專利名稱：一種多肽-順鉑偶合物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗癌藥物的制備領(lǐng)域，具體涉及一種多肽-順鉬偶合物及其制備方法 與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
順鉬，英文名Cisplatin，是1965年由美國科學(xué)家B. Rosenborg等人首次發(fā)現(xiàn)的第 一個具有抗癌活性的金屬配合物。他在1965年意外發(fā)現(xiàn)“惰性的鉬電極”能引起細(xì)菌的菌 絲生長這一事實，從而展開了對順式二氯二鉬的抗癌特性的研究。順鉬是中心以二價鉬同 兩個氯原子和兩個氨分子結(jié)合的重金屬絡(luò)合物，類似于雙功能烷化劑。研究發(fā)現(xiàn)順鉬的主 要作用部位在DNA的嘌呤和嘧啶堿基，可以抑制癌細(xì)胞的DNA復(fù)制過程，并損傷其細(xì)胞膜上 的結(jié)構(gòu)，高濃度的順鉬可抑制RNA及蛋白質(zhì)的合成，具有較強的廣譜抗癌作用，對生殖系統(tǒng) 腫瘤尤其是對卵巢癌及睪丸癌療效顯著；對頭頸部癌，如鼻咽癌、甲狀腺癌或喉癌也有較好 的療效；對膀胱癌、肺癌、惡性淋巴瘤、乳腺癌、腎細(xì)胞癌、前列腺癌、軟組織肉瘤或惡性黑色 素瘤也有一定的療效；對癌癥引起的惡性胸腹水有特效。但是順鉬也會使患者產(chǎn)生很強的不良反應(yīng)，如骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)、腎臟毒性、 神經(jīng)毒性、過敏反應(yīng)、電解質(zhì)紊亂及肝功能損害。而且，由于目前市場上常用的順鉬及其改 良絡(luò)合物作用于人體時，沒有靶向性，導(dǎo)致人體產(chǎn)生強烈的不良反應(yīng)。因此，順鉬的上述缺 陷尤其是其毒副作用使人們迫切需要尋找更加低毒、高效、水溶性好且無交叉耐藥性的新 一代腫瘤靶向性的鉬類金屬抗腫瘤藥物。目前順鉬藥物因其分子量大，容易引起人體的免 疫反應(yīng)，產(chǎn)生過敏癥狀，故制備抗腫瘤藥物的順鉬絡(luò)合物還應(yīng)該具備分子量相對較小這一 特征。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種分子量小、無抗原性且具有靶向 性的多肽-順鉬偶合物。本發(fā)明另一目的在于提供上述多肽_順鉬偶合物的制備方法。本發(fā)明還有一個目的在于提供上述多肽_順鉬偶合物在制備治療癌癥及其并發(fā) 癥的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明上述目的通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)本發(fā)明多肽_順鉬偶合物是由具有式(I)所示通式的多肽和順鉬偶合而成Leu-Leu-Ala-Asp-Thr-Thr-His-His-Arg-X-Y-Z(I)；其中，X 為 Ala、Pro 或 Arg ；Y 為 Trp、Tyr 或 Phe ；Z 為 Cys、Thr 或 Ser。上述多肽-順鉬偶合物中，X優(yōu)選為Arg或Pro ；Y優(yōu)選為Phe或Tyr ；Z優(yōu)選為Cys或 Ser0上述多肽-順鉬偶合物中，X最優(yōu)選為Arg，Y最優(yōu)選為Phe，Z最優(yōu)選為Cys。上述多肽-順鉬偶合物中，所述多肽為乙?；亩嚯幕蛘吲c聚乙二醇共聚的多 肽。本發(fā)明多肽_順 鉬偶合物的制備方法包括如下步驟(1)通過固相多肽合成法合成多肽；(2)將合成好的多肽與二鹵代烷烴進行反應(yīng)，得到相應(yīng)的多肽C-端鹵化物；(3)多肽C-端鹵化物與二(I-Ft氨基)乙基胺進行縮合反應(yīng)，得到氨基修飾多肽 前驅(qū)物，如式(II)所示 (4)步驟(3)中得到的多肽前驅(qū)物進行還原脫保護反應(yīng)，得到多胺修飾肽，如式 (III)所示 (5)將步驟(4)中所得的多胺修飾肽與氯化鉬反應(yīng)，得到多肽-順鉬偶合物。作為一種優(yōu)選方案，上述制備方法中，所述二鹵代烷烴中的鹵元素為Br或I。作為一種優(yōu)選方案，上述制備方法中，所述固相多肽合成法合成多肽包括如下步 驟(1)第一個 Pro 的引入Fmoc-Pro-0H共價連接在 CTC 樹脂上，F(xiàn)moc-Pro-OH/Resin =1. 1，反應(yīng) 4h，得到 Fmoc-Pro-CTC Resin ；(2)其余氨基酸的導(dǎo)入其余氨基酸共價連接在CTC樹脂上，F(xiàn)moc-AA/Resin = 3.0，加入二甲基甲酰胺溶液，偶聯(lián)劑為多肽縮合劑；(3)去除Fmoc 通過加入20體積％哌啶的二甲基甲酰胺溶液去除；(4)樹脂裂解加入1體積％的三氟乙酸溶液去除CTC樹脂，得到多肽。其中，所述CTC樹脂的反應(yīng)容量為0. 9mmol/g。本發(fā)明中，優(yōu)選固相多肽合成法合成多肽的原因是常用的溶液法規(guī)?；铣啥?肽的方法中，雖然產(chǎn)品容易純化，純度也可以控制，但其缺點是反應(yīng)步驟太多，制備周期長； 采用固相多肽合成法，可以在較短時間內(nèi)提供一定數(shù)量的樣品。具體來說，針對本發(fā)明多 肽，使用全自動固相多肽合成儀，可以在一周左右時間制備出約10 15g樣品，純度一般在 85%以上。再經(jīng)制備型液相分離(約1 2周)，純度可達98%，收率約在40 60%。
另外，多肽作用的功能和機制可以千變?nèi)f化，從作為免疫刺激荷爾蒙，協(xié)助蛋白質(zhì) 降解，到擁有抗菌活性。一般來說，多肽已被證明具有較高的活性和高選擇性、較低的毒性， 在器官中較低的積累性，以及較少的藥物相互作用的并發(fā)癥。缺點是其生物利用度差，容易 降解和合成困難。影響多肽藥物穩(wěn)定性的因素主要是，當(dāng)藥物進入體內(nèi)時，各種水解酶導(dǎo)致 藥物降解為小分子肽或氨基酸。近幾年來，多肽類藥物的給藥技術(shù)亦有飛速發(fā)展。傳統(tǒng)蛋 白質(zhì)/多肽類藥物大多為注射劑型，使用頗為不便，目前新技術(shù)包括口服劑/長效緩釋劑、 微囊劑、干粉吸入劑，PEG化制劑(聚乙二醇包埋劑)等等，從而大大提高了蛋白質(zhì)/多肽 類藥物在體內(nèi)的半衰期與生物利用度。除此以外，我們將利用化學(xué)修飾手段來提高多肽在 體內(nèi)的穩(wěn)定性，具體修飾方法可以但不限于下述方法1.氮端的乙酰化將多肽氮端的自由氨基與乙酸酐或酰氯反應(yīng)，使其轉(zhuǎn)化成乙酰 肽，通常能提高多肽藥物在體內(nèi)的半衰期。2.易酶解氨基酸的取代全部由L-氨基酸組成的多肽藥物，通常穩(wěn)定性都 比較 差。如果將某些對酶敏感的L-氨基酸替代為D-氨基酸，特別是改變多肽兩端氨基酸的構(gòu) 型，其穩(wěn)定性可能會明顯改善。除了使用D-氨基酸，其他諸如羥基氨基酸，甲基化氨基酸， 雜環(huán)氨基酸等也可用于L-氨基酸的取代。3.與聚乙二醇聚合一般來說，對于小分子藥物(M < 5000)很容易被腎的代謝排 出去。因此，通過與PEG(MW > 10000)相連接，既可提高腎代謝的穩(wěn)定性，又可增加酶水解 的位阻。而PEG本身具有無毒副作用，水溶性及生物相容性好等優(yōu)點。本發(fā)明多肽-順鉬偶合物可用于制備治療癌癥的藥物，尤其是用于制備治療肺癌 (包括小細(xì)胞肺癌SCLC和非小細(xì)胞肺癌NSCLC)、肺癌性胸腹水、結(jié)腸癌、食管癌或生殖系統(tǒng) 腫瘤的藥物。本發(fā)明多肽-順鉬偶合物是順鉬原有作用的延伸，其抗腫瘤特性是順鉬的功能， 但是所用多肽的作用是發(fā)揮腫瘤靶向性，可以分別以envoplakin、CD63等抗原為靶點，對 腫瘤細(xì)胞有高效殺傷力，可促進腫瘤細(xì)胞的凋亡。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果(1)本發(fā)明多肽-順鉬偶合物的分子量小于2000，遠(yuǎn)低于抗體分子的分子量(通 常為100，000 150，000)，因此幾乎無抗原性，不會導(dǎo)致機體產(chǎn)生免疫過敏反應(yīng)。(2)本發(fā)明多肽_順鉬偶合物對實體瘤的組織穿透力和組織分布作用強于抗體等 大分子物質(zhì)；(3)本發(fā)明多肽_順鉬偶合物具有腫瘤靶向性，避免在腫瘤以外的部位積聚，減少 不良反應(yīng)，增加了腫瘤殺傷的特異性；(4)本發(fā)明多肽-順鉬偶合物的毒副作用低，是原來順鉬的1/20 1/50，相同劑 量用藥的療效也增強了 10 20倍。
具體實施例方式以下結(jié)合實施例來進一步解釋本發(fā)明，但實施例并不對本發(fā)明做任何形式的限定。實施例1多肽-順鉬偶合物的制備在25 毫升圓底燒瓶中加入 10 毫升 DMF，25mg(0. 017mol) LLADTTHHRPffT,3. 5mg(0. 019mmol) 1，2-二溴乙烷和無水碳酸鈉15mg..室溫下攪拌24小時。加入二(2-鄰 苯二甲酰亞胺)乙胺10mg(0. 028mol)，繼續(xù)攪拌24小時。加入80%的胼水溶液1毫升，繼 續(xù)攪拌3天。加10毫升70%丙酮溶液，過濾。用70%丙酮溶液洗滌沉淀。將沉淀溶解在 3毫升水中，加入氯化亞鉬4. 5毫克(0. 017mmol)，將溶液冷凍干燥得到產(chǎn)物。實施例2多肽-順鉬偶合物的體內(nèi)抗肺癌藥效學(xué)研究1材料與方法 1. 1 細(xì)胞NCI-H1299人肺癌細(xì)胞株，由中科院上海細(xì)胞研究所提供。1.2實驗動物SPF級健康雄性Balb-c裸鼠，5 6周齡，體重16 20g，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物 中心提供，合格證號SCXK(粵)2008-0002。在廣東藥學(xué)院藥科學(xué)院新藥篩選與藥效學(xué)評價 中心IVC系統(tǒng)內(nèi)，溫度25°C，濕度70 80%，飼養(yǎng)1周后用于實驗。1. 3主要試劑和藥物高糖DMEM培養(yǎng)基購自Gibco公司；進口胎牛血清購自Hyclone公司；受試藥品 H001，注射液自制；陽性對照藥物順鉬，由德國拜耳公司生產(chǎn)，批號BXF 23E3。1. 4細(xì)胞培養(yǎng)與傳代人肺癌細(xì)胞NCI-H1299用含10 %胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，置于37°C、 5 % CO2恒溫孵箱內(nèi)培養(yǎng)，細(xì)胞為單層貼壁生長，待貼壁細(xì)胞融合達80 % 90 %時，以含 0.01% EDTA的0. 25%胰蛋白酶消化傳代。1. 5荷人肺癌裸鼠動物模型的建立將處于對數(shù)生長期、狀態(tài)良好的人肺癌細(xì)胞NCI-H1299，以含0.01% EDTA的 0. 25%胰酶消化后，IOOOrpm離心lmin，去上清，加入無血清高糖DMEM培養(yǎng)液重懸沉淀，細(xì) 胞計數(shù)調(diào)整細(xì)胞密度，于裸鼠背腹部選取一個注射位點，皮下接種人肺癌細(xì)胞NCI-H1299， 每個位點注射細(xì)胞約2X IO6個，7后天肉眼見裸鼠接種部位有腫瘤長出后，可用于實驗。1. 6分組治療將荷人肺癌裸鼠隨機分成4組，分別設(shè)置如下(1)陰性對照組(生理鹽水)； (2)陽性藥(順鉬)對照組為(10mg/kg)；三組試驗藥(多肽_順鉬偶合物)分別為(3) 多肽-順鉬偶合物低劑量組(2. 5mg/kg), (4)多肽-順鉬偶合物中劑量組(5mg/kg), (5) 多肽-順鉬偶合物高劑量組(10mg/kg)。各組裸鼠每天腹腔注射給藥一次，給藥體積為 0. lml/10g，連續(xù)給藥 14d。1. 7觀察腫瘤生長情況及裸鼠一般情況分別于給藥第1、4、7、10、14天稱量裸鼠體重，用游標(biāo)卡尺測量給藥第1、7、14天腫 瘤大小，以下述公式計算腫瘤的體積V = ab2 π /60，a 腫瘤結(jié)節(jié)的最大直徑，b 腫瘤結(jié)節(jié) 的橫徑，末次測量后脫頸處死裸鼠，剝離出腫瘤組織并拍照、稱重、測體積，分別以4%多聚 甲醛、10%福爾馬林固定腫瘤組織。1. 8多肽_順鉬偶合物在荷瘤裸鼠的組織分布圖取熒光素FITC標(biāo)記多肽(Fitc-多肽-順鉬偶合物)Img溶于600uLPBS，配成 1.67mg/mL。稀釋4倍進行尾靜脈注射。15min后(1000)開始心臟灌流。(固定老鼠，打 開胸腔，暴露心臟，灌流器從心尖部進入左心室，然后在右心房開一小口，先用30mLNS沖洗血管，然后用50mL多聚甲醛先快后慢灌流進行組織固定)。完成灌流，立刻開始解剖取小鼠 的心，肝，脾，肺，腎和腫瘤組織。進行冰凍切片(順序為心，肝，脾，肺，腎，腫瘤組織)，進行 冰凍切片，拍照，(所有照片為IOOx和200x，暴光時間為IOs)。1. 9數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)結(jié)果以表示，采用SPSS 11. 0統(tǒng)計軟件進行兩獨立樣本t檢驗，P < 0. 05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2 結(jié)果2. 1成瘤率本實驗用裸鼠均于人肺癌細(xì)胞NCI-H1299皮下接種后3天在接種部位出現(xiàn)約 0. 15cm大小的腫瘤結(jié)節(jié)，成瘤率達95%，表明成功建立荷人肺癌裸鼠模型。2. 2各組裸鼠一般情況及體重變化絕大多數(shù)裸鼠治療期間均未出現(xiàn)明顯的活動減少、反應(yīng)遲緩、精神萎縮、消瘦等現(xiàn) 象。給藥后各組裸鼠的體重變化情況如表1所示。表1各組裸鼠體重(g) 2. 2腫瘤生長情況2. 2. 1體積變化用游標(biāo)卡尺測量給藥第1、7、14天裸鼠腫瘤長短徑大小，求出各 腫瘤體積值，結(jié)果如表2所示；根據(jù)公式"AV1 =給藥后腫瘤體積值-給藥前腫瘤體積值” 分別求出給藥第7、14天各組裸鼠腫瘤體積的變化值，結(jié)果如表3所示；根據(jù)公式“ AV2=S物組腫瘤體積值-陰性對照組腫瘤體積值”求出給藥第7、14天各藥物組與陰性對照組相比的腫瘤體積差值，結(jié)果如表4所示?？梢?，給藥后陽性藥物組的裸鼠腫瘤體積明顯小于陰性 對照組及多肽-順鉬偶合物組，與陰性對照組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0. 01)，多肽-順 鉬偶合物高劑量組的裸鼠腫瘤體積小于陰性對照組，與陰性對照組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P < 0. 01)，而多肽-順鉬偶合物中、低劑量組的裸鼠腫瘤體積略小于陰性對照組的，但是 與對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P > 0. 05)。表2各組裸鼠腫瘤體積(mm3) *p < 0. 05，**P < 0. 01，藥物組 vs 陰性對照組。表3與給藥前相比，給藥第7、14天各組裸鼠腫瘤體積的變化值(mm3) *P < 0. 05，**P < 0. 01，藥物組 vs 陰性對照組。表4給藥后，各藥物組與陰性對照組相比的腫瘤體積差值(mm3)
組別η 腫瘤體積差值(mm3)
第7天第14天
陰性對照組 //
陽性對照組 -1.82-16.13
多肽-順鉑偶合物低劑量組7 -0.16-2.14
多肽-順鉑偶合物中劑量組 -1.00-7.31
多肽-順鉑偶合物高劑量組7 -1.64-11.852. 2. 2瘤重變化第14天治療結(jié)束后，處死荷瘤裸鼠，取出瘤塊，稱重結(jié)果見表5。給藥后陽性藥物組的裸鼠腫瘤重量明顯輕于陰性對照組及多肽_順鉬偶合物組，與陰性對 照組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.01)，多肽-順鉬偶合物高、中劑量組的裸鼠腫瘤重量輕 于陰性對照組，與陰性對照組之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0. 05)。根據(jù)公式“ Δ W =藥物 組平均瘤重值-陰性對照組平均瘤重值”求出給藥第7、14天各藥物組與陰性對照組相比的 腫瘤重量差值，結(jié)果如表6所示。表5各組裸鼠腫瘤重量(g)
組別η瘤重(g)
陰性對照組 0.186 士 0.082
陽性對照組70.091 士 0.011*
多肽-順鉑偶合物低劑量組70.166 ±0.057
多肽-順鉑偶合物中劑量組70.092 ±0.039*
多肽-順鉑偶合物高劑量組70.072 ± 0.030**Ρ < 0. 05，**Ρ < 0. 01，藥物組 vs 陰性對照組。表6給藥后，各藥物組與陰性對照組相比的瘤重差值(g) 2. 2. 3第14天治療結(jié)束后，處死荷瘤裸鼠，取出瘤塊，水量法測量剝離后的腫瘤體 積，結(jié)果見表7。給藥后陽性藥物組的裸鼠腫瘤體積明顯小于陰性對照組及HOOl組的，與 陰性對照組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0. 01),HOOl高劑量組的裸鼠腫瘤體積小于陰性對 照組的，與陰性對照組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0. 01)，而多肽-順鉑偶合物中、低劑量 組的裸鼠腫瘤體積與陰性對照組的接近，無統(tǒng)計學(xué)意義。根據(jù)公式“ Δ V 二藥物組腫瘤體積 值-陰性對照組腫瘤體積值”求出給藥第7、14天各藥物組與陰性對照組相比的腫瘤體積差 值，結(jié)果如表8所示。表7水量法測量剝離后的腫瘤體積(cm3)P < 0. 05，**Ρ < 0. 01，藥物組 vs 陰性對照組。表8水量法測量剝離后的腫瘤體積，各藥物組與陰性對照組相比的腫瘤體積差值 (cm3)組別η腫瘤體積差值(cm3)
陰性對照組7-
陽性對照組7-0.08
多肽-順鉑偶合物低劑量組 0.00
多肽-順鉑偶合物中劑量組7-0.03 多肽-順鉑偶合物高劑量組7-0.092. 2. 4熒光素標(biāo)記的多肽-順鉬偶合物在荷瘤裸鼠體內(nèi)的組織分布圖，可見接種 的肺癌組織中多肽-順鉬偶合物有較多分布，而心、肝、腦、肺、腎正常組織，結(jié)果見

圖1。3 結(jié)論利用人肺癌NCI-H1299細(xì)胞，接種于裸鼠，成功復(fù)制了荷瘤裸鼠模型。對受試藥多 肽-順鉬偶合物進行了抗腫瘤藥效學(xué)試驗，結(jié)果表明當(dāng)多肽_順鉬偶合物為10mg/kg時可 以顯著抑制腫瘤生長，與對照模型組(陰性對照組)相比，P < 0. 05 ；當(dāng)多肽-順鉬偶合物 為2. 5mg/kg和5mg/kg時，對NCI-H1299肺癌生長的抑制作用不明顯，與對照組相比無統(tǒng)計 學(xué)意義。結(jié)果表明，當(dāng)多肽-順鉬偶合物劑量大于等于10mg/kg時具有明顯抗人肺癌作用。實施例3多肽_順鉬偶合物體外抗結(jié)腸癌的藥效學(xué)實驗研究1材料與方法1. 1細(xì)胞株Sffl 116人結(jié)腸癌細(xì)胞株，由中科院上海細(xì)胞研究所提供。1.3主要試劑和藥物高糖DMEM培養(yǎng)基購自Gibco公司；進口胎牛血清購自Hyclone公司；受試藥品 H001，注射液自制；陽性對照藥物順鉬，由德國拜耳公司生產(chǎn)，批號BXF 23E3。1.4細(xì)胞培養(yǎng)與傳代人結(jié)腸癌細(xì)胞SW1116用含10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，置于37°C、5% CO2恒溫孵箱內(nèi)培養(yǎng)，細(xì)胞為單層貼壁生長，待貼壁細(xì)胞融合達80% 90%時，以含0.01% EDTA的0. 25%胰蛋白酶消化傳代。采用MTT比色法，選取對數(shù)生長期SWl 116細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度為 1 X 105/L于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，分別加入終濃度為0. 5 10mg/L的MnSODm 100 μ 1/孔， 置C02培養(yǎng)箱，在37°C、5 % CO2及飽和濕度條件下培養(yǎng)24 72h，離培養(yǎng)終點4h加入MTT 溶液(5g/L)10y 1/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，加入10% SDS (0. 01mol/L HCl溶液)100 μ 1/孔，靜置 過夜。酶標(biāo)儀(Micro-TEKWAVE X)于570nm處測吸光度(A)值，計算細(xì)胞增殖抑制率和半 數(shù)抑制濃度(IC50)。1.5分組治療將人結(jié)腸癌細(xì)胞隨機分成6組，分別設(shè)置如下(1)陰性對照組(生理鹽水)；(2)陽性藥(順鉬)對照組為(10ug/ml)；五組試驗藥(多肽_順鉬偶合物)分別為(3)多 肽_順鉬偶合物5ug/ml劑量組，(4)多肽-順鉬偶合物lOug/ml劑量組，(5)多肽-順鉬偶 合物20ug/ml劑量組，(6)多肽-順鉬偶合物20ug/ml劑量組。各組裸鼠每天腹腔注射給藥一次，給藥體積為0. lml/10g，連續(xù)給藥14d。2 結(jié)果HOOl 抗結(jié)腸癌 Sffl 116 的 IC50 為 18ug/ml，順鉬抗結(jié)腸癌 Sffl 116 的 IC50 為 15ug/ ml ο3 結(jié)論多肽-順鉬偶合物對人結(jié)腸癌細(xì)胞具有與順鉬一樣的殺傷作用，其IC50分別為 18ug/ml 禾口 15ug/ml。
權(quán)利要求
一種多肽-順鉑偶合物，其特征在于所述多肽-順鉑偶合物由具有式(I)所示通式的多肽和順鉑偶合而成Leu-Leu-Ala-Asp-Thr-Thr-His-His-Arg-X-Y-Z(I)；其中，X為Ala、Pro或Arg；Y為Trp、Tyr或Phe；Z為Cys、Thr或Ser。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽_順鉬偶合物，其特征在于所述X為Arg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽_順鉬偶合物，其特征在于所述Y為Phe。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽_順鉬偶合物，其特征在于所述Z為Cys。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 4中任意一條權(quán)利要求所述的多肽_順鉬偶合物，其特征在于所 述多肽為乙?；亩嚯幕蛘吲c聚乙二醇共聚的多肽。
6.權(quán)利要求1 4中任意一條權(quán)利要求所述多肽_順鉬偶合物的制備方法，其特征在 于包括如下步驟(1)通過固相多肽合成法合成多肽；(2)將合成好的多肽與二鹵代烷烴進行反應(yīng)，得到相應(yīng)的多肽C-端鹵化物；(3)多肽C-端鹵化物與二(1-Ft氨基)乙基胺進行縮合反應(yīng)，得到氨基修飾多肽前驅(qū) 物，如式(II)所示(II); (4)步驟(3)中得到的多肽前驅(qū)物進行還原脫保護反應(yīng)，得到多胺修飾肽，如式(III) 所示 (5)將步驟⑷中所得的多胺修飾肽與氯化鉬反應(yīng)，得到多肽-順鉬偶合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的多肽-順鉬偶合物的制備方法，其特征在于步驟⑴中，所述 固相多肽合成法合成多肽包括如下步驟(1)第一個Pro 的引入Fmoc-Pro-0H 共價連接在 CTC 樹脂上，F(xiàn)moc-Pro-OH/Resin = 1. 1，反應(yīng) 4h，得到 Fmoc-Pro-CTC Resin ；(2)其余氨基酸的導(dǎo)入其余氨基酸共價連接在CTC樹脂上，F(xiàn)m0C-AA/Resin= 3.0，加 入二甲基甲酰胺溶液，偶聯(lián)劑為多肽縮合劑；(III);(3)去除Fmoc通過加入20體積％哌啶的二甲基甲酰胺溶液去除；(4)樹脂裂解加入1體積％的三氟乙酸溶液去除CTC樹脂，得到多肽。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的多肽-順鉬偶合物的制備方法，其特征在于步驟⑵中，所述 二鹵代烷烴中的鹵元素為Br或I。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的多肽順鉬偶合物的制備方法，其特征在于所述CTC樹脂的反 應(yīng)容量為0. 9mmol/go
10.權(quán)利要求1 4所述多肽-順鉬偶合物的應(yīng)用，其特征在于所述多肽_順鉬偶合物 用于制備治療癌癥或癌癥并發(fā)癥的藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種多肽-順鉑偶合物，該多肽-順鉑偶合物是以一個含有12個氨基酸的肽段為載體，通過與抗腫瘤藥物順鉑的偶合而得，本發(fā)明還對該多肽-順鉑偶合物的藥理性能進行了初步的研究。順鉑廣泛應(yīng)用于目前的癌癥治療中，但其毒副作用很大等缺點限制了其在治療中的應(yīng)用。因此，降低順鉑的毒副作用成為改良順鉑藥物的關(guān)鍵。本發(fā)明通過將多肽通過化學(xué)反應(yīng)與順鉑偶合，得到的多肽-順鉑偶合物用于制備抗腫瘤疾病的藥物時的分子量小，無抗原性，不會導(dǎo)致過敏反應(yīng)，還可以使藥物發(fā)揮腫瘤靶向性，以envoplakin、CD63等抗原為靶點，對腫瘤進行高效殺傷，促進腫瘤細(xì)胞凋亡，毒副作用降低。
文檔編號A61K47/48GK101870726SQ201010195530
公開日2010年10月27日 申請日期2010年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月4日
發(fā)明者臧林泉 申請人:臧林泉