專利名稱：番石榴葉及其提取物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種番石榴葉及其提取物在制備用于預(yù)防或治療對蝦白斑綜合癥病 毒W(wǎng)SSV藥物中的應(yīng)用，屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
經(jīng)過近三十年的快速發(fā)展，對蝦養(yǎng)殖業(yè)已成為我國農(nóng)村經(jīng)濟(jì)的重要組成部分，在 提高沿海地區(qū)農(nóng)漁民就業(yè)和經(jīng)濟(jì)收入中發(fā)揮了重要的作用。但是，隨著規(guī)模的不斷擴(kuò)大和 環(huán)境的惡化，對蝦病害問題也日趨嚴(yán)重，給對蝦養(yǎng)殖業(yè)者帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失自從1974年 Couch報(bào)道首例對蝦桿狀病毒(BP)以來，已發(fā)現(xiàn)的對蝦疾病病原包括病毒、細(xì)菌、真菌、立 克次氏體和寄生蟲等達(dá)40多種，眾多疾病當(dāng)中危害較大的是病毒病和細(xì)菌病，而其中危害 最嚴(yán)重的是對蝦白斑綜合癥病毒(White Spot Syndrome Virus，WSSV)，每年給對蝦養(yǎng)殖業(yè) 造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，至今仍未得到完全控制，成為目前對蝦養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展的主要障礙 之一。1995年被國際獸疫局、聯(lián)合國糧農(nóng)組織以及亞太地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖發(fā)展網(wǎng)絡(luò)中心將其列 為需要報(bào)告的水生動(dòng)物病毒性疫病之一。在傳統(tǒng)的防治方法中，主要是利用化學(xué)消毒劑對水體進(jìn)行消毒，以阻斷其在水中 的傳播，但是化學(xué)消毒劑在殺滅病毒的同時(shí)，對細(xì)菌、藻類以及其他生物可能也有殺滅做 用，破壞了蝦池生態(tài)平衡，不利于對蝦生存環(huán)境的穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供番石榴葉或其提取物在制備用于預(yù)防或治療對蝦白斑綜 合癥病毒藥物中的應(yīng)用。番石榴葉提取物資源豐富、成本低、加工方便、較少抗藥性和藥 物殘留、毒副作用小，且可有效殺滅水體中的對蝦白斑綜合癥病毒，降低該病毒在水中的傳播。實(shí)際上，本發(fā)明番石榴葉及其提取物在制備預(yù)防或治療對蝦白斑綜合癥病毒藥物 中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的番石榴葉提取物可以是番石榴葉水提取物，先將番石榴葉粉碎，然 后加水提取后，高壓滅菌、離心除渣，得番石榴葉水提取物的原液，實(shí)際使用時(shí)調(diào)整養(yǎng)殖水 體中番石榴葉提取物的質(zhì)量濃度范圍是I-IOOg/噸水。本發(fā)明所述的番石榴葉還可以是番石榴葉原材料，使用時(shí)將其粉碎后直接拋灑于 養(yǎng)殖水體或者與飼料混合投喂對蝦，并調(diào)整養(yǎng)殖水體中番石榴葉粉末的質(zhì)量濃度范圍是 I-IOOg/ 噸水。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是本發(fā)明采用的番石榴葉資源豐富、成本低、加工方便、較少抗藥 性和藥物殘留、毒副作用小等特點(diǎn)，本發(fā)明制備的番石榴葉或番石榴葉提取物可以有效的 殺滅水中的對蝦白斑綜合癥病毒，以降低該病毒在水中的傳播的可能性，達(dá)到預(yù)防該病毒 傳播的目的。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，以下試劑如無特殊說明均為市售 或采用常規(guī)手段制備獲得。實(shí)施例1番石榴葉粉末的制備取番石榴葉10g，按常規(guī)方法粉碎、過篩后制得番石榴葉粉末，滅菌后分裝即可，使 用時(shí)直接拋灑入海水養(yǎng)殖水體中并使養(yǎng)殖水體中番石榴葉粉末的濃度為I-IOOg/噸水即可。實(shí)施例2番石榴葉水提取物的制備取番石榴葉藥材lg，經(jīng)粉碎過篩后，加入99mL水浸泡，室溫浸泡24小時(shí)，然后， 121°C高壓滅菌20min，5000g離心15min除掉藥渣，作為儲(chǔ)備液密封4°C保存?zhèn)溆?，藥物的?度相當(dāng)于10mg/mL，使用時(shí)直接拋灑入海水養(yǎng)殖水體中并使養(yǎng)殖水體中番石榴葉提取物的 濃度為I-IOOg/噸水即可。上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍。以下通過試驗(yàn)來驗(yàn)證番石榴葉及其提取物作為抗對蝦白斑綜合癥WSSV的新用 途。一、番石榴葉提取物與其它原料對對蝦白斑綜合癥病毒的影響對比1.1試驗(yàn)原料的制備稱取番石榴葉Ig加入99ml蒸餾水，室溫浸泡24h，然后，121°C高壓滅菌20min， 5000g離心15min除掉藥渣，作為儲(chǔ)備液密封4°C保存?zhèn)溆茫幬锏臐舛认喈?dāng)于10mg/mL。同時(shí)采用以下單味原料作為對比，稱取丁香、板藍(lán)根、辣蓼、百部、金銀花、蒼術(shù)、黃 岑、苦辣皮、白芪、穿心蓮等10種超微粉碎的原料各1克，分別加入99ml蒸餾水，室溫浸泡 24h，然后，121°C高壓滅菌20min，5000g離心15min除掉藥渣，作為儲(chǔ)備液密封4°C保存?zhèn)?用，藥物的濃度相當(dāng)于10mg/mL。1.2實(shí)驗(yàn)對蝦的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)用蝦為凡納賓對蝦Litopenaeus Varmamei，購自海南省陵水黎族自治縣某 蝦場，體重約8克，在海南陵水熱帶水產(chǎn)研究中心陵水新村試驗(yàn)場內(nèi)暫養(yǎng)一周，實(shí)驗(yàn)前將 0. 5m3的玻璃缸清洗干凈，用0. 5%的高錳酸堿溶液浸泡Ih消毒，然后沖洗干凈。放蝦前一 天注入海水并連續(xù)充氣。養(yǎng)殖海水經(jīng)自然經(jīng)沉淀后沙濾，保持連續(xù)充氣，每天上午虹吸糞 便，隔天換水，換水量約為1/3-1/2，溫度28-320C，鹽度32-33，溶解氧6. 6-7. Omg/L,氨氮 0.3-0.5mg/L。完全適應(yīng)后挑選體色健康、大小均勻的凡納濱對蝦進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)用蝦每天 分三次投料，08 00，17 00和22 00，投料量為蝦重的5 %-8 %，并根據(jù)攝食情況適當(dāng)調(diào)節(jié)投 喂量。1. 3 WSSV感染病毒液的制備選取具典型WSSV病癥，并經(jīng)PCR檢驗(yàn)為WSSV陽性的凡納濱對蝦，取肌肉組織 0. lg，加入Iml沙濾海水，冰浴勻漿，然后，再用海水稀釋到1000倍，作為病毒粗提液。1. 4注射液的制備12種原料儲(chǔ)備液各取lml，分別加入9ml的病毒粗提液，混勻，0.22 μ m硝酸纖維素濾膜過濾除菌，室溫放置24h，作為病毒注射液，藥物的濃度相當(dāng)于lmg/mL ；另外，取各種原 料儲(chǔ)備液加入9倍體積的海水，過濾除菌后作為陰性對照注射液；最后，分別把海水、Iml海 水加9ml病毒粗提液過濾除菌后作為空白對照和陽性對照注射液。1. 5人工感染實(shí)驗(yàn)把注射液分別注射對蝦，每尾對蝦注射50μ L，分別養(yǎng)在玻璃鋼桶中，每天觀察死 亡情況。1. 6 WSSV 的檢測取0. Ig 對蝦肌肉組織，加入 PBS 緩沖液(8gNaCl，0. 2gKCl，1. 44gNa2HP04 和 0. 24g KH2PO4,加水定容至1L，用HCl調(diào)節(jié)溶液PH值至7. 4，高溫高壓滅菌20min備用)lmL，冰浴勻 漿，6000rpm離心5min。取上清液50 μ L加入1 μ L蛋白酶K(10mg/ml)，煮沸15min，立即放 于冰上5min后，8000rpm離心IOmin。上清液用作PCR檢測模板，利用中山大學(xué)提供的WSSV 檢測試劑盒進(jìn)行檢測。表1抗對蝦白斑綜合癥病毒原料篩選結(jié)果
權(quán)利要求
番石榴葉及其提取物在制備用于預(yù)防或治療對蝦白斑綜合癥病毒藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的番石榴葉提取物為其水提取物。
3.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于使用時(shí)調(diào)整養(yǎng)殖水體中番石榴葉或其 提取物的質(zhì)量濃度范圍是I-IOOg/噸水。
全文摘要
本發(fā)明公開了番石榴葉及其提取物在制備預(yù)防或治療對蝦白斑綜合癥病毒藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明采用的番石榴葉資源豐富、成本低、加工方便、較少抗藥性和藥物殘留、毒副作用小，本發(fā)明所述的番石榴葉或番石榴葉提取物可以有效的殺滅水中的對蝦白斑綜合癥病毒，以降低該病毒在水中的傳播的可能性，達(dá)到預(yù)防該病毒傳播的目的。
文檔編號A61K127/00GK101946812SQ20101026834
公開日2011年1月19日 申請日期2010年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月30日
發(fā)明者馮娟, 李卓佳, 王瑞旋, 郭志勛 申請人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所