專利名稱：一種桉烷型倍半萜類化合物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從植物川陜風(fēng)毛菊中分離得到的桉烷型倍 半萜類化合物Encelin的應(yīng)用。白血病是一種惡性血液病，其特征是造血干/祖細胞惡性克隆性增生并廣泛浸潤 全身各組織，正常造血受抑，導(dǎo)致貧血、出血、感染及組織和器官浸潤的表現(xiàn)。白血病按細胞 學(xué)分類主要有髓系白血病和淋巴細胞白血?。桓鶕?jù)細胞的分化程度、自然病程的長短，分為 急性白血病和慢性白血病兩大類。白血病是十大高發(fā)惡性腫瘤之一，嚴(yán)重危害人類生命。白 血病的化學(xué)治療一直是醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究的重點領(lǐng)域。從傳統(tǒng)的細胞毒類藥物至近年來新的 抗白血病藥物的應(yīng)用，白血病的治療療效有了長足的進步，使部分患者得以治愈。但白血病 的總體療效仍不理想，尤其是白血病的耐藥和復(fù)發(fā)問題嚴(yán)重困擾著白血病的化療效果。因 此，新型抗白血病藥物的研發(fā)成為白血病治療的研究熱點和迫切任務(wù)。jl|KMii^ (Saussurea licentiana Hand-Mazz. )(Compositae)
屬(Saussurea)植物，分布在陜西，四川，生于山頂，山坡旁。本屬植物全世界約有400余種， 主要分布于歐洲和亞洲，是菊科中較大的一個屬，風(fēng)毛菊屬植物在我國約有264種，主要分 布在西南和西北的青藏高原、天山等高海拔、高緯度地區(qū)。風(fēng)毛菊屬植物中的許多種類是非 常有價值的藥用植物，是各少數(shù)民族常用的中草藥，在我國的中藥、藏藥、蒙藥中有其獨特 的作用。其廣泛用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、各類婦科疾病、心血管疾病、肺寒咳嗽、中風(fēng)，具有 消炎鎮(zhèn)痛、壯陽、抗早孕、治療心血管系統(tǒng)疾病等多方面功效。國內(nèi)外研究表明，本屬植物含 有倍半萜類、生物堿、黃酮類、木脂素類、糖類、香豆素、醌類和揮發(fā)油等化學(xué)成分，但至今未 見將桉烷型倍半萜類化合物應(yīng)用于治療白血病的藥物中。本發(fā)明的目的在于提供一種具有治療白血病作用的桉烷型倍半萜類化合物的應(yīng)用。本發(fā)明的目的通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)一種桉烷型倍半萜類化合物的應(yīng)用，所述 的化合物為 Encelin，其化學(xué)命名為(3aR, 4aR, 8aS, 9aR) -8a-methyl-3, 5-dimethylidene -4, 4a, 9, 9a-tetrahydro-3aH-benzo [f] [l]benzofuran_2, 6-dione,分子式為 C15H16O3,化學(xué) 結(jié)構(gòu)式如下
其特征在于所述的化合物應(yīng)用于制備治療白血病藥物中。
本發(fā)明所述的桉烷型倍半萜類化合物Encelin對急慢性髓系白血病及淋巴細胞
背景技術(shù)：

發(fā)明內(nèi)容
3白血病細胞均具有顯著的增殖抑制作用。
具體實施例方式下面通過實施例對本發(fā)明內(nèi)容進行詳細說明
本發(fā)明所述的桉烷型倍半萜類化合物的提取、分離及結(jié)構(gòu)鑒定 1.提取取10 kg川陜風(fēng)毛菊干燥全草，粉碎后經(jīng)95%乙醇室溫浸泡提取4次，每次7 天。減壓濃縮去醇后，得浸膏900g。浸膏用水懸浮后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進行 萃取，得到石油醚部分122g，乙酸乙酯部分153g和正丁醇部分261 g。2.分離乙酸乙酯層用等量硅膠拌樣上硅膠柱層析，用氯仿-甲醇(1 :(Γ0 1)極 性梯度洗脫，最后用甲醇沖柱，合并成分相同部分后共得10個組分(Fr I ^Fr X ) 0 Fr II 過硅膠柱，石油醚_乙酸乙酯極性梯度，得到3個流分洗脫(Fr II A^Fr II C)。Fr II C過 Sephadex LH-20柱，氯仿-甲醇極性梯度洗脫，經(jīng)TLC檢測，取有淡黃色斑點的組分，用等量 硅膠拌樣，上硅膠小柱(200-300目)，用石油醚-乙酸乙酯極性梯度洗脫，待溶劑揮發(fā)后有 白色粉末析出。白色粉末用甲醇溶解后經(jīng)制備型高效液相色譜儀，以甲醇_水為洗脫劑分 離得該化合物純品。3.結(jié)構(gòu)鑒定本發(fā)明所述的桉烷型倍半萜類化合物的理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)如下 ⑴本品為無色針晶(乙酸乙酯)，mp :195 196°C，5%硫酸乙醇溶液顯淡黃色。
EI-MS(m/z) :244[M+]。13CNMR, DEPT 和1HNMR 譜顯示有 4 個 CH2，其中兩個末端雙鍵 CH2, δ η5· 70 (brs, Η-13 α )，6. 22 (brs, Η-13 β ) ,5. 22 (d, J=2. 0 Hz, H-15 α ) ,6. 13 (d, J=2. 0 Ηζ，Η-15β)，1 個 CH3，5 個 CH，其中一對為雙鍵質(zhì)子-CH=CH-, δ Η6. 82 (d，J=IO. 2 Hz, H-l)，6.01(d，J=IO. 2 Hz，H-2)，5 個季 C，一個酯羰基 δ。188.46，一個 α β 不飽和酮羰基 δ c169. 74，126. 60，159. 30 ； δ Η6· 82 (d)，6· 01 (d)。由 CH3 的 1HNMR 禾口 13CWR 數(shù)據(jù) δ Η1· 03 (s)， δ c19. 25可推測此化合物為桉烷型倍半萜內(nèi)酯。⑵本發(fā)明所述的桉烷型倍半萜類化合物的波譜學(xué)數(shù)據(jù)如下EI-MS(m/z) 244 [M+]，229 [M-CH3], 171，105，91，69 (Bas 印 eak)。1H-WR(CDCl3) δΗ 6. 82 (1Η, d, J=IO. 2 Hz, Η-1)，6· 01 (1Η, d, J=IO. 2 Hz, Η_2)，2. 61 (1Η, dd, J=12. 3,2. 4 Hz, H_5)，1. 58 (1H, ddd, J=13. 5，12. 3，12. 3 Hz, H_6 α )，2. 04 (1H，ddd, J=9. 3，7. 2，2. 4 Hz, H_6 β )，3. 08 (1H，m, H-7)，4. 61 (1H，m, H_8)，1. 79 (1H，dd, J=15. 3,4. 8 Hz, H_9 α )，2. 41 (1H，dd, J=15. 3，1.2 Hz, H-9 β ), 5. 70 (1H, brs, Η_13α)，6. 22 (1H, brs, H—13 β )，1. 03 (3H，s, H_14)，5. 22 (1H, d, J=2. 0 Hz, H-15a),6. 13 (1H, d, J=2. 0 Ηζ，Η_15β) ；13C-NMR (CDCl3) : δ c159. 30 (C-I), 126. 60 (C-2),188. 46 (C_3),144. 19(C_4) , 44. 60 (C_5),28. 61 (C_6),39.94 (C_7)， 76. 01 (C-8)，37· 34(C-9)，35· 98 (C-10)，141. 02 (C-Il)，169. 74(C_12)，121. 17(C_13)， 19. 25(C-14)，119. 01(C-15)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻報道(Zdero L, Bohlmann F, King RM. Eudesmane derivatives and other constituents from Apalochlamys spectabilis and Cassinia species. Phytochemistry, 1990, 29(10) : 3201-3206.)的數(shù)據(jù)一致，因此鑒定該化合物 為 Encelin0實施例1
本發(fā)明所述的桉烷型倍半萜類化合物抗急性髓系白血病活性實驗(MTT法)
4方法分別取對數(shù)生長期的人急性髓系白血病細胞系HL-60細胞和NB4細胞，接種于 96孔培養(yǎng)板上，每孔接種量分別為6000/150μ 、12000/150μ 。實驗設(shè)藥物實驗組、陰性對 照組和空白對照孔。藥物實驗組每孔加不同濃度的本發(fā)明所述的桉烷型倍半萜類化合物溶 液50μ (化合物母液用營養(yǎng)液稀釋)，每個濃度做3個復(fù)孔；陰性對照組每孔加營養(yǎng)液50μ ， 共設(shè)6個復(fù)孔；空白對照孔只加營養(yǎng)液200μ ，用于儀器調(diào)零。在常規(guī)培養(yǎng)條件下，作用72h 后，每孔加入20μ MTT溶液(濃度為5mg/mL，用PBS配制，pH=7. 4)，繼續(xù)培養(yǎng)4h，離心棄上 清，每孔加二甲基亞砜(DMSO) 150μ ，震蕩5min，待結(jié)晶完全溶解后，用酶標(biāo)儀(BI0-RAD產(chǎn) 品)在570nm波長處測定每個小孔的吸光度值(為7(|)，各組取平均值，計算抑制率IR = (1 — 實驗組Ato /對照組Ato) X 100%。用SPSS12.0進行統(tǒng)計學(xué)分析，并計算IC5(1。實驗重復(fù)一 次。結(jié)果見表1和表2。實施例2:
本發(fā)明所述的桉烷型倍半萜類化合物抗慢性髓系白血病活性實驗(MTT法) 方法取對數(shù)生長期的人慢性髓系白血病細胞系K-562細胞，接種于96孔培養(yǎng)板上，每 孔接種量為6000/150μ 。實驗設(shè)藥物實驗組、陰性對照組和空白對照孔。藥物實驗組每孔 加不同濃度的本發(fā)明所述的桉烷型倍半萜類化合物溶液50μ (化合物母液用營養(yǎng)液稀釋)， 每個濃度做3個復(fù)孔；陰性對照組每孔加營養(yǎng)液50μ ，共設(shè)6個復(fù)孔；空白對照孔只加營養(yǎng) 液200μ ，用于儀器調(diào)零。在常規(guī)培養(yǎng)條件下，作用72h后，每孔加入20μ MTT溶液(濃度為 5mg/mL，用PBS配制，pH=7. 4)，繼續(xù)培養(yǎng)4h，離心棄上清，每孔加二甲基亞砜(DMSO) 150μ , 震蕩5min，待結(jié)晶完全溶解后，用酶標(biāo)儀(BI0-RAD產(chǎn)品)在570nm波長處測定每個小孔的 吸光度值U57Q)，各組取平均值，計算抑制率=IR = Cl 一實驗組A7tl /對照組Ato) X 100%。 用SPSS12. 0進行統(tǒng)計學(xué)分析，并計算IC5(I。實驗重復(fù)一次。結(jié)果見表1和表2。實施例3:
本發(fā)明所述的桉烷型倍半萜類化合物抗淋巴細胞白血病活性實驗(MTT法) 方法取對數(shù)生長期的人淋巴細胞白血病細胞系M0LT-4細胞，接種于96孔培養(yǎng)板上， 每孔接種量為12000/150μ 。實驗設(shè)藥物實驗組、陰性對照組和空白對照孔。藥物實驗組 每孔加不同濃度的本發(fā)明所述的桉烷型倍半萜類化合物溶液50μ (化合物母液用營養(yǎng)液 稀釋)，每個濃度做3個復(fù)孔；陰性對照組每孔加營養(yǎng)液50μ ，共設(shè)6個復(fù)孔；空白對照孔 只加營養(yǎng)液200μ ，用于儀器調(diào)零。在常規(guī)培養(yǎng)條件下，作用72h后，每孔加入20μ MTT 溶液(濃度為5mg/mL，用PBS配制，pH=7. 4)，繼續(xù)培養(yǎng)4h，離心棄上清，每孔加二甲基亞砜 (DMSO) 150μ ，震蕩5min，待結(jié)晶完全溶解后，用酶標(biāo)儀(BI0-RAD產(chǎn)品)在570nm波長處測 定每個小孔的吸光度值(為7(|)，各組取平均值，計算抑制率IR = (1 —實驗組為/對照組 A7tl) X 100%。用SPSS12.0進行統(tǒng)計學(xué)分析，并計算IC5(1。實驗重復(fù)一次。結(jié)果見表1和表2。表1不同濃度的Encelin對白血病細胞的增殖抑制作用
糸與對照組義7。比較，7X0.05。
表2 Encelin對白血病細胞的半數(shù)抑制濃度
上述實驗結(jié)果表明，本發(fā)明所述的桉烷型倍半萜類化合物Encelin對急性髓系白血 病、慢性髓系白血病及淋巴細胞白血病等多種人白血病的細胞系(HL-60、ΝΒ4、Κ-562和 M0LT-4)均具有顯著的增殖抑制作用，并呈劑量依賴性；作用72h的IC5tl分別為0. 10、 0. 20、0. 35和0. 17mg/L，說明Encelin具有抗人白血病作用。因此，本發(fā)明所述的桉烷型倍 半萜類化合物Encelin可用于制備抗白血病藥物。
權(quán)利要求
一種桉烷型倍半萜類化合物的應(yīng)用，所述的化合物為Encelin，其化學(xué)命名為 (3aR,4aR,8aS,9aR) 8a methyl 3,5 dimethylidene 4,4a,9,9a tetra hydro 3aH benzo[f][1]benzofuran 2,6 dione，分子式為C15H16O3，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下；其特征在于所述的化合物應(yīng)用于制備治療白血病藥物中。2010102731427100001dest_path_image002.jpg
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桉烷型倍半萜類化合物的應(yīng)用，其特征在于所述的化合物 應(yīng)用于制備治療急性髓系白血病藥物中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桉烷型倍半萜類化合物的應(yīng)用，其特征在于所述的化合物 應(yīng)用于制備治療慢性髓系白血病藥物中。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桉烷型倍半萜類化合物的應(yīng)用，其特征在于所述的化合物 應(yīng)用于制備治療淋巴細胞白血病藥物中。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種桉烷型倍半萜類化合物的應(yīng)用，所述的化合物為Encelin，其化學(xué)命名為(3aR,4aR,8aS,9aR)-8a-methyl-3,5-dimethylidene-4,4a,9,9a-tetrahydro-3aH-benzo[f][1]benzofuran-2,6-dione，分子式為C15H16O3，其特征在于所述的化合物應(yīng)用于制備治療白血病藥物中。本發(fā)明所述的桉烷型倍半萜類化合物Encelin對急慢性髓系白血病及淋巴細胞白血病細胞均具有顯著的增殖抑制作用。
文檔編號A61P35/02GK101919841SQ20101027314
公開日2010年12月22日 申請日期2010年9月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月6日
發(fā)明者張永紅, 謝捷明, 陳永勝 申請人:福建醫(yī)科大學(xué)