專利名稱：一種具有抗菌活性的呋喃酮類化合物Cytosporanone A的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，是一種從植物內生真菌Cytospora sp.發(fā)酵物中分離 到一個新的具有抗菌活性的呋喃酮類化合物Cytosporanone A。
背景技術：
內生真菌(endophytic fungus)是存在于健康植物的莖葉中，形成不明顯侵染的 一類真菌。內生真菌作為主要的微生物物種，種類及數(shù)量龐大，分布的宿主植物范圍廣，其 所處的微生態(tài)系統(tǒng)的多樣性，加上宿主植物本身所處生態(tài)環(huán)境的多樣性，因而其次生代謝 產(chǎn)物也具有豐富的多樣性，能夠為天然藥物的研究提供豐富的潛在資源。內生真菌Cytospora sp.屬于半知菌亞門(Deuteromycotina)、腔孢綱 (Coelomycetes)、球殼抱目(Sphaeropsidales)、殼囊抱屬(Cytospora)真菌。Cytospora sp.菌株分離自冬青目(Aquifoliales)、冬青科(Aquifoliaceae)、冬青屬(Ilex)植物加那 利冬青(Ilex canariensis)，加那利冬青是一種常綠灌木，采自西班牙戈梅拉島(Gomera)。 已報道的從殼囊孢屬真菌中分離的化合物約有35個?；衔镱愋陀写蟓h(huán)內酯類、聚酮類、 二蒽醌類、異香豆素類、萘酮類等。部分化合物都具有較強的生物活性，如抗真菌、抗細菌、 抗氧化、抗病毒等活性。但至今未見從內生真菌Cytospora sp.中分離到具有抗菌活性的 呋喃酮類化合物Cytosporanone A的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供從植物內生真菌Cytospora sp.發(fā)酵物中提取分離得到一個具有抗菌 活性的新化合物，分子式為C11H12O3,命名為Cytosporanone A，系統(tǒng)命名為(R)-5-((S)-hyd roxy (phenyl) -methyl) dihydrofuran-2 (3H) -one,化學結構式如下 通過紅外、紫外、質譜和二維核磁共振等多種現(xiàn)代光譜技術的綜合解析，確定了化 合物Cytosporanone A的化學結構，并通過旋光確定了其絕對構型。化合物Cytosporanone A為白色粉末狀固體，熔點:124°C ；分子式為C11H12O3 ；[α]203 +50. 2(c 0. 18，CHCl3)；電子轟 擊質譜 EI-MS :m/z 192 [Μ]+ (12), 107 (100), 85 (29), 77 (39)；紅外光譜 IR(film) Vmax :3364， 3029,2924,2853,1770,1664,1606,1455,1182,1025,704cm-1 ；UV(MeOH) Amax nm(log ε ) 257(3. 53) ；1H和13C核磁共振數(shù)據(jù)見表1。表1.化合物 Cytosporanone A 的 1H 和 13C 匪R 數(shù)據(jù)(CDCl3,400MHz/100MHz)
本發(fā)明化合物Cytosporanone A的制備方法如下由內生真菌Cytospora sp.的發(fā)酵物制備Cytosporanone A，此發(fā)酵物由德國不倫 瑞克大學提供。將發(fā)酵物用IOml氯仿完全溶解，用正相硅膠色譜(200 300目)分離，以二氯甲 烷丙酮體積比為100 1,80 20,50 50,30 70，1 100的洗脫液進行梯度洗脫， 根據(jù)薄層板監(jiān)測，各流份按照極性的差別從小到大共收集18個部分洗脫液Fr 1 Fr 18 ； 將Fr. 6部分再經(jīng)正相硅膠色譜(400 500目)分離純化，以氯仿甲醇20 1的洗脫液 進行洗脫，根據(jù)薄層板監(jiān)測，得到3個部分洗脫液Fr 6.1 Fr 6.3。將Fr 6. 3部分通過 半制備型HPLC進行純化，以甲醇水為80 1的混合溶劑作為流動相，檢測器為示差檢測 器，流速1. 5ml/min，收集保留時間為11. 4min的流份，得化合物Cytosporanone A。經(jīng)體外抗菌試驗。表明化合物Cytosporanone A對灰霉菌、殼針孢葉枯病菌和巨 大芽孢桿菌有明顯的抑菌效果。因此可以用于制備抗菌藥物。本發(fā)明為研制抗菌藥物提供了新的先導化合物，為開發(fā)利用中國的植物內生菌資
源具有重要意義。
具體實施例方式實施例1.制備化合物Cytosporanone A按常規(guī)取內生真菌Cytospora sp.發(fā)酵物18. 73g。發(fā)酵物由德國不倫瑞克大學提 供。將發(fā)酵物溶于IOml氯仿中，用正相硅膠色譜(200 300目)分離，以二氯甲烷丙酮 體積比為100 1,80 20,50 50,30 70，1 100的洗脫液進行梯度洗脫，根據(jù)薄層 板監(jiān)測，各流份按照極性的差別從小到大共收集18個部分Fr 1 Fr 18。Fr 6部分再經(jīng) 正相硅膠色譜(400 500目)分離純化，以氯仿甲醇20 1的洗脫液進行洗脫，根據(jù)薄 層板監(jiān)測，得到3個部分Fr6. 1 Fr6. 3。將Fr6. 3部分通過半制備型HPLC進行純化，以甲 醇水的體積比為80 1的混合溶劑作為流動相，檢測器為示差檢測器，流速1. 5ml/min, 收集保留時間為11. 4min的流份，減壓蒸干，得化合物Cytosporanone A共18. 6mg。體外抗菌試驗
一、試驗用真菌、細菌和藻類1.試驗用真菌花藥黑粉菌(Microbotryum violaceum)、灰霉菌(Botrytis cinerea)和殼針孢葉枯病菌(Septoria tritici)；2.試驗用細菌大腸桿菌(Escherichia coli)、巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)；3.試驗用藻類小球藻(Chlorella fusca)。二、實驗用藥1.陽性對照藥青霉素(Penicillin)、鏈霉素(Sti^ptomycin)；2.陰性對照品丙酮(Acetone)；3. Cytosporanone A 由實施例 1 制備三.實驗方法1.配制藥物溶液將青霉素、鏈霉素和Cytosporanone A分別用丙酮配制成濃度 為lmg/ml的溶液，單次測試用量50 μ 1。2.將上述3種真菌、2種細菌和1種藻類按無菌操作的要求分別用7ml滅菌水配制 成菌液，各用噴霧器取4ml菌液，分別均勻噴灑于各自培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基表面，再在每個培養(yǎng) 皿內分別放置直徑約Icm滅菌濾紙兩塊，覆蓋于培養(yǎng)基表面，然后分別取上述配制的藥液 50 μ 1滴于濾紙上，蓋上培養(yǎng)基蓋子進行培養(yǎng)。各培養(yǎng)皿蓋子上均注明相應培養(yǎng)基種類、菌 種、化合物名稱、接種時間?；ㄋ幒诜劬覝?天，灰霉菌室溫5天，殼針孢葉枯病菌20°C 4 天，大腸桿菌37°C 24小時，巨大芽孢桿菌37°C 24小時，小球藻20°C 5天。按時觀察結果， 測量抑菌圈的大小(直徑)，平行試驗3次，結果見表2。表2.瓊脂擴散實驗活性篩選(mm) 由表2可見，化合物Cytosporanone A對灰霉菌、殼針孢葉枯病菌和巨大芽孢桿菌 均有顯著的抑制作用，對巨大芽孢桿菌的抑制作用接近陽性對照藥。因此，本發(fā)明化合物 Cytosporanone A可用于制備抗菌藥物。
權利要求
一種呋喃酮類化合物Cytosporanone A，其特征在于化學結構式如下FSA00000168848100011.tif
2.權利要求1所述的呋喃酮類化合物Cytosporanone A在制備抗菌藥物中的應用,
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，是從植物內生真菌Cytospora sp.發(fā)酵物中分離得到1個具有抗菌活性的呋喃酮類化合物Cytosporanone A，系統(tǒng)命名為(R)-5-((S)-hydroxy(phenyl)-methyl)dihydrofuran-2(3H)-one，化學結構式如下經(jīng)體外抗菌試驗，表明化合物Cytosporanone A對灰霉菌、殼針孢葉枯病菌和巨大芽孢桿菌有明顯的抑菌效果，因此可用于制備抗菌藥物。本發(fā)明為研制新的抗菌藥物提供了先導化合物，對開發(fā)利用中國的內生真菌藥用資源具有重要價值。
文檔編號A61K31/341GK101880266SQ20101020794
公開日2010年11月10日 申請日期2010年6月23日 優(yōu)先權日2010年6月23日
發(fā)明者劉寶姝, 盧山, 孫鵬, 張文, 易楊華, 李玲, 湯華 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學