專利名稱：一種含有艾塞那肽的多囊脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于緩釋制劑領(lǐng)域，特別涉及一種含有艾塞那肽的多囊脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟(IDF)最新統(tǒng)計，2009年全球糖尿病患病人數(shù)超過2. 85億人， 每年新增糖尿病患者700萬人，預(yù)計在未來的20年內(nèi)，全球糖尿病患者人數(shù)將達(dá)到4. 4億。 我國糖尿病患者人數(shù)排世界第二位，僅次于印度，目前我國共有2型糖尿病患者約7000萬， 城市人口 2型糖尿病患病率平均為4.8%，但并發(fā)癥控制率不足20%。因此，研究開發(fā)理想的糖尿病臨床用藥非常重要。艾塞那肽(代號AC-2993，化學(xué)名exenatide)最先從美國大毒蜥進食時分泌的唾液中分離出來的，為Exendin-4類激動劑，具有腸促胰島素模擬作用的人工合成肽類物質(zhì)。艾塞那肽是一種含有39個氨基酸的多肽，與人的胰高血糖素(glucagon)有48% 的同源性，與人的胰高血糖素樣肽-Kglucagon-like ρ印tide-1，GLP-1)有53%的同源性，于GLP-I受體有高度親和性并具有相似的生理功能。艾塞那肽的氨基酸序列為His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-G Iu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-IIe-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-A Ia-Pro-Pro-Pro-Ser-NH2,分子量為4186. 6道爾頓，在水、甲醇或乙醇中易溶，比旋度為-61° -68°。艾塞那肽的藥理作用包括(1)顯著增加葡萄糖依賴性促胰島素分泌，在血糖水平正?；虻脱菚r并不刺激胰島素的分泌，僅在血糖水平較高時刺激胰島素分泌；(2)抑制II型糖尿病患者胰高血糖素的分泌，在高血糖時降低血清中胰高血糖素濃度，但不減弱正常胰高血糖素對低血糖的反應(yīng)；(3)抑制餐后胃腸動力及分泌功能，延遲胃排空從而有利于餐后血糖的控制；(4)降低食欲，減少食物的攝入；( 刺激β細(xì)胞增生或胚胎胰島素成熟分化，抑制β細(xì)胞凋亡從而增加β細(xì)胞的數(shù)量；(6)恢復(fù)II型糖尿病患者喪失的胰島素第一時相反應(yīng)，顯著增加第一時相劑第二時相胰島素的分泌，改善II型糖尿病患者的空腹及餐后血糖水平。由于艾塞那肽注射液臨床給藥方案是每次給藥5 10 μ g，每天給藥兩次，使用周期長達(dá)半年以上，患者的順應(yīng)性差，因此開發(fā)其緩釋制劑是臨床急需的。脂質(zhì)體是一種定向藥物載體，屬于靶向給藥系統(tǒng)的一種新劑型。它可以將藥物粉末或溶液包埋在直徑為納米級的微粒中，這種微粒具有類細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進入人體內(nèi)主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬而激活機體的自身免疫功能，并改變被包封藥物的體內(nèi)分布，使藥物主要在肝、脾、肺和骨髓等組織器官中積蓄，從而提高藥物的治療指數(shù)，減少藥物的治療劑量和降低藥物的毒性。多囊脂質(zhì)體是基于脂質(zhì)體的緩釋藥物傳遞系統(tǒng)，被用于局部、區(qū)域和系統(tǒng)藥物傳遞。多囊脂質(zhì)體還被稱為多泡脂質(zhì)體或多室脂質(zhì)體，是含有多個非同心腔室的脂質(zhì)體顆粒， 形狀類似于脂質(zhì)體顆粒，這種顆粒的結(jié)構(gòu)區(qū)別于含有多個同心腔室的多室脂質(zhì)體，又區(qū)別于只含有單個內(nèi)水相腔室的單室脂質(zhì)體。許多水溶性藥物可包封于多囊脂質(zhì)體中，通過動物鞘內(nèi)、皮下、腹腔和硬膜外給藥，人體腦室內(nèi)、鞘內(nèi)、皮下、硬膜外給藥都顯示出了緩釋作用。Kim. S等人于1983年最先發(fā)現(xiàn)并研究了多囊脂質(zhì)體。他們通過復(fù)乳溶劑蒸發(fā)法， 以磷脂、膽固醇和中性脂質(zhì)為成膜材料，以氯仿和乙醚為有機溶劑，成功制備了多囊脂質(zhì)體，并憑借光學(xué)顯微鏡和電鏡觀察了多囊脂質(zhì)體的微觀結(jié)構(gòu)。在制備過程中，首先將藥物溶液和脂質(zhì)相在機械作用力下形成油包水型乳液，再將此乳液與外水相混合制得復(fù)乳，然后氮氣吹干除去有機溶劑而制得多囊脂質(zhì)體混懸液。多囊脂質(zhì)體為非同心圓的拓樸結(jié)構(gòu)，使其在注射部位形成藥物“儲庫”，隨著磷脂雙分子層的不斷代謝，包封在囊泡中的藥物逐步釋放至血液或病變部位，發(fā)揮很好的延遲釋放作用。通過調(diào)節(jié)制備過程中的參數(shù)和處方比例，可以輕松控制藥物釋放時間在幾天到數(shù)周之間。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題就是針對現(xiàn)有的艾塞那肽制劑存在釋放速度快， 給藥頻繁，患者的順應(yīng)性差的缺陷，提供一種艾塞那肽的新制劑，其釋放艾塞那肽緩慢，具有更佳的降血糖效果，可大大減少減少用藥次數(shù)和頻率。本發(fā)明還提供其制備方法。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之一是一種含有艾塞那肽的多囊脂質(zhì)體，其中包括下列重量份的各組分艾塞那肽1份、脂質(zhì)成分0. 1 200份、PH調(diào)節(jié)劑 0. 2 10份、滲透壓調(diào)節(jié)劑13 590份和輔助乳化劑5 150份，其中所述的脂質(zhì)成分包括重量比為0.4 1 19 1的中性磷脂和膽固醇，以及在脂質(zhì)成分中占摩爾百分比為 1 9%的三酸甘油酯。根據(jù)本發(fā)明，所述的含有艾塞那肽的多囊脂質(zhì)體中，藥脂比較佳的是1 0. 1 1 200，更佳的為1 5 1 40。本發(fā)明中，所述的“藥脂比”是指藥物活性成分艾塞那肽與多囊脂質(zhì)體中的脂質(zhì)成分的質(zhì)量比。本發(fā)明中，所述的脂質(zhì)成份中包括中性磷脂。中性磷脂是指處于中性PH時整個分子的凈電荷為零的磷脂。所述的中性磷脂可以是天然或者合成的中性磷脂，較佳的選自卵磷脂、大豆磷脂、腦磷脂、鞘磷脂、氫化大豆磷脂、磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)、磷脂酰乙醇胺和二油酰磷脂酰乙醇胺 (DOPE)中的一種或幾種。本發(fā)明中，所述的脂質(zhì)成份中包括膽固醇。中性磷脂及膽固醇為成膜材料。膽固醇為膜調(diào)節(jié)劑，可通過改變磷脂相轉(zhuǎn)變溫度調(diào)節(jié)脂質(zhì)體膜層的流動性，從而改善脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，減小貯存過程中因脂質(zhì)體膜層相變引起的藥物滲漏。膽固醇用量過小，其調(diào)節(jié)作用甚微，當(dāng)用量過大時難以形成脂質(zhì)體的磷脂雙分子層，研究表明當(dāng)中性磷脂與膽固醇重量比在0.4 1 19 1之間，更佳的在2 1 8 1之間時形成的脂質(zhì)體較穩(wěn)定。本發(fā)明中，所述的脂質(zhì)成份中包括三酸甘油酯。三酸甘油酯是形成多囊脂質(zhì)體拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的決定性因素之一。其在脂質(zhì)體中主要起支架作用，分布于非同心水性腔室磷脂雙分子層節(jié)點處，支撐起多囊脂質(zhì)體的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。所述的三酸甘油酯可以是天然或者合成的三酸甘油酯。天然三酸甘油酯較佳的如各種植物油、動物油。本發(fā)明中所述的三酸甘油酯更佳的選自三辛脂、三丁脂、大豆油、豬油脂和牛油脂中的一種或幾種。三酸甘油酯在脂質(zhì)成分中占摩爾百分比為1 9%，更佳的是4 8%。本發(fā)明中，所述的脂質(zhì)成分中較佳的還可以含有負(fù)電荷磷脂或者脂肪胺。負(fù)電荷磷脂是指處于中性PH時整個分子帶負(fù)電荷的磷脂。脂肪胺則帶正電荷。這些帶電荷的成分可有效調(diào)節(jié)脂質(zhì)體表面電荷，使脂質(zhì)體帶負(fù)電或正電，以克服中性磷脂由于范德華力所導(dǎo)致的凝聚問題，從而增強制劑的穩(wěn)定性。本發(fā)明所述的負(fù)電荷磷脂較佳的選自磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸(DPPS)、二硬脂酰磷脂酰絲氨酸(DSPS)、磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、磷脂酰肌醇、二棕櫚酰磷脂酰肌醇 (DPPZ)、二硬脂酰磷脂酰肌醇(DSPZ)、磷脂酸二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)和二硬脂酰磷脂酸 (DSPA)中的一種或幾種。而所述的脂肪胺較佳的為硬脂胺(SA)。所述的負(fù)電荷磷脂或者脂肪胺與中性脂質(zhì)的重量比為1 1 1 28，較佳的為1 2 1 10。本發(fā)明中，所述的艾塞那肽多囊脂質(zhì)體包含滲透壓調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明中，所述的“滲透壓調(diào)節(jié)劑”是指用于調(diào)節(jié)溶液滲透壓的物質(zhì)，可為本領(lǐng)域現(xiàn)有技術(shù)中常用的物質(zhì)，如海藻糖、琥珀酸鹽、環(huán)糊精、半乳糖、甘露醇、麥芽糖、甘露糖醇、檸檬酸鹽、山梨醇、葡萄糖和蔗糖等，較佳的選自葡萄糖、蔗糖、甘露醇和氯化鈉中的一種或幾種。 本發(fā)明中，所述的艾塞那肽多囊脂質(zhì)體包含pH調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明中，所述的“pH調(diào)節(jié)劑”是指用于調(diào)劑溶液PH的物質(zhì)，可為本領(lǐng)域現(xiàn)有技術(shù)中常用的物質(zhì)，如檸檬酸、醋酸、磷酸和枸櫞酸中的一種或幾種。本發(fā)明中，所述的艾塞那肽多囊脂質(zhì)體包含輔助乳化劑。所述的“輔助乳化劑”是指用于調(diào)節(jié)乳化劑HLB值的物質(zhì)，可以是本領(lǐng)域現(xiàn)有技術(shù)中常用的輔助乳化劑，較佳的可以選自賴氨酸、甘氨酸、組氨酸、聚乙烯醇(PVA)、右旋糖酐、羥甲基淀粉、羥乙基淀粉、明膠、 海藻酸鈉和聚乙烯吡咯烷酮中的一種或幾種。輔助乳化劑可增加產(chǎn)品的穩(wěn)定性。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之二是一種艾塞納肽多囊脂質(zhì)體的制備方法，其包括下列步驟①將脂質(zhì)成分溶于有機溶劑中，以作為脂質(zhì)相，其中該脂質(zhì)成分包括重量比為 0.4 1 19 1的中性磷脂和膽固醇，以及在脂質(zhì)成分中占摩爾百分比為1 9%的三酸甘油酯，該中性磷脂在脂質(zhì)相中的濃度為5 150mg/ml ；②將艾塞納肽溶于含pH調(diào)節(jié)劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑的水溶液中，以作為內(nèi)水相；③將所述內(nèi)水相加入脂質(zhì)相上層，混合乳化制得油包水型(W/0)初乳；④將外水相加入所述油包水型初乳的上層，攪拌形成水包油包水(W/0/W)型復(fù)乳，其中外水相中含有輔助乳化劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑；⑤除去步驟④得到的復(fù)乳中的有機溶劑而制得艾塞納肽多囊脂質(zhì)體初品。⑥用等滲溶液洗滌所述艾塞那肽多囊脂質(zhì)體初品，再分散于等滲溶液中，制得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體成品。本發(fā)明中，步驟①為將脂質(zhì)成分溶于有機溶劑中，以作為脂質(zhì)相，其中該脂質(zhì)成分包括重量比為0.4 1 19 1的中性磷脂和膽固醇，以及在脂質(zhì)成分中占摩爾百分比為 1 9%的三酸甘油酯，該中性磷脂在脂質(zhì)相中的濃度為5 150mg/ml。其中，所述的有機溶劑可為本領(lǐng)域常規(guī)的用于溶解脂質(zhì)成分的有機溶劑，通常選自醚、烴、鹵代烴、鹵代醚和酯，較佳的選自乙醚、氯仿、二氯甲烷、環(huán)己烷、氯代甲醚和乙酸乙酯中的一種或幾種。所述的中性磷脂或三酸甘油酯的具體種類均如前所述。本發(fā)明中，步驟②為將艾塞納肽溶于含PH調(diào)節(jié)劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑的水溶液中，以作為內(nèi)水相。艾塞那肽的用量較佳的為0. 05 20mg/ml，更佳的為0. 5 15mg/ml。所述的滲透壓調(diào)節(jié)劑濃度為> 0g/100mL，且彡6g/100mL。pH調(diào)節(jié)劑的濃度為10 120mM，較佳的為10 50mM。維持內(nèi)水相的pH為2 5，更佳為3 4. 5。所述的滲透壓調(diào)節(jié)劑具體種類均如前所述。本發(fā)明中，步驟③為將等體積的所述內(nèi)水相加入脂質(zhì)相上層，混合乳化制得油包水型(W/0)初乳。該制備油包水(W/0)型初乳的方法為本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，采用選自機械攪拌、超聲和噴霧干燥的方法進行乳化。其中所述的內(nèi)水相和脂質(zhì)相的體積比較佳的為 1 1 1 4，更佳的為1 1 1 2。本發(fā)明中，步驟④為將外水相加入所述油包水型初乳的上層，攪拌形成水包油包水(W/0/W)型復(fù)乳，其中外水相中含有輔助乳化劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑。該所述的制備水包油包水(W/0/W)型復(fù)乳的方法為本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，采用選自機械攪拌、超聲和噴霧干燥的方法進行乳化。所述的油包水型初乳和外水相的體積比較佳的為1 1 1 10，更佳的為 1 3 1 5。所述的輔助乳化劑的濃度為0.5% 5% (Wt)，較佳的為1^-3% (wt)。 滲透壓調(diào)節(jié)劑的濃度為> 0g/100mL，且彡6g/100mL，較佳的為3. 2 6g/100mL。所述的輔助乳化劑或滲透壓調(diào)節(jié)劑具體種類均如前所述。本發(fā)明中，步驟⑤為除去步驟④得到的復(fù)乳中的有機溶劑而制得艾塞納肽多囊脂質(zhì)體初品。其中，除去有機溶劑的方法為本領(lǐng)域的常規(guī)的溶劑去除法，較佳的為氣流吹干、 旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)或噴霧干燥，其中氣流吹干法所用氣體可選自氮氣、氦氣、氬氣、氧氣、氫氣和
二氧化碳。本發(fā)明中，步驟⑥為用等滲溶液洗滌所述艾塞那肽多囊脂質(zhì)體初品，再分散于等滲溶液中，制得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體成品。其中，用等滲溶液洗滌的方法可以是本領(lǐng)域常規(guī)的方法，可用等滲溶液作為洗滌溶液，采用離心、透析或膜濾的方法去除其中的游離藥物和輔助乳化劑，然后用等滲溶液懸浮。本發(fā)明中，所述的“等滲溶液”是指其滲透壓等于血漿滲透壓的溶液，較佳的為生理鹽水。本發(fā)明的艾塞那肽多囊脂質(zhì)體的給藥途徑與常規(guī)的脂質(zhì)體一樣，如肌肉注射、皮下注射、硬膜外注射或鞘內(nèi)注射等。根據(jù)本發(fā)明，所說的藥物活性成分艾塞那肽為化合物艾塞那肽。本發(fā)明中，上述優(yōu)選條件在符合本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實例。本發(fā)明除特別說明之外，所用的百分比都是質(zhì)量百分比。本發(fā)明所用的原料或試劑除特別說明之外，均市售可得。一切以本發(fā)明為基礎(chǔ)的艾塞那肽多囊脂質(zhì)體以及它們的制備方法都在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果如下本發(fā)明將治療II型糖尿病的藥物艾塞那肽制備成艾塞那肽多囊脂質(zhì)體。利用藥物活性成分艾塞那肽易溶于水的性質(zhì)，直接將其
7溶解于內(nèi)水相中，采用復(fù)乳溶劑蒸發(fā)法進行制備，原料利用率高，載藥濃度高。本發(fā)明的艾塞那肽多囊脂質(zhì)體藥物包封率高，穩(wěn)定性好，在大鼠體內(nèi)藥效學(xué)試驗中顯示具有與普通注射劑相當(dāng)?shù)闹委熜Ч⑶以隗w內(nèi)、體外試驗中均顯示有良好的緩釋作用，具有更佳的降血糖效果。從而減少用藥次數(shù)和頻率，減少不良反應(yīng)，提高病人的順應(yīng)性。


以下結(jié)合

本發(fā)明的特征和有益效果。圖1是本發(fā)明艾塞那肽多囊脂質(zhì)體藥效學(xué)實驗數(shù)據(jù)。圖2是本發(fā)明艾塞那肽多囊脂質(zhì)體體外釋放實驗數(shù)據(jù)。
具體實施例方式下面用實施例來進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。實施例中由摩爾比換算得到的物料的重量投料，由于磷脂多為混合物，故在計算時取其大約分子量。涉及到的物質(zhì)的分子量如下卵磷脂750、氫化大豆磷脂790、磷脂酸 424. 5、硬脂胺沈9. 5、膽固醇387、三油酸甘油酯885、三辛酸甘油脂470、三丁酸甘油脂302、 磷脂酰甘油740、二棕櫚酰磷脂酰甘油745、二油酰磷脂酰膽堿786、二油酰磷脂酰乙醇胺 744、磷脂酰肌醇859、二棕櫚酸酰磷脂酰絲氨酸733、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿678、磷脂酰乙醇胺744，鞘磷脂731。實施例中所用主要試劑的生產(chǎn)廠商如下各種磷脂，Degussa ；檸檬酸，中國醫(yī)藥集團上海化學(xué)試劑公司；膽固醇，國藥集團化學(xué)試劑有限公司；三酸甘油脂，廣州化學(xué)試劑廠。實施例中所用的艾塞那肽樣品購買于上海肽士生物科技有限公司。藥物包封率測定方法為精密量取脂質(zhì)體混懸液ImL至5mL量瓶中，加生理鹽水至刻度，搖勻，得稀釋液。精密量取稀釋液ImL至5mL量瓶中，加Triton X-100 (10wt% )至刻度，超聲15分鐘，測定混懸液中的艾塞那肽的濃度；另取稀釋液適量，400 X g離心5分鐘分離上清液，精密量取上清液ImL至5mL量瓶中，加TritonX-100 (IOwt % )至刻度，超聲15分鐘，測定游離的艾塞那肽的濃度。按下列公式計算包封率包封率(％ )=(混懸液中艾塞那肽總量-游離艾塞那肽量)/混懸液中艾塞那肽總量* 100。Zeta電位測定方法為取多囊脂質(zhì)體混懸液適量，加生理鹽水稀釋，用ZW380型粒度儀(PCS，光子相關(guān)光譜技術(shù))測定。實施例1步驟1 在干凈的玻璃容器中加入ImL含有19. 8mM(14. 85mg)卵磷月旨， 4. 2mM(3. 13mg) 二棕櫚酰磷脂酰甘油，30mM (11. 61mg)膽固醇和3. 75mM(3. 32mg)三油酸甘油酯的氯仿溶液。該溶液稱為脂質(zhì)相。步驟2 將溶解有艾塞那肽lmg，20mM(4. 20mg)檸檬酸和2. 5% (25mg)蔗糖的水溶液的內(nèi)水相ImL加入上述盛有脂質(zhì)相的玻璃容器中，用高速剪切機以10，OOOrpm的速度攪拌10分鐘，得W/0型初乳。步驟3 將5mL含有5. 4% (w/v) (270mg)葡萄糖和1 % (50mg)PVA的外水相溶液置于初乳層上，然后以10，OOOrpm的速度混合10秒鐘，得W/0/W型復(fù)乳。步驟4 將復(fù)乳轉(zhuǎn)移至盛有5mL含有5. 4% (w/v) (270mg)葡萄糖和(50mg)PVA 的250mL錐形瓶中，37°C恒溫水浴，使8L/min的氮氣流通過錐形瓶中的懸液，15分鐘后緩慢揮干氯仿，得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體初品。步驟5 向錐形瓶內(nèi)加入5倍量的生理鹽水混合均勻，然后600Xg離心10分鐘。 棄上清液，并將沉淀物再分散于5mL生理鹽水中，再離心沉淀，如此循環(huán)操作3次，富集沉淀，得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體成品。測得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體的粒徑為5 50 μ m ；包封率為89. 56%;zeta電位為負(fù) 38.6mV0實施例2步驟1 在干凈的玻璃容器中加入ImL含有5mM (3. 96mg)氫化大豆磷脂， 0. 5mM(0. 38mg) 二棕櫚酸磷脂酰絲氨酸，IOmM(3. 87mg)膽固醇和0. 155mM(0. 073mg)三辛酸甘油酯的氯仿-乙醚(體積比1 1)溶液。該溶液稱為脂質(zhì)相。步驟2 將溶解有艾塞那肽5mg，20mM(2. IOmg)檸檬酸和6% (30mg)蔗糖的水溶液的內(nèi)水相0. 5mL加入上述盛有脂質(zhì)相的玻璃容器中，用高速剪切機以10，OOOrpm的速度攪拌10分鐘，得W/0型初乳。步驟3 將7. 5mL含有5. 4% (w/v) (405mg)葡萄糖和1 % (75mg)明膠的外水相溶液置于初乳層上，然后以4500rpm的速度混合40秒鐘，得W/0/W型復(fù)乳。步驟4 將復(fù)乳轉(zhuǎn)移至盛有9mL含有5. 4% (w/v) (486mg)葡萄糖和1 % (90mg)明膠的250mL錐形瓶中，37°C恒溫水浴，使8L/min的氮氣流通過錐形瓶中的懸液，15分鐘后緩慢揮干有機溶劑，得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體初品。步驟5:同實施例1。測得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體的粒徑為5 50 μ m ；包封率為75. 32%;zeta電位為負(fù) 44mV0實施例3步驟1 在干凈的玻璃容器中加入ImL含有IOOmM(75mg)卵磷脂，20mM(8. 49mg)磷脂酸，10mM(3.87mg)膽固醇和13mM(ll. 51mg)三油酸甘油酯的二氯甲烷溶液。該溶液稱為脂質(zhì)相。步驟2 將溶解有艾塞那肽2. 5mg, 100mM(21. Olmg)檸檬酸的水溶液的內(nèi)水相ImL 加入上述盛有脂質(zhì)相的玻璃容器中，用高速剪切機以10，OOOrpm的速度攪拌10分鐘，得W/ O型初乳。步驟3 將20mL含有6% (w/v) (1200mg)葡萄糖和1 % (200mg)羥甲基淀粉的外水相溶液置于初乳層上，然后以10，OOOrpm的速度混合10秒鐘，得W/0/W型復(fù)乳。步驟4 將復(fù)乳轉(zhuǎn)移至盛有5mL含有6 % (w/v) (300mg)葡萄糖和1 % (50mg)羥甲基淀粉的250mL錐形瓶中，37°C恒溫水浴，使8L/min的氮氣流通過錐形瓶中的懸液，15分鐘后緩慢揮干二氯甲烷，得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體初品。步驟5:同實施例1。
測得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體的粒徑為5 50 μ m ；包封率為85. 3% ；zeta電位為負(fù) 5anV。實施例4步驟1 在干凈的玻璃容器中加入0. 5mL含有25mM(9.8;3mg) 二棕櫚酰磷脂酰膽堿，10mM(8. 59mg)磷脂酰肌醇，5mM(0. 97mg)膽固醇、1.2mM(0. 53mg)三油酸甘油酯和 1. 2mM(0. 28mg)三辛酸甘油酯的氯仿-乙醚(體積比1 1)溶液。該溶液稱為脂質(zhì)相。步驟2 將溶解有艾塞那肽10mg，20mM(2. IOmg)檸檬酸和3. 2% (16mg)蔗糖的水溶液的內(nèi)水相0. 5mL加入上述盛有脂質(zhì)相的玻璃容器中，用高速剪切機以10，OOOrpm的速度攪拌10分鐘，得W/0型初乳。步驟3 將2. 5mL含有5.4% (w/v) (135mg)葡萄糖和5% (125mg)羥乙基淀粉的外水相溶液置于初乳層上，然后以7500rpm的速度混合10秒鐘，得W/0/W型復(fù)乳。步驟4 將復(fù)乳轉(zhuǎn)移至盛有2. 5mL含有8% (w/v) (200mg)葡萄糖和5% (125mg) 羥乙基淀粉的250mL錐形瓶中，37°C恒溫水浴，使8L/min的氮氣流通過錐形瓶中的懸液，15 分鐘后緩慢揮干有機溶劑，得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體初品。步驟5:同實施例1。測得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體的粒徑為5 50 μ m ；包封率為91. 95%;zeta電位為負(fù) 51. 79mV。實施例5步驟1 在干凈的玻璃容器中加入2mL含有50mM(75mg)大豆磷脂，5mM(2. 7mg)硬脂胺，50mM(38.7mg)膽固醇和8. 4mM(7. 9mg)三辛酸甘油酯的氯仿溶液。該溶液稱為脂質(zhì)相。步驟2 將溶解有艾塞那肽5mg，50mM(5. 20mg)檸檬酸和1 % (5mg)蔗糖的水溶液的內(nèi)水相0. 5mL加入上述盛有脂質(zhì)相的玻璃容器中，用高速剪切機以13，OOOrpm的速度攪拌10分鐘，得W/0型初乳。步驟3 將2. 5mL含有2. 5% (w/v) (62. 5mg)葡萄糖和3% (75mg)右旋糖酐的外水相溶液置于初乳層上，然后以7500rpm的速度混合10秒鐘，得W/0/W型復(fù)乳。步驟4 將復(fù)乳轉(zhuǎn)移至盛有20mL含有2. 5% (w/v) (500mg)葡萄糖和3% (600mg) 右旋糖酐的250mL錐形瓶中，37°C恒溫水浴，使8L/min的氮氣流通過錐形瓶中的懸液，15分鐘后緩慢揮干氯仿，得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體初品。步驟5:同實施例1。測得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體的粒徑為5 50 μ m ；包封率為90. 4% ；zeta電位為負(fù) 38. ImV0實施例6步驟1 在干凈的玻璃容器中加入0. 5mL含有5mM(l. 97mg) 二油酰磷脂酰膽堿， ImM(0. 73mg) 二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸，0. 625mM(0. 12mg)膽固醇和0. 27mM(0. 16mg)大豆油的氯仿-乙醚(體積比1 1)溶液。該溶液稱為脂質(zhì)相。步驟2 將溶解有艾塞那肽lmg，10mM(l. 05mg)檸檬酸和3. 2% (16mg)蔗糖的水溶液的內(nèi)水相0. 5mL加入上述盛有脂質(zhì)相的玻璃容器中，用高速剪切機以13，OOOrpm的速度攪拌10分鐘，得W/0型初乳。
步驟3 將5mL含有3. 5% (w/v) (175mg)葡萄糖和3% (150mg)聚乙烯吡咯烷酮的外水相溶液置于初乳層上，然后以7500rpm的速度混合10秒鐘，得W/0/W型復(fù)乳。步驟4 將復(fù)乳轉(zhuǎn)移至盛有5mL含有3. 5% (w/v) (175mg)葡萄糖和3% (150mg)聚乙烯吡咯烷酮的250mL錐形瓶中，37°C恒溫水浴，使8L/min的氮氣流通過錐形瓶中的懸液， 15分鐘后緩慢揮干有機溶劑，得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體初品。步驟5:同實施例1。測得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體的粒徑為5 50 μ m ；包封率為91. 63%;zeta電位為負(fù) 29.4mV0實施例7步驟1 在干凈的玻璃容器中加入ImL含有20mM(15mg)卵磷脂，20mM(7. 74mg)膽固醇和2.4mM(1.45mg)三丁酸甘油酯的氯仿溶液。該溶液稱為脂質(zhì)相。步驟2 將溶解有艾塞那肽5mg，50mM(10. 51mg)檸檬酸和2. 5% (25mg)蔗糖的水溶液的內(nèi)水相ImL加入上述盛有脂質(zhì)相的玻璃容器中，用高速剪切機以10，OOOrpm的速度攪拌10分鐘，得W/0型初乳。步驟3 將5mL含有5. 4% (w/v) (270mg)葡萄糖和0. 5% (25mg)海藻酸鈉的外水相溶液置于初乳層上，然后以10，OOOrpm的速度混合10秒鐘，得W/0/W型復(fù)乳。步驟4 將復(fù)乳轉(zhuǎn)移至盛有5mL含有5.4% (w/v) (270mg)葡萄糖和0. 5% (25mg) 海藻酸鈉的250mL錐形瓶中，37°C恒溫水浴，使8L/min的氮氣流通過錐形瓶中的懸液，15分鐘后緩慢揮干氯仿，得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體初品。步驟5:同實施例1。測得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體的粒徑為5 50 μ m ；包封率為77. 24%;zeta電位為負(fù) 19mV。實施例8步驟1 在干凈的玻璃容器中加入ImL含有3mM(aiig) 二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿， 2mM(1.49mg)磷脂酰乙醇胺，9mM(7. 9mg)膽固醇和lmM(0. 89mg)三油酸甘油酯的環(huán)己烷溶液。該溶液稱為脂質(zhì)相。步驟2 將溶解有艾塞那肽0. 5mg, 120mM鹽酸和2. 5% (25mg)蔗糖的水溶液的內(nèi)水相ImL加入上述盛有脂質(zhì)相的玻璃容器中，用高速剪切機以10，OOOrpm的速度攪拌10分鐘，得W/0型初乳。步驟3 將5mL含有5. 4% (w/v) (270mg)葡萄糖和40mM甘氨酸的外水相溶液置于初乳層上，然后以10，OOOrpm的速度混合10秒鐘，得W/0/W型復(fù)乳。步驟4 將復(fù)乳轉(zhuǎn)移至盛有5mL含有5. 4% (w/v) (270mg)葡萄糖和40mM甘氨酸的 250mL錐形瓶中，37°C恒溫水浴，使8L/min的氮氣流通過錐形瓶中的懸液，15分鐘后緩慢揮干環(huán)己烷，得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體初品。步驟5:同實施例1。測得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體的粒徑為5 50 μ m ；包封率為54. 31%;zeta電位為負(fù) 39.7mV0實施例9步驟1 在干凈的玻璃容器中加入ImL含有45mM(33. 5mg) 二油酰磷脂酰乙醇胺，40mM(30mg)腦磷脂，9mM(3. 5mg)膽固醇和5mM(4. ^ig)三油酸甘油酯的氯代甲醚溶液。該溶液稱為脂質(zhì)相。步驟2 將溶解有艾塞那肽lmg，50mM(10. 4mg)檸檬酸和3. 2% (32mg)蔗糖的水溶液的內(nèi)水相ImL加入上述盛有脂質(zhì)相的玻璃容器中，用高速剪切機以10，OOOrpm的速度攪拌10分鐘，得W/0型初乳。步驟3 將5mL含有5. 4% (w/v) (270mg)葡萄糖和40mM組氨酸的外水相溶液置于初乳層上，然后以10，OOOrpm的速度混合10秒鐘，得W/0/W型復(fù)乳。步驟4 將復(fù)乳轉(zhuǎn)移至盛有5mL含有5. 4% (w/v) (270mg)葡萄糖和40mM組氨酸的 250mL錐形瓶中，37°C恒溫水浴，使8L/min的氮氣流通過錐形瓶中的懸液，15分鐘后緩慢揮干氯代甲醚，得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體初品。步驟5:同實施例1。測得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體的粒徑為5 50 μ m ；包封率為38. 99%;zeta電位為負(fù) 45mV。實施例10步驟1 在干凈的玻璃容器中加入ImL含有20mM(14. 6mg)鞘磷脂，IOmM(7. 4mg)磷脂酰甘油，50mM(19.;3mg)膽固醇和2mM(l. 77mg)三油酸甘油酯的乙酸乙酯溶液。該溶液稱為脂質(zhì)相。步驟2 將溶解有艾塞那肽2. 5mg,20mM(4. 2mg)檸檬酸和2. 5% (25mg)蔗糖的水溶液的內(nèi)水相ImL加入上述盛有脂質(zhì)相的玻璃容器中，用高速剪切機以10，OOOrpm的速度攪拌10分鐘，得W/0型初乳。步驟3 將5mL含有5. 4% (w/v) (270mg)葡萄糖和40mM賴氨酸的外水相溶液置于初乳層上，然后以10，OOOrpm的速度混合10秒鐘，得W/0/W型復(fù)乳。步驟4 將復(fù)乳轉(zhuǎn)移至盛有5mL含有5. 4% (w/v) (270mg)葡萄糖和40mM賴氨酸的 250mL錐形瓶中，37°C恒溫水浴，使8L/min的氮氣流通過錐形瓶中的懸液，15分鐘后緩慢揮干乙酸乙酯，得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體初品。步驟5:同實施例1。測得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體的粒徑為5 50 μ m ；包封率為12. 57%;zeta電位為負(fù) 53. 2mV0實施例11步驟1 在干凈的玻璃容器中加入ImL含有IOmM (7. 3mg)氫化大豆磷脂， 2mM(l. 49mg) 二棕櫚酰磷脂酰甘油，ImM(0. 386mg)膽固醇和ImM(0. 885mg)三油酸甘油酯的氯仿溶液。該溶液稱為脂質(zhì)相。步驟2 將溶解有艾塞那肽0. 05mg, 20mM(4. 2mg)檸檬酸和2. 5% (25mg)蔗糖的水溶液的內(nèi)水相ImL加入上述盛有脂質(zhì)相的玻璃容器中，用高速剪切機以10，OOOrpm的速度攪拌10分鐘，得W/0型初乳。步驟3 將5mL含有5. 4% (w/v) (270mg)葡萄糖和1 % (50mg)羥乙基淀粉的外水相溶液置于初乳層上，然后以10，OOOrpm的速度混合10秒鐘，得W/0/W型復(fù)乳。步驟4 將復(fù)乳轉(zhuǎn)移至盛有5mL含有5. 4% (w/v) (270mg)葡萄糖和1 % (50mg)羥乙基淀粉的250mL錐形瓶中，37°C恒溫水浴，使8L/min的氮氣流通過錐形瓶中的懸液，15分鐘后緩慢揮干氯仿，得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體初品。步驟5:同實施例1。測得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體的粒徑為5 50 μ m ；包封率為98. 36%;zeta電位為負(fù) 55mV。實施例12步驟1 在干凈的玻璃容器中加入ImL含有IOmM (7. 3mg)氫化大豆磷脂， 2mM(l. 49mg) 二棕櫚酰磷脂酰甘油，ImM(0. 386mg)膽固醇和ImM(0. 885mg)三油酸甘油酯的氯仿溶液。該溶液稱為脂質(zhì)相。步驟2 將溶解有艾塞那肽10mg，20mM(4. 20mg)檸檬酸和2. 5% (25mg)蔗糖的水溶液的內(nèi)水相ImL加入上述盛有脂質(zhì)相的玻璃容器中，用高速剪切機以10，OOOrpm的速度攪拌10分鐘，得W/0型初乳。步驟3 將5mL含有5. 4% (w/v) (270mg)葡萄糖和2% (50mg)羥乙基淀粉的外水相溶液置于初乳層上，然后以10，OOOrpm的速度混合10秒鐘，得W/0/W型復(fù)乳。步驟4 將復(fù)乳轉(zhuǎn)移至盛有5mL含有5. 4% (w/v) (270mg)葡萄糖和2% (50mg)羥乙基淀粉的250mL錐形瓶中，37°C恒溫水浴，使8L/min的氮氣流通過錐形瓶中的懸液，15分鐘后緩慢揮干氯仿，得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體初品。步驟5 向錐形瓶內(nèi)加入5倍量的生理鹽水混合均勻，然后600Xg離心10分鐘。 棄上清液，并將沉淀物再分散于5mL生理鹽水中，再離心沉淀，如此循環(huán)操作3次，富集沉淀，得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體成品。測得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體的粒徑為5 50 μ m ；包封率為81. 64%;zeta電位為負(fù) 52. 5mV0下面通過試驗例來進一步說明本發(fā)明的有益效果。試驗實施例1艾塞那肽多囊脂質(zhì)體的藥效學(xué)實驗將體重180_200g的SD大鼠(雄)若干，隨機分成5組，每組8只。A組為空白對照組，B組為模型對照組，C組為艾塞那肽水溶液實驗組一，D組為艾塞那肽水溶液實驗組二，E組為艾塞那肽多囊脂質(zhì)體實驗組。A組、B組每天頸背部皮下注射生理鹽水2次，早晚各一次；C組每天頸背部皮下注射艾塞那肽水溶液2次，每次給藥劑量為3 μ g .Kg"1,早晚各一次；D組頸背部一次性皮下注射艾塞那肽水溶液，每次給藥劑量為3μ g · Kg—1，七天一次； E組頸背部一次性皮下注射艾塞那肽多囊脂質(zhì)體混懸液(實施例1制備)，每次給藥劑量為 42 μ g · Kg-1。B、C、D、E組從實驗開始的第1天每天腹腔注射STZ 30mg/kg(0. Imol · L-1檸檬酸緩沖液配置，PH4.幻，連續(xù)7天，注射STZ前小鼠禁食12h。實驗開始的第0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16 天早上在注射艾塞
那肽水溶液或艾塞納肽多囊脂質(zhì)體混懸液之前測定大鼠血糖，測量之前大鼠禁食12h，眼內(nèi)齜取血，用葡萄糖試劑盒進行血糖測定，觀察小鼠16d之內(nèi)的血糖變化情況。結(jié)果見圖1。試驗結(jié)果表明，每七天注射一次艾塞那肽多囊脂質(zhì)體的大鼠血糖濃度水平與每天注射兩次艾塞那肽溶液相當(dāng)，證明艾塞那肽多囊脂質(zhì)體具有顯著的緩釋效果， 可大大減少艾塞那肽的給藥次數(shù)，提高患者順應(yīng)性。試驗實施例2
取艾塞那肽多囊脂質(zhì)體混懸液(實施例1制備)，分別移取ImL (平行3份)于透析袋內(nèi)(5. 0cmX2. 5cm)，置于含有 0. 01mol/L 等滲 PBS 10、25、50mL 的廣口瓶內(nèi)，于 37°C、 100r/min的恒溫振蕩儀中進行釋放實驗，分別于0、1、6、18、24、48、72、96、120、168h取樣 lmL，補加等量等滲PBS。樣品用microBCA法測定。結(jié)果見圖2。試驗結(jié)果表明艾塞那肽多囊脂質(zhì)體在體外能持續(xù)釋放160個小時以上，緩釋效果明顯。
權(quán)利要求
1.一種含有艾塞那肽的多囊脂質(zhì)體，其特征在于，包括下列重量份的各組分艾塞那肽1份、脂質(zhì)成分0. 1 200份、PH調(diào)節(jié)劑0. 2 10份、滲透壓調(diào)節(jié)劑13 590份和輔助乳化劑5 150份，其中所述的脂質(zhì)成分包括重量比為0. 4 1 19 1的中性磷脂和膽固醇，以及在脂質(zhì)成分中占摩爾百分比為1 9%的三酸甘油酯。
2.如權(quán)利要求1所述的多囊脂質(zhì)體，其特征在于，所述的含有艾塞那肽的多囊脂質(zhì)體中藥脂比是1 5 1 40，所述的“藥脂比”是指藥物活性成分艾塞那肽與多囊脂質(zhì)體中的脂質(zhì)成分的質(zhì)量比。
3.如權(quán)利要求1所述的多囊脂質(zhì)體，其特征在于，所述的中性磷脂選自卵磷脂、大豆磷脂、腦磷脂、鞘磷脂、氫化大豆磷脂、磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺和二油酰磷脂酰乙醇胺中的一種或幾種。
4.如權(quán)利要求1所述的多囊脂質(zhì)體，其特征在于，所述的三酸甘油酯選自三辛脂、三丁脂、大豆油、豬油脂和牛油脂中的一種或幾種。
5.如權(quán)利要求1所述的多囊脂質(zhì)體，其特征在于，所述的脂質(zhì)成分中還含有負(fù)電荷磷脂或者脂肪胺。
6.如權(quán)利要求5所述的多囊脂質(zhì)體，其特征在于，所述的負(fù)電荷磷脂選自磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、二硬脂酰磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、二棕櫚酰磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰肌醇、磷脂酸二棕櫚酰磷脂酸和二硬脂酰磷脂酸中的一種或幾種，所述的脂肪胺為硬脂胺。
7.如權(quán)利要求1所述的多囊脂質(zhì)體，其特征在于，所述的輔助乳化劑選自賴氨酸、甘氨酸、組氨酸、聚乙烯醇、右旋糖酐、羥甲基淀粉、羥乙基淀粉、明膠、海藻酸鈉和聚乙烯吡咯烷酮中的一種或幾種。
8.—種權(quán)利要求1 7任一項所述的艾塞納肽多囊脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，包括下列步驟①將脂質(zhì)成分溶于有機溶劑中，以作為脂質(zhì)相，其中該脂質(zhì)成分包括重量比為 0.4 1 19 1的中性磷脂和膽固醇，以及在脂質(zhì)成分中占摩爾百分比為1 9%的三酸甘油酯，該中性磷脂在脂質(zhì)相中的濃度為5 150mg/ml ；②將艾塞納肽溶于含PH調(diào)節(jié)劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑的水溶液中，以作為內(nèi)水相；③將所述內(nèi)水相加入脂質(zhì)相上層，混合乳化制得油包水型(W/0)初乳；④將外水相加入所述油包水型初乳的上層，攪拌形成水包油包水(W/0/W)型復(fù)乳，其中外水相中含有輔助乳化劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑；⑤除去步驟④得到的復(fù)乳中的有機溶劑而制得艾塞納肽多囊脂質(zhì)體初品。⑥用等滲溶液洗滌所述艾塞那肽多囊脂質(zhì)體初品，再分散于等滲溶液中，制得艾塞那肽多囊脂質(zhì)體成品。
9.如權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，步驟①中，所述的有機溶劑選自乙醚、 氯仿、二氯甲烷、環(huán)己烷、氯代甲醚和乙酸乙酯中的一種或幾種；步驟②中，艾塞那肽的用量為0. 05 20mg/ml ；所述的滲透壓調(diào)節(jié)劑濃度為> 0g/100mL，且彡6g/100mL ；pH調(diào)節(jié)劑的濃度為10 120mM ；步驟③中，所述的內(nèi)水相和脂質(zhì)相的體積比為1 1 1 4;步驟④中，所述的油包水型初乳和外水相的體積比為1 1 1 10;所述的輔助乳化劑的濃度為0.5% 5% (wt)；滲透壓調(diào)節(jié)劑的濃度為> 0g/100mL，且彡6g/100mL。
10.如權(quán)利要求1 7所述的含有艾塞那肽的多囊脂質(zhì)體在制備治療或預(yù)防2型糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含有艾塞那肽的多囊脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用。其多囊脂質(zhì)體包括下列重量份的各組分艾塞那肽1份、脂質(zhì)成分0.1～200份、pH調(diào)節(jié)劑0.2～10份、滲透壓調(diào)節(jié)劑13～590份和輔助乳化劑5～150份，其中所述的脂質(zhì)成分包括重量比為0.4∶1～19∶1的中性磷脂和膽固醇，以及在脂質(zhì)成分中占摩爾百分比為1～9％的三酸甘油酯。本發(fā)明將治療II型糖尿病的藥物艾塞那肽制備成多囊脂質(zhì)體制劑。利用藥物活性成分艾塞那肽易溶于水的性質(zhì)，直接將其溶解于內(nèi)水相中，采用復(fù)乳溶劑蒸發(fā)法進行制備，原料利用率高，載藥濃度高，藥物包封率高，穩(wěn)定性好，緩釋良好，降血糖效果更佳，從而減少用藥次數(shù)和頻率，減少不良反應(yīng)，提高病人的順應(yīng)性。
文檔編號A61K47/28GK102274182SQ201010201228
公開日2011年12月14日 申請日期2010年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月13日
發(fā)明者徐成業(yè), 楊耀杰, 陸偉根, 陳亭亭 申請人:上?，F(xiàn)代藥物制劑工程研究中心有限公司