專(zhuān)利名稱：具有抗腫瘤作用的肉豆蔻提取物及其藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及肉豆蔻提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用及其藥物制劑，屬于中藥領(lǐng) 域。
背景技術(shù)：
肉豆蔻為肉豆蔻科植物(Myristica fragrans Houtt.)的干燥成熟種仁，可治虛 瀉冷痢、脘腹冷痛、嘔吐等；外用可作寄生蟲(chóng)驅(qū)除劑，治療風(fēng)濕痛等。肉豆蔻中含揮發(fā)油、脂 肪酸、淀粉、蛋白質(zhì)及少量的蔗糖、戊聚糖、色素等，其中揮發(fā)油具有較強(qiáng)的藥理活性，具有 鎮(zhèn)痛、止瀉、抗病毒等作用。惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的常見(jiàn)病和多發(fā)病，抗癌藥物的開(kāi)發(fā)已成為本世紀(jì) 新藥研究的重大課題。目前，從植物中尋找高效低毒的抗腫瘤藥物，已成為國(guó)內(nèi)外抗腫瘤藥 物研究的重點(diǎn)。我們?cè)诤Y選抗腫瘤藥物過(guò)程中發(fā)現(xiàn)肉豆蔻提取物具有很強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞 和實(shí)體瘤生長(zhǎng)的作用。在本發(fā)明之前未見(jiàn)以肉豆蔻提取物為原料制備藥物劑型并用于預(yù)防和治療腫瘤 疾病的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供了肉豆蔻提取物的制備方法； 本發(fā)明的目的之二是提供了肉豆蔻提取物的藥物制劑；
本發(fā)明的目的之三是提供了肉豆蔻提取物的抗腫瘤新用途。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
本發(fā)明的肉豆蔻提取物是按照如下方法制備用水和/或有機(jī)溶劑作為提取劑，從肉 豆蔻的干燥成熟種仁中提取得到肉豆蔻提取物。其中，所述有機(jī)溶劑具體可為甲醇、乙醇、 石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯。所述有機(jī)溶劑優(yōu)選體積百分含量為 60%-99%的乙醇水溶液，最好選擇體積百分含量為80%-95%的乙醇水溶液。所述提取可為回 流提取，提取溫度可為60-100°C，至少提取一次，每次提取的時(shí)間為1-4小時(shí)。本發(fā)明的藥物制劑含有1%_99%的肉豆蔻提取物和99%_1%的賦形劑(包括其它 配用的藥物)，優(yōu)選含有20%-80%的肉豆蔻提取物和80%-20%的賦形劑(包括其它配用的藥 物)，最好含有40%-60%的肉豆蔻提取物和60%-40%的賦形劑(包括其它配用的藥物)。按藥劑學(xué)方法，可以將本發(fā)明的肉豆蔻提取物制備成多種臨床藥物劑型作為抗腫 瘤藥物，包括口服制劑或非腸道給藥的劑型。所說(shuō)的口服制劑選于片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒 劑、微囊片劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑中的任何一種；所說(shuō)的非腸道給藥劑型選自于注 射劑、氣霧劑、栓劑或皮下給藥劑型當(dāng)中的一種。本發(fā)明的抗腫瘤藥物中的輔料是指常規(guī)的賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐 劑、著色劑、粘合劑等。本發(fā)明的抗腫瘤藥物中的其它配伍用的藥物，指的是以有效劑量的 肉豆蔻提取物為一定的藥物原料，再配伍其它已允許合用的中藥或化學(xué)藥品。上述預(yù)防和/或治療腫瘤藥物的用量一般為IOO-IOOOmg肉豆蔻提取物/kg體重/天，療程為10至15天。本發(fā)明的肉豆蔻提取物藥物制劑具有抗腫瘤作用，是通過(guò)以下的藥效學(xué)試驗(yàn)得到 證實(shí)的。試驗(yàn)例1考察了肉豆蔻提取物對(duì)體外5種腫瘤細(xì)胞的抑制作用
細(xì)胞人卵巢癌細(xì)胞(Skov-3)、人宮頸癌上皮細(xì)胞(Hela)、人肝癌細(xì)胞(BEL-7402)、人 結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT-116)、人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)。以上細(xì)胞均為中科院海洋所海洋藥物實(shí)驗(yàn)
室提供。藥品及試劑肉豆蔻提取物中科院海洋所海洋藥物實(shí)驗(yàn)室提供，膏狀物；5-氟脲 嘧啶(5-FU)江蘇南通精華制藥有限公司產(chǎn)品，批號(hào)為100402 ； MTT (SIGMA, USA) ；DMSO (SIGMA, USA)；胰蛋白酶(SIGMA，USA) ；RPMI1640 (GIBCO, Invitragen Co.，USA) ；DMEM (GIBCO, Invitragen Co.，USA)；優(yōu)級(jí)胎牛血清(GIBCO，Invitragen Co.，USA)；特級(jí)胎牛血 清 Fetal Bovine Serum (Hyclone)0儀器超低溫冰箱(Nature，USA),細(xì)胞培養(yǎng)箱(SANYO, Japan),倒置顯微鏡 (NIKON, Japan), Slfeft (Bio-Tek Instruments, Inooski, VT, USA), PHifCThermo orion, USA)，超凈工作臺(tái)(FLC-哈爾濱東聯(lián)儀器廠)。實(shí)驗(yàn)方法MTT法各種人的腫瘤細(xì)胞株按照常規(guī)方法培養(yǎng)傳代，收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞懸液濃度5 X IO4個(gè)/ml左右。將細(xì)胞懸液加入96孔培養(yǎng)板中，每個(gè)孔加入 180 μ L·置于37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)M h后，實(shí)驗(yàn)組加入各濃度肉豆蔻提取物(以5-FU 作為陽(yáng)性對(duì)照組)20 μ 1/孔，每組各設(shè)4個(gè)平行孔，并分別設(shè)空白孔(只加入溶劑)以調(diào)零。 在培養(yǎng)箱37°C，培養(yǎng)48 h后，用移液槍將96孔板中液體洗凈后每孔加入MTT (1 mg/ml)30 μ 1，置(X)2培養(yǎng)箱37°C培養(yǎng)4 h，棄去上清，每孔加入DMSO 150 μ 1，置搖床搖勻30 min, 用酶標(biāo)儀在492 nm下檢測(cè)，利用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)算細(xì)胞死亡率，求取IC5(1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)SPSS軟件統(tǒng)計(jì)，肉豆蔻提取物對(duì)用于試驗(yàn)的5種腫瘤細(xì)胞，人 卵巢癌細(xì)胞(Skov-3)、人宮頸癌上皮細(xì)胞(Hela)、人肝癌細(xì)胞(BEL-7402)、人結(jié)腸癌細(xì)胞 (HCT-116)、人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)均有不同程度的抑制作用，并且呈一定的劑量依賴關(guān) 系，不同濃度的肉豆蔻提取物對(duì)各種腫瘤細(xì)胞的抑制率、IC50值詳見(jiàn)表1。表1不同濃度的肉豆蔻提取物對(duì)5種腫瘤細(xì)胞的抑制率
權(quán)利要求
1.具有抗腫瘤作用的肉豆蔻提取物，所述肉豆蔻提取物按照如下方法制備用水和/ 或有機(jī)溶劑作為提取劑，從肉豆蔻干燥成熟種仁中提取得到肉豆蔻提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肉豆蔻提取物，其特征在于所述的提取劑為甲醇、乙醇、石 油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯中的一種或幾種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肉豆蔻提取物，所述提取為回流提取，提取的溫度為 60-100°C，至少提取一次，每次提取的時(shí)間為1-4小時(shí)。
4.一種用于腫瘤治療的藥物制劑，其特征在于含有治療有效劑量的肉豆蔻提取物和一 種或多種藥學(xué)上可接受的藥用賦形劑，或可與肉豆蔻提取物組方的其它藥物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物制劑，其特征在于含有1%_99%的肉豆蔻提取物和 99%-1%的藥用賦形劑或其它可組方的藥物。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物制劑，其特征在于所說(shuō)的藥物制劑是口服制劑或非腸道 給藥的劑型。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物制劑，其特征在于所說(shuō)的口服制劑選自于片劑、丸劑、膠 囊劑、顆粒劑、微囊片劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑中的任何一種；所說(shuō)的非腸道給藥劑 型選自于注射劑、氣霧劑、栓劑或皮下給藥劑型當(dāng)中的任何一種。
8.肉豆蔻提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的用途，其特征在于所說(shuō)的抗腫瘤是指抑制腫瘤細(xì)胞和實(shí)體瘤的生長(zhǎng)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其特征在于所說(shuō)的腫瘤細(xì)胞為以下5種人卵巢癌細(xì)胞 (Skov-3)、人宮頸癌上皮細(xì)胞(Hela)、人肝癌細(xì)胞(BEL-7402)、人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT-116)、 人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)。所說(shuō)的實(shí)體瘤為上述5種腫瘤細(xì)胞的裸鼠移植性腫瘤。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了肉豆蔻提取物在抗腫瘤方面的醫(yī)藥新用途，同時(shí)也公開(kāi)了肉豆蔻提取物的制備方法，即以肉豆蔻為原料，用水和/或有機(jī)溶劑提取得到，以及用肉豆蔻提取物為原料制備成片劑、膠囊劑、丸劑、注射劑等臨床上可接受的藥物制劑，其中含有重量百分比為1%-99%的肉豆蔻提取物和99%-1%的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)。本發(fā)明提供的肉豆蔻提取物及其藥物制劑具有很好的抗腫瘤作用。表現(xiàn)在對(duì)體外人卵巢癌、人宮頸癌、人肝癌、人結(jié)腸癌、人乳腺癌5種腫瘤細(xì)胞具有明顯的抑制活性，并對(duì)此5種腫瘤細(xì)胞的裸鼠移植瘤具有顯著的抑瘤活性。此外，由于該藥物制劑的主要活性成分為中藥提取物，因而相對(duì)化學(xué)治療藥物而言具有毒副作用小的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K131/00GK102114059SQ20101029268
公開(kāi)日2011年7月6日 申請(qǐng)日期2010年9月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月27日
發(fā)明者劉海洲, 廖德忠, 林秀坤 申請(qǐng)人:林秀坤