專(zhuān)利名稱(chēng)：一種辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體凍干粉及其溫敏型辛夷納米凝膠和制備方法
一種辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體凍干粉及其溫敏型辛夷納米凝
膠和制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種脂質(zhì)體凍干粉，具體地說(shuō)，是關(guān)于一種辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體凍 干粉及其溫敏型辛夷納米凝膠和制備方法。
背景技術(shù)：
辛夷為木蘭科植物望春花、玉蘭或武當(dāng)玉蘭的干燥花蕾，有祛風(fēng)發(fā)散、通鼻竅之功 效。主要用于風(fēng)寒頭痛、鼻塞、鼻淵、鼻流濁涕等。研究證明，辛夷揮發(fā)油是其有效成分之 一，具有廣泛的藥理活性，如抗炎、抗過(guò)敏、抗組胺和肥大細(xì)胞膜穩(wěn)定作用等，但傳統(tǒng)中藥制 劑中揮發(fā)油類(lèi)成分易揮發(fā)，穩(wěn)定性差，導(dǎo)致其臨床療效的不確定性。目前常用的辛夷滴鼻劑有滴通鼻炎水、鼻炎滴劑等。此類(lèi)滴鼻劑制作工藝簡(jiǎn)單，療 效比較局限，藥物易揮發(fā)，穩(wěn)定性較差、科技含量不高，缺乏系統(tǒng)深入的研究，這一切都限制 了辛夷在臨床上的推廣應(yīng)用。本發(fā)明的課題組前期研究已經(jīng)成功制備出辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體，但是液態(tài)脂質(zhì) 體的貯存穩(wěn)定性較差。在貯存過(guò)程中極易發(fā)生團(tuán)聚、融合及藥物滲漏，且主要膜材磷脂易 氧化、水解，難以滿足藥物制劑穩(wěn)定性的要求，同時(shí)由于溫度、光線等影響產(chǎn)生乳析、凝聚、 融合、粒徑變大等現(xiàn)象，這些變化都對(duì)脂質(zhì)體的應(yīng)用產(chǎn)生負(fù)面的效應(yīng)，使應(yīng)用受到了很大限 制。為此，必須采用適當(dāng)?shù)姆椒▉?lái)處理液態(tài)脂質(zhì)體來(lái)提高其貯存穩(wěn)定性。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體凍干 粉。本發(fā)明的再一的目的是，提供一種溫敏型辛夷納米凝膠。本發(fā)明的另一的目的是，提供辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體凍干粉制備方法。本發(fā)明的第四個(gè)目的是，提供溫敏型辛夷納米凝膠制備方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體凍干粉，所述的納米脂質(zhì)體凍干粉是由以下方法制備 得到A，取辛夷揮發(fā)油，用高壓均質(zhì)法制備得到辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體；B，將步驟A得到的辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體用冷凍干燥法制備辛夷揮發(fā)油納米脂 質(zhì)體凍干粉；所述的步驟B中冷凍干燥法中選用的脂質(zhì)體凍干保護(hù)劑是濃度為10% 15%的
甘露醇。所述的步驟A中，高壓均質(zhì)法中用的均質(zhì)機(jī)的操作條件如下壓力200、400、600、 800bar各循環(huán)均質(zhì)15min ；溫度4 7°C。為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是
一種溫敏型辛夷納米凝膠，所述的溫敏型辛夷納米凝膠是由以下方法制備得到A，取辛夷揮發(fā)油，用高壓均質(zhì)法制備得到辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體；B，將步驟A得到的辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體用冷凍干燥法制備辛夷揮發(fā)油納米脂 質(zhì)體凍干粉；C，配制P188-F127溶液，將P188-F127溶液溶于水中，加入辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體 凍干粉，得到溫敏型辛夷納米凝膠；所述的步驟B中冷凍干燥法中選用的脂質(zhì)體凍干保護(hù)劑是濃度為10% 15%的
甘露醇。所述的步驟C中所述的P188-F127溶液是在22. 46% F127+2. 6% P188濃度下配 出的凝膠溶液。為實(shí)現(xiàn)上述第三個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體凍干粉制備方法，包括以下步驟A，取辛夷揮發(fā)油，用高壓均質(zhì)法制備得到辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體；B，將步驟A得到的辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體用冷凍干燥法制備辛夷揮發(fā)油納米脂 質(zhì)體凍干粉；所述的步驟A中，高壓均質(zhì)法中用的均質(zhì)機(jī)的操作條件如下壓力200、400、600、 800bar各循環(huán)均質(zhì)15min ；溫度4 7。C,所述的步驟B中冷凍干燥法中選用的脂質(zhì)體凍干保護(hù)劑是濃度為10% 15%的
甘露醇。為實(shí)現(xiàn)上述第四個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種溫敏型辛夷納米凝膠制備方法，包括以下步驟A，取辛夷揮發(fā)油，用高壓均質(zhì)法制備得到辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體；B，將步驟A得到的辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體用冷凍干燥法制備辛夷揮發(fā)油納米脂 質(zhì)體凍干粉；C，配制P188-F127溶液，將P188-F127溶液溶于水中，加入辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體 凍干粉，得到溫敏型辛夷納米凝膠；所述的步驟A中，高壓均質(zhì)法中用的均質(zhì)機(jī)的操作條件如下壓力200、400、600、 800bar各循環(huán)均質(zhì)15min ；溫度4 7。C,所述的步驟B中冷凍干燥法中選用的脂質(zhì)體凍干保護(hù)劑是濃度為10% 15%的
甘露醇，所述的步驟C中所述的P188-F127溶液是在22. 46% F127+2. 6% P188濃度下配 出的凝膠溶液。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于1，本發(fā)明創(chuàng)新性的采用冷凍干燥技術(shù)，將辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體制成凍干粉，以 提高藥物的穩(wěn)定性，便于脂質(zhì)體大量制備和長(zhǎng)期保存。2，將溫敏型高分子材料泊洛沙姆407 (F127)和泊洛沙姆188 (P188)引入鼻腔給藥 系統(tǒng)，制成溫敏型辛夷納米凝膠，不僅具有一般鼻用制劑的優(yōu)點(diǎn)，還可以明顯延長(zhǎng)藥物在鼻 腔的滯留時(shí)間，提高藥物療效。3，研究了制備工藝，確定了溫敏型辛夷納米凝膠的制備處方。制備的辛夷納米凍
5干粉質(zhì)地疏松，加去離子水后迅速溶解，很快恢復(fù)藥液的原有特性，有利于藥品的長(zhǎng)期貯 存，與水劑相比，穩(wěn)定性有顯著優(yōu)勢(shì)。去離子水復(fù)溶后脂質(zhì)體平均粒徑為92nm，包封率為 75. 2%。辛夷納米凍干粉經(jīng)本研究制備的溫敏型分散液復(fù)溶后，在室溫下為自由流動(dòng)的液 體，給藥后在鼻腔溫度(34°C )下形成半固體凝膠。4，采用Franz擴(kuò)散池法考察溫敏型辛夷納米凝膠的體外釋藥過(guò)程，12小時(shí)持續(xù)研 究發(fā)現(xiàn)，該制劑與辛夷揮發(fā)油相比較，具有明顯的緩釋效應(yīng)。采用大鼠在體鼻腔滯留法考察溫敏型辛夷納米凝膠的鼻腔吸收規(guī)律，結(jié)果表明該 制劑的吸收符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，顯示該制劑鼻腔滯留時(shí)間為2小時(shí)，具有緩釋效應(yīng)。


圖1:Tween-80加入量對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響。
圖2膽酸鈉加入量對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響。
圖3膽固醇加入量對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響。
圖4辛夷揮發(fā)油加入量對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響。
圖5甘露醇加入量對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響。
圖6壓力對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響。
圖7脂質(zhì)體透射電鏡照片。
圖8凍干粉復(fù)溶后脂質(zhì)體透射電鏡照片。
圖9溫敏型辛夷納米凝膠制備的技術(shù)路線。
具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體凍干粉的制備及性能考察一，儀器與試劑1，儀器實(shí)驗(yàn)儀器詳見(jiàn)表1表1實(shí)驗(yàn)儀器 2，試劑實(shí)驗(yàn)原料詳見(jiàn)表2。
表2原料的性質(zhì)及來(lái)源
二，凍干保護(hù)劑的篩選液態(tài)脂質(zhì)體是一種混懸態(tài)乳劑，在貯存過(guò)程中會(huì)發(fā)生凝聚、融合并導(dǎo)致其包容藥 物的泄漏。所以?xún)龈杀Ｗo(hù)至關(guān)重要。為了研究不同保護(hù)劑、不同保護(hù)劑濃度在凍干過(guò)程中對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響，找到 對(duì)脂質(zhì)體保護(hù)效果較好的保護(hù)劑及其濃度，初步選定甘露醇、海藻糖、葡萄糖、蔗糖為凍干 保護(hù)劑，并分別以5%，10%，15%濃度進(jìn)行冷凍干燥研究，所得凍干樣品形態(tài)如表3 表3脂質(zhì)體凍干保護(hù)劑
表3顯示，海藻糖、葡萄糖及蔗糖對(duì)辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體凍干的保護(hù)效果較差， 濃度為10% 15%的甘露醇對(duì)脂質(zhì)體凍干有較好的保護(hù)作用。三，辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體制備方法的選擇納米脂質(zhì)體的制備方法很多，主要有逆相蒸發(fā)法、薄膜分散法、乙醇注入法、乙醚 注入法等。前期研究嘗試了幾種制備方法，通過(guò)比較其包封率最終選定一種包封率最高的 制備方法，即薄膜分散_超聲-膜過(guò)濾法。通過(guò)薄膜分散法制備的辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體混懸 液，經(jīng)過(guò)探針超聲和水浴超聲兩次超聲，再經(jīng)過(guò)一次濾膜過(guò)濾，既滿足制備的混懸液的穩(wěn)定 性和純度及制備的參量的可控性，同時(shí)使粒徑的分布更窄，體系更穩(wěn)定。A薄膜分散_超聲-膜過(guò)濾法薄膜分散_超聲-膜過(guò)濾法制備的脂質(zhì)體經(jīng)過(guò)凍干、復(fù)溶后，經(jīng)檢測(cè)，粒徑過(guò)大 (1090nm)。故應(yīng)選擇其它制備方法。B高壓均質(zhì)法(1)實(shí)驗(yàn)方法稱(chēng)取一定量的脂材(大豆卵磷脂膽固醇比為6 1)、辛夷揮發(fā)油、去氧膽酸鈉、 吐溫-80，按照40 3 10 10(質(zhì)量比)的比例溶于適量無(wú)水乙醇中，在超聲波中溶解； 稱(chēng)取總處方量2倍的甘露醇，溶于一定體積的去離子水中，用磁力攪拌器攪拌，同時(shí)將混合 液以緩慢流速滴加入攪拌的三葉燒杯中，滴完后用真空泵抽真空2-3h，在低溫冷卻液循環(huán) 泵中進(jìn)行操作，得半透明狀溶液。即得辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體混懸液。將混懸液放入冰箱 中在-20°C下預(yù)凍12h，然后放入冷凍干燥機(jī)制成凍干粉備用。①「察吐溫-80 (Tween-80)對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響表面活性劑的作用是降低水的表面張力，從而可以提高納米粒子的分散穩(wěn)定性。 另一方面，表面活性劑能增加藥物的親水性，有助于藥物的釋放。本實(shí)驗(yàn)以Tween-80為分 散劑，研究了 Tween-80對(duì)制備微球粒徑的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Tween-80對(duì)該懸浮體系有較好 的分散穩(wěn)定性。本組實(shí)驗(yàn)中，保持脂材(大豆卵磷脂膽固醇比為6 1)、辛夷揮發(fā)油、去 氧膽酸鈉按照40 3 10(質(zhì)量比)不變，進(jìn)一步考察了 Tween-80用量的變化對(duì)脂質(zhì)體 粒徑的影響，結(jié)果如圖1所示。結(jié)果顯示隨著表面活性劑加入量的增大，脂質(zhì)體粒徑幵始 向小粒子方向移動(dòng)，但繼續(xù)加入表面活性劑，粒子的粒徑又向大粒子方向移動(dòng)。分析認(rèn)為 Tween-80是一種非離子表面活性劑，其分子量為1309，這種分子結(jié)構(gòu)在脂質(zhì)體的形成過(guò)程 中起到空間位阻作用，所以很好地降低了脂質(zhì)體的粒徑，提高了脂質(zhì)體的分散穩(wěn)定性。但隨 著加入量的增加，表面活性劑可能又與脂質(zhì)體微球產(chǎn)生一定的物理結(jié)合，連接在脂質(zhì)體微 球上，使粒徑又向大粒子方向移動(dòng)。由此可見(jiàn)，表面活性劑的最佳加入量為脂材表面活性 劑二 4 1(質(zhì)量比)。
②考察膽酸鈉對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響柔性納米脂質(zhì)體是在脂質(zhì)體的雙分子層中加入附加劑制備而成，它具有柔性和形 變性。研究表明，由磷脂和適當(dāng)?shù)谋砻婊钚詣┲苽涞玫降娜嵝灾|(zhì)體(或稱(chēng)為傳遞體)具 有充分的柔性，可以發(fā)生形變，能通過(guò)比它自身小得多的孔道，具有更好的生物通透性。去氧膽酸鈉是一種表面活性劑，它能增加脂質(zhì)體的柔性。作為柔性脂質(zhì)體，與普通 剛性脂質(zhì)體不同，它易受滲透壓的影響，并被擠入透過(guò)黏膜，提高了吸收率。本組實(shí)驗(yàn)中，保 持脂材(大豆卵磷脂膽固醇比為6 1)、辛夷揮發(fā)油、Tween-80按照40 3 10(質(zhì)量 比)不變，進(jìn)一步考察去氧膽酸鈉用量的變化對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響，結(jié)果圖2所示。脂質(zhì)體 的粒徑隨著膽酸鈉含量的增加，先降低后升高，這是因?yàn)椴糠种|(zhì)體會(huì)因?yàn)槟懰徕c的量的 增加而破壞，黏附在其他脂質(zhì)體表面，使粒徑反而增加。綜合考慮，脂材膽酸鈉為4 1。③考察脂材大豆卵磷脂膽固醇的比例對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響脂質(zhì)體的主要組分為磷脂和膽固醇，最常用的磷脂酰膽堿又稱(chēng)卵磷脂，是人體細(xì) 胞膜的主要成分之一。本課題選用卵磷脂含量較高的大豆卵磷脂。膽固醇是脂質(zhì)膜的形成 成分之一，跟磷脂的極性鍵相結(jié)合，可增加脂質(zhì)體膜的抗氧化作用，具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)膜流動(dòng)性 的作用。本組實(shí)驗(yàn)中，保持辛夷揮發(fā)油去氧膽酸鈉Tween-80按照3 10 10(質(zhì)量 比)不變，進(jìn)一步考察脂材(大豆卵磷脂膽固醇)的變化對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響，保持卵磷 脂加入量不變，分別考察大豆卵磷脂膽固醇=4 1、5 1、6 1、7 1時(shí)粒徑變化。 結(jié)果如圖3所示。隨著膽固醇用量的增加，脂質(zhì)體粒徑相應(yīng)變大。這是因?yàn)槟懝檀紝?duì)脂質(zhì) 體膜的通透性具有雙向調(diào)節(jié)作用?？紤]到成膜，選擇合適的比例為大豆卵磷脂膽固醇= 6 1。④考察辛夷揮發(fā)油對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響本組實(shí)驗(yàn)中，保持脂材(大豆卵磷脂膽固醇比為6 1)、去氧膽酸鈉、Tween-80 按照4 1 1(質(zhì)量比)不變，進(jìn)一步考察辛夷揮發(fā)油用量的變化對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響， 結(jié)果如圖4所示。脂質(zhì)體粒徑隨著辛夷油含量增大有增大的趨勢(shì)，但變化不明顯，而且增加 辛夷揮發(fā)油量會(huì)使其包封率相應(yīng)增加，綜合考慮，脂材辛夷揮發(fā)油為40 3。⑤考察甘露醇對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響在凍干過(guò)程中，冰晶的形成、滲透壓的改變、相分離及相轉(zhuǎn)變等因素均可導(dǎo)致脂質(zhì) 體膜折疊、融合、破裂及藥物滲漏等，所以在脂質(zhì)體冷凍干燥過(guò)程中，凍干保護(hù)劑的選擇尤 為重要。它不僅起到凍干制劑的骨架作用，而且能促進(jìn)前體脂質(zhì)體在水中的再分散。經(jīng)過(guò) 前期實(shí)驗(yàn)，選用甘露醇作為凍干保護(hù)劑。本組實(shí)驗(yàn)中，保持脂材(大豆卵磷脂膽固醇比為 6 1)、辛夷揮發(fā)油、去氧膽酸鈉、吐溫-80，按照40 3 10 10(質(zhì)量比)不變，分別 考察甘露醇與總處方的比例為1 2、1 1、2 1、3 1時(shí)對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響，結(jié)果如 圖5所示。甘露醇需保持一定劑量才能保持脂質(zhì)體的粒徑。綜合考慮，甘露醇與總處方的 比例為2 1。⑥考察均質(zhì)過(guò)程工藝條件對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響(1)不同壓力下，均質(zhì)過(guò)程對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響如圖6所示。隨著壓力的增大脂質(zhì) 體的粒徑逐漸減小，但由于脂質(zhì)體本身質(zhì)地較軟，壓力過(guò)大會(huì)破壞脂質(zhì)體自身結(jié)構(gòu)，不利于 粒徑的均一、穩(wěn)定。此外，在均質(zhì)過(guò)程中逐漸增加壓力，可以在有效保護(hù)脂質(zhì)體的前提下最 大限度地提高均質(zhì)效果。
實(shí)驗(yàn)選擇了均質(zhì)機(jī)的最佳操作條件如下壓力200、400、600、800bar各循環(huán)均質(zhì) 15min ；溫度4 7°C。(2)形貌觀察取少量辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體混懸液，滴至專(zhuān)用銅網(wǎng)上，稍干后用3%的磷鎢酸負(fù) 染，自然揮干后，用透射電鏡觀察其形貌。由透射電鏡照片(圖7)可見(jiàn)，制備的脂質(zhì)體成圓 形囊泡狀，顆粒均勻。(3)粒徑分布經(jīng)檢測(cè)，脂質(zhì)體平均粒徑為86. 7nm。(4)包封率測(cè)定脂質(zhì)體乳液中總的辛夷油含量測(cè)試精密量取10ml新制備的辛夷油脂質(zhì)體，加入 lml 2%曲拉通X-100破乳，然后用二氯甲烷萃取3次，裝入10ml容量瓶中，用二氯甲烷定 容至刻度，得到樣品a ；包封在脂質(zhì)體內(nèi)部的辛夷油含量測(cè)試精密量取10ml新制備的辛夷 油脂質(zhì)體，放入離心機(jī)中，80001 離心30min，下面是白色脂質(zhì)體的沉淀，上面是清夜，把上 層清液去掉，用磷酸鹽緩沖液定容10ml，再放入離心機(jī)8000r離心30min，去掉上層清液， 取下層白色乳液加入lml2%曲拉通X-100破乳，然后用二氯甲烷萃取3次，裝入10ml容量 瓶中，用二氯甲烷定容至刻度，得到樣品b ；分別將2個(gè)樣品進(jìn)行氣相色譜分析，樣品a的樟 腦吸收峰面積為44. 25176，樣品b的樟腦吸收峰面積為34. 80361，代入公式可得包封率為 79. 4%。綜上所述，通過(guò)對(duì)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法和高壓均質(zhì)法的比較研究，本課題確立了高壓均 質(zhì)法制備辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體，其凍干粉的最佳制備處方為吐溫(Tween-80)0. 4g、 去氧膽酸鈉0. 4g、膽固醇0. 23g、卵磷脂1.37g、辛夷揮發(fā)油120mg、無(wú)水乙醇100ml、 T-water400ml、甘露醇4. 75g。均質(zhì)機(jī)的最佳操作條件為壓力200、400、600、800bar各循 環(huán)均質(zhì)15min ；溫度4 7°C。高壓均質(zhì)技術(shù)在納米制劑中的優(yōu)勢(shì)納米制劑制備的關(guān)鍵是控制粒子的大小和獲得較窄且均勻的粒度分布。影響粒徑 和分布的因素很多，如處方配比、穩(wěn)定劑的用量等，而采用的制備工藝和分散設(shè)備也是關(guān)鍵 因素。許多研究表明，新型分散設(shè)備——高壓均質(zhì)機(jī)較傳統(tǒng)的高速攪拌機(jī)、超聲波儀、乳勻 機(jī)等制備的納米制劑中微粒粒徑較小，且粒度分布均勻和穩(wěn)定性好。高壓均質(zhì)機(jī)在制藥領(lǐng)域中常用于制備納米乳劑、納米粒、脂質(zhì)體等等，制備工藝一 般為先進(jìn)行初乳制備，再經(jīng)高壓均質(zhì)得到較小粒徑和均勻一致的制劑。其中制備脂質(zhì)體的 方法不下十余種，如逆相蒸發(fā)法、乙醇注入法、薄膜分散法等，而高壓均質(zhì)法制備脂質(zhì)體具 有重現(xiàn)性好，可大規(guī)模生產(chǎn)，微粒均勻、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，日益受到廣泛重視。根據(jù)所查文獻(xiàn)，高壓均質(zhì)技術(shù)在制備納米脂質(zhì)體方面多用于西藥如前列腺素E1， 中藥如槲皮素等，而在揮發(fā)油類(lèi)中藥中只有制備莪術(shù)油固體脂質(zhì)納米粒等，沒(méi)有制備揮發(fā) 油類(lèi)中藥納米脂質(zhì)體的記載。四，凍干粉復(fù)溶工藝考察本實(shí)驗(yàn)從水化方式、水化時(shí)間及水化介質(zhì)三個(gè)方面考察了脂質(zhì)體的水化工藝。(1)水化方式考察干態(tài)脂質(zhì)體的水化主要有兩種方式，即手工振蕩與儀器超聲兩種。手工水化雖然
10簡(jiǎn)單易行，但不能達(dá)到干態(tài)脂質(zhì)體完全水化的目的，所以本實(shí)驗(yàn)采用超聲波振蕩一定時(shí)間 即可完成脂質(zhì)體的水化。(2)水化介質(zhì)考察凍干脂質(zhì)體的水化介質(zhì)可以是去離子水、緩沖液、生理鹽水。但是由于凍干過(guò)程是 水分較少的過(guò)程，其中的溶質(zhì)質(zhì)量不會(huì)較少，因此，為了保持凍干后各項(xiàng)理化性質(zhì)不變，本 實(shí)驗(yàn)選擇去離子水為水化介質(zhì)，這樣可保持原來(lái)的PH值。(3)水化時(shí)間考察采用超聲波振蕩方法，加水后立即振蕩，振蕩時(shí)間分別為2、5、10min發(fā)現(xiàn)5min的 振蕩時(shí)間凍干樣品分散較完全，2min的振蕩時(shí)間樣品中還是留有較多的大顆粒未溶解，而 繼續(xù)延長(zhǎng)振蕩時(shí)間也沒(méi)有明顯變化，所以本實(shí)驗(yàn)選擇5min的振蕩時(shí)間。五，凍干粉復(fù)溶后形貌觀察凍干粉復(fù)溶后取少量辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體混懸液，滴至專(zhuān)用銅網(wǎng)上，稍干后用 3%的磷鎢酸負(fù)染，自然揮干后，用透射電鏡觀察其形貌。由透射電鏡照片(圖8)可見(jiàn)，脂 質(zhì)體顆粒分布均勻，顆粒大小未發(fā)生明顯變化。六，凍干粉復(fù)溶后粒徑測(cè)定經(jīng)檢測(cè)，凍干粉復(fù)溶后平均粒徑92nm。實(shí)施例2溫敏型辛夷納米凝膠的制備溫敏型辛夷納米凝膠的制備的技術(shù)路線見(jiàn)圖9一，溫敏型分散液的制備配制不同濃度的F127水溶液，P188-F127溶液(配比如表4)，裝入各離心管內(nèi)，并 將其放入4°C的環(huán)境中，過(guò)夜，使其充分溶解。表4 P188-F127 配比 二，溫敏凝膠的臨界溫度測(cè)定(1) F127濃度對(duì)其自身臨界溫度的影響將離心管固定在恒溫水槽中，使試劑侵入水槽液面以下，進(jìn)行溫控升溫，每次升溫 1°C，待溫度穩(wěn)定后，持續(xù)lOmin，然后觀察是否形成凝膠，記錄形成凝膠的溫度，即為該樣品 的臨界溫度。(2)P188對(duì)臨界溫度的影響按照表4相應(yīng)稱(chēng)取適量的P188及F127，配制成表中的濃度，按上述方法安排試驗(yàn)，測(cè)試樣品臨界溫度。溫敏型分散液溫度敏感性考察(1)F127濃度對(duì)其自身臨界溫度的影響F127濃度16% 26%的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表5 表5F127濃度對(duì)其臨界溫度的影響 從表5可以得出，隨著F127濃度的增加，臨界溫度隨之下降；F127濃度小于16% 將無(wú)法膠凝，當(dāng)F127濃度高于24%，F(xiàn)127濃度一臨界溫度曲線趨向水平，即其臨界溫度將 不作改變或變化很小。(2)P188對(duì)臨界溫度的影響F127濃度18% 26%，P188濃度2% 12%的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表6
12 以F127濃度對(duì)臨界溫度影響，與空白基質(zhì)相比，加入P188會(huì)使臨界溫度提高；并且在同一個(gè)P188濃度下，隨建1 F127濃度的提高，臨界溫度隨之下降，總體趨勢(shì)和空白基質(zhì)大體相同，當(dāng)P188濃度大于10%時(shí)，F(xiàn)127濃度一臨界溫度曲線開(kāi)始重合，即當(dāng)P188濃度大于10%時(shí)，臨界溫度不再隨P188濃度升高而改變。 以P188濃度對(duì)臨界溫度影響，在同一個(gè)F127濃度下，隨著P188濃度的提高，臨界 溫度隨之升高；當(dāng)P188濃度大于10%時(shí)，P188濃度一臨界溫度曲線趨向水平，即臨界溫度 將不作改變或變化很小。三，溫敏型辛夷納米凝膠的最佳制備過(guò)程將處方量的F127、P188溶于蒸餾水中，邊攪拌邊加入處方量的辛夷揮發(fā)油納米脂 質(zhì)體凍干粉，使其分散均勻，于4°C條件放置24小時(shí)，使凝膠充分溶脹分散均勻得到澄明的 溶液，即得溫敏型辛夷納米凝膠。綜上所述，在22. 46 % F127+2. 6%P188濃度下配出的凝膠溶液，在溫度為34°C時(shí)， 加入凍干粉的量不同，在5min時(shí)間都可以成為凝膠，差異不顯著，加入的凍干粉劑量越小，成為凝膠的時(shí)間相應(yīng)有所減少，經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn)，性能穩(wěn)定。實(shí)施例3溫敏型辛夷納米凝膠的體外釋藥考察及其比較一，溫敏型辛夷納米凝膠的體外釋藥考察采用Franz擴(kuò)散池法研究藥物的體外釋放情況。將半透膜(截留分子量7000u)固 定于Franz擴(kuò)散池兩池間，本實(shí)驗(yàn)使用的Franz擴(kuò)散池的面積為0. 785cm2。往給藥池中準(zhǔn) 確加入溫敏型辛夷納米凝膠約1ml，使其均勻分布在半透膜的表面，放入33°C烘箱中l(wèi)Omin 使形成凝膠。將擴(kuò)散池放入33°C水浴中，往接收池中加入已預(yù)熱至33°C的無(wú)水乙醇5ml作 為接收液，接收池中置一攪拌子以300轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)動(dòng)，于51^11、101^11、201^11、301^11、111、211、 4h、6h、8h、10h、12h分別取樣，取出1ml介質(zhì)并迅速補(bǔ)加等量預(yù)熱的無(wú)水乙醇。樣品必要時(shí) 適當(dāng)稀釋使?jié)舛仍跇?biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，采用HPLC法測(cè)定，計(jì)算累積釋放量，見(jiàn)表7。表7溫敏型辛夷納米凝膠體外釋藥結(jié)果(mg/cm2，n = 3) 由累積釋放率對(duì)時(shí)間作圖即可得體外釋放曲線，然后可進(jìn)一步擬合找出釋放規(guī)律。將樣品在4°C條件下密封儲(chǔ)存，平均分成四份，分別在不同時(shí)間考察樣品釋藥方 程，結(jié)果見(jiàn)表8。 表8樣品體外釋藥動(dòng)力學(xué)參數(shù) 從試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，溫敏型辛夷納米凝膠釋藥模式具有分段性，前30min符合 Higuchi方程，以擴(kuò)散過(guò)程為主，可能的原因是這段時(shí)間首先是少量游離的辛夷油擴(kuò)散到外 面溶液中。30min后呈現(xiàn)零級(jí)釋藥模式，說(shuō)明此時(shí)的凝膠起到辛夷油的儲(chǔ)庫(kù)系統(tǒng)的作用，可 以連續(xù)穩(wěn)態(tài)釋藥，辛夷油通過(guò)凝膠的控釋作用釋放，成為整個(gè)辛夷油釋藥的限速步驟。溫敏 型辛夷納米凝膠12小時(shí)累積釋放率為14%。避光，密封于4度冰箱條件下儲(chǔ)存一周，二周，一月的樣品和新制備的樣品相比， 釋藥模式無(wú)明顯變化。二，辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體體外釋藥考察方法同上，給藥池為等量的辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體，接收池為磷酸鹽緩沖液。累積 釋放量見(jiàn)表9，辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體12h累積釋放率為21 %。
表9辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體體外釋藥結(jié)果(mg/cm2，n = 3) 三，辛夷揮發(fā)油體外釋藥考察方法同上，給藥池為等量的辛夷揮發(fā)油，接收池為30%無(wú)水乙醇。辛夷揮發(fā)油12h 累積釋藥率為46. 3%。見(jiàn)表10表10辛夷揮發(fā)油體外釋藥結(jié)果(mg/cm2，n = 3) 3. 3. 4三組藥物體外釋藥比較辛夷揮發(fā)油、辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體、溫敏型辛夷納米凝膠的釋藥曲線比較，三組 藥物(辛夷揮發(fā)油、辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體、溫敏型辛夷納米凝膠)在30min內(nèi)均有突釋作 用，其后藥物的釋藥速度明顯減慢，12h累積釋藥率分別為46. 3 %、21 %、14 %。由此可見(jiàn)， 脂質(zhì)體和凝膠制劑可顯著降低辛夷揮發(fā)油的釋藥速度。在三種劑型中，藥物的緩釋性溫敏 型辛夷納米凝膠優(yōu)于辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體，優(yōu)于辛夷揮發(fā)油。進(jìn)一步證實(shí)了脂質(zhì)體及凝 膠作為新型的藥物載體，具有良好的粘附性和控緩釋性。實(shí)施例4溫敏型辛夷納米凝膠鼻腔吸收規(guī)律的研究一，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型及裝置選擇體重200_250g的健康雄性大鼠，腹腔注射戊巴比妥鈉(2%，2. 5ml/kg)麻醉 后，頸部切開(kāi)，暴露氣管和食管，向氣管中插入聚乙烯套管，用直徑相同的鼻腔套管由食管 插向鼻腔后部，將口腔與鼻腔相連的鼻腭封閉，以防止藥液從口腔流出。用一根橡膠管與插 入大鼠鼻腔后部的套管相連，管子的另一端與清洗液生理鹽水接觸，將盛有生理鹽水的容 器至于約4°C的冷水浴中。本實(shí)驗(yàn)中采用單側(cè)鼻腔給藥，另一鼻孔用502膠封閉。給藥后， 藥物在鼻腔中滯留一定時(shí)間，用電子蠕動(dòng)泵使生理鹽水從鼻孔中將藥液沖出，收集清洗液， 用HPLC法測(cè)定其中含藥量。二，清洗液用量的考察為了考察洗凈鼻腔內(nèi)殘留藥物所用的清洗液量，向一側(cè)鼻孔注入溫敏凝膠溶液 20ul，形成凝膠后，立刻由鼻腔套管以2ml/min的流速灌注生理鹽水。經(jīng)多次試驗(yàn)表明，5ml 清洗液的回收率可達(dá)93%以上。所以本實(shí)驗(yàn)所需清洗液至少為5ml，可選擇清洗液體積為 6ml。三，溫敏型辛夷納米凝膠鼻腔吸收規(guī)律的研究單側(cè)鼻腔給予溫敏凝膠液10ul，滯留一定時(shí)間后，用6ml清洗液以2ml/min流速?zèng)_ 洗大鼠鼻腔，取滯留時(shí)間為10min、15min、20min、30min、60min、120min的清洗液，補(bǔ)加生理鹽水至10ml。采用HPLC法測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量，即為溫敏凝膠的殘余量，用給藥量減去 殘留藥量即為吸收藥量。見(jiàn)表11。采用動(dòng)力學(xué)模型處理，結(jié)果表明溫敏型辛夷納米凝膠的 吸收符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)過(guò)程，具有緩釋效應(yīng)。表11平均吸收藥量(ug，n = 3) 以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為 本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
一種辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體凍干粉，其特征在于，所述的納米脂質(zhì)體凍干粉是由以下方法制備得到A，取辛夷揮發(fā)油，用高壓均質(zhì)法制備得到辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體；B，將步驟A得到的辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體用冷凍干燥法制備辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體凍干粉；所述的步驟B中冷凍干燥法中選用的脂質(zhì)體凍干保護(hù)劑是濃度為10％～15％的甘露醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米脂質(zhì)體凍干粉，其特征在于，所述的步驟A中，高壓均 質(zhì)法中用的均質(zhì)機(jī)的操作條件如下壓力200、400、600、800bar各循環(huán)均質(zhì)15min ；溫度 4 7°C。
3.—種溫敏型辛夷納米凝膠，其特征在于，所述的溫敏型辛夷納米凝膠是由以下方法 制備得到A，取辛夷揮發(fā)油，用高壓均質(zhì)法制備得到辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體； B，將步驟A得到的辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體用冷凍干燥法制備辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體 凍干粉；C，配制P188-F127溶液，將P188-F127溶液溶于水中，加入辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體凍干 粉，得到溫敏型辛夷納米凝膠；所述的步驟B中冷凍干燥法中選用的脂質(zhì)體凍干保護(hù)劑是濃度為10% 15%的甘露醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的溫敏型辛夷納米凝膠，其特征在于，所述的步驟C中所述的 P188-F127溶液是在22. 46% F127+2. 6% P188濃度下配出的凝膠溶液。
5.一種辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體凍干粉制備方法，包括以下步驟 A，取辛夷揮發(fā)油，用高壓均質(zhì)法制備得到辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體；B，將步驟A得到的辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體用冷凍干燥法制備辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體 凍干粉；所述的步驟A中，高壓均質(zhì)法中用的均質(zhì)機(jī)的操作條件如下壓力200、400、600、 800bar各循環(huán)均質(zhì)15min ；溫度4 7。C,所述的步驟B中冷凍干燥法中選用的脂質(zhì)體凍干保護(hù)劑是濃度為10% 15%的甘露醇。
6.一種溫敏型辛夷納米凝膠制備方法，包括以下步驟A，取辛夷揮發(fā)油，用高壓均質(zhì)法制備得到辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體； B，將步驟A得到的辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體用冷凍干燥法制備辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體 凍干粉；C，配制P188-F127溶液，將P188-F127溶液溶于水中，加入辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體凍干 粉，得到溫敏型辛夷納米凝膠；所述的步驟A中，高壓均質(zhì)法中用的均質(zhì)機(jī)的操作條件如下壓力200、400、600、 800bar各循環(huán)均質(zhì)15min ；溫度4 7。C,所述的步驟B中冷凍干燥法中選用的脂質(zhì)體凍干保護(hù)劑是濃度為10% 15%的甘露醇，所述的步驟C中所述的P188-F127溶液是在22. 46% F127+2 . 6% P188濃度下配出的凝膠溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體凍干粉，所述的納米脂質(zhì)體凍干粉是由以下方法制備得到A，取辛夷揮發(fā)油，用高壓均質(zhì)法制備得到辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體B，將步驟A得到的辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體用冷凍干燥法制備辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體凍干粉；所述的步驟B中冷凍干燥法中選用的脂質(zhì)體凍干保護(hù)劑是濃度為10％～15％的甘露醇。本發(fā)明還提供了溫敏型辛夷納米凝膠和制備方法。本發(fā)明創(chuàng)新性的采用冷凍干燥技術(shù)，將辛夷揮發(fā)油納米脂質(zhì)體制成凍干粉，以提高藥物的穩(wěn)定性，便于脂質(zhì)體大量制備和長(zhǎng)期保存。
文檔編號(hào)A61K9/19GK101849991SQ20101020044
公開(kāi)日2010年10月6日 申請(qǐng)日期2010年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月12日
發(fā)明者吳敏, 王靖, 馬博, 馬碧濤 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院