專利名稱：烏司他丁用于制備治療自身免疫性腦脊髓炎藥物的用途及其藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及一種治療自身免疫性腦脊髓炎 的藥物，特別涉及烏司他丁作為制備治療自身免疫性腦脊髓炎藥物的一種應(yīng)用。
背景技術(shù)：
多發(fā)性硬化(Multiple Sclerosis, MS)是最常見的神經(jīng)免疫性疾病之一，在溫帶 患病率接近千分之三。年輕人易患病，發(fā)病年齡太約在28歲；具有遷延、復(fù)發(fā)并逐漸惡化的 特點(diǎn)，50%患者在首次發(fā)病15年后需借助拐仗行走，致死率高。因此，本病危害極大。由于 MS發(fā)病機(jī)制迄今不清，目前尚無有效的治療方法。MS病理上有炎癥浸潤、髓鞘脫失和神經(jīng)變性，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，Thl7細(xì)胞是MS的 最關(guān)健致病因素，其他如CD8+T細(xì)胞、DC細(xì)胞等也參與發(fā)病。多種炎性因子在MS的早期誘 導(dǎo)和疾病進(jìn)展上起重要作用。大量研究也證實MS炎癥期間產(chǎn)生的細(xì)胞內(nèi)外蛋白水解酶與 MS的中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘和神經(jīng)損傷有關(guān)，抑制MS關(guān)健蛋白酶活動可以抑制與致病有關(guān) 的多重通路。目前MS藥物治療主要針對抗炎和免疫調(diào)節(jié)，急性期標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)典治療是大劑量的激 素沖擊治療，它常常伴有嚴(yán)重的副作用如感染、性腺抑制、及腫瘤等，并且抑制內(nèi)源性腦保 護(hù)通路，增加神經(jīng)元丟失，因些需要尋找更安全更有效的治療藥物。烏司他丁，又名人尿胰蛋白酶抑制劑(Human Urinary Trypsin Inhibitor，UTI， Urinastatin ；或Ulinastatin)，是從人體尿液中分離純化的由143個氨基酸組成的酸性糖 蛋白，它不僅是一種廣譜蛋白酶抑制劑，還有抗炎、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)等多種作用，可以抑 制免疫細(xì)胞的活化增殖，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，其抗炎和免疫調(diào)節(jié)與MS致病過種的靶點(diǎn)有重
I=I ο

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為治療自身免疫性腦脊髓炎提供一種高效、安全且副作用少的方法。本發(fā)明的烏司他丁對自身免疫性腦脊髓炎有明顯的治療作用，一般以藥物組合物 的形式使用，這種組合物含有治療有效量的作為活性成分的烏司他丁和可藥用輔料，主要 劑型包括凍干粉針劑和注射液劑，通常以靜脈注射途徑給藥。經(jīng)靜脈注射給藥的烏司他丁組合物，一般是固體的滅菌組合物形式。這些組合物 還可以含有添加劑，特別是甘露醇、右旋糖苷、水解明膠、檸檬酸鈉、甘氨酸等。在使用時溶 解于滅菌注射用水或其它注射用滅菌介質(zhì)中。經(jīng)靜脈注射給藥的烏司他丁組合物也可以是水溶液形式，組合物還可以含有添加 劑，特別是甘露醇、氯化鈉、葡萄糖等。烏司他丁的劑量根據(jù)病情的嚴(yán)重程度、治療時間而定，一般靜脈注射給藥量是每
3天給藥1-4次，每次給藥10萬 100單位/支(瓶)，優(yōu)選20-60萬單位。
具體實施例方式以下通過具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實施例1制備烏司他丁干粉針取過濾滅菌烏司他丁水溶液10000萬單位，加20克甘露醇溶解，調(diào)節(jié)PH到中性， 加注射用水至2000毫升，加氯化鈉調(diào)節(jié)等滲，無菌過濾，分裝于1000個西林瓶中，無菌條件 下冷凍干燥，即得。實施例2制備烏司他丁注射液取過濾滅菌的烏司他丁水溶液10000萬單位，加20克甘露醇溶解，調(diào)節(jié)PH到中 性，加注射用水至2000毫升，加氯化鈉調(diào)節(jié)等滲，無菌過濾，分裝1000個西林瓶中，即得。實施例3烏司他丁對實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)小鼠的治療作用第一部份EAE小鼠模型的建立取6-8周齡C57BL/6雌性小鼠，體重(18_20) g，先準(zhǔn)備以下制劑A液M0G35-55，每只鼠0. 2mg,溶于無菌無內(nèi)素素的PBS中。B液結(jié)核菌素H37RA，每只鼠0. 4mg，溶于含結(jié)核菌素H37RA的完全福氏佐劑中。A液在B液中用乳化器乳化30分鐘以上，充分乳化，制成MOG乳化液。小鼠皮膚消毒后，于兩側(cè)下腹部多點(diǎn)皮下注射乳化液。在第0天和48小時再分別 注射百日咳毒素，每只小鼠0. 4 μ g (溶于0. Iml的PBS中)，第7天于雙側(cè)腋窩部位再次皮 下加強(qiáng)注射等量的MOG乳化液。第二部分烏司他丁治療EAE小鼠模型的實驗研究選取免疫后第13天的EAE小鼠模型72只，隨機(jī)分為六組空白對照組、溶劑對照 組、激素治療組、烏司他丁治療I組、烏司他丁治療II組、烏司他丁治療III組。空白對照 組不予治療；溶劑對照組為等容積的含有選自甘露醇、氯化鈉或葡萄糖的添加劑組成的緩 沖液，其成份比與烏司他丁注射液內(nèi)添加劑相同；激素治療組為甲基強(qiáng)的松龍，劑量30mg/ kg，每日1次，持續(xù)5天一個療程；烏司他丁 I組劑量為50，000單位/kg，II組劑量為 200，000單位/kg, III組劑量為400，000單位/kg，均為每日一次，持續(xù)5天一個療程。各 組用藥途徑均采用尾靜脈注射方法。主要檢測項目為治療結(jié)束時小鼠病情評分、EAE神經(jīng)病理學(xué)評分。小鼠病情臨床評分標(biāo)準(zhǔn)如下0分無任何癥狀和體征；1分尾部部分無力；2分尾部完全無力；3分后肢輕度癱瘓或步態(tài)共濟(jì)失調(diào)；4分雙后肢完全癱瘓或前肢受累；5分涉死狀態(tài)或死亡。腦及脊髓炎癥細(xì)胞浸潤評分標(biāo)準(zhǔn)0分無細(xì)胞浸潤；
4
1分脊膜細(xì)胞浸潤；2分1到2個血管周圍小范圍細(xì)胞浸潤；3分3到4個血管周圍小范圍細(xì)胞浸潤和/或1個累及實質(zhì)的大范圍細(xì)胞浸潤；4分大量細(xì)胞浸潤累及20%以上的白質(zhì)區(qū)域。髓鞘脫失評分標(biāo)準(zhǔn)0分無髓鞘脫失；1分軟膜下面少量的髓鞘改變；2分軟膜下和血管周圍明顯的脫髓鞘；3分廣泛的血管套形成，并延伸到鄰近實質(zhì)區(qū)域，或血管周圍脫髓鞘斑塊融合；4分軟膜下和血管周廣泛的脫髓鞘累及一半脊髓，并伴有中樞神經(jīng)系統(tǒng)實質(zhì)內(nèi) 炎癥細(xì)胞浸潤；5分廣泛的軟膜下和血管周脫髓鞘累及整個脊髓橫斷面，伴有中樞神經(jīng)系統(tǒng)實 質(zhì)內(nèi)的炎癥細(xì)胞浸潤。結(jié)果1.臨床病情評分比較EAE小鼠模型經(jīng)治療后，烏司他丁 II組，III組及激素治療組臨床病情平均評分明 顯改善，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 005)，烏司他丁治療I組差異不顯著。結(jié)果表明烏司他丁 對EAE的病情改善有激素同樣的效果。表2臨床病情評分比較(X 士 S)2. EAE神經(jīng)病理學(xué)評分比較空白對照組及溶劑對照組的EAE小鼠HE染色顯示腰段脊髓有大量的炎癥細(xì)胞浸 潤，有大量的血管套形成，砂羅硌花染色示腰段脊髓折質(zhì)腫脹，有大塊的脫髓鞘，主要分布 于前索和側(cè)索。烏司他丁治療II組，III組及激素治療組的病理改變明顯減輕，腰段脊髓 的炎癥和脫髓鞘差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 005)。表5各治療組小鼠造模后24周腎臟病理變化的統(tǒng)計
動物分組
平均臨床評分
空白對照組 溶劑對照組 激素治療組 烏司他丁 I組 烏司他丁 II組 烏司他丁 III組
權(quán)利要求
烏司他丁用于制備治療自身免疫性腦脊髓炎藥物的用途，所述藥物含有治療有效量的烏司他丁以及藥學(xué)上可接受的載體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物的給藥量是每天給藥1-4次，每次給藥10 萬 100單位/支(瓶)，優(yōu)選20-60萬單位。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物為凍干粉針劑，載體可選用葡萄糖、氯化鈉、 甘露醇、乳糖或水解明膠中的一種或其任意混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物為注射液，載體可選用注射用水、葡萄糖、氯 化鈉或甘露醇的一種或其任意混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求3的用途，其中所述藥物還含有選自甘露醇、右旋糖苷、水解明膠、檸 檬酸鈉或甘氨酸的添加劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求4的用途，其中所述藥物還含有選自甘露醇、氯化鈉或葡萄糖的添加劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及烏司他丁作為制備治療自身免疫性腦脊髓炎藥物的一種應(yīng)用。本發(fā)明涉及藥物來源于人尿提純的天然蛋白藥物，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，不良反應(yīng)少，克服了現(xiàn)有糖皮質(zhì)激素等治療自身免疫性腦脊髓炎常用藥物存在的副作用較多，影響患者的生活質(zhì)量甚至死亡等缺點(diǎn)。通過對自身免疫性腦脊髓炎動物模型的療效對比研究，發(fā)現(xiàn)烏司他丁療效與激素相當(dāng)。
文檔編號A61K9/08GK101972471SQ20101029950
公開日2011年2月16日 申請日期2010年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月8日
發(fā)明者傅和亮, 華明娟, 吳蓉蓉, 鄒春芽, 陳穎 申請人:廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司