專利名稱：一種豬多聯(lián)抗血清復合制劑的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種抗血清制劑的制備方法，具體是一種豬多聯(lián)抗血清復合制劑的制備方法。
背景技術：
豬多聯(lián)抗血清是一種針對某些特定病毒的綜合性抗體，注射后可以快速提高機體 特定病毒抗體水平，使機體短時期內(nèi)獲得針對這些特定病毒的被動性免疫，是這些特定病 毒性疾病的緊急免疫手段。但是由于豬多聯(lián)抗血清中可能存在有包括細菌、病毒和支原體 等外源微生物，使用后可能給豬群帶來其他細菌和病毒性疾病，所以需要一種抗血清中病 毒、細菌及支原體等的滅活技術來保證豬多聯(lián)抗血清的安全性。目前抗血清制品主要采用超速離心、膜過濾、親和吸附柱過濾去除外源微生物。超 速離心法可以將抗血清與外源微生物分離，但是存在成本大、血清得率低、安全性偏低并且 不易生產(chǎn)擴大化的缺點，很難運用于實際生產(chǎn)中；授權公告號為CN1325061C的發(fā)明專利所 述的血漿制劑或血清制劑及其制造方法采用膜過濾技術可以將大于膜孔直徑的病毒完全 分離，達到去除血清中外源病毒的作用，但是存在技術設備要求高、成本大、操作繁瑣且周 期長的缺點；公開號為CN101628135A的發(fā)明專利公開的特異性清除血液中病毒粒子的親 和吸附柱及其制備方法中采用親和吸附柱過濾技術能夠完全去除某一個特定血清外源病 毒，效果好、操作簡便、成本低、可重復性好，但是其具有特異性強，只能去除某特定外源病 毒，豬多聯(lián)抗血清制品的外源微生物具有不可知性，所以該項技術難以應用于豬多聯(lián)抗血 清制品外源微生物的去除。黃芪多糖是從中草藥黃芪中提取的一種有效成分，具有抗菌抗病毒功效，其可以 顯著增強非特異性免疫功能和體液免疫功能，能激活機體B細胞轉(zhuǎn)化為漿細胞，分泌抗體， 還可以刺激機體T細胞的分化和成熟，參與免疫應答反應，并且可以誘導機體產(chǎn)生干擾素、 白介素等細胞因子，增強機體抗病能力，是一種很好的免疫調(diào)節(jié)劑，臨床上已得到廣泛的應用。許多研究表明，多糖對免疫球蛋白有良好的保護作用，其作用機制是多糖能夠包 裹在免疫球蛋白周圍并且填充在免疫球蛋白功能結構內(nèi)，特別是活性部位，有效防止免疫 球蛋白分子發(fā)生三維結構的變化，從而避免了免疫球蛋白分子活性的丟失。
發(fā)明內(nèi)容
為了提高豬多聯(lián)抗血清制品的預防效果，并且為了克服現(xiàn)有豬多聯(lián)抗血清制品中 外源微生物分離技術成本大、技術設備要求高以及病毒、細菌及支原體滅活效果差等缺點， 本發(fā)明提供一種豬多聯(lián)抗血清復合制劑的制備方法。解決上述技術問題，本發(fā)明所述的一種豬多聯(lián)抗血清復合制劑的制備方法，是將 黃芪多糖在12rC、100kPa條件下滅菌60分鐘，滅菌后的黃芪多糖溶液加入到含有豬瘟病毒抗體、豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體和豬偽狂犬病病毒抗體的抗血清中形成豬多聯(lián)抗血 清復合溶液，并使黃芪多糖在該復合溶液中的質(zhì)量濃度為1%，再使用6tlCo-Y射線輻照該 豬多聯(lián)抗血清復合溶液制得豬多聯(lián)抗血清復合制劑，輻照溫度為15 25°C，輻照劑量率為 5 20Gy/min，輻照吸收劑量為9 19kGy。為取得更好的效果，優(yōu)選的輻照條件是輻照溫度為20°C，輻照劑量率為13. SGy/ min，輻照吸收劑量為12kGy。該豬多聯(lián)抗血清復合制劑選用黃芪多糖作為抗體保護劑及免疫增強劑，其與豬多 聯(lián)抗血清配合，首先其可以包裹在抗體周圍形成保護層，在6tlCo-Y射線輻照該復合制劑時 保護抗體活性，其次黃芪多糖能夠激活機體免疫系統(tǒng)，增強B細胞、T細胞的活化，增強其他 吞噬細胞的殺傷作用，并且促進細胞分泌各種免疫因子(干擾素等)，抑制病毒繁殖。通過抽取高免豬的血液，再取血清就可以得到豬瘟病毒抗體、豬繁殖與呼吸綜合 征病毒抗 體和豬偽狂犬病病毒抗體的抗血清。本發(fā)明用6tlCo-Y射線輻照豬多聯(lián)抗血清復 合制劑滅活病毒、細菌及支原體的原理是在輻照過程中，6tlCo釋放出的Y射線穿透西林 瓶，作用于外源病毒、細菌及支原體，直接或間接破壞其DNA、RNA、蛋白質(zhì)和酶等生命至關重 要的物質(zhì)，從而殺死病毒、細菌及支原體。直接作用是指Y射線輻照病毒、細菌及支原體內(nèi) 的核糖核酸、蛋白質(zhì)和酶分子，使其激發(fā)或電離，激發(fā)態(tài)分子的共價鍵斷裂或與其它分子反 應經(jīng)電子傳遞產(chǎn)生自由基，導致它們分子結構破壞而死亡。間接作用是指Y射線能量被病 毒、細菌及支原體內(nèi)生命重要分子的周圍物質(zhì)如水吸收而激發(fā)或電離，產(chǎn)生激發(fā)的水分子、 電子或水離子，或裂解為氫自由基、羥自由基，由此產(chǎn)生一系列與核糖核酸、蛋白質(zhì)、酶進行 氧化還原等反應，致病毒、細菌及支原體死亡。各種微生物之間，對輻照敏感性差異很大，革 蘭氏陰性菌對輻照敏感，有一些革蘭氏陽性菌對輻照異常頑固。芽孢比生長的細胞更能抗 輻照。病毒比細菌芽孢對輻照更具有抵抗力，其抗輻照性能隨著微生物個體的減少而增大， 芽孢的抗輻照性能按次序比細菌、酵母、霉菌更強些。輻照吸收劑量對病毒、細菌及支原體的滅活效果具有至關重要的影響，超出條件 范圍或者達不到滅活效果，或者會破壞抗血清本身的有效成分。藥典中已將6tlCo-Y射線輻 照作為一種輻照滅菌方法，常用的滅菌輻照吸收劑量為25kGy，該項滅菌技術已廣泛應用于 中藥材、中成藥、抗生素、維生素等的滅菌，但在抗血清制品滅菌中還未見報道，就是由于輻 照吸收劑量影響抗體效價和滅菌效果，輻照吸收劑量過大時雖然能達到滅菌效果，但抗體 效價衰減過多，輻照吸收劑量過小時抗體效價衰減不明顯，但滅菌效果不佳，所以既要保證 滅菌效果，又要保證抗體效價不衰減，輻照滅菌吸收劑量難以確定。本發(fā)明組成員通過長期 努力，經(jīng)過大量實驗確定了一種豬多聯(lián)抗血清復合制劑的輻照條件，輻照過程在普通的室 溫條件下進行，可以有效地殺滅豬多聯(lián)抗血清復合制劑中的病毒、細菌及支原體。本發(fā)明對輻照吸收劑量分組進行了篩選，分別選取了三個輻照吸收劑量組2 SkGy, 9 19kGy，20 25kGy。短小芽孢桿菌孢子是6tlCo- γ射線輻照滅菌法的生物指示劑， 所以選用短小芽孢桿菌作為輻照吸收劑量篩選指示劑。將短小芽孢桿菌孢子片(IO7個)與 豬多聯(lián)抗血清復合制劑共同裝于IOml西林瓶中，每瓶一片短小芽孢桿菌孢子片及IOml豬 多聯(lián)抗血清復合制劑(豬瘟病毒抗體OD值為2. 860，豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體OD值為 3. 042，豬偽狂犬病病毒抗體OD值為2. 217)，并設不輻照陽性對照組，分別進行三組輻照吸 收劑量組的輻照滅菌，輻照溫度為15 25°C，輻照劑量率為5 20Gy/min，輻照后分別用豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒、豬繁殖與呼吸綜合征ELISA抗體檢測試劑盒和豬偽狂犬 病病毒ELISA抗體檢測試劑盒檢測豬多聯(lián)抗血清復合制劑中豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合 征病毒和豬偽狂犬病病毒抗體效價水平，并且將短小芽孢桿菌孢子片取出放入胰蛋白胨大 豆肉湯(TSB)培養(yǎng)基中35°C培養(yǎng)，每日觀察情況，共培養(yǎng)7日。結果為下表 表1 不同輻照區(qū)間三種病毒抗體OD值
—抗體OD值抗體OD值抗體OD值
輻照吸收劑量_2 8kGy_9 19kGy_20 25kGy_
豬瘟病毒_ 2. 858 2. 8212. 791 2. 4821. 599 0. 392
豬繁殖與呼吸綜合征病__ 3. 029 2. 9882. 900 2. 5471. 665 0. 443
豬偽狂犬病病毒|2. 193 2. Ill|2. 101 1.672|θ. 759 0. 301
輻照吸收劑量為2 SkGy的豬多聯(lián)抗血清復合制劑三種病毒抗體OD值變化不明顯， 培養(yǎng)短小芽孢桿菌孢子片的培養(yǎng)基48小時時渾濁；輻照吸收劑量為9 19kGy的豬多聯(lián)抗 血清復合制劑三種病毒抗體OD值下降幅度不大，培養(yǎng)短小芽孢桿菌孢子片的培養(yǎng)基7日后 仍澄清透明；輻照吸收劑量為20 25kGy的豬多聯(lián)抗血清復合制劑三種病毒抗體OD值急 劇下降，抗體效價損失嚴重，培養(yǎng)短小芽孢桿菌孢子片培養(yǎng)基7日后仍澄清透明；不輻照陽 性對照組三種病毒抗體OD值仍為原先值，不變，培養(yǎng)短小芽孢桿菌孢子片培養(yǎng)基24小時時 渾濁。通過實驗結果可以看出當輻照吸收劑量為20 25kGy時，雖然能夠達到豬多聯(lián)抗血 清復合制劑殺滅短小芽孢桿菌孢子的要求但是豬多聯(lián)抗血清復合制劑抗體效價急劇下降， 故不能作為豬多聯(lián)抗血清復合制劑殺滅病毒、細菌及支原體的輻照吸收劑量；當輻照吸收 劑量為2 SkGy時，雖然豬多聯(lián)抗血清復合制劑抗體效價變化不明顯，但是未能達到豬多 聯(lián)抗血清復合制劑殺滅短小芽孢桿菌孢子的要求，故也不能作為豬多聯(lián)抗血清復合制劑殺 滅病毒、細菌和支原體的輻照吸收劑量；只有在輻照吸收劑量為9 19kGy時，既能達到豬 多聯(lián)抗血清復合制劑殺滅病毒、細菌和支原體的要求，又能使豬多聯(lián)抗血清復合制劑抗體 效價下降幅度不大，故該輻照吸收劑量為最佳劑量。以下是6tlCo-Y射線對豬多聯(lián)抗血清復合制劑中抗體效價的影響所做的實驗，取 豬多聯(lián)抗血清復合制劑(豬瘟病毒抗體OD值為2. 860，豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體OD 值為3. 042，豬偽狂犬病病毒抗體OD值為2. 217)分別分裝于無菌西林瓶中，每瓶10ml， 每5瓶為一組，將分裝后的豬多聯(lián)抗血清復合制劑用6tlCo- γ射線輻照，輻照吸收劑量分別 為 9kGy，IOkGy, IlkGy, 12kGy, 13kGy, 14kGy, 15kGy, 16kGy, 17kGy, 18kGy, 19kGy，輻照溫度為 20°C，輻照劑量率為13. 8Gy/min0輻照后分別用豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒、豬繁殖與 呼吸綜合征ELISA抗體檢測試劑盒和豬偽狂犬病病毒ELISA抗體檢測試劑盒檢測豬多聯(lián)抗 血清復合制劑中豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬偽狂犬病病毒抗體效價水平，結 果如下表2、3、4所示。表2 豬瘟病毒$體OD值 ____
福照吸收劑量 |9kGyIlOkGyIllkGy|l2kGy|l3kGy|l4kGy
抗體 OD 值—2.7912.7752.751~ 2.7202.6972.655
福照吸收劑 f 15kGy16kGyTVkGy— 18kGy19kGy
抗體 OD 值 \2. 607\2. 579\2. 534\2. 501\2. 482
表3 豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體OD值
從表2、3、4可見9 19kGy中的任意一個輻照吸收劑量都可以作為豬多聯(lián)抗血清復 合制劑病毒、細菌和支原體的滅菌劑量，其對血清抗體效價影響不明顯。在以上條件范圍之 內(nèi)，從大量實驗中優(yōu)選的輻照條件是輻照溫度為20°C，輻照劑量率為13. 8Gy/min，輻照吸 收劑量為12kGy。本發(fā)明所述的豬多聯(lián)抗血清復合制劑注射豬體能夠使豬體迅速具有豬瘟病毒抗 體、豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體及豬偽狂犬病病毒抗體，使豬體達到被動免疫的效果；該 豬多聯(lián)抗血清復合制劑并同時具有增強機體免疫機能的作用，使豬能夠更好的抵抗病毒性 疾病的發(fā)生，而且通過60Co- γ射線輻技術不會有外源病毒和細菌感染的危險，該方法可 以殺滅豬多聯(lián)抗血清復合制劑中的病毒、細菌及支原體，輻照后的西林瓶呈棕褐色，此滅活 病毒、細菌和支原體的技術較膜過濾、親和吸附柱過濾技術成本降低約70%，操作極其簡便， 并且對豬多聯(lián)抗血清復合制劑的抗體效價影響小，同時，在原有豬多聯(lián)抗血清的基礎上加 入抗體保護劑及免疫調(diào)節(jié)劑——黃芪多糖。本發(fā)明所述的方法操作簡便、成本低廉、既能保 護抗體活性、還能增強機體自身免疫反應，使其達到良好的緊急預防免疫效果。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明，實施例1為本發(fā)明的制備方法，實 施例2-7是豬多聯(lián)抗血清復合制劑的病毒、細菌和支原體的滅活實驗。實施例1
制備IL豬多聯(lián)抗血清復合制劑
黃芪多糖IOg加熱溶于50ml注射用水中，調(diào)pH值為6 7之間，過濾除雜，然后在 121°CUOOkPa條件下進行高溫高壓滅菌60分鐘，取出滅菌后的黃芪多糖與950ml豬多聯(lián) 抗血清混合，攪勻，分裝于IOml西林瓶中，壓蓋，用6tlCo-γ射線輻照，輻照條件是輻照溫 度 200C (或 15°C或 25°C或 17°C)，輻照劑量率為 13. 8Gy/min (或 5Gy/min 或 20Gy/min 或 15Gy/min)，輻照吸收劑量為 12kGy (或 9kGy 或 19kGy 或 15kGy)。實施例2
60Co- γ射線對豬多聯(lián)抗血清復合制劑中豬瘟病毒的滅活
取豬瘟石門系血毒與豬多聯(lián)抗血清復合制劑(豬瘟病毒抗體OD值為2. 860，豬繁殖與 呼吸綜合征病毒抗體OD值為3. 042，豬偽狂犬病病毒抗體OD值為2. 217)1 1混合，混合后 豬瘟病毒抗體OD值為1. 896，豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體OD值為2. 214，豬偽狂犬病病 毒抗體OD值為1.548，其最小致死量為105/ml，分裝于無菌西林瓶中，每瓶10ml，每5瓶為 一組，同時設接毒對照組即接毒不輻照豬多聯(lián)抗血清復合制劑組。輻照溫度20°C (或15°C 或 25°C或 17°C)，輻照劑量率為 13. 8Gy/min(或 5Gy/min 或 20Gy/min 或 15Gy/min)，輻照吸收劑量為12kGy(或9kGy或19kGy或15kGy)，輻照完后，三組用豬瘟抗原膠體金快速檢測試 劑檢測豬多聯(lián)抗血清復合制劑中的豬瘟病毒，實驗組顯示為陰性，接毒對照組顯示為陽性， 表明6tlCo-Y射線能夠?qū)⒇i多聯(lián)抗血清復合制劑中的豬瘟病毒滅活。實施例3
60Co- γ射線對豬多聯(lián)抗血清復合制劑中口蹄疫病毒的滅活
取口蹄疫病毒0S/99株毒液與豬多聯(lián)抗血清復合制劑(豬瘟病毒抗體OD值為2. 860，豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體OD值為3. 042，豬偽狂犬病病毒抗體OD值為2. 217) 1 1混 合，混合后豬瘟病毒抗體OD值為1. 896，豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體OD值為2. 214，豬偽 狂犬病病毒抗體OD值為1. 548，其半數(shù)感染量為104ID5(i/0. 2ml，分裝于無菌西林瓶中，每瓶 10ml，每5瓶為一組，同時設接毒對照組即接毒不輻照豬多聯(lián)抗血清復合制劑組。輻照溫 度 200C (或 15°C或 25°C或 17°C)，輻照劑量率為 13. 8Gy/min (或 5Gy/min 或 20Gy/min 或 15Gy/min)，輻照吸收劑量為12kGy (或9kGy或19kGy或15kGy)，輻照完后，用反向間接血 凝試驗(RIHA)檢測豬多聯(lián)抗血清復合制劑中的口蹄疫病毒，實驗組無血球凝集現(xiàn)象，接毒 對照組出現(xiàn)血球凝集現(xiàn)象。表明6tlCo-γ射線能夠?qū)⒇i多聯(lián)抗血清復合制劑中的口蹄疫病 毒滅活。實施例4
60Co- γ射線對豬多聯(lián)抗血清復合制劑中豬繁殖與呼吸綜合征病毒的滅活
取豬繁殖與呼吸綜合征病毒CH-IR株毒液與豬多聯(lián)抗血清復合制劑(豬瘟病毒抗體 OD值為2. 860，豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體OD值為3. 042，豬偽狂犬病病毒抗體OD值為 2.217)1:1混合，混合后豬瘟病毒抗體OD值為1. 896，豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體OD值 為2. 214，豬偽狂犬病病毒抗體OD值為1. 548，其半數(shù)感染量為105_ 18TCID5(1/0. 1ml，分裝于 無菌西林瓶中，每瓶10ml，每5瓶為一組，同時設接毒對照組即接毒不輻照豬多聯(lián)抗血清復 合制劑組。輻照溫度20°C (或15°C或25°C或17°C)，輻照劑量率為13. 8Gy/min (或5Gy/ min 或 20Gy/min 或 15Gy/min)，輻照吸收劑量為 12kGy (或 9kGy 或 19kGy 或 15kGy)，輻照 完后，將實驗組、接毒對照組的豬多聯(lián)抗血清復合制劑分別接種生長良好的Marc-145細胞 單層的96孔細胞培養(yǎng)板上(接種前棄去生長液)，每孔200 μ 1，同時設正常細胞對照組，置 37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5日，可見實驗組、正常細胞對照組均沒有出現(xiàn)CPE(細胞病變)， 而接毒對照組出現(xiàn)了 CPE(細胞病變)，表明6tlCo-Y射線能夠?qū)⒇i多聯(lián)抗血清復合制劑中的 豬繁殖與呼吸綜合征病毒滅活。實施例5
60Co- γ射線對豬多聯(lián)抗血清復合制劑中豬偽狂犬病病毒的滅活
取豬偽狂犬病病毒BarthaK61株毒液與豬多聯(lián)抗血清復合制劑(豬瘟病毒抗體OD 值為2. 860，豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體OD值為3. 042，豬偽狂犬病病毒抗體OD值為 2.217)1:1混合，混合后豬瘟病毒抗體OD值為1. 896，豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體OD值 為2. 214，豬偽狂犬病病毒抗體OD值為1. 548，其半數(shù)感染量為50ID5(1/0. 2ml，分裝于無菌 西林瓶中，每瓶10ml，每5瓶為一組，同時設接毒對照組即接毒不輻照豬多聯(lián)抗血清復合制 劑組。輻照溫度20°C (或15°C或25°C或17°C)，輻照劑量率為13. 8Gy/min (或5Gy/min或 20Gy/min或15Gy/min)，輻照吸收劑量為12kGy (或9kGy或19kGy或15kGy)，輻照完后，將 實驗組、接毒對照組的豬多聯(lián)抗血清復合制劑通過絨毛尿囊膜接種雞胚，在37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4天，觀察結果，可見接毒對照組雞胚死亡且膜表面有隆起的痘斑樣病變，實驗組 雞胚發(fā)育正常，表明6tlCo-Y射線能夠?qū)⒇i多聯(lián)抗血清復合制劑中的豬偽狂犬病病毒滅活。實施例6
60Co- y射線對豬多聯(lián)抗血清復合制劑中豬肺炎支原體的滅活 取豬肺炎支原體168弱毒菌株(菌數(shù)為IO6CCU)與豬多聯(lián)抗血清復合制劑(豬瘟病毒抗 體OD值為2. 860，豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體OD值為3. 042，豬偽狂犬病病毒抗體OD值 為2. 217) 1 1混合，混合后豬瘟病毒抗體OD值為1. 896，豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體OD 值為2. 214，豬偽狂犬病病毒抗體OD值為1. 548，分裝于無菌西林瓶中，每瓶IOml，每5瓶為 一組，同時設接菌對照組即接菌不輻照豬多聯(lián)抗血清復合制劑組。輻照溫度20°C (或15°C 或 25°C或 17°C)，輻照劑量率為 13. 8Gy/min (或 5Gy/min 或 20Gy/min 或 15Gy/min)，輻照 吸收劑量為12kGy (或9kGy或19kGy或15kGy)，輻照完后，將實驗組、接菌對照組的豬多聯(lián) 抗血清復合制劑分別接種于含有酚紅的KM2培養(yǎng)基(pH值為7. 2 7. 6)，37°C恒溫培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)，觀察15日，可見實驗組培養(yǎng)基顏色無變化，仍為紅色，而接菌對照組培養(yǎng)基在24小 時后變?yōu)辄S色。表明6tlCo-γ射線能夠?qū)⒇i多聯(lián)抗血清復合制劑中的豬肺炎支原體滅活。實施例7
60Co- γ射線對豬多聯(lián)抗血清復合制劑中大腸桿菌的滅活
取大腸桿菌ASI. 90菌種(菌數(shù)為1 X IO8)與豬多聯(lián)抗血清復合制劑(豬瘟病毒抗體OD 值為2. 860，豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體OD值為3. 042，豬偽狂犬病病毒抗體OD值為 2.21 7)1:1混合，混合后豬瘟病毒抗體OD值為1. 896，豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體OD值 為2. 214，豬偽狂犬病病毒抗體OD值為1. 548，分裝于無菌西林瓶中，每瓶IOml，每5瓶為一 組，同時設接菌對照組即接菌不輻照豬多聯(lián)抗血清復合制劑組。輻照溫度20°C (或15°C或 25°C或 17°C)，輻照劑量率為 13. 8Gy/min(或 5Gy/min 或 20Gy/min 或 15Gy/min)，輻照吸收 劑量為12kGy (或9kGy或19kGy或15kGy)，輻照完后，用平板傾注稀釋分離法，將各組樣品 接種于麥康凱瓊脂平皿上測定大腸桿菌數(shù)。每種劑量三個適宜稀釋度，每個稀釋度三個重 復，37°C恒溫培養(yǎng)24 36h，觀察計數(shù)，取平均數(shù)。實驗組大腸桿菌活菌數(shù)為O個/ml，接菌 對照組大腸桿菌活菌數(shù)為1.86X 108個/ml，表明6tlCo-Y射線能夠?qū)⒇i多聯(lián)抗血清復合制 劑中的大腸桿菌滅活。
權利要求
一種豬多聯(lián)抗血清復合制劑的制備方法，其特征在于是將黃芪多糖在121℃、100kPa條件下滅菌60分鐘，滅菌后的黃芪多糖溶液加入到含有豬瘟病毒抗體、豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體和豬偽狂犬病病毒抗體的抗血清中形成豬多聯(lián)抗血清復合溶液，并使黃芪多糖在該復合溶液中的質(zhì)量濃度為1%，再使用60Co-γ射線輻照該豬多聯(lián)抗血清復合溶液制得豬多聯(lián)血清復合制劑，輻照溫度為15～25℃，輻照劑量率為5～20Gy/min，輻照吸收劑量為9～19kGy。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種豬多聯(lián)抗血清復合制劑的制備方法，其特征在于輻照 溫度為20°C，輻照劑量率為13. 8Gy/min，輻照吸收劑量為12kGy。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗血清制劑的制備方法，為了提高豬多聯(lián)抗血清制品的預防效果，本發(fā)明提供一種豬多聯(lián)抗血清復合制劑的制備方法，是將黃芪多糖在121℃、100KPa條件下滅菌60分鐘，滅菌后的黃芪多糖溶液加入到含有豬瘟病毒抗體、豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體和豬偽狂犬病病毒抗體的抗血清中形成豬多聯(lián)抗血清復合溶液，并使黃芪多糖在該復合溶液中的質(zhì)量濃度為1%，再使用60Co-γ射線輻照該豬多聯(lián)抗血清復合溶液制得豬多聯(lián)抗血清復合制劑，輻照溫度為15～25℃，輻照劑量率為5～20Gy/min，輻照吸收劑量為9～19kGy。本發(fā)明所述的方法操作簡便、成本低廉、既能保護抗體活性、還能增強機體自身免疫反應，使其達到良好的緊急預防免疫效果。
文檔編號A61K47/36GK101862452SQ20101023315
公開日2010年10月20日 申請日期2010年7月22日 優(yōu)先權日2010年7月22日
發(fā)明者喬云龍, 任鴻春, 田曉麗, 蘇向花 申請人:山西芮城亞寶獸藥有限公司