專利名稱：一種磁靶向熱化療金殼納米載藥系統(tǒng)的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于納米藥物載體領(lǐng)域，特別涉及一種磁靶向熱化療金殼納米載藥系統(tǒng)的 制備。背景材料藥物的靶向輸送是現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)的研究熱點(diǎn)。納米藥物載體是實(shí)現(xiàn)藥物靶向輸送 的有效手段之一。盡管癌癥治療的方法多種多樣，如單獨(dú)藥物治療或者配合手術(shù)、放療或生物療法 等，但是臨床使用的抗癌藥物大多利用高毒性殺死細(xì)胞，在殺死細(xì)胞的同時(shí)，也嚴(yán)重?fù)p害了 正常細(xì)胞，且容易產(chǎn)生耐藥性。靶向給藥，一方面提高了病變部位的藥物濃度，增強(qiáng)了療效， 另一方面降低了非靶部位的藥物分布，減輕了藥物的毒副反應(yīng)，這對(duì)于疾病的藥物治療尤 其是腫瘤的化療意義重大，使更多的病人能承受大劑量的化療。納米藥物載體在腫瘤的靶 向治療中有其獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。腫瘤血管對(duì)納米顆粒有較高的通透性，因此可用納米載體攜帶藥 物靶向作用于腫瘤組織。將藥物準(zhǔn)確送到腫瘤細(xì)胞中方法可以是將抗體、配體結(jié)合在載體 上，通過抗原-抗體、受體-配體的特異性結(jié)合，達(dá)到特異性腫瘤的靶向作用。該靶向性過 程的特異性，決定了抗體靶向性納米只能針對(duì)具有相應(yīng)抗原的腫瘤細(xì)胞，但是一般腫瘤細(xì) 胞表面抗原具有復(fù)雜性，并非所有癌細(xì)胞都有相應(yīng)的抗原表達(dá)。目前，利用磁性納米的磁靶 向作用是目前應(yīng)用較廣的一種靶向性原理，而磁性納米主要是以Fe3O4為磁性原料，也有人 使用Fe2O3，但Fe2O3磁性較弱，磁性納米的原理是利用外加磁場(chǎng)引導(dǎo)納米載體在病變部位富 積從而實(shí)現(xiàn)其靶向性。金納米殼球體是一種球狀分層的納米復(fù)合物顆粒，最先由美國RICE大學(xué)的Halas 教授[1]發(fā)明，它是一種核-殼結(jié)構(gòu)的納米，內(nèi)核由絕緣體核(SiO2)構(gòu)成，外層為薄的金殼， 其等離激元共振頻率隨核和殼相對(duì)大小的變化而系統(tǒng)地變化。根據(jù)Mie散射理論，通過調(diào) 節(jié)金層和介電中空球的核殼比，可使一部分復(fù)合材料的等離子共振消光峰以吸收為主，調(diào) 節(jié)其在近紅外區(qū)的吸收，將近紅外光的能量轉(zhuǎn)化為周圍的熱能，達(dá)到殺死腫瘤細(xì)胞的目的， 并可將化療藥物裝載到該復(fù)合材料中。由此發(fā)展出一種特殊的腫瘤治療方法-熱融治療 (Thermal ablative therapy)[2]。近年來，有關(guān)金納米殼球體的研究報(bào)道越來越多，而且金 殼納米的構(gòu)造也有了很大的變化，如磁性金殼納米，空心金殼納米，F(xiàn)e3O4OSiO2IgAu多層殼納 米粒，AuiAu2S納米等[3_5]。由于具有單分散性、生物相容性、光熱轉(zhuǎn)化等有很多優(yōu)良特性， 金殼納米在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用越來越廣泛，尤其是在免疫測(cè)定、腫瘤治療、抗耐藥菌治療 和藥物控釋等方面。[6_11]聚(N-異丙基丙烯酰胺)(PNIPAM)為溫敏可控性聚合物材料，且在低臨界溶解溫 度(Lower Critical Solubility Temperature, LCST)附近往往發(fā)生急劇變化。當(dāng)溶液溫 度在LCST附近變化時(shí)，微粒的許多性質(zhì)諸如親水性、粒徑、孔隙、電泳淌度和流變性質(zhì)都發(fā) 生變化，利用PNIPAM微粒的這些性質(zhì)，使其在藥物釋放、生物傳感和生物大分子分離等許 多領(lǐng)域具有誘人的應(yīng)用前景。將金殼納米與溫敏可控性聚合物材料結(jié)合到一起，在近紅外 線的照射下，金殼吸收光能轉(zhuǎn)化成熱能，當(dāng)溫度超過LCST時(shí)，PNIPAM聚合層發(fā)生坍縮，從而達(dá)到釋放藥物的能力。目前有關(guān)金殼納米的研究報(bào)道主要集中在金殼納米的光熱消融方面，通過可穿 透人體組織的近紅外光線的照射，利用金殼納米在皮膚深層的不同分布，遞送所需熱的治 療劑量，最終達(dá)到殺死腫瘤細(xì)胞的目的。有關(guān)金殼納米熱消融原理，在體外和體內(nèi)的實(shí)驗(yàn) 都得到了證實(shí)，尤其是將金殼納米應(yīng)用到了乳腺癌的治療上[12_13]。人表皮生長(zhǎng)素因子受 體-2 (HER-2)，是大部分乳腺癌細(xì)胞所表達(dá)的特異性抗原，將抗HER-2抗體與金殼納米連 接，使其具有乳腺癌靶向性[14]。本研究發(fā)明制備的磁靶向性金殼納米載藥系統(tǒng)將，將金殼 納米的熱消融作用和裝載抗腫瘤藥物聯(lián)合，最終達(dá)到聯(lián)合治療乳腺癌的目地。

發(fā)明內(nèi)容
為了降低紫杉醇藥物對(duì)患者的副作用、增加患者的順應(yīng)性，聯(lián)合金殼納米的熱消 融作用和抗癌藥物的化療作用，本發(fā)明提供了一種磁靶向熱化療金殼納米載藥系統(tǒng)的制備 方法。本發(fā)明是通過金納米殼球體裝載紫杉醇類藥物，利用PINPAM@Au@Fe304載體的良 好分散性和體內(nèi)循環(huán)特性以及納米載體的磁性，在外加磁場(chǎng)的作用下將載藥納米引導(dǎo)到癌 細(xì)胞區(qū)域，利用金納米殼球體在近紅外光照射下的光熱效應(yīng)和抗癌藥物的細(xì)胞毒性作用殺 死乳腺癌細(xì)胞。本發(fā)明的一種磁靶向性熱化療納米載藥系統(tǒng)的制備方法包括以下步驟(I)Fe3O4 的制備稱取 0.6 1.2g FeCl2IMH20,1. 80 2. 2g FeCl3@6H20，在氮?dú)獾?保下溶解于80 120mL去氧蒸餾水中，加入0. 5 1. 5mL曲通X-100，攪拌，加速溶解。水 浴加熱到70 90°C，并將70 120mL濃度為0. 75 1. 25mol/L的氨水緩慢滴加到上述溶 液中，同時(shí)劇烈攪拌并繼續(xù)通入氮?dú)?，生成黑色Fe3O4沉淀；滴加完后，停止通氮?dú)?，冷卻至 室溫，停止攪拌，磁分離，分別用水、乙醇洗滌后，真空冷凍干燥，備用；(2) Fe3O4表面的氨基修飾取第(1)步中制備的Fe3O4粒子50 150mg，加入80 120mL 95%乙醇，60KHz超聲20 40min，加入1 3mL γ -氨丙基二乙氧基硅烷縮寫為 APTES，常溫下攪拌6 12h，放置過夜，磁分離，用95%乙醇洗滌后，用無水乙醇配成IOmg/ mL分散液；(3) Fe3O4OAu 復(fù)合粒子的制備取 90 150 μ L 上述 Fe3O4-APTES 10mg/mL 分散液， 加入90 95mL蒸餾水，5 IOmL濃度為ImM的HAuCl4,60KHz超聲10 30min后，加入油 胺，于70 90°C，60KHz超聲反應(yīng)2 4h至溶液由淺黃色變成紫黑色。磁分離，用蒸餾水 洗滌幾次直至溶液呈中性；(4)Fe304@Au@PNIPAM 的制備將 60 μ L，10mg/mL 上述 Fe3O4OAu 粒子分散液，0. 02 0. 03g N-異丙基丙烯酸胺縮寫為ΝΙΡΑΜ,Ο. 002 0. 003g N，N’-亞甲基雙丙烯酰胺縮寫為 MBA，2. O 3. O μ L丙烯酸縮寫為AA溶于20 30 mL H2O中，通入N2,升溫至70 90°C，加 入0. 020 0. 030g的過硫酸銨縮寫為APS，60KHz超聲反應(yīng)5 8h ；磁分離，水洗至中性， 即得到Fe304@Au@PNIPAM溫敏載藥納米，真空冷凍干燥后，4°C保存；本發(fā)明中所述納米內(nèi)核為Fe3O4磁性納米，在Fe3O4外層為一層金殼層，厚度為 20nm ；所述磁靶向金殼納米載藥系統(tǒng)Fe304@Au(gPNIPAM的粒徑小于250nm，其外層的溫敏的 高分子聚合層的大小為120 180nm，各類型粒子通過紅外光譜分析和透射電鏡掃描，其結(jié) 果如圖-2和圖_3所示；
本發(fā)明中所述磁靶向熱化療金殼納米載藥系統(tǒng)裝載抗癌藥物的方法，其特征在 于，取IOmg Fe304iAuiPNIPAM納米粉末，分散到IOOmL的蒸餾水，并將溫度控制在25 35°C，加入抗腫瘤藥物紫杉特爾1 3mg, pH控制在6. 5 7. 5，超聲0. 5 2h,3000r/min 離心，去除上清，蒸餾水洗滌。本發(fā)明所述抗腫瘤藥物為紫杉特爾。本實(shí)驗(yàn)制備的載藥納米具有以下優(yōu)點(diǎn)①所合成的Fe304@Au(gPNIPAM粒子具有磁 性和溫敏性雙重響應(yīng)能力②使用曲通X-100作為穩(wěn)定劑，制備的Fe3O4納米粒徑更加均一③ 溫敏PNIPAM層，可以實(shí)現(xiàn)藥物的裝載和控釋過程④納米粒子具有多層核殼結(jié)構(gòu)⑤納米粒 子的粒徑穩(wěn)定，大小在250nm以下。


圖-1是Fe304@Au(gPNIPAM復(fù)合粒子制備過程的示意圖。圖-2是油胺穩(wěn)定的Fe3O4OAu粒子X射線光電子能譜，跟據(jù)X射線光電子能譜圖顯 示，該粒子結(jié)構(gòu)中含有Fe、0、Au、C和N元素，其中C和N元素為油胺的成分，而Fe、0、Au元 素的存在也證明了納米基本構(gòu)成為Fe3O4OAu。圖-3是納米粒子的透射電鏡圖，左下角為標(biāo)尺。(a)為Fe3O4粒子的電鏡圖，F(xiàn)e3O4 粒子易發(fā)生團(tuán)聚，但納米的輪廓可見，粒徑在20nm左右。(b)為Fe3O4OAu,其單分散性較好， 納米粒徑比Fe3O4粒子大一些。(c)Fe304@Au@PNIPAM粒子，納米粒徑在250nm左右，粒子內(nèi) 層電子密度較高，外層電子密度很低且范圍很大。 圖-4是PNIPAM和Fe304@Au@PNIPAM粒子的磁滯回線圖，從圖中可以發(fā)現(xiàn)兩種粒子 都具有超磁化的性質(zhì)，在無外加磁場(chǎng)的情況下，粒子磁性消失。而包裹有PNIPAM層的粒子 磁化能力要比單獨(dú)的Fe3O4OAu粒子弱。圖-5為紫杉特爾載藥金殼納米的體外釋放曲線，橫坐標(biāo)為釋放的次數(shù)，縱坐標(biāo)為 釋放率。該圖顯示了近紅外線照射組和不經(jīng)照射組的釋放率曲線，兩組釋放率差異明顯，經(jīng) 照射組的釋放率最終可達(dá)到90%，而不經(jīng)照射組為30%。
具體實(shí)施例方式以下為磁靶向性載藥金殼納米系統(tǒng)的制備的實(shí)例，但該制備方法不限與此。實(shí)例1.(I)Fe3O4 的制備稱取 0. 6g FeCl2IMH20,1. 8g FeCl3@6H20，在氮?dú)獾谋Ｏ氯芙庥?IOOmL去氧蒸餾水中，加入0.5mL曲通X_100作為表面活性劑，用電動(dòng)攪拌器攪拌溶解。水 浴加熱到80°C，并將70mL IM氨水緩慢滴加到上述溶液中，同時(shí)劇烈攪拌并繼續(xù)通入氮?dú)猓?生成黑色Fe3O4沉淀。滴加完后，停止通氮?dú)?，冷卻至室溫，停止攪拌。磁分離，分別用水、乙 醇洗滌后，真空冷凍干燥，備用；(2)Fe3O4表面的氨基修飾取75mg Fe3O4粒子，加入98mL 95 %乙醇，60KHz超聲 20min，加入ImL APTES，常溫下攪拌6h，放置過夜，磁分離，用95%乙醇洗滌后，用無水乙醇 配成lOmg/mL分散液；(3) Fe3O4OAu復(fù)合粒子的制備取90 μ L上述Fe3O4-APTES 10mg/mL分散液，加入 91mL蒸餾水，5mL濃度為ImM的HAuCl4,60KHz超聲IOmin后，加入5μ L油胺，于70°C超聲反應(yīng)2h至溶液由淺黃色變成紫黑色。磁分離，用蒸餾水洗滌3次；(4)Fe304iAuiPNIPAM 的制備取上述 6O μ L, 10mg/mLFe304iAu 粒子分散液，0. 02g ΝΙΡΑΜ,Ο. 002g MBA, 2. 0 μ L AA 溶于 25mL H2O 中，通 N2 30min，升溫至 70 °C 以上，加入 0. 020gAPS，60KHz超聲反應(yīng)6h。磁分離，水洗3次后，即得到無色透明的Fe304@Au@PNIPAM 溫敏載藥納米，真空冷凍干燥，4 °C保存。(5)抗癌藥物的裝載取IOmg Fe304iAuiPNIPAM納米粉末，分散到IOOmL的蒸餾 水，并將溫度控制在25°C，加入3mg紫杉特爾，pH控制在7，超聲0. 5h。3000r/min離心，收 集上清液，采用紫外分光光度計(jì)于227nm處檢測(cè)，測(cè)定吸光度，根據(jù)紫杉特爾的標(biāo)準(zhǔn)曲線， 計(jì)算上清中紫杉特爾的含量。本例制備的紫杉特爾磁性金殼納米經(jīng)檢測(cè)計(jì)算，其包封率為 80. 0%，載藥量為19.4%。(6)紫杉特爾磁性金殼納米載藥系統(tǒng)的體外釋放測(cè)定以PBS (pH = 7. 0)為釋放介 質(zhì)，用802nm的近紅外線對(duì)納米載藥系統(tǒng)進(jìn)行照射以控制紫杉特爾的釋放，對(duì)照組納米載藥 系統(tǒng)不進(jìn)行近紅外照射。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組每次照射時(shí)間分別為5min，IOmin和15min，間隔 時(shí)間為2小時(shí)，釋放完后，將溶液3000r/min離心lOmin，取上清液，檢測(cè)溶液中紫杉特爾的含 量。根據(jù)本例中釋放后測(cè)得的含量，計(jì)算六個(gè)樣品的釋放率如圖_5所示。該圖顯示了近紅 外線照射組和不經(jīng)照射組的釋放率曲線，其釋放率的差異明顯，經(jīng)照射組的釋放率最終可達(dá) 到90%，而不經(jīng)照射組為30%。照射5min，lOmin, 15min的三個(gè)組，其藥物釋放的總體趨勢(shì)相 似，且最終達(dá)到的釋放率都在90%左右，在以后的釋放實(shí)驗(yàn)中，將照射的時(shí)間控制在lOmin。實(shí)例2.(I)Fe3O4 的制備稱取 1. Og FeCl2i4H20, 2. Og FeCl3@6H20，在氮?dú)獾谋Ｏ氯芙庥?IOOmL去氧蒸餾水中，加入0. SmL曲通X-100作為表面活性劑，用電動(dòng)攪拌器攪拌溶解。水 浴加熱到80°C，并將90mL IM氨水緩慢滴加到上述溶液中，同時(shí)劇烈攪拌并繼續(xù)通入氮?dú)猓?生成黑色Fe3O4沉淀。滴加完后，停止通氮?dú)?，冷卻至室溫，停止攪拌。磁分離，分別用水、乙 醇洗滌后，真空冷凍干燥，備用；(2) Fe3O4表面的氨基修飾取IOOmg Fe3O4粒子，加入98mL 95%乙醇，60KHz超聲 20min，加入2mL APTES，常溫下攪拌10h，放置過夜，磁分離，用95%乙醇洗滌后，用無水乙 醇配成lOmg/mL分散液；(3) Fe3O4OAu復(fù)合粒子的制備取120 μ L上述Fe3O4-APTES 10mg/mL分散液，加入 9ImL蒸餾水，9mL濃度為ImM的HAuCl4,60KHz超聲IOmin后，加入10 μ L油胺，于70°C超聲 反應(yīng)2. 5h至溶液由淺黃色變成紫黑色。磁分離，用蒸餾水洗滌3次；(4) Fe304iAuiPNIPAM 的制備取 60 μ L, 10mg/mL 上述 Fe3O4OAu 粒子分散液，0. 025g ΝΙΡΑΜ,Ο. 0025g MBA, 2. O μ L AA 溶于 25mL H2O 中，通 N2 30min，升溫至 80°C，加入 0. 02g APS,60KHz超聲反應(yīng)6h。磁分離，水洗3次后，即得到Fe304@Au(gPNIPAM溫敏載藥納米。(5)抗癌藥物的裝載取10mgFe304@Au@PNIPAM納米粉末，分散到IOOmL的蒸餾水， 并將溫度控制在35°C，加入Img紫杉特爾，pH控制在7，超聲1. 5h。3000r/min離心，取上 清，通過檢測(cè)上清中紫杉特爾的含量，計(jì)算得到包封率為71.0%，載藥量為6. 6%。實(shí)例3.(I)Fe3O4 的制備稱取 0. 8g FeCl2i4H20, 2. 08g FeCl3@6H20，在氮?dú)獾谋Ｏ氯芙庥?IOOmL去氧蒸餾水中，加入0. SmL曲通X-100作為表面活性劑，電動(dòng)攪拌器攪拌溶解。水浴加熱到80°C，并將80mL IM氨水緩慢滴加到上述溶液中，同時(shí)劇烈攪拌并繼續(xù)通入氮?dú)猓?成黑色Fe3O4沉淀。滴加完后，停止通氮?dú)?，冷卻至室溫，停止攪拌。磁分離，分別用水、乙醇 洗滌后，然真空冷凍干燥，備用；(2)Fe3O4表面的氨基修飾取IOOmg Fe3O4粒子，加入98mL 95%乙醇，超聲30min， 加入2mL APTES，常溫下攪拌8h，放置過夜，磁分離，用95%乙醇洗滌后，用無水乙醇配成 10mg/mL分散液；(3) Fe3O4OAu復(fù)合粒子的制備取120 μ L上述Fe3O4-APTES 10mg/mL分散液，加入 9ImL蒸餾水，9mL濃度為ImM的HAuCl4,60KHz超聲IOmin后，加入1 μ L油胺，于70°C超聲 反應(yīng)2. 5h至溶液由淺黃色變成紫黑色。磁分離，用蒸餾水洗滌3次； (4) Fe304iAuiPNIPAM 的制備取 60 μ L, 10mg/mL 上述 Fe3O4OAu 粒子分散液，0. 025g ΝΙΡΑΜ,Ο. 0025g MBA, 2. O μ L AA 溶于 25mL H2O 中，通 N2 30min，升溫至 70°C，加入 0. 025g APS, 60KHz超聲反應(yīng)6h。磁分離，水洗3次后，即得到無色透明的Fe304@Au(gPNIPAM溫敏磁 性金殼納米。(5)抗癌藥物的裝載取10mgFe304@Au@PNIPAM納米粉末，分散到IOOmL的蒸餾水， 并將溫度控制在37°C，加入1.5mg紫杉特爾，pH控制在7. 5，超聲1. 5h。3000r/min離心， 取上清，通過檢測(cè)上清中紫杉特爾的含量，計(jì)算得到包封率為82.0%，載藥量為11.0%。實(shí)例 4.(I)Fe3O4 的制備稱取 1. 2g FeCl2i4H20, 2. 2g FeCl3@6H20，在氮?dú)獾谋Ｏ氯芙庥?IOOmL去氧蒸餾水中，加入ImL曲通X-100作為表面活性劑，電動(dòng)攪拌器攪拌使樣品溶解。 水浴加熱到80°C，并將IOOmL 1. 25M氨水緩慢滴加到上述溶液中，同時(shí)劇烈攪拌并持續(xù)通 入氮?dú)?，生成黑色Fe3O4沉淀。滴加完后，停止通氮?dú)猓鋮s至室溫，停止攪拌。磁分離，分別 用水、乙醇洗滌后，真空冷凍干燥，備用；(2)Fe3O4表面的氨基修飾取150mg Fe3O4粒子，加入98mL 95%乙醇，60KHz超聲 30min，加入3mL APTES，常溫下攪拌12h，放置過夜，磁分離，用95%乙醇洗滌后，用無水乙 醇配成lOmg/mL分散液；(3) Fe3O4OAu復(fù)合粒子的制備取150 μ L上述Fe3O4-APTES 10mg/mL分散液，加入 90mL蒸餾水，IOmL濃度為ImM的HAuCl4,60KHz超聲30min后，加入10 μ L油胺，于90°C超 聲反應(yīng)4h至溶液由淺黃色變成紫黑色。磁分離，用蒸餾水洗滌3次；(4) Fe304iAuiPNIPAM 的制備取 60 μ L, 10mg/mL 上述 Fe3O4OAu 粒子分散液，0. 03g ΝΙΡΑΜ,Ο. 003g MBA, 3. O μ L AA 溶于 25mL H2O 中，通 N2 30min，升溫至 70 °C 以上，加入 0. 030gAPS，60KHz超聲反應(yīng)8h。磁分離，水洗3次后，即得到無色透明的Fe304@Au@PNIPAM 溫敏載藥納米。(5)抗癌藥物的裝載取10mgFe304@Au@PNIPAM納米粉末，分散到IOOmL的蒸餾水， 并將溫度控制在40°C，加入2mg紫杉特爾，pH控制在7，超聲2h。3000r/min離心，取上清， 通過檢測(cè)上清中紫杉特爾的含量，計(jì)算得到包封率為88. 0%，載藥量為15. 0%。參考文獻(xiàn)[1]Oldenburg S J, Averitt R D, Westcott S L,et al. Chem. Phys. Lett. ,1998, 288(2-4) 243-247.[2]Hirsch, LR, Stafford, RJ, Bankson, JA, et al..Nanoshel1-mediatednear-infrared thermal therapy of tumors under magnetic resonance guidance[J]. Proceedings of national academy of sciences of the united states of America. 2003，100(23) 13549-13554[3]Melancon MP, Lu W, Yang Z, et al. . In vitro and in vivo targeting of hollow gold nanoshells directed at epidermal growth factor receptor for photothermal ablation therapy[J]. Molecular Cancer Therapeutics,2008,7(6) 1730-1739[4]ffei-Chieh Huang, Pei-Jane Tsai, and Yu-Chie Chen. Multifunctional Fe3 04iAu Nanoeggs as Photothermal Agents for Selective Killing of Nosocomial and Antibiotic-Resistant Bacteria[J]· Small,2009,5(1) :51_56[5]Ren L, Chow G M. NIR-sensitive Au_Au2S nanoparticles for drug delivery[J], Mat Sci Eng C，2003，23 :113_116[6]談?dòng)拢∩偃A，王毅，錢衛(wèi)平· [J].化學(xué)學(xué)報(bào)，2005，63 (10) 929-933[7]Alex W. H. Lin, Christopher
Integrated Diagnosis and Therapy of 308-314.
金納米殼球體的制備及其潛在的生物學(xué)應(yīng)用 H. Loo, Leon R. Hirsch, Jennifer K. Barton，
Cancer [J] .Proceedings of SPIE. 2004 ；5593
Min-Ho Lee Naomi J. Halas, Jennifer L. West, Rebekah A. Drezek. Nanoshells for[8]L. R. Hirsch，R. J. Stafford，J. A. Bankson，S. R. Sershen，B. Rivera, R. E. Price，J. D. Hazle，N. J. Halas, and J. L West. Nanoshel 1-mediated near-infrared thermal therapy of tumors under magnetic resonance guidance[J]. PNAS. 2003 ； 100(23) :13549-13554.[9]Verena Hohensinner，Irene Maier，F(xiàn)ritz Pittner. A gold cluster-linked immunosorbent assay :0ptical near-field biosensor chip for the detection of allergenic β -Iactoglobulin in processed milk matrices[J]. Journal of Biotechnology. 2007 ；130 :385_388.[10] L. R. Hirsch, J. B. Jackson, A. Lee et al. A Whole Blood Immunoassay Using Gold Nanoshells [J]. Anal. Chem. 2003，75 :2377_2381[11]Sershen S R，Halasa N J，West J L. Pulsatile release of insulin via photothermal modulated drug delivery (R). Houston, TX, USA. Oct 23-26,2002[12]D. Patrick 0， Neal, Leon R. Hirsch, Naomi J. Halas, J. Donald Payne, Jennifer L.West. Photo-thermaltumor ablation in mice using near infrared-absorbing nanoparticles[J]. Cancer Lett.2006 ；209 171-176[13]Amahda R Lowery, AndreM Gobin， Emily S Day, Naomi J Halas, Jennifer L West. Immunonanoshells for targeted photothermal ablation of tumor cells [J]. International Journal of Nanomedicine. 2006 ； 1 (2) :149_154·[14]E1-Sayed IH，Huang X, El-Sayed MA. Selective laser photo-thermal therapy of epithelial carcinoma using anti-EGFR antibody conjugated gold nanoparticles[J]. Cancer Lett. 2006 ；239 129.
權(quán)利要求
一種磁靶向熱化療金殼納米載藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)Fe3O4的制備稱取0.6～1.2g FeCl2@4H2O，1.80～2.2g FeCl3@6H2O，在氮?dú)獾谋Ｏ氯芙庥?0～120mL去氧蒸餾水中，加入0.5～1.5mL曲通X 100，攪拌，加速溶解。水浴加熱到70～90℃，并將70～120mL濃度為0.75～1.25mol/L的氨水緩慢滴加到上述溶液中，同時(shí)劇烈攪拌并繼續(xù)通入氮?dú)?，生成黑色Fe3O4沉淀；滴加完后，停止通氮?dú)?，冷卻至室溫，停止攪拌，磁分離，分別用水、乙醇洗滌后，真空冷凍干燥，備用；(2)Fe3O4表面的氨基修飾取第(1)步中制備的Fe3O4粒子50～150mg，加入80～120mL 95％乙醇，60KHz超聲20～40min，加入1～3mLγ 氨丙基二乙氧基硅烷縮寫為APTES，常溫下攪拌6～12h，放置過夜，磁分離，用95％乙醇洗滌后，用無水乙醇配成10mg/mL分散液；(3)Fe3O4@Au復(fù)合粒子的制備取90～150μL上述Fe3O4 APTES 10mg/mL分散液，加入90～95mL蒸餾水，5～10mL濃度為1mM的HAuCl4，60KHz超聲10～30min后，加入油胺，于70～90℃，60KHz超聲反應(yīng)2～4h至溶液由淺黃色變成紫黑色。磁分離，用蒸餾水洗滌幾次直至溶液呈中性；(4)Fe3O4@Au@PNIPAM的制備將60μL，10mg/mL上述Fe3O4@Au粒子分散液，0.02～0.03g N 異丙基丙烯酸胺縮寫為NIPAM，0.002～0.003g N，N’ 亞甲基雙丙烯酰胺縮寫為MBA，2.0～3.0μL丙烯酸縮寫為AA溶于20～30mL H2O中，通入N2，升溫至70～90℃，加入0.020～0.030g的過硫酸銨縮寫為APS，60KHz超聲反應(yīng)5～8h；磁分離，水洗至中性，即得到Fe3O4@Au@PNIPAM溫敏載藥納米，真空冷凍干燥后，4℃保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種磁靶向熱化療金殼納米載藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在 于，在Fe3O4外層為一層金殼層，金殼層厚度為20nm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種磁靶向熱化療金殼納米載藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在 于制備的磁靶向金殼納米載藥系統(tǒng)Fe304@Au(gPNIPAM的粒徑小于250nm，其外層的溫敏的 高分子聚合層的大小為120 180nm。
4.一種由權(quán)利要求1所述磁靶向熱化療金殼納米載藥系統(tǒng)裝載抗癌藥物的方法，其特 征在于，取10mgFe304@Au@PNIPAM納米粉末，分散到IOOmL的蒸餾水，并將溫度控制在25 350C，加入抗腫瘤藥物1 3mg，pH控制在中性，超聲0. 5 2h，3000r/min離心，去上清，用 蒸餾水洗滌。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種磁靶向熱化療金殼納米載藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在 于所述抗腫瘤藥物為紫杉特爾。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種磁靶向熱化療金殼納米載藥系統(tǒng)的制備方法，該制備工藝首先采用化學(xué)沉淀法，以FeCl3@6H2O，F(xiàn)eCl2@4H2O為原料，制備出Fe3O4磁性納米內(nèi)核，其次采用自組裝-化學(xué)鍍法在磁納米的表面鍍上一層金殼，制備好的粒子經(jīng)洗滌后，用純水溶解，并與NIPAM和AA混合，以過硫酸銨為引發(fā)劑，在超聲的條件下，在金殼的表面形成一層溫敏可控的高分子聚合層。本發(fā)明的PNIPAM@Au@Fe3O4粒子直徑為230～250nm，磁飽化強(qiáng)度12.5～17emu/g，呈現(xiàn)超磁性。本發(fā)明制備的粒子，可以將抗腫瘤藥物裝載到PNIPAM中，并利用金殼層將近紅外線照射轉(zhuǎn)化成熱能達(dá)到釋放藥物的作用，最終通過熱消融和化療原理治療癌癥。
文檔編號(hào)A61K31/337GK101954085SQ20101027196
公開日2011年1月26日 申請(qǐng)日期2010年9月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月3日
發(fā)明者劉勤, 張浩偉, 張陽德 申請(qǐng)人:中華人民共和國衛(wèi)生部肝膽腸外科研究中心;中南大學(xué)