專利名稱：一種用于抗癌的鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種多肽制劑，具體涉及一種包載具有特異性抗癌活性的鏡像多肽的脂質(zhì)納米制劑。
背景技術(shù)：
癌癥依舊是威脅人類健康的頭號殺手，盡管基于放療和化療為主的常規(guī)治療手段在過去幾十年間取得了階段性的成果，但其有限的療效與嚴重的毒副作用使得探索癌癥發(fā)病機理、相關(guān)靶點及針對具體靶點與機制設(shè)計特異性藥物的努力一刻也未停止過。研究人員經(jīng)過長期的研究與積累，近年來逐步明確了多個與癌癥發(fā)生、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的通路，伴隨著多種癌相關(guān)重要靶點的發(fā)現(xiàn)，為特異性抗癌藥物的研發(fā)墊定了基礎(chǔ)。抑癌蛋白p53及其負性調(diào)節(jié)蛋白MDM2是近年來逐步闡明的一條癌發(fā)生通路，并為抗癌研究提供了一個嶄新的靶點。研究表明，P53基因是人類最重要的抑癌基因，由其表達產(chǎn)生的P53蛋白是其抑癌功能的具體執(zhí)行者。癌癥的發(fā)生與p53基因及蛋白有著十分重要的聯(lián)系。研究還表明，約有50%癌組織的細胞內(nèi)p53蛋白正常表達，但卻由于高表達MDM2 等負性調(diào)節(jié)蛋白，使得P53蛋白被結(jié)合而喪失了抑癌活性。如果能針對p53與MDM2蛋白的結(jié)合設(shè)計競爭性抑制劑，則能將被結(jié)合的P53重新釋放出來而發(fā)揮其功效，從而達到抗癌的目的，這對于高表達負性調(diào)節(jié)蛋白的惡性腫瘤如一些軟組織癌、腦膠質(zhì)瘤等的治療有著十分重要的意義。近年來，在有關(guān)癌相關(guān)靶點的研究中，逐步由主要研究癌細胞外各類因子和細胞膜上相關(guān)受體轉(zhuǎn)變?yōu)榘┘毎麅?nèi)潛在的靶分子，而這一研究變化趨勢的形成，主要得益于分子藥劑學的興起與發(fā)展。有觀點認為，任何針對癌細胞內(nèi)靶點的特異性藥物或分子實體，只有進入癌細胞內(nèi)才能真正發(fā)揮作用，而要達到此目標，首先需要有效地將藥物或分子實體遞送至癌組織部位。有研究通過鏡像噬菌體展示技術(shù)篩選得到一類針對MDM2的D型多肽(稱為鏡像多肽)，經(jīng)初步驗證，其能結(jié)合負性調(diào)節(jié)蛋白MDM2，推測其具有潛在抑制MDM2結(jié)合p53并恢復P53功能的抗癌活性；但所述的鏡像多肽本身不具有進細胞的功能，需要適宜的遞送系統(tǒng)將其帶入癌細胞內(nèi)發(fā)揮其抗癌活性。目前脂質(zhì)體已廣泛應用于化療藥物、基因藥物和診斷藥物(放射性、順磁等物質(zhì))等的制劑開發(fā)中，一定粒徑脂質(zhì)體具有良好的被動靶向性， 通過對脂質(zhì)材料的修飾，可賦予其長循環(huán)和主動靶向等功能。目前，采用脂質(zhì)體包載可以恢復p53活性的鏡像多肽，發(fā)揮其特異性抗癌功效的制劑研究未見國內(nèi)外類似報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于彌補現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種用于抗癌的鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑，具體涉及一種包載具有特異性抗癌活性的鏡像多肽的脂質(zhì)納米制劑。具體而言，本發(fā)明的用于抗癌的鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑，其特征在于，由尋靶材料、脂質(zhì)成分和鏡像多肽或其衍生物組成，所述脂質(zhì)成分制成脂質(zhì)體，包載并遞送所述的鏡像多肽或其衍生物，通過包載可恢復抑癌蛋白P53活性的鏡像多肽，將其遞送入癌細胞內(nèi)并發(fā)揮其抑制癌細胞生長效果，達到癌癥靶向治療的目的。本發(fā)明中，所述的尋靶材料是能夠特異性結(jié)合癌細胞的靶向分子與聚乙二醇-磷脂材料偶聯(lián)成的主動靶向復合物。所述的聚乙二醇-磷脂材料選自單一的聚乙二醇-磷脂材料，如聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺材料(PEG-DSPE)，聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰膽堿(PEG-DPPC)等，或多種聚乙二醇-磷脂的混合材料。所述的聚乙二醇-磷脂材料，其磷脂材料上的脂肪酸鏈可以相同或不同，每條脂肪鏈所含碳原子數(shù)12-20。所述的聚乙二醇分子量為2000_20000Da，本發(fā)明中優(yōu)選2000_5000Da。所述的聚乙二醇一端為活性基團，可以與特異性結(jié)合癌細胞或靶細胞的分子偶聯(lián)。聚乙二醇上的活性基團選自馬來酰亞胺基、巰基、酰胺基、氨基、羧基、生物素或親和素中的一種。本發(fā)明中，所述的特異性結(jié)合癌細胞或靶細胞的分子包括特異性結(jié)合癌細胞或靶細胞的抗體，如anti-HER2，小分子配體，如葉酸，多肽配體，如RGD環(huán)肽，以及針對癌細胞或靶細胞表面特殊靶標開展噬菌體展示篩選得到的多肽配基，如針對人腦膠質(zhì)瘤U87篩選得到的序列為VTWTPQAWFQWV的多肽配基或SELEX技術(shù)篩選得到的核酸適體，如針對人前列腺癌LNCaP細胞表面抗原PSMA篩選得到的核酸適體AlO PSMA Apt。本發(fā)明中，脂質(zhì)成分包括聚乙二醇-磷脂、多種磷脂成分和膽固醇等，用于制備脂質(zhì)納米載體。所述的脂質(zhì)成分選自荷負電的脂質(zhì)材料如磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰絲氨酸(PS) 等，中性的脂質(zhì)材料如磷脂酰膽堿(PC)、膽固醇等，荷正電的磷脂材料如磷脂酰乙醇胺 (PE)、1，2-二油酰基-3-三甲基氨基內(nèi)烷(DOTAP)等。本發(fā)明中，所述遞送的鏡像多肽為針對癌蛋白MDM2開展鏡像噬菌體展示技術(shù)所篩選得到的多肽或其衍生物，能夠競爭性拮抗MDM2/MDMX與抑癌蛋白p53的結(jié)合，恢復p53 蛋白活性。本發(fā)明中，所述鏡像抗癌多肽衍生物經(jīng)化學修飾后，更利于構(gòu)建脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)。所述衍生物包括連接荷電氨基酸片段，如聚天冬氨酸、聚精氨酸等的鏡像多肽，可與荷相反電荷的磷脂形成脂質(zhì)納米系統(tǒng)；也包括連接脂肪酸，如棕櫚酸，肉豆蔻酸等或其他脂溶性分子，如膽固醇的鏡像多肽，可插入磷脂膜中形成脂質(zhì)納米系統(tǒng)。所述的鏡像抗癌多肽或其衍生物包括D-PMI、D-PMIa和D-PMI β等D型多肽，其中=D-PMI 序列為 DffffPLAFEALLR, D-PMI α 序列為 TNWYANLEKLLR, D-PMI β 序列為 TAffYANFEKLLR0本發(fā)明以脂質(zhì)體為鏡像多肽的載體，采用逆向蒸發(fā)法得到載肽脂質(zhì)體混懸液后， 通過擠壓過膜，并經(jīng)凝膠柱分離純化，得到鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑；通過粒徑測定儀對其粒徑大小進行表征，并計算該制劑中多肽的包封率；制得本發(fā)明用于抗癌的鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑，構(gòu)建了一種能夠?qū)㈢R像抗癌多肽遞送到靶部位及其靶細胞內(nèi)的脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)。
本發(fā)明中，遞藥系統(tǒng)粒徑為30_1000nm。本遞藥系統(tǒng)能通過靜脈給藥途徑發(fā)揮治療癌癥的作用。本發(fā)明通過下述步驟，以人腦膠質(zhì)瘤細胞U87為模型，對其活性進行了體外(細胞)和體內(nèi)(皮下瘤與原位瘤)藥效學評價。1、脂質(zhì)體包載鏡像多肽采用逆向蒸發(fā)法得到載肽脂質(zhì)體混懸液后，通過擠壓過膜，并經(jīng)凝膠柱分離純化， 得到鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑。通過粒徑測定儀對其粒徑大小進行表征，并計算該制劑中多肽的包封率。2、鏡像多肽脂質(zhì)體的體外抗癌活性評價以人腦膠質(zhì)瘤U87為體外模型對鏡像多肽D-PMI α脂質(zhì)體的抗癌活性進行評價。 評價手段為MTT法測定給藥后癌細胞生存率，繪制不同給藥濃度下的癌細胞生存率變化曲線。3、鏡像多肽脂質(zhì)體的抗癌特異性評價(作用機制)以ρ53野生型的人腦膠質(zhì)瘤U87和ρ53變異型的人腦膠質(zhì)瘤U251為模型進行鏡像多肽D-PMI α脂質(zhì)體的抗癌機制研究。采用Western Blotting技術(shù)檢測給藥后細胞內(nèi) P53通路相關(guān)的三種重要指標(p53、MDM2和p21)的含量變化情況。4、鏡像多肽脂質(zhì)體的體內(nèi)抗癌活性評價(皮下瘤)以U87皮下移植瘤裸小鼠為模型動物，對鏡像多肽脂質(zhì)體的體內(nèi)抗癌活性進行評價，繪制瘤體積相對值隨時間變化的曲線評價治療效果。5、鏡像多肽脂質(zhì)體的體外抗癌活性評價(腦原位瘤)以U87腦原位瘤裸小鼠為模型動物，對鏡像多肽脂質(zhì)體的體內(nèi)抗癌活性進行評價，評價指標為荷瘤裸小鼠的生存時間。結(jié)果顯示，該制劑能特異性地殺傷p53野生型的人腦膠質(zhì)瘤U87細胞，能顯著抑制 U87皮下瘤的生長和延長U87原位瘤模型動物的生存時間，提示本發(fā)明具有良好的用于癌癥治療的潛力。本發(fā)明以脂質(zhì)材料作為主要載體材料，將具有特異性抗癌機制的新型鏡像多肽包載于脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)中，具有良好的治療癌癥的潛力。本發(fā)明遞送的鏡像多肽為D型氨基酸序列構(gòu)成，能夠有效克服生理環(huán)境下的酶降解，可以保障該多肽被遞送至細胞內(nèi)后能達到穩(wěn)定抗癌效果，具有廣闊的應用前景。


圖1 鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑體外抑制癌細胞效果圖，其中，分別加入鏡像多肽D-PMI α的兩種脂質(zhì)納米制劑(RGD環(huán)肽修飾的主動靶向制劑；不經(jīng)修飾的PEG化長循環(huán)被動靶向制劑)，分別以載對照多肽(序列和D-PMI α完全一致的L型多肽)的RGD環(huán)肽修飾脂質(zhì)體、游離D-PMI α多肽和小分子p53_MDM2抑制劑 Nutlin-3作為對照，以人腦膠質(zhì)瘤U87的MTT細胞活性檢測法評價體外活性。圖2 鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑特異性體外抑制癌細胞效果圖，其中，選用兩種p53蛋白不同狀態(tài)的腦膠質(zhì)瘤細胞(p53野生型的U87 ；p53 突變型的U251)，分別加入RGD環(huán)肽修飾的鏡像多肽D-ΡΜΙα脂質(zhì)納米制劑后，以WesternBlotting技術(shù)，測定兩種細胞中p53、MDM2和p21三種蛋白含量隨多肽濃度增加而變化的情況。圖3 鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑體內(nèi)抗癌效果圖(皮下瘤)，其中，以皮下荷瘤(人腦膠質(zhì)瘤U87)裸鼠為體內(nèi)活性評價模型動物，18只荷瘤裸鼠隨機分為三組(n = 6)，分別為鏡像多肽脂質(zhì)體制劑治療組、陽性對照組(RGD環(huán)肽修飾的阿霉素脂質(zhì)體)和陰性對照組(生理鹽水組)，以瘤體積相對值隨時間變化的曲線評價治療效果，并比較各組與陰性對照組的差異(*代表P < 0. 05，具有顯著性差異；**代表ρ < 0.01，具有十分顯著的差異；***代表P < 0. 001，具有特別顯著的差異)。圖4 鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑體內(nèi)抗癌效果圖(腦原位瘤)，其中，以人膠質(zhì)瘤U87的原位荷瘤裸鼠為體內(nèi)活性評價模型動物，18只荷瘤裸鼠隨機分為三組(η = 6)，分別為繪鏡像多肽脂質(zhì)體制劑治療組、陽性對照組(RGD環(huán)肽修飾的阿霉素脂質(zhì)體)、游離鏡像多肽組合和陰性對照組，以荷瘤裸鼠的生存時間為指標評價治療效果。
具體實施例方式通過以下實施例描述將有助于進一步理解本發(fā)明，但本發(fā)明并不局限于如下描述范圍。實施例1針對腦膠質(zhì)瘤U87的鏡像多肽D-PMI α脂質(zhì)納米制劑的制備及活性評價1、脂質(zhì)體包載鏡像多肽按質(zhì)量比55 45 2 1稱取氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)、膽固醇、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG2qqq-DSPE)和 RGD 環(huán)肽-PEG34qq-DSPE (c (RGDyK) -PEG3400-DSP E)作為膜材料用于制備脂質(zhì)體。將上述材料和鏡像多肽D-PMI α分別溶于氯仿和純水中， 其中多肽與磷脂材料質(zhì)量比為1 7，水相與有機相的體積比為1 5。將水相和有機相混合并超聲，直至形成穩(wěn)定的乳劑。所得乳劑在真空下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)池后，加入水化液繼續(xù)減壓蒸發(fā)直至形成均勻的脂質(zhì)體。依次擠壓過200nm、IOOnm和80nm聚酯膜，并經(jīng)kphadex CL-4B凝膠柱分離游離多肽，得粒徑為90nm左右的鏡像多肽脂質(zhì)體制劑。經(jīng)測定，該脂質(zhì)納米制劑對鏡像多肽的包封率約為30%。2、鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑的體外抗癌活性評價用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，在二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)(37°C，5% C02，飽和濕度)連續(xù)培養(yǎng)，使人腦膠質(zhì)瘤細胞U87處于貼壁狀態(tài)。取對數(shù)生長期的單層培養(yǎng)U87細胞， 用0. 25%胰蛋白酶和0.02%乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)消化并吹打成單個細胞，把細胞懸浮在培養(yǎng)液中，計數(shù)，以每孔3000個細胞接種于96孔培養(yǎng)板，每孔體積180 μ L，鋪板時留出不含細胞的空白培養(yǎng)液孔。培養(yǎng)M小時后給藥。取上述已接種U87細胞的96孔板，加入不同濃度梯度的培養(yǎng)液配制c (RGDyK)-脂質(zhì)體-D-PMI α或脂質(zhì)體-D-PMI α或c (RGDyK)-脂質(zhì)體-對照多肽(序列與D-PMI α —致的L型多肽)或游離D-PMI α或陽性對照Nutlin-3 (每孔加入20 μ L)，每個濃度均設(shè)三復孔(實驗孔)。留出三個僅加入培養(yǎng)液的孔作為對照孔。培養(yǎng)72小時后，每孔均加入20 μ L MTT溶液(5mg/mL)，培養(yǎng)箱內(nèi)再培養(yǎng)4小時后，移除孔內(nèi)液體并每孔加入100 μ LDMS0,于室溫孵育10分鐘后在檢測波長490nm處測定各孔吸光度值。按以下公式計算細胞存活率
存活率=’實驗孔-Α贈白培養(yǎng)液孔χ ιοο% Α490對照孔_ A490空白培養(yǎng)液孔 將存活率對藥物濃度對數(shù)值作圖，并計算半數(shù)抑制濃度(IC5tl)。結(jié)果顯示，c (RGDyK)-脂質(zhì)體-D-PMI α能有效殺傷U87細胞，其IC5tl約為1. 9 μ Μ， 明顯強于陽性對照Nutlin-3 (3. 8 μ Μ)，提示該脂質(zhì)納米制劑具有較強的體外抗癌潛力。3、鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑的體內(nèi)抗癌活性評價(皮下瘤)U87皮下瘤模型動物的建立取對數(shù)生長期的U87細胞，每只裸小鼠接種6 X IO6個細胞(均勻分散于200 μ LPBS緩沖液中)。細胞接種于裸小鼠的右肩胛骨皮下。接種后每兩天測定一次瘤的長徑(Dmax)和短徑(Dmin)，按照下列公式計算瘤體積(V)V = [DmaxX (Dmin)2]/2種瘤14天后，裸小鼠皮下瘤大小為50 120mm3，開始進行藥效實驗。隨機分為3 組，每組6只。實驗分組及給藥方案生理鹽水(空白對照組)；C(RGDyK)-脂質(zhì)體-阿霉素 (陽性對照組)，于第1天、第6天和第11天給藥，單次給藥劑量為2. 5mg/Kg ；C組為 c (RGDyK)-脂質(zhì)體-D-PMI α (治療組)，于第1天、第3天、第5天、第8天、第10天和第12 天給藥，單次給藥劑量為7. 5mg/Kg ；藥效實驗共進行14天，首次給藥前測定瘤的長徑和短徑，得瘤體積(Vtl)，以后每兩天同樣操作得瘤體積(Vd)，按& = Vd/V0計算得到瘤體積相對值(Rd)。以時間為橫坐標，以 Rd為縱坐標作圖，得瘤體積相對值隨時間變化曲線評價治療效果。結(jié)果顯示，根據(jù)瘤體積相對值隨時間變化曲線，對比生理鹽水組，載鏡像多肽的脂質(zhì)納米制劑能顯著抑制U87皮下瘤的生長(ρ < 0. 01)，提示該脂質(zhì)納米制劑具有較強的體內(nèi)抗癌潛力。4、鏡像多肽脂質(zhì)遞藥系統(tǒng)的體內(nèi)抗癌活性評價(腦原位瘤)U87原位瘤模型動物的建立取對數(shù)生長期的U87細胞，每只裸小鼠接種8 X IO5個細胞(分散于5μ LPBS緩沖液中)。裸小鼠麻醉后，用腦立體定位儀固定，細胞接種于腦紋狀體右部(前囟前0. 6mm，側(cè)1. 8mm,深3mm)。從接種腫瘤后第六天開始給藥。荷瘤裸小鼠隨機分為4組，每組6只。實驗分組及給藥方案如下生理鹽水(空白對照組)；c (RGDyK)-脂質(zhì)體-阿霉素 (陽性對照組)，于原位種瘤后第6天、第10天、第14天和第18天給藥，單次給藥劑量為 5mg/Kg ；c (RGDyK)-脂質(zhì)體-D-PMI α (治療組)，于種瘤后第6天、第8天、第10天、第12天、 第14天、第16天、第18天和第20天給藥，單次給藥劑量為10mg/Kg ；游離多肽組，給藥時間和單次給藥劑量與治療組相同。繪制各組Kaplan-Meier生存曲線評級治療效果。結(jié)果顯示，治療組c (RGDyK)-脂質(zhì)體-D-PMI α與生理鹽水相比，能顯著延長模型動物的生存時間(P < 0. 001)。采用鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑治療后，模型動物平均生存時間由生理鹽水組的22. 5天延長到28天。結(jié)果表明，該脂質(zhì)納米制劑具有較強的體內(nèi)抗癌潛力實施例2針對人口腔上皮細胞癌KB的鏡像多肽D-PMI α脂質(zhì)納米制劑的制備及活性評價
以葉酸為靶向頭基、針對人口腔上皮細胞癌KB(葉酸受體高表達)的鏡像抗癌多肽D-PMI α脂質(zhì)納米制劑的制備及活性評價方法同實施例1。實驗結(jié)果提示該脂質(zhì)納米制劑具有較強的體外抗癌潛力。實施例3針對腦膠質(zhì)瘤U87的鏡像多肽D-PMI β衍生物的脂質(zhì)納米制劑的制備及活性評價1、鏡像多肽D-PMI β的衍生化稱取25毫克D-PMI β與7毫克NHS活化的棕櫚酸，混溶于2毫升DMF溶液中，加入3% (m/m)的DIEA，反應于室溫下過夜，經(jīng)C4制備柱分離純化并經(jīng)冷凍干燥后的得到棕櫚酸化的D-PMI β衍生物。2、脂質(zhì)體包載鏡像多肽衍生物按質(zhì)量比55 45 2 1稱取氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)、膽固醇、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)和 RGD 環(huán)肽-PEG34qq-DSPE (c (RGDyK) -PEG3400-DSPE) 作為膜材料用于制備脂質(zhì)體。按藥脂質(zhì)量比1 7稱取適量的鏡像抗癌多肽D-PMI β棕櫚酸化衍生物。將上述材料和鏡像抗癌多肽共同溶于氯仿中，在真空下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)2小時后，加入水化液繼續(xù)減壓蒸發(fā)2小時。水化完畢經(jīng)依次擠壓過200nm、IOOnm和SOnm聚酯膜，并經(jīng) Sephadex CL-4B凝膠柱分離游離多肽，得粒徑為SOnm左右的載抗癌多肽的脂質(zhì)體，經(jīng)測定脂質(zhì)納米制劑對棕櫚酸化的D-PMI β的包封率幾乎達到100%。3、包載鏡像多肽衍生物的脂質(zhì)納米制劑的體外抗癌活性評價方法同實施例1。實驗結(jié)果提示該脂質(zhì)納米制劑具有較強的體外抗癌潛力。4、包載鏡像抗癌多肽衍生物的脂質(zhì)納米制劑的體內(nèi)抗癌活性評價方法同實施例1。實驗結(jié)果提示該脂質(zhì)納米制劑具有較強的體內(nèi)抗癌潛力。
權(quán)利要求
1.一種用于抗癌的鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑，其特征在于，由尋靶材料、脂質(zhì)成分和鏡像多肽或其衍生物組成，所述脂質(zhì)成分制成脂質(zhì)體，包載并遞送所述的鏡像多肽或其衍生物。
2.按權(quán)利要求1所述的用于抗癌的鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑，其特征在于，所述的尋靶材料是能夠特異性結(jié)合癌細胞的靶向分子與聚乙二醇-磷脂材料偶聯(lián)成的主動靶向復合物。
3.按權(quán)利要求2所述的用于抗癌的鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑，其特征在于所述的聚乙二醇-磷脂材料選自聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺材料，聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰膽堿，或多種聚乙二醇-磷脂的混合材料。
4.按權(quán)利要求2所述的用于抗癌的鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑，其特征在于，所述的聚乙二醇-磷脂材料，其磷脂材料上的脂肪酸鏈相同或不同，每條脂肪鏈所含碳原子數(shù)12-20。
5.按權(quán)利要求2所述的用于抗癌的鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑，其特征在于，所述的聚乙二醇分子量為2000-20000Da。
6.按權(quán)利要求5所述的用于抗癌的鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑，其特征在于，所述的聚乙二醇分子量為2000-5000Da。
7.按權(quán)利要求2所述的用于抗癌的鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑，其特征在于，所述的聚乙二醇一端為活性基團，所述的活性基團選自馬來酰亞胺基、巰基、酰胺基、氨基、羧基、生物素或親和素中的一種。
8.按權(quán)利要求2所述的用于抗癌的鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑，其特征在于，所述的特異性結(jié)合癌細胞或靶細胞的分子選自特異性結(jié)合癌細胞或靶細胞的抗體anti-HER2，小分子配體葉酸，多肽配體c (RGDy K環(huán)肽或VTWTPQAWFQWV多肽或核酸適體AlO PSMA Apt。
9.按權(quán)利要求1所述的用于抗癌的鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑，其特征在于，所述脂質(zhì)體膜材料選自磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、膽固醇或1，2_ 二油酰基-3-三甲基氨基內(nèi)烷。
10.按權(quán)利要求1所述的用于抗癌的鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑，其特征在于，所述的鏡像多肽或其衍生物能夠競爭性拮抗MDM2/MDMX與抑癌蛋白p53的結(jié)合，恢復p53蛋白活性。
11.按權(quán)利要求1所述的用于抗癌的鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑，其特征在于，所述的鏡像多肽選自D-PMI、D-PMIa或D-PMI β多肽，其衍生物選自連接荷電氨基酸片段的鏡像多肽， 或連接脂肪酸或其他脂溶性分子的鏡像多肽。
12.按權(quán)利要求1所述的用于抗癌的鏡像多肽脂質(zhì)納米制劑，其特征在于，其特征在于所述的納米制劑其粒徑為30-1000nm。
全文摘要
本發(fā)明屬藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種多肽遞藥系統(tǒng)，具體涉及一種包載具有特異性抗癌活性的鏡像多肽的脂質(zhì)納米制劑。本遞藥系統(tǒng)由尋靶材料、脂質(zhì)成分和鏡像多肽或其衍生物組成，通過包載可恢復抑癌蛋白p53活性的鏡像多肽，將其遞送入癌細胞內(nèi)而發(fā)揮其抑制癌細胞生長的活性，達到抗癌治療的目的。本發(fā)明通過體內(nèi)外活性評價，證明了該遞藥系統(tǒng)能夠成功將鏡像多肽遞送到靶部位并進入靶細胞內(nèi)，具有明確的治療效果。
文檔編號A61K47/22GK102274186SQ20101020242
公開日2011年12月14日 申請日期2010年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月11日
發(fā)明者李翀, 陸五元, 陸偉躍 申請人:復旦大學