毒可藥用的載體。
8.—種權(quán)利要求1所述的3，4-二氫-4-芳基香豆素類化合物的用途，其特征在于是 在制備抗腫瘤、抗血管異常增生、抗氧化、抗菌藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種3，4-二氫-4-芳基香豆素衍生物及其制備方法和用途。以取代苯甲醛及丙二酸為原料，在吡啶與哌啶存在條件下加熱，發(fā)生Perkin反應(yīng)及脫羧反應(yīng)，得到取代苯基丙烯酸衍生物；然后取代苯基丙烯酸衍生物與酚類化合物在三氟化硼乙醚與三氯氧磷的催化下進(jìn)行反應(yīng)，得到3，4-二氫-4-芳基香豆素類化合物。此類化合物可用于制備抗腫瘤、抗血管異常增生、抗菌、抗氧化藥物。
文檔編號(hào)A61P31/00GK101906090SQ201010195208
公開日2010年12月8日 申請(qǐng)日期2010年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月4日
發(fā)明者丁為現(xiàn), 孫捷, 張克云, 鄒永, 高艷明, 高藍(lán) 申請(qǐng)人:中科院廣州化學(xué)有限公司