專利名稱：苦丁茶總苷及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種植物提取物及其制備方法，尤其涉及一 種苦丁茶苷及其制備方法。
背景技術(shù)：
苦丁茶是木犀科女貞屬粗壯女貞L. robustum(Roxb)Blume或木犀科女貞屬紫莖 女貞(L. purpurascens Y. C. Yang)，俗稱茶丁、富丁茶、皋盧茶，主要分布在云南、貴州、四川 等地，苦丁茶是我國傳統(tǒng)藥用植物，在民間使用歷史悠久?？喽〔杈哂星鍩釠鲅?、滋養(yǎng)肝腎 之功，具有散風(fēng)熱、清頭目、除煩渴、去油膩的功效，對治療頭痛、齒痛、目赤、熱病煩渴、痢疾 等有明顯作用。但苦丁茶中的某種生物堿成分具有苦寒特性，因此不是人人都適宜飲用苦 丁茶，患了風(fēng)寒感冒的人、虛寒體質(zhì)的人、慢性胃腸炎患者不能飲用，經(jīng)期女性和新產(chǎn)婦也 不適宜飲用。并且苦丁茶成分復(fù)雜，其有效成分含量有限，作為藥物使用時的使用量較大， 但苦丁茶苦味濃，口感不好，不宜被接受。為了去除苦丁茶中苦寒物質(zhì)，保留其活性成分，需要對苦丁茶中進行提純處理，作 為植物活性成分的提取多采用溶劑萃取法、大孔樹脂吸附法、溶劑沉淀法、溶劑沉淀法、膽 甾醇沉淀法、鉛鹽沉淀法、層析法等方法。但這些方法存在一些缺陷，例如溶劑萃取法耗 時長，易出現(xiàn)乳化層，嚴(yán)重影響總苷的萃取效果和純度，此法不宜對大量樣品的處理。大孔 樹脂吸附法植物中的油脂、親脂成分或者低極性成分易于與大孔樹脂結(jié)合，在樹脂表面涂 上一層油脂層，并且在大孔樹脂的溶劑洗脫為水或親水溶劑時，就會大大降低大孔樹脂的 吸附載量，嚴(yán)重影響分離效果。溶劑沉淀法需要加入高倍量的有機溶劑，有機溶劑用量大， 對環(huán)境有污染，且濃縮較為困難，提取物純度也低，還存在有機溶劑殘留問題。膽留醇沉淀 法苦丁茶苷與留醇形成的分子復(fù)合物不太穩(wěn)定，不適合用膽留醇沉淀法提純。鉛鹽沉淀 法工藝較復(fù)雜，除鉛工藝難，重金屬鉛含量高，產(chǎn)品顏色很深，很難達到食品和藥品標(biāo)準(zhǔn)要 求。層析法此法與樹脂法工藝類似，也有和大孔樹脂吸附法一樣的缺陷，另外層析用氧化 鋁的粒度太大分離效果差，粒度太小溶劑流速慢，容易使譜帶擴散。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于，針對苦丁茶苦味濃、口服不易接受、并且其有效成 分含量低、用量大的問題，提供一種去除膠質(zhì)及纖維素等無效成分保留活性成分、口感好、 應(yīng)用更廣、對于化學(xué)性肝損傷有輔助保護作用、并具有醒酒功能及降脂功能的苦丁茶總苷。本發(fā)明進一步要解決的技術(shù)問題在于，提供一種工藝簡單、成本低、能高效率提取 苦丁茶活性成分并有效保留活性成分、無溶劑污染的苦丁茶總苷制備方法。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是一種苦丁茶總苷，是以紫莖女貞苦 丁茶或/和粗壯女貞苦丁茶的葉片為原料，經(jīng)醇提、水沉、膜分離純化得到的提取物?？喽〔杩傑罩?，所述的醇提為采用乙醇為溶劑對原料進行至少一次的加熱提取， 濃縮提取液得浸膏。
苦丁茶總苷中，所述的水沉為將醇提得到的浸膏經(jīng)至少一次水溶后離心取澄清 溶液?？喽〔杩傑罩?，所述膜分離純化為經(jīng)水沉后的澄清溶液采用濾膜過濾得苦丁茶 總苷的純化液。苦丁茶總苷的制備方法，包括以下步驟(1)、醇提將紫莖女貞苦丁茶或/和粗壯女貞苦丁茶的葉片粉碎，加入乙醇加熱 回流提取1 3次，過濾，合并提取液，濃縮得到浸膏；(2)、水沉將醇提得到的浸膏溶水中，充分溶解后靜置，取上清液；重復(fù)水沉2 4次后合并上清液；將水沉后合并的上清液進行超高速離心處理，其中離心轉(zhuǎn)速為15000 20000轉(zhuǎn)/分鐘，棄去沉淀物得到澄清透明溶液；(3)、超濾膜分離純化將離心得到澄清透明溶液通過超濾膜過濾，超濾膜孔徑為 0. 001 0. 02微米，其中過濾時的壓力控制在0. 05 0. 15MPa,收集膜透過液；(4)、納濾膜分離純化步驟(4)得到的膜透過液再泵入納濾膜分離純化得到純化 液，其中納濾膜孔徑在0.001微米以下，包括0. 001微米?？喽〔杩傑罩苽浞椒ㄖ校霾襟E(1)的醇提為將紫莖女貞苦丁茶或/和粗壯女 貞苦丁茶的葉片粉碎，加入葉片重量5 10倍的乙醇，加熱回流提取1 3次，每次加熱回 流的時間為1 3小時，過濾合并提取液，將所有提取液濃縮到比重為1. 05 1. 20，得到浸 膏；苦丁茶總苷制備方法中，所述步驟(2)的水沉為將醇提得到的浸膏溶于5 10 倍重量的純化水中，充分溶解后靜置，取上清液，重復(fù)水沉2 4次后合并上清液?？喽〔杩傑罩苽浞椒ㄖ校诓襟E(1)的醇提之前還設(shè)有對葉片進行微波滅酶鈍化 處理步驟?？喽〔杩傑罩苽浞椒ㄖ?，在步驟(4)之后還設(shè)有對純化液進行噴霧干燥的步驟?？喽〔杩傑罩苽浞椒ㄖ校龅膰婌F干燥的步驟為將純化液泵入噴霧槽進行噴 霧干燥，得到苦丁茶總苷的干粉；其中噴霧槽的進風(fēng)溫度為185 205°C，出風(fēng)溫度為80 95 "C。本發(fā)明的苦丁茶總苷是是以紫莖女貞苦丁茶或/和粗壯女貞苦丁茶的葉片為原 料，經(jīng)醇提、水沉、膜分離純化得到的提取物。該提取物為混合物，其中富集了苦丁茶中的 活性成分，其活性成分主要包括阿克苷、異阿克苷，其中阿克苷占到提取物總量的40%左 右，上述活性成分的作用功效為抗氧化、護肝、降脂等。本發(fā)明的總苷純度高，并大大減少了 苦澀，口感綿甘。本發(fā)明的苦丁茶總苷除了應(yīng)用于食品、飲料等，還可以用于制造藥物注射 劑和口服液，并且其澄明度高，能長期儲存，在一年半保持澄明度不變?？喽〔杩傑罩腥コ?了寒性成分，使得產(chǎn)品安全性更高，適應(yīng)性更好更廣。本發(fā)明的制備方法中只涉及乙醇和水，避開使用其他有毒有害溶劑，安全性好；制 備的工序少，生產(chǎn)周期短，節(jié)省原料，尤其是節(jié)省了原料乙醇，降低了生產(chǎn)成本，工藝條件要 求不高，易于實現(xiàn)，有利于安全生產(chǎn)。生產(chǎn)效率高，產(chǎn)品純度高，去雜質(zhì)效果好，并有效地保 留了活性成分。本發(fā)明純化不采用高溫加熱濃縮，避免了活性成分中的糖苷鍵斷裂，保證 了活性成分如阿克苷不被破壞。制備方法中采用的濾膜可以反復(fù)使用，經(jīng)濟效益明顯。本 發(fā)明工藝簡化、提純過程簡單、操作方便、分離效率高、最適宜產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明采用超濾膜和納濾膜，其中超濾膜是一種孔徑規(guī)格一致、額定孔徑范圍為 0. 001 0. 02微米的微孔過濾膜。在膜的一側(cè)施以適當(dāng)壓力，就能篩出小于孔徑的溶質(zhì)分 子，以分離分子量大于500道爾頓、粒徑大于2 20納米的顆粒。納濾膜也是一種功能性的 半透膜，能截留納米級(0. 001微米)的物質(zhì)，其截留物質(zhì)分子量約為200-800MW左右。因此 本發(fā)明中可以通過超濾膜除熱原及病原微生物，其去除效果可達到藥典要求，產(chǎn)品更安全。


圖1是苦丁茶總苷的制備流程圖。
具體實施例方式一種苦丁茶總苷，是以紫莖女貞苦丁茶或/和粗壯女貞苦丁茶的葉片為原料，經(jīng) 醇提、水沉、膜分離純化得到的提取物。由于苦丁茶總苷為混合物，組成成分較為復(fù)雜，因 此，本發(fā)明要得到的產(chǎn)物一苦丁茶總苷就是通過上述方法提取純化后的物質(zhì)。所述的醇提為采用乙醇為溶劑對原料進行至少一次的加熱提取，濃縮提取液得浸膏。所述的水沉為將醇提得到的浸膏經(jīng)至少一次水溶后離心取澄清溶液。所述膜分離純化為經(jīng)水沉后的澄清溶液采用濾膜過濾得苦丁茶總苷的提取物。以下通過多個實施例來詳細說明本發(fā)明。實施例1 按照如圖1所示的制備流程，苦丁茶總苷的制備，包括以下步驟1.采摘的苦丁茶葉片，在12小時內(nèi)采用DWIM-20MV8微波干燥殺菌機，對其進行微 波滅酶鈍化處理，設(shè)定微波輸出功率15KW，傳送速度lm/min，進料葉子的厚度5cm，連續(xù) 進料。微波滅酶鈍化處理的過程也是對原料殺菌消毒、干燥的過程。2.苦丁茶葉粉碎及浸提1)苦丁茶葉粉碎，過20目篩得到苦丁茶粗粉；2)上述粗粉中加入粗粉5倍重量的50%的食用乙醇浸泡1小時后，加熱回流1小 時，過濾，藥渣再加粗粉5倍重量的50%的食用乙醇加熱回流1小時，過濾，合并2次乙醇提 取液，棄殘渣；3)將兩次乙醇提取液減壓回收乙醇，并濃縮到比重1.05，得到浸膏。3.提純1)浸膏處理將浸膏充分溶于5倍重量的純化水中，靜置，取上清液，備用；然后重 復(fù)水沉3次后合并上清液，水沉上清液進行超高速離心，過GF-105型管式離心機(遼陽北 方制藥機械廠)，離心機轉(zhuǎn)速15000轉(zhuǎn)/分鐘，得到澄清透明溶液，作為沉淀物的藥渣棄去；2)裝好超濾膜，本實施例選用聚丙烯腈濾膜(型號UFbIA160，孔徑是0. 002 μ m)， 將澄清透明濾液泵入，控制操作壓力0. 05MPa,工作溫度為20°C，棄去膜阻斷物，收集膜透 過液。3)膜透過液再泵入HNF-90-4040型納濾膜(孔徑是Inm)，除去重金屬及小分子雜 質(zhì)，棄去膜阻斷物，得到純化液。4.濃縮及噴霧干燥處理1)將純化液直接泵入噴霧高位槽；2)在控制進風(fēng)溫度185°C，出風(fēng)溫度85°C，進行噴霧干燥，控制噴霧速度，得到苦 丁茶總苷的干粉。3)將干粉粉碎過成40目篩，雙層塑料袋包裝，得苦丁茶總苷粉。
經(jīng)檢測，本實施例苦丁茶總苷粉中，阿克苷含量為41. 38%、異阿克苷含量為
11.65%。實施例2 苦丁茶總苷的制備，包括以下步驟1.采摘的苦丁茶葉片，在12小時內(nèi)采用DWIM-20MV8微波干燥殺菌機采用 DWIM-20MV8微波干燥殺菌機，對葉片進行微波滅酶鈍化處理，設(shè)定微波輸出功率15KW，傳 送速度3m/min，進料葉子的厚度10cm，連續(xù)進料。微波滅酶鈍化處理的過程也是對原料殺 菌消毒、干燥的過程。2.苦丁茶葉粉碎及浸提1)苦丁茶葉粉碎，過20目篩得到苦丁茶粗粉；2)上述粗粉加入粗粉重量10. 5倍的95%的食用乙醇浸泡1小時后，加熱回流3 小時，過濾，藥渣分別兩次加10. 5倍量95%的食用乙醇加熱回流3小時，過濾，合并三次乙 醇提取液，棄殘渣；3)將三次乙醇提取液減壓回收乙醇，并濃縮到比重1. 20，得到浸膏。3.提純1)浸膏處理將浸膏溶于15倍量的純化水，靜置，取上清液，備用；重復(fù)水沉4次 后合并上清液，進行超高速離心，過GF-105型管式離心機(遼陽北方制藥機械廠)，離心機 轉(zhuǎn)速20000轉(zhuǎn)/分鐘，得到澄清透明溶液，作為沉淀物的藥渣棄去；2)裝好超濾膜，本實施例選用聚丙烯腈濾膜，孔徑是0.001 μ m，將澄清透明溶液 泵入，控制操作壓力0. 15MPa，工作溫度5°C，收集膜透過液，棄去膜阻斷物。3)膜透過液再泵入納濾膜，納濾膜孔徑是0. Inm,除去重金屬及小分子雜質(zhì)，棄去 膜阻斷物，得到純化液。4.濃縮及噴霧干燥處理1)將純化液直接泵入噴霧高位槽；2)在控制進風(fēng)溫度205°C，出風(fēng)溫度95°C，進行噴霧干燥，控制噴霧速度，使之得 到苦丁茶總苷的干粉。3)將干粉粉碎過成40目篩，雙層塑料袋包裝，得苦丁茶總苷粉。經(jīng)檢測，本實施例苦丁茶總苷粉中，阿克苷含量為42. 15%、異阿克苷含量為
12.92%。實施例3 苦丁茶總苷的制備，包括以下步驟1.采摘的苦丁茶葉片，在12小時內(nèi)采用DWIM-20MV8微波干燥殺菌機采用 DWIM-20MV8微波干燥殺菌機，對葉片進行滅酶鈍化處理，設(shè)定微波輸出功率15KW，傳送速 度2m/min，進料葉子的厚度8cm，連續(xù)進料。微波滅酶鈍化處理的過程也是對原料殺菌消 毒、干燥的過程。2.經(jīng)過處理的苦丁茶葉粉碎及浸提1)苦丁茶葉粉碎，過20目篩得到苦丁茶粗粉；2)上述粗粉加入粗粉10倍重量的80%的食用乙醇浸泡1小時后，加熱回流2小 時，過濾，棄殘渣；3)將乙醇提取液減壓回收乙醇，并濃縮到比重1. 10，得到浸膏。3.提純
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1)浸膏處理將浸膏溶于10倍量的純化水，靜置，取上清液，備用；重復(fù)水沉2次 后合并上清液，進行超高速離心，過GF-105型管式離心機(遼陽北方制藥機械廠)，離心機 轉(zhuǎn)速18000轉(zhuǎn)/分鐘，得到澄清透明溶液，作為沉淀物的藥渣棄去；2)裝好超濾膜，本實施例選用聚丙烯腈濾膜，超濾膜孔徑是0. 02 μ m。將澄清透明 溶液泵入，控制操作壓力0. lOMPa，工作溫度45°C，棄去膜阻斷物，收集膜透過液。3)膜透過液再泵入納濾膜，納濾膜孔徑是0. 5nm,除去重金屬及小分子雜質(zhì)，棄去 膜阻斷物，得到純化液。4.濃縮及噴霧干燥處理1)將純化液直接泵入噴霧高位槽；2)在控制進風(fēng)溫度195°C，出風(fēng)溫度80°C，進行噴霧干燥，控制噴霧速度，使之得 到苦丁茶總苷的干粉。3)將粉碎過成40目篩，雙層塑料袋包裝，得苦丁茶總苷粉。經(jīng)檢測，本實施例苦丁茶總苷粉中，阿克苷含量為41. 88%、異阿克苷含量為 13. 17%。上述實施例中，也可以不對苦丁茶葉片進行微波滅酶鈍化處理，直接將葉片干燥 粉碎浸提。經(jīng)納濾膜過濾的純化液也可以直接應(yīng)用，不制成干粉?？喽〔杩傑湛梢詰?yīng)用于苦丁茶飲料的制造，也可以作以藥物原料制成注射劑或口 服劑?？喽〔枧c苦丁茶總苷的對比試驗一、口感將IOg苦丁茶原葉200ml開水沖泡，0. 16g苦丁茶總苷干粉加入200ml 水，供10人分別飲用，結(jié)果10人均覺得苦丁茶總苷干粉飲料清香可口，后甘味突出，直接 用苦丁茶原葉泡的太苦而澀，口感不佳，很難飲完一杯。二、飲用效果試食方法IOg苦丁茶原葉200ml開水沖泡，每天飲用3次；16g苦丁茶總苷干粉加入200ml水，每天飲用3次；受試對象經(jīng)體檢符合實驗要求的30名大學(xué)生志愿者，體重度均超過20%以上，實 驗采用自身對照設(shè)計。臨床體檢1、血液檢查實驗前后受試者紅血球計數(shù)、血色素、白血球的兩次測定結(jié)果均在正 常值范圍內(nèi)，血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽固醇TC、甘油三脂TG、 高密度脂蛋白LDL-C水平測定。2、生化指標(biāo)測定實驗前后受試者各項生化指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)。3、心電圖、B超、胸透、血壓、心率實驗前后受試者心電圖、X線胸部透視、B超 (肝、膽、胰、脾、腎)、血壓、心率兩次檢查結(jié)果均正常。4、結(jié)果受試者連續(xù)食用飲料2周后，進行血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶 (AST)、總膽固醇TC、甘油三脂TG、高密度脂蛋白LDL-C水平測定，結(jié)果ALT平均降低 20. 3%, AST平均降低35. 4%, TC平均降低28. 4% TG平均降低21. 3% LDL-C平均降低17.2%。結(jié)論可以認為本發(fā)明之飲料具有降脂及對化學(xué)性肝損傷有輔助保護作用。
受試者表示食用飲料后，飲酒量明顯增大。醉酒后食用飲料可加速醒酒。
權(quán)利要求
一種苦丁茶總苷，其特征在于，以紫莖女貞苦丁茶或/和粗壯女貞苦丁茶的葉片為原料，經(jīng)醇提、水沉、膜分離純化得到的提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的苦丁茶總苷，其特征在于，所述的醇提為采用乙醇為溶劑對 原料進行至少一次的加熱提取，濃縮提取液得浸膏。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的苦丁茶總苷，其特征在于，所述的水沉為將醇提得到的浸膏 經(jīng)至少一次水溶后離心取澄清溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的苦丁茶總苷，其特征在于，所述膜分離純化為經(jīng)水沉后的澄 清溶液采用濾膜過濾得苦丁茶總苷的純化液。
5.苦丁茶總苷的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)、醇提將紫莖女貞苦丁茶或/和粗壯女貞苦丁茶的葉片粉碎，加入乙醇加熱回流 提取1 3次，過濾，合并提取液，濃縮得到浸膏；(2)、水沉將醇提得到的浸膏溶水中，充分溶解后靜置，取上清液；重復(fù)水沉2 4次 后合并上清液；將水沉后合并的上清液進行超高速離心處理，其中離心轉(zhuǎn)速為15000 20000轉(zhuǎn)/分鐘，棄去沉淀物得到澄清透明溶液；(3)、超濾膜分離純化將離心得到澄清透明溶液通過超濾膜過濾，其中過濾時的壓力 控制在0. 05 0. 15MPa，超濾膜孔徑為0. 001 0. 02微米，收集膜透過液；(4)、納濾膜分離純化步驟(4)得到的膜透過液再泵入納濾膜分離純化得到純化液， 其中納濾膜孔徑在0. 001微米以下。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的苦丁茶總苷制備方法，其特征在于，所述步驟(1)的醇提為 將紫莖女貞苦丁茶或/和粗壯女貞苦丁茶的葉片粉碎，加入葉片重量5 10倍的乙醇，加 熱回流提取1 3次，每次加熱回流的時間為1 3小時，過濾合并提取液，將所有提取液 濃縮到比重為1. 05 1. 20，得到浸膏。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的苦丁茶總苷制備方法，其特征在于，所述步驟(2)的水沉為 將醇提得到的浸膏溶于5 10倍重量的純化水中，充分溶解后靜置，取上清液，重復(fù)水沉 2 4次后合并上清液。
8.根據(jù)權(quán)利要求5 7任意一項所述的苦丁茶總苷制備方法，其特征在于，在步驟(1) 的醇提之前還設(shè)有對葉片進行微波滅酶鈍化處理步驟。
9.根據(jù)權(quán)利要求5 7任意一項所述的苦丁茶總苷制備方法，其特征在于，在步驟(4) 之后還設(shè)有對純化液進行噴霧干燥的步驟。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的苦丁茶總苷制備方法，其特征在于，所述的噴霧干燥的步驟 為將純化液泵入噴霧槽進行噴霧干燥，得到苦丁茶總苷的干粉；其中噴霧槽的進風(fēng)溫度 為185 205"C、出風(fēng)溫度為80 95"C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種苦丁茶總苷及其制備方法，苦丁茶總苷是以紫莖女貞苦丁茶或/和粗壯女貞苦丁茶的葉片為原料，經(jīng)醇提、水沉、膜分離純化得到的提取物。制備方法為(1)醇提將紫莖女貞苦丁茶或/和粗壯女貞苦丁茶的葉片粉碎，乙醇中加熱回流提取，提取液濃縮得浸膏；(2)水沉將浸膏多次溶水取上清液；上清液超高速離心處理得澄清透明溶液；(3)超濾膜分離純化將澄清透明溶液通過超濾膜過濾，收集膜透過液；(4)納濾膜分離純化膜透過液再經(jīng)納濾膜分離純化得到純化液。本發(fā)明的苦丁茶總苷去除無效成分保留了活性成分、口感好、對于化學(xué)性肝損傷有輔助保護作用、并具有醒酒功能及降脂功能、應(yīng)用更廣。制備方法簡單、操作方便、能高效率提取苦丁茶活性成分。
文檔編號A61K127/00GK101966210SQ20101024894
公開日2011年2月9日 申請日期2010年8月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月9日
發(fā)明者劉龍清, 張仲銘, 李軍 申請人:深圳市華熙生物科技有限公司