專利名稱：載有鹽酸阿霉素的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球及其制法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種可生物降解的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球，可以用作硼中子俘獲療法，也可以用作藥物載體。
背景技術(shù)：
硼中子俘獲療法(BNCT)是通過腫瘤細(xì)胞內(nèi)的原子核反應(yīng)來摧毀癌細(xì)胞的治療方 法。它的治療原理是先給腫瘤病人注射同位素“1硼，硼進(jìn)入體內(nèi)后在腫瘤細(xì)胞內(nèi)聚集，而其 他的組織分布很少。這種含硼的化合物對人體無毒，對癌癥也沒有治療效果。用一種熱中 子射線照射腫瘤部位，中子照射時(shí)1個(gè)“1硼原子吸收1個(gè)中子變成11硼原子并發(fā)生原子核 裂變，裂變釋放出α粒子(4He)和鋰原子(7Li)。α粒子是殺傷力極強(qiáng)射線，能有效殺死腫 瘤細(xì)胞，并對缺氧腫瘤細(xì)胞和分裂間期腫瘤細(xì)胞同樣有效。由于α粒子射程僅約10微米， 即一個(gè)細(xì)胞直徑，故只能殺死發(fā)生核反應(yīng)的腫瘤細(xì)胞，對周圍正常細(xì)胞無影響，從而在細(xì)胞 水平達(dá)到保護(hù)周圍健康組織的目的。而作為BNCT的攜帶劑，應(yīng)具備以下特點(diǎn)1，攜帶劑無毒性，對腫瘤的選擇性高，給藥后藥物在腫瘤內(nèi)的濃度是正常組織濃 度的3-4倍；2，腫瘤組織內(nèi)硼的濃度必須達(dá)到20微克/克；3，治療期間攜帶劑在腫瘤組織內(nèi)保持一定的濃度，快速從體內(nèi)和血液中除去。目前廣泛應(yīng)用的是低分子和高分子硼攜帶劑兩大類。低分子硼攜帶劑廣泛應(yīng)用的 是巰基十二硼烷二鈉鹽(BSH)和對二羥基硼酰苯丙氨酸(BPA)。高分子的硼攜帶劑主要是 硼化單克隆抗體。研究表明，目前還沒有一種完全符合上述要求的硼攜帶劑，主要是由于正 常組織內(nèi)不可避免有硼攜帶劑的存在，很難有效解決正常組織不受傷害的問題。因此，尋找 生物相容并且可生物降解的硼攜帶劑，在減少正常組織吸收的同時(shí)又提高腫瘤部位的硼攜 帶劑濃度已經(jīng)引起了人們廣泛的關(guān)注。鹽酸阿霉素是一種抗腫瘤抗生素，是臨床上常用的蒽環(huán)類抗惡性腫瘤藥?？梢砸?制RNA和DNA的合成，其中對RNA的抑制作用最強(qiáng)，抗瘤譜廣，對多種腫瘤都有作用，屬于周 期非特異性藥物，對各種生長周期的腫瘤細(xì)胞都有殺滅作用。主要適用于白血病，對急性淋 巴細(xì)胞白血病及細(xì)胞白血病均有效，對乳腺癌，肉瘤，肺癌，膀胱癌，甲狀腺瘤，絨毛膜上皮 癌，前列腺癌，睪丸癌，胃癌，肝癌等等其他各種癌癥都有一定的療效，多與其他抗腫瘤藥聯(lián) 合使用。但是阿霉素的毒副作用比較嚴(yán)重，如白細(xì)胞和血小板減少，心臟毒性表現(xiàn)為心率失 常，惡心，食欲減退，藥物溢出血管外可引起組織潰瘍及壞死。另外，用藥后尿液可出現(xiàn)紅 色。研究證明，抗腫瘤藥物是通過各種途徑給藥后，達(dá)到一定的血藥濃度分布于全身而起到 的治療作用。但是，多數(shù)的抗腫瘤藥物的分子量比較低，在體內(nèi)容易擴(kuò)散，導(dǎo)致相對平均的 組織分布，往往在治療的同時(shí)產(chǎn)生毒副作用。因此，尋找生物相容并且可生物降解的阿霉素 載體，在減少正常組織毒副作用的同時(shí)又不降低甚至提高腫瘤部位的藥物濃度已經(jīng)引起了 人們廣泛的關(guān)注。
隨著生物醫(yī)藥納米技術(shù)的發(fā)展，使得可生物降解的天然高分子納米微粒的藥物輸 送體系成為研究抗腫瘤藥物的重點(diǎn)。腫瘤部位的血管系統(tǒng)具有比正常部位更高的通透性 (EPR)效應(yīng)，天然高分子納米粒子可以通過這種效應(yīng)，在腫瘤等病變部位富集，達(dá)到“被動(dòng)靶 向”藥物輸送的效果。載藥納米微粒在進(jìn)入機(jī)體后，被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的巨噬細(xì)胞吞噬而從血 液循環(huán)系統(tǒng)中清除，因此藥物的療效受到很大的限制。天然高分子納米粒子除了具備傳統(tǒng) 藥物輸送體系所具有的諸如提高藥物溶解度、增加藥物穩(wěn)定性以及緩釋等優(yōu)點(diǎn)外，還可以 改變藥物的組織分布和代謝，提高藥效并降低藥物的系統(tǒng)毒副作用，在臨床方面具有重大 的應(yīng)用價(jià)值。苯硼酸可以與1，2 二醇或1，3 二醇的多羥基化合物形成可逆的五元環(huán)或者六元環(huán) 的硼酸酯，還可以與氨基有配位作用。而自然界中含有大量的多羥基化合物，可以 與苯硼酸 形成硼酸酯，這個(gè)過程也是一個(gè)可逆的過程。由于苯硼酸的反應(yīng)特性，它被可以廣泛應(yīng)用于 檢測、分離、提純，還可以用于自律給藥系統(tǒng)或者調(diào)節(jié)生命活動(dòng)。迄今為止，天然高分子-聚 (3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種生物相容，可以生物降解的，可能用于硼中子俘獲療 法的，可用作藥物載體天然高分子納米微球及其制備方法。本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種天然高分子-聚(3_丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球，它的表面是親水性 的天然高分子，內(nèi)部是疏水性的聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)，天然高分子的數(shù)均分子量在 3000-100000范圍內(nèi)，含量為復(fù)合納米微球質(zhì)量的5%-70%，聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的 數(shù)均分子量在2000-4000范圍內(nèi)，含量為復(fù)合納米微球質(zhì)量的30% -95%。納米微球的平 均粒徑為40-100納米。上所述的天然高分子_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球，所述的天然高 分子可以是葡聚糖、殼聚糖、羥丙基纖維素、海藻酸、肝素、牛血清蛋白。一種制備上述天然高分子_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的方法，它 包括如下步驟步驟1.在40_80°C攪拌下，在蒸餾水中加入天然高分子和3-丙烯酰胺基苯硼酸， 天然高分子與3-丙烯酰胺基苯硼酸的質(zhì)量比為0.5 1 5 1，體系中反應(yīng)物的總濃度 為5-30mg/ml，加熱攪拌至完全溶解；步驟2.溶解完全并冷卻后，加入自由基引發(fā)劑并用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH到3-7，在 60-90°C攪拌下反應(yīng)1-4小時(shí)，反應(yīng)完成后形成水相納米微粒分散液。上述的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的制法，所述的引 發(fā)劑可以是過硫酸鉀或者4，4’ -偶氮(4-氰基戊酸)。一種載有鹽酸阿霉素的天然高分子_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球， 它是上述的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球作為載體，載有復(fù)合納 米微球質(zhì)量的5-10%的鹽酸阿霉素的載有鹽酸阿霉素的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯 硼酸)復(fù)合納米微球。一種制備載有鹽酸阿霉素的天然高分子_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的方法，它是將上述的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的水分散 液用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH到5-9后，攪拌下加入鹽酸阿霉素，鹽酸阿霉素與納米微球中苯硼酸 單元的物質(zhì)的量之比為0.1 1-1 1，在室溫?cái)嚢柘路磻?yīng)12-72小時(shí)后，透析，即得到載有 鹽酸阿霉素的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球，其中，鹽酸阿霉素占 復(fù)合納米微球質(zhì)量的5-10%。
本發(fā)明的制備方法制得的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球 粒徑較均一，分散性好。本發(fā)明制備的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球可以用作藥 物載體，還可能用作硼中子俘獲療法的攜帶劑。本發(fā)明的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球和需包裹藥物經(jīng) 攪拌，吸附，透析，得到包裹有藥物的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微 球。本發(fā)明的載有鹽酸阿霉素的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微 球具有很強(qiáng)的藥物緩釋功能。本發(fā)明提供了一種平均粒徑為40-100nm的天然高分子_聚(3_丙烯酰胺基苯硼 酸)復(fù)合納米微球的制備方法。本發(fā)明的復(fù)合納米微球生物相容性好，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。本 發(fā)明的復(fù)合納米微球可以用作藥物載體，還可能用作硼中子俘獲療法的攜帶劑。本發(fā)明的 負(fù)載有鹽酸阿霉素的復(fù)合納米微球，具有很強(qiáng)的藥物緩釋功能。


圖1為載有阿霉素的葡聚糖_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的體外釋 放曲線(■ ρΗ7· 4 ▼ρΗδ.Ο· ρΗ4· 0)。圖2為葡聚糖-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球?qū)θ宋赴┘?xì)胞ΜΚΝ-28 體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖3為載有阿霉素的葡聚糖_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球?qū)θ藢m頸 癌細(xì)胞Hela體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的內(nèi)容，但是這些實(shí)施例并不限制本發(fā)明的保 護(hù)范圍。實(shí)施例1 葡聚糖-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的制備在25ml攪拌式反應(yīng)器中，將90毫克3_丙烯酰胺基苯硼酸和數(shù)均分子量為3000 的152毫克葡聚糖溶解于12毫升蒸餾水。冷卻到室溫后，加入9.4毫克4，4’_偶氮(4-氰 基戊酸)引發(fā)劑。升溫到80°C，引發(fā)聚合反應(yīng)2小時(shí)，得到葡聚糖-聚(3-丙烯酰胺基苯 硼酸)復(fù)合納米微球的水溶液。停止反應(yīng)，將體系溫度降至室溫，將水分散液裝入透析袋 (Cut-off分子量為12000)中透析24小時(shí)，除去體系中未反應(yīng)的單體。通過動(dòng)態(tài)光散射測 得的納米微球的平均粒徑是72. 5士2. Onm。其中天然高分子占9. 1 %，聚(3-丙烯酰胺基苯 硼酸)占90.9%。聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的數(shù)均分子量為2000。實(shí)施例2 葡聚糖_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的制備
在25ml攪拌式反應(yīng)器中，將90毫克3_丙烯酰胺基苯硼酸和數(shù)均分子量為3000 的76毫克葡聚糖溶解于12毫升蒸餾水。冷卻到室溫后，加入9. 4毫克4，4’ -偶氮(4-氰 基戊酸)引發(fā)劑。升溫到80°C，引發(fā)聚合反應(yīng)2小時(shí)，得到葡聚糖-聚(3-丙烯酰胺基苯硼 酸)復(fù)合納米微球的水溶液。停止反應(yīng)，將體系溫度降至室溫過濾，過濾后將水分散液裝入 透析袋(Cut-off分子量為12000)中透析24小時(shí)，除去體系中未反應(yīng)的單體。通過動(dòng)態(tài)光 散射測得的納米微球的平均粒徑是77. 4士2. lnm，其中天然高分子占4.2%，聚(3-丙烯酰 胺基苯硼酸)占95.8%。聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的數(shù)均分子量為2000。實(shí)施例3 葡聚糖_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的制備在25ml攪拌式反應(yīng)器中，將90毫克3_丙烯酰胺基苯 硼酸和數(shù)均分子量為3000 的38毫克葡聚糖溶解于12毫升蒸餾水。冷卻到室溫后，加入9. 4毫克4，4’ -偶氮(4-氰 基戊酸)引發(fā)劑。升溫到80°C，引發(fā)聚合反應(yīng)2小時(shí)，得到葡聚糖-聚(3-丙烯酰胺基苯硼 酸)復(fù)合納米微球的水溶液。停止反應(yīng)，將體系溫度降至室溫過濾，過濾后將水分散液裝入 透析袋(Cut-off分子量為12000)中透析24小時(shí)，除去體系中未反應(yīng)的單體。通過動(dòng)態(tài)光 散射測得的納米微球的平均粒徑是65. 1 士0. lnm，其中天然高分子占2.5%，聚(3-丙烯酰 胺基苯硼酸)占97.5%。聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的數(shù)均分子量為2500。實(shí)施例4 葡聚糖_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的制備在25ml攪拌式反應(yīng)器中，將90毫克3_丙烯酰胺基苯硼酸和數(shù)均分子量為3000 的304毫克葡聚糖溶解于12毫升蒸餾水。冷卻到室溫后，加入9.4毫克4，4’_偶氮(4-氰 基戊酸)引發(fā)劑。升溫到80°C，引發(fā)聚合反應(yīng)2小時(shí)，得到葡聚糖-聚(3-丙烯酰胺基苯硼 酸)復(fù)合納米微球的水溶液。停止反應(yīng)，將體系溫度降至室溫過濾，過濾后將水分散液裝入 透析袋(Cut-off分子量為12000)中透析24小時(shí)，除去體系中未反應(yīng)的單體。通過動(dòng)態(tài)光 散射測得的納米微球的平均粒徑是98.8士 1.6nm。其中天然高分子占14. 3%，聚(3-丙烯 酰胺基苯硼酸)占85.7%。聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的數(shù)均分子量為2000。實(shí)施例5 葡聚糖_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的制備在25ml攪拌式反應(yīng)器中，將90毫克3_丙烯酰胺基苯硼酸和數(shù)均分子量為40000 的152毫克葡聚糖溶解于12毫升蒸餾水。冷卻到室溫后，加入6毫克過硫酸鉀引發(fā)劑。升 溫到80°C，引發(fā)聚合反應(yīng)2小時(shí)，得到葡聚糖-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球 的水溶液。停止反應(yīng)，將體系溫度降至室溫過濾，過濾后將水分散液裝入透析袋(Cut-off 分子量為100000)中透析24小時(shí)，除去體系中未反應(yīng)的單體。通過動(dòng)態(tài)光散射測得的納米 微球的平均粒徑是98.8士 1.6nm，其中天然高分子占9.1%，聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)占 90.9%。聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的數(shù)均分子量為2000。實(shí)施例6 牛血清蛋白_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的制備在50ml攪拌式反應(yīng)器中，將60毫克3_丙烯酰胺基苯硼酸和數(shù)均分子量為66000 的40毫克牛血清蛋白溶解于12毫升蒸餾水。冷卻到室溫后，加入8. 5毫克4，4’ -偶氮 (4-氰基戊酸)引發(fā)劑。升溫到80°C，引發(fā)聚合反應(yīng)2小時(shí)，得到牛血清蛋白-聚(3-丙烯 酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的水溶液。停止反應(yīng)，將體系溫度降至室溫過濾，過濾后將水 分散液裝入透析袋(Cut-off分子量為100000)中透析24小時(shí)，除去體系中未反應(yīng)的單體。 通過動(dòng)態(tài)光散射測得的納米微球的平均粒徑是42. 5士 1. Onm，其中天然高分子占74%，聚 (3-丙烯酰胺基苯硼酸)占26%。聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的數(shù)均分子量為3000。
實(shí)施例7 殼聚糖_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的制備在25ml攪拌式反應(yīng)器中，將90毫克3_丙烯酰胺基苯硼酸和數(shù)均分子量為100000的120毫克殼聚糖溶解于12毫升蒸餾水。冷卻到室溫后，加入6毫克過硫酸鉀引發(fā)劑。升 溫到80°C，引發(fā)聚合反應(yīng)2小時(shí)，得到殼聚糖-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球 的水溶液。停止反應(yīng)，將體系溫度降至室溫過濾，過濾后將水分散液裝入透析袋(Cut-off 分子量為100000)中透析24小時(shí)，除去體系中未反應(yīng)的單體。通過動(dòng)態(tài)光散射測得的納米 微球的平均粒徑是92. 5士2. Onm，其中天然高分子占42%，聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)占 58%。聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的數(shù)均分子量為3500。實(shí)施例8 海藻酸_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的制備在25ml攪拌式反應(yīng)器中，將90毫克3_丙烯酰胺基苯硼酸和數(shù)均分子量為50000 的60毫克海藻酸溶解于12毫升蒸餾水。冷卻到室溫后，加入9毫克4，4’ -偶氮(4-氰基 戊酸)引發(fā)劑。升溫到80°C，引發(fā)聚合反應(yīng)2小時(shí)，得到海藻酸-聚(3-丙烯酰胺基苯硼 酸)復(fù)合納米微球的水溶液。停止反應(yīng)，將體系溫度降至室溫過濾，過濾后將水分散液裝入 透析袋(Cut-off分子量為100000)中透析24小時(shí)，除去體系中未反應(yīng)的單體。通過動(dòng)態(tài) 光散射測得的納米微球的平均粒徑是100. 5士2. Onm，其中天然高分子占32%，聚(3-丙烯 酰胺基苯硼酸)占68%。聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的數(shù)均分子量為3000。實(shí)施例9 羥丙基纖維素_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的制備在25ml攪拌式反應(yīng)器中，將50毫克3_丙烯酰胺基苯硼酸和數(shù)均分子量為30000 的30毫克羥丙基纖維素溶解于8毫升蒸餾水。冷卻到室溫后，加入4毫克4，4’-偶氮(4-氰 基戊酸)引發(fā)劑。升溫到80°C，引發(fā)聚合反應(yīng)2小時(shí)，得到羥丙基纖維素-聚(3-丙烯酰胺 基苯硼酸)復(fù)合納米微球的水溶液。停止反應(yīng)，將體系溫度降至室溫過濾，過濾后將水分散 液裝入透析袋(Cut-off分子量為100000)中透析24小時(shí)，除去體系中未反應(yīng)的單體。通過 動(dòng)態(tài)光散射測得的納米微球的平均粒徑是84. 5 士 2. Onm，其中天然高分子占62 %，聚(3-丙 烯酰胺基苯硼酸)占38%。聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的數(shù)均分子量為4000。實(shí)施例10 載有阿霉素的葡聚糖_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的制 備在IOml攪拌式反應(yīng)器中，取5mL葡聚糖-聚(3_丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微 球用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值到8. 2，攪拌下逐滴加入ImL鹽酸阿霉素水溶液(3mg/mL)，滴完后 繼續(xù)攪拌12小時(shí)，得到載有阿霉素的葡聚糖-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球。 通過動(dòng)態(tài)光散射測得的納米微球的平均粒徑是94. 5士2. Onm。上述的納米微球經(jīng)離心后，上 清溶液中的阿霉素的濃度用熒光光譜的通過標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測定。載藥量為10%，包裹效 率為98%。實(shí)施例11 載有阿霉素的葡聚糖_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的制 備在IOml攪拌式反應(yīng)器中，取5mL葡聚糖-聚(3_丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微 球用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值到7. 4，攪拌下逐滴加入0. 5mL鹽酸阿霉素水溶液(3mg/mL)，滴完 后繼續(xù)攪拌12小時(shí)，得到載有阿霉素的葡聚糖-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微 球。通過動(dòng)態(tài)光散射測得的納米微球的平均粒徑是98.0士2. Onm。上述的納米微球經(jīng)離心 后，上清溶液中的阿霉素的濃度用熒光光譜的通過標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測定。載藥量為5%，包裹效率為96%。實(shí)施例12 載有阿霉素的牛血清蛋白_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球 的制備在IOml攪拌式反應(yīng)器中，取5mL牛血清蛋白-聚(3_丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納 米微球用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值到8. 2，攪拌下逐滴加入0. 5mL鹽酸阿霉素水溶液(3mg/mL)， 滴完后繼續(xù)攪拌12小時(shí)，得到載有阿霉素的葡聚糖-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米 微球。通過動(dòng)態(tài)光散射測得的納米微球的平均粒徑是42.0士2. Onm.。上述的納米微球經(jīng)離 心后，上清溶液中的阿霉素的濃度用熒光光譜的通過標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測定。載藥量為5%， 包裹效率為95%。實(shí)施例13 載有阿霉素的葡聚糖_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的體 外釋放取實(shí)施例10中制得的ImL載有阿霉素的葡聚糖-聚(3_丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù) 合納米微球水溶液(所含阿霉素的量為0. 5毫克)放在透析袋(Cut-off分子量為12000) 中，然后將透析袋完全浸入5mL 0. 01mol/L PBS(pH 7.4，pH 5.0，pH 4.0)中，在37°C攪拌 下進(jìn)行釋放實(shí)驗(yàn)。每隔一定時(shí)間取出5mL釋放介質(zhì)，再加入5mL新的釋放介質(zhì)。用熒光光 譜的通過標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測定樣品 中阿霉素的含量。并根據(jù)含量計(jì)算釋放百分率，結(jié)果如 圖1所示，可以看出在低PH值下，負(fù)載于其中的藥物表現(xiàn)出持續(xù)穩(wěn)定的釋放特性。實(shí)施例14 葡聚糖-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的體外細(xì)胞毒性試 驗(yàn)細(xì)胞株為人胃癌細(xì)胞MKN-28。通過MTT法測定實(shí)施例1中的葡聚糖-聚(3_丙烯 酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的生物生物相容性，時(shí)間為48h，結(jié)果見圖2。從圖2中可以 看出葡聚糖-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球沒有細(xì)胞毒性，說明該納米微球是 生物相容性的。實(shí)施例15 載有阿霉素的葡聚糖_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的體 外細(xì)胞毒性試驗(yàn)細(xì)胞株為人宮頸癌細(xì)胞Hela。通過MTT法測定實(shí)施例1中的載有阿霉素的葡聚 糖-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球?qū)ela細(xì)胞的體外殺傷效果，時(shí)間為48h，結(jié) 果見圖3。從圖3中可以看出載有阿霉素的葡聚糖-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米 微球沒有阿霉素裸藥殺死細(xì)胞的能力強(qiáng)，有很好的藥物緩釋效果。
權(quán)利要求
一種天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球，其特征是它的表面是親水性的天然高分子，內(nèi)部是疏水性的聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)，天然高分子的數(shù)均分子量在3000-100000范圍內(nèi)，含量為復(fù)合納米微球質(zhì)量的5％-70％，聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的數(shù)均分子量在2000-4000范圍內(nèi)，含量為復(fù)合納米微球質(zhì)量的30％-95％。納米微球的平均粒徑為40-100納米。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的天然高分子_聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球，其 特征是所述的天然高分子可以是葡聚糖、殼聚糖、羥丙基纖維素、海藻酸、肝素、牛血清蛋 白。
3.一種制備權(quán)利要求1所述的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球 的方法，其特征是它包括如下步驟步驟1.在40-8(TC攪拌下，在蒸餾水中加入天然高分子和3-丙烯酰胺基苯硼酸，天 然高分子與3-丙烯酰胺基苯硼酸的質(zhì)量比為0.5 1 5 1，體系中反應(yīng)物的總濃度為 5-30mg/ml，加熱攪拌至完全溶解；步驟2.溶解完全并冷卻后，加入自由基引發(fā)劑并用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH到3-7，在 60-90°C攪拌下反應(yīng)1-4小時(shí)，反應(yīng)完成后形成水相納米微粒分散液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的制 法，其特征是所述的引發(fā)劑可以是過硫酸鉀或者4，4’ -偶氮(4-氰基戊酸)。
5.權(quán)利要求1所述的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球作為藥物 載體中的應(yīng)用。
6.一種載有鹽酸阿霉素的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球，其 特征是它是權(quán)利要求1所述的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球作為 載體，載有復(fù)合納米微球質(zhì)量的5-10%的鹽酸阿霉素的載有鹽酸阿霉素的天然高分子-聚 (3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球。
7.一種制備權(quán)利要求5所述的載有鹽酸阿霉素的天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯 硼酸)復(fù)合納米微球的方法，其特征是它是將權(quán)利要求1所述的天然高分子-聚(3-丙烯 酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球的水分散液用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH到5-9后，攪拌下加入鹽酸阿 霉素，鹽酸阿霉素與納米微球中苯硼酸單元的物質(zhì)的量之比為0.1 1-1 1，在室溫?cái)嚢?下反應(yīng)12-72小時(shí)后，透析，即得到載有鹽酸阿霉素的天然高分子_聚(3-丙烯酰胺基苯硼 酸)復(fù)合納米微球，其中，鹽酸阿霉素占復(fù)合納米微球質(zhì)量的5-10%。
全文摘要
一種天然高分子-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)復(fù)合納米微球，它的表面是親水性的天然高分子，內(nèi)部是疏水性的聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)，天然高分子的數(shù)均分子量在2000-100000范圍內(nèi)，含量為復(fù)合納米微球質(zhì)量的5％-70％，聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的數(shù)均分子量在1000-10000范圍內(nèi)，含量為復(fù)合納米微球質(zhì)量的30％-95％。納米微球的平均粒徑為40-100納米。本發(fā)明的復(fù)合納米微球生物相容性好，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。本發(fā)明的復(fù)合納米微球可以用作藥物載體，并有緩釋作用，還可能用作硼中子俘獲療法的攜帶劑。本發(fā)明公開了其制法。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101879427SQ20101021315
公開日2010年11月10日 申請日期2010年6月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月29日
發(fā)明者張魯中, 武偉, 王晶, 蔣錫群 申請人:南京大學(xué)