專利名稱：靶向絲-蘇氨酸蛋白激酶極光激酶a的鎖核酸核酶與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及靶向絲-蘇氨酸蛋白激酶極光激酶A(簡(jiǎn)稱Aurora A，說(shuō)明書(shū)的下述內(nèi) 容中，以“Aurora Α”表示絲-蘇氨酸蛋白激酶極光激酶Α)的核酶及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
前列腺癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，迄今尚無(wú)特效治療手段，前列腺癌發(fā)生的分 子機(jī)制尚未完全明了，但近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，前列腺癌的發(fā)生發(fā)展與Aurora A的異常具有 密切相關(guān)性。Aurora A基因定位于人染色體20ql3，該區(qū)域在人類惡性腫瘤中經(jīng)常出現(xiàn)擴(kuò) 增，因此基因治療值得探索。本專利申請(qǐng)的發(fā)明人曾設(shè)計(jì)合成了針對(duì)Aurora A的脫氧核酶DNAzyme2〔 DNAzyme2 的核苷酸序列見(jiàn) Cancer Gene Ther. 200815(8) :518〕，實(shí)驗(yàn)表明，所述 DNAzyme2 能有效抑制前列腺癌細(xì)胞中Aurora A的表達(dá)，并抑制前列腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)〔見(jiàn)Cancer Gene Ther. 200815(8) :517_525〕。但為了提高前列腺癌的治愈率，造福于人類，有必要獲得更多 的針對(duì)AuroraA的核酶。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新型的靶向絲-蘇氨酸蛋白激酶極光激酶A的鎖核酸 核酶(簡(jiǎn)稱“Aurora A-LNAzyme”，說(shuō)明書(shū)的下述內(nèi)容中，以“Aurora A-LNAzyme”表示靶向 絲-蘇氨酸蛋白激酶極光激酶A的鎖核酸核酶)，以便開(kāi)發(fā)出療效更好的治療前列腺癌的藥 物。本發(fā)明所述Aurora A-LNAzyme，其核苷酸序列為序列表中SEQ ID NO :1所示。所 述核苷酸序列中，位于中部的15個(gè)脫氧核苷酸ggctagctacaacga組成催化結(jié)構(gòu)域，位于催 化結(jié)構(gòu)域左側(cè)的8個(gè)核苷酸t(yī)HSacagg組成第一底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域，位于催化結(jié)構(gòu)域右側(cè)的 8個(gè)核苷酸cctLgaaatL組成第二底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域，第一底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域和第二底物識(shí)別結(jié) 構(gòu)域均含有兩個(gè)鎖核酸#。本發(fā)明所述Aurora A-LNAzyme，采用固相亞磷酰胺三酯法在DNA自動(dòng)合成儀上合 成。實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明所述Aurora A-LNAzyme抑制了 Aurora A在前列腺癌細(xì)胞中的 表達(dá)；明顯抑制無(wú)胸腺小鼠體內(nèi)前列腺癌移植瘤的生長(zhǎng)，抑瘤率可達(dá)61%。因此，本發(fā)明所 述AuroraA-LNAzyme可在制備治療前列腺癌的藥中應(yīng)用。本發(fā)明具有以下有益效果1、本發(fā)明設(shè)計(jì)和合成了一種新型的靶向絲-蘇氨酸蛋白激酶極光激酶A的鎖核酸 核酶，為前列腺癌的治療提供了新藥品。2、實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明所述Aurora A-LNAzyme能抑制Aurora A在前列腺癌細(xì)胞中 的表達(dá)；能明顯抑制無(wú)胸腺小鼠體內(nèi)前列腺癌移植瘤的生長(zhǎng)，與DNAzyme2相比，對(duì)腫瘤生 長(zhǎng)的抑制能力更強(qiáng)，血清半衰期更長(zhǎng)，可望成為更優(yōu)的高效、特異、穩(wěn)定的前列腺癌抑制劑。


圖1是Aurora A的電泳圖和核酶對(duì)Aurora A體外切割的電泳圖，圖中，1為Aurora A的電泳圖(405bp) ；2為經(jīng)對(duì)照核酶處理的Aurora A的電泳圖，未見(jiàn)切割條帶；3為經(jīng) AuroraA-LNAzyme處理的Aurora A的電泳圖，可見(jiàn)293bp和112bp兩條切割條帶。圖2是Aurora A在前列腺癌細(xì)胞PC3中所表達(dá)蛋白的電泳圖，圖中，1為Aurora A在未轉(zhuǎn)染核酶的前列腺癌細(xì)胞PC3中所表達(dá)蛋白的電泳圖；2為Aurora A在轉(zhuǎn)染對(duì)照核 酶的前列腺癌細(xì)胞PC3中所表達(dá)蛋白的電泳圖；3為Aurora A在轉(zhuǎn)染Aurora A-LNAzyme的 前列腺癌細(xì)胞PC3中所表達(dá)蛋白的電泳圖；β-actin為Western blot的內(nèi)參照，圖中顯示 其在1、2、3中表達(dá)水平一致，說(shuō)明Aurora A條帶具有定量的可比性。圖3是流式細(xì)胞儀檢測(cè)的細(xì)胞周期分布圖，圖中，1為對(duì)照核酶導(dǎo)入前列腺癌細(xì)胞 PC3的周期分布圖，實(shí)驗(yàn)表明，處理12h，24h，48h，前列腺癌細(xì)胞PC3的周期分布相似，圖中 為處理48h時(shí)前列腺癌細(xì)胞PC3的周期分布；2為Aurora A-LNAzyme導(dǎo)入前列腺癌細(xì)胞PC3 處理12h的前列腺癌細(xì)胞PC3的周期分布圖，圖中顯示G2/M期細(xì)胞明顯增多；3為Aurora A-LNAzyme導(dǎo)入前列腺癌細(xì)胞PC3處理24h的前列腺癌細(xì)胞PC3的周期分布圖，圖中顯示 G2/M期細(xì)胞明顯增多；4為Aurora A-LNAzyme導(dǎo)入前列腺癌細(xì)胞PC3處理48h的前列腺癌 細(xì)胞PC3的周期分布圖，圖中顯示G2/M期細(xì)胞明顯增多，同時(shí)出現(xiàn)明顯的凋亡峰(SubGl，箭 頭所指)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 :Aurora A-LNAzyme設(shè)計(jì)與合成Aurora A-LNAzyme設(shè)計(jì)引入鎖核酸，對(duì)本專利申請(qǐng)發(fā)明人曾設(shè)計(jì)合成的脫氧核 酶DNAzyme2進(jìn)行修飾，設(shè)計(jì)成了本發(fā)明所述的Aurora A-LNAzyme0本發(fā)明所述Aurora A-LNAzyme的核苷酸序列為序列表中SEQ ID NO 1所示，所述核苷酸序列中，組成第一底物 識(shí)別結(jié)構(gòu)域、催化結(jié)構(gòu)域和第二底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域的核苷酸及其排列如下第一底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域 催化結(jié)構(gòu)域 第二底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域5' tLtLaacaggggctagctacaacga cctLgaaatL3'為了驗(yàn)證本發(fā)明所述Aurora A-LNAzyme的效果，還設(shè)計(jì)了對(duì)照核酶(Control)， 對(duì)照核酶的核苷酸序列及其排列如下第一底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域 催化結(jié)構(gòu)域 第二底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域5' tLtLaacaggggctaactacaacga cctLgaaatL3'對(duì)照核酶與Aurora A-LNAzyme的不同之處是催化結(jié)構(gòu)域中的第6個(gè)核苷酸不同， 即Aurora A-LNAzyme催化結(jié)構(gòu)域中的第6個(gè)核苷酸是“g”，而對(duì)照核酶催化結(jié)構(gòu)域中的第 6個(gè)核苷酸是“a”。本發(fā)明所述Aurora A-LNAzyme和對(duì)照核酶均采用固相亞磷酰胺三酯法(參見(jiàn)《核 酸結(jié)構(gòu).功能與合成下冊(cè)》，王德寶，祁國(guó)榮主編，科學(xué)出版社，1987. 6)，在DNA自動(dòng)合成儀 上合成。自90年代起，國(guó)內(nèi)外有關(guān)核苷酸序列的合成均已專業(yè)化、商品化。因此，將所設(shè)計(jì) 的Aurora A-LNAzyme和對(duì)照核酶交由有關(guān)專業(yè)公司合成。本發(fā)明的Aurora A-LNAzyme和 對(duì)照核酶交由美國(guó)sigma公司合成。
實(shí)施例 2 :Aurora A-LNAzyme 體夕卜切割 Aurora A1、試劑和材料RT-PCR 試劑盒為 Qiagen LongRange 2-step RT-PCR Kit (德國(guó) Qiagen 公司)；PC3、LNCaP和Du 145前列腺癌細(xì)胞購(gòu)自美國(guó)ATCC ；質(zhì)粒pcDNA3. 1 (+)購(gòu)自美國(guó) Invitrogen 公司；EcoRI酶，XhoI酶和T4DNA連接酶購(gòu)自寶生物公司；Aurora A-LNAzyme 實(shí)施例1設(shè)計(jì)與合成，用生理鹽水配制成50 μ M/L的溶液備 用；對(duì)照核酶實(shí)施例1設(shè)計(jì)與合成，用生理鹽水配制成50 μ M/L的溶液備用；
T7/SP6體外轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自美國(guó)Roche公司；地高辛化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Roche公司；甲酰胺購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；溴酚藍(lán)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；EDTA 購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；聚丙烯酰胺購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。2、實(shí)驗(yàn)方法(1)克隆 Aurora A cDNA 部分片段從基因文庫(kù)(進(jìn)入號(hào)AF011468)中獲取Aurora A的編碼序列，用RT-PCR克隆 Aurora A保守片斷。分別提取三個(gè)前列腺癌細(xì)胞PC3、LNCaP和Dul45的總RNA，然后以相 同比例合并，以其作為模板，合成第一條cDNA鏈，再以所述cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增在 95°C預(yù)變性6分鐘后，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段(94°C, Imin ；58°C, Imin ；70°C，90s)，循環(huán)34次。 引物序列設(shè)計(jì)如下上游引物5 ‘-GCGAATTCC ATCATGGACCGATCTAA-3’，帶有EcoRI酶切位 點(diǎn)及二個(gè)保護(hù)堿基；下游引物5’-GCCTCGAGTTCAGGTGCCGATGGCAG-3’，帶有XhoI酶切位點(diǎn)及 二個(gè)保護(hù)堿基。PCR擴(kuò)增后得到長(zhǎng)度為341bp的PCR產(chǎn)物(見(jiàn)SEQ ID NO :2)，其經(jīng)凝膠電 泳純化回收后，經(jīng)EcoRI和XhoI酶切，并由T4DNA連接酶催化，連接到質(zhì)粒pcDNA3. 1 (+)的 EcoRI和XhoI酶切位點(diǎn)之間，形成重組質(zhì)粒pcDNA3-Aurora A_l。(2) Aurora A的體夕卜切害Ij用XhoI酶切重組質(zhì)粒pcDNA3_Aurora A_l，使之線型化。按T7/SP6體外轉(zhuǎn)錄試 劑盒說(shuō)明書(shū)的要求，用T7/SP6體外轉(zhuǎn)錄試劑盒合成地高辛-UTP標(biāo)記的Aurora Α,此地高 辛-UTP標(biāo)記的Aurora A由405個(gè)核苷酸構(gòu)成(見(jiàn)SEQ ID NO :3)，其中核酶切點(diǎn)位于SEQ ID N03的112位堿基a和113位堿基c之間。將地高辛-UTP標(biāo)記的Aurora A和Aurora A-LNAzyme 以 1 100 的摩爾比加到 20 μ 1 反應(yīng)緩沖液(50mmol/L Tris-Hcl, ρΗ7· 2，15mM Mgcl2,0.01% SDS)中，40°C孵育2小時(shí)后，加質(zhì)量濃度96%的甲酰胺、質(zhì)量濃度0. 的溴 酚藍(lán)和20mmol/L EDTA中止反應(yīng)。上述反應(yīng)的反應(yīng)產(chǎn)物在質(zhì)量濃度50%的甲酰胺中變性8 分鐘，置于冰上冷卻，然后在質(zhì)量濃度8%的聚丙烯酰胺凝膠(含8mol/l尿素)，500V,電泳 1. 5h。電泳結(jié)束后，按地高辛化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求，用地高辛化學(xué)發(fā)光 法檢測(cè)切割條帶。采用上述方法用對(duì)照核酶體外切割A(yù)urora Α,并用地高辛化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒
5檢測(cè)切割條帶。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果地高辛化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)切割條帶的結(jié)果見(jiàn)圖1，圖1顯示，本發(fā)明所述Aurora A-LNAzyme能酶切約80%的Aurora A，對(duì)照核酶不能切割A(yù)urora A。實(shí)施例3 =Aurora A-LNAzyme轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞PC31、試劑、材料和器材FuGENE6，購(gòu)自美國(guó) Roche 公司；Aurora A-LNAzyme 實(shí)施例1設(shè)計(jì)與合成，用生理鹽水配制成50 μ M/L的溶液備 用；對(duì)照核酶實(shí)施例1設(shè)計(jì)與合成，用生理鹽水配制成50 μ M/L的溶液備用；前列腺癌細(xì)胞PC3 購(gòu)自美國(guó)ATCC ；Coulter流式細(xì)胞儀，購(gòu)自Beckman公司；數(shù)據(jù)分析軟件ModFitLT 2.0，美國(guó) Verity Software House 產(chǎn)品。2、實(shí)驗(yàn)方法常規(guī)培養(yǎng)前列腺癌細(xì)胞PC3，當(dāng)前列腺癌細(xì)胞PC370%融合以后，通過(guò)FuGENE6按 照說(shuō)明書(shū)要求分別將濃度300nmol/L的Aurora A-LNAzyme液、濃度300nmol/L的對(duì)照核 酶液轉(zhuǎn)染到前列腺癌細(xì)胞PC3中，在轉(zhuǎn)染24小時(shí)和48小時(shí)后分別收集上述被轉(zhuǎn)染Aurora A-LNAzyme、對(duì)照核酶的前列腺癌細(xì)胞PC3，然后用常規(guī)Western印跡方法分別檢測(cè)未轉(zhuǎn)然 核酶的前列腺癌細(xì)胞PC3中的Aurora A蛋白，轉(zhuǎn)染了 Aurora A-LNAzyme和對(duì)照核酶的前 列腺癌細(xì)胞PC3中的AuroraA蛋白。為測(cè)定前列腺癌細(xì)胞PC3中Aurora A表達(dá)水平對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)程的影響，使用流式 細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞周期分布，測(cè)定操作通過(guò)FuGENE6按照說(shuō)明書(shū)要求分別將濃度300nmol/ L的AuroraA-LNAzyme液、濃度300nmol/L的對(duì)照核酶液轉(zhuǎn)染到前列腺癌細(xì)胞PC3中，在轉(zhuǎn) 染(處理)12、24、48小時(shí)后分別收集被轉(zhuǎn)染Aurora A-LNAzyme的前列腺癌細(xì)胞PC3與被 轉(zhuǎn)染對(duì)照核酶的前列腺癌細(xì)胞PC3，然后分別用0. IM的PBS沖洗、用含0. 05mg/L碘化丙啶 的 Krishan 緩沖液(0. 1% sodium citrate,0. 2mg ml_lRNAase,0. 3% NP40)終止反應(yīng)，在 4°C孵育30分鐘，繼后用Coulter流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)分析，用ModFitLT 2. O軟件進(jìn)行數(shù) 據(jù)分析。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果Western印跡方法檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖2，圖2顯示，轉(zhuǎn)染對(duì)照核酶的前列腺癌細(xì)胞PC3 中Aurora A蛋白的表達(dá)水平與未轉(zhuǎn)染對(duì)照核酶的前列腺癌細(xì)胞PC3中Aurora A蛋白的 表達(dá)水平相同；轉(zhuǎn)染Aurora A-LNAzyme的前列腺癌細(xì)胞PC3與未轉(zhuǎn)染Aurora A-LNAzyme 的前列腺癌細(xì)胞PC3相比，所含Aurora A蛋白明顯減少。上述檢測(cè)結(jié)果表明，本發(fā)明所述 Aurora A-LNAzyme抑制了 AuroraA在前列腺癌細(xì)胞中的表達(dá)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖3，圖3顯示，在Aurora A-LNAzyme處理組的細(xì)胞中， 出現(xiàn)于G2-M期的細(xì)胞百分率在12小時(shí)增加到約18. 23%, 24小時(shí)為28. 02%,48小時(shí)為 39. 56%。在對(duì)照核酶處理組的細(xì)胞中,G2-M期的細(xì)胞百分率在12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)每 個(gè)時(shí)間點(diǎn)都接近于9. 27%。相較于對(duì)照核酶處理組的細(xì)胞，Aurora A-LNAzyme處理組的細(xì) 胞中有一部分處于細(xì)胞周期中的亞G1的細(xì)胞(18. 33%)，提示凋亡細(xì)胞明顯增加。上述檢
6測(cè)結(jié)果表明，本發(fā)明所述AuroraA-LNAzyme介導(dǎo)的Aurora A表達(dá)受抑，會(huì)引起前列腺癌細(xì) 胞PC3在G2-M期異常聚集直至最終凋亡。實(shí)施例4 =LNAzyme抑制小鼠前列腺癌移植瘤的生長(zhǎng)1、材料和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物前列腺癌細(xì)胞PC3 購(gòu)自美國(guó)ATCC ；Aurora A-LNAzyme 實(shí)施例1設(shè)計(jì)與合成；對(duì)照核酶實(shí)施例1設(shè)計(jì)與合成；BALB/C裸鼠四川大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。2、實(shí)驗(yàn)方法BALB/C雌性裸鼠12只，BALB/C雄性裸鼠12只，平均年齡5周，平均體重20g。所 有裸鼠被分成三組，每組由四只雌性BALB/C裸鼠和四只雄性BALB/C裸鼠組成。第一組為 生理鹽水組，第二組為Aurora A-LNAzyme組，第三組為對(duì)照核酶組。將IXlO7前列腺癌細(xì)胞PC3經(jīng)皮下注射移植到各組的每只裸鼠。5周以后，腫瘤組 織的體積增加到約65mm3用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。第一組中的各只裸鼠每天接受10 μ 1/只的生理鹽水注射。第二組中的各只裸鼠 每天通過(guò)瘤內(nèi)多位點(diǎn)注射將Aurora A-LNAzyme液注入腫瘤組織，各只裸鼠每天的注射量 為8 μ g AuroraA-LNAzyme溶于10 μ 1生理鹽水形成的Aurora A-LNAzyme液。第三組中 的各只裸鼠每天通過(guò)瘤內(nèi)多位點(diǎn)注射將對(duì)照核酶液注入腫瘤組織，各只裸鼠每天的注射量 為8μ g對(duì)照核酶溶于10μ 1生理鹽水形成的對(duì)照核酶液。注射14天后處死每組裸鼠。測(cè) 量各只裸鼠體重和腫瘤濕重及體積，數(shù)據(jù)以(平均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差)表示。計(jì)算抑瘤率〔抑瘤 率=(生理鹽水組瘤重_核酶處理組瘤重)/生理鹽水組瘤重Χ100 %〕，通過(guò)方差分析來(lái)進(jìn) 行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P < 0. 05視為有顯著性差異。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。表114天時(shí)裸鼠體重，移植瘤體積及重量(η = 8) ^Aurora A-LNAzyme組與生理鹽水組和對(duì)照核酶組比較，P < 0. 05實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明所述Aurora A-LNAzyme明顯抑制了人前列腺癌在無(wú)胸腺小 鼠體內(nèi)的移植瘤的生長(zhǎng)，而對(duì)照核酶并沒(méi)有表現(xiàn)出抑制腫瘤生長(zhǎng)的效果。實(shí)施例 5 :Aurora A-LNAzyme 與 DNAzyme2 的比較1、血清半衰期比較(I)Aurora A-LNAzyme 血清半衰期測(cè)定①試劑和儀器酚、氯仿、聚丙酰胺變性凝膠購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；FH2408自動(dòng)定標(biāo)器購(gòu)自北京核儀器廠；
Aurora A-LNAzyme 實(shí)施例1設(shè)計(jì)與合成。②測(cè)定方法Aurora A-LNAzyme 的 32P 標(biāo)記參照文獻(xiàn)[Sambrook J. Molecular Cloning a LaboratoryManual,2nd. New York CoId Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, 1989]進(jìn)行。降解反應(yīng)如下取每分鐘脈沖數(shù)(counts per minute, cpm)為2X105 的標(biāo)記 Aurora A-LNAzyme, 20 μ 1 人血清，0. 9nmol 未標(biāo)記 Aurora A_LNAzyme,力口水至總體 積為100 μ 1?；靹?，置37°C水浴。分別于反應(yīng)后第lh、2h、4h、8h、16h各取20μ 1樣品，酚 和氯仿抽提后，20%聚丙酰胺變性凝膠電泳，-20°C壓片8h，在X線觀片燈上切下對(duì)應(yīng)條帶 凝膠，F(xiàn)H2408自動(dòng)定標(biāo)器計(jì)數(shù)CPM值，按下式計(jì)算Aurora A-LNAzyme的降解率，降解率= 降解條帶CPM/ (未降解條帶CPM+降解條帶CPM) X 100%。③測(cè)定結(jié)果AuroraA-LNAzyme 在 16 小時(shí)的降解率為 12. 3%。(2)DNAzyme2血清半衰期測(cè)定DNAzyme2的血清半衰期測(cè)定同上述方法，測(cè)定結(jié)果為DNAZyme2血清半衰期為4 小時(shí)。2、抑瘤率的比較Aurora A-LNAzyme的抑瘤率為61 % (見(jiàn)實(shí)施例4)，DNAzyme2的抑瘤率為53% (見(jiàn) CancerGene Ther. 200815(8) :523)。上述數(shù)據(jù)表明，與DNAzyme2相比，本發(fā)明所述Aurora A-LANzyme對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑 制能力更強(qiáng)，血清半衰期更長(zhǎng)，因此Aurora A-LNAzyme可望成為更優(yōu)的高效、特異、穩(wěn)定的 前列腺癌抑制劑。
權(quán)利要求
一種靶向絲 蘇氨酸蛋白激酶極光激酶A的鎖核酸核酶，其特征在于它的核苷酸序列為序列表中SEQ ID NO1所示，所述核苷酸序列中，位于中部的15個(gè)脫氧核苷酸ggctagctacaacga組成催化結(jié)構(gòu)域，位于催化結(jié)構(gòu)域左側(cè)的8個(gè)核苷酸t(yī)LtLaacagg組成第一底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域，位于催化結(jié)構(gòu)域右側(cè)的8個(gè)核苷酸cctLgaaatL組成第二底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域，第一底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域和第二底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域均含有兩個(gè)鎖核酸t(yī)L。
2.權(quán)利要求1所述靶向絲-蘇氨酸蛋白激酶極光激酶A的鎖核酸核酶在制備治療前列 腺癌的藥中的應(yīng)用。
全文摘要
一種靶向絲-蘇氨酸蛋白激酶極光激酶A的鎖核酸核酶，其核苷酸序列為序列表中SEQ IDNO1所示，所述核苷酸序列中，位于中部的15個(gè)脫氧核苷酸組成催化結(jié)構(gòu)域，位于催化結(jié)構(gòu)域左側(cè)的8個(gè)核苷酸組成第一底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域，位于催化結(jié)構(gòu)域右側(cè)的8個(gè)核苷酸組成第二底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域，第一底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域和第二底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域均含有兩個(gè)鎖核酸t(yī)L。所述靶向絲-蘇氨酸蛋白激酶極光激酶A的鎖核酸核酶可在制備治療前列腺癌的藥中應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P13/08GK101914536SQ201010221558
公開(kāi)日2010年12月15日 申請(qǐng)日期2010年7月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月9日
發(fā)明者伍金林, 唐軍, 屈藝, 張 林, 張莉, 李熙鴻, 母得志, 王 華, 石晶, 趙鳳艷 申請(qǐng)人:四川大學(xué)