專利名稱：一種貫葉連翹精提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物有效成分的提取方法領(lǐng)域，尤其涉及一種用市售貫葉連翹粗提物 制備富含貫葉金絲桃素的貫葉連翹精提取物的方法。
背景技術(shù)：
貫葉連翹含有多種化學(xué)成分，主要有萘駢二蒽酮類、間苯三酚類、黃酮類、揮發(fā)油 類、氨基酸類、苯丙烷類和咕噸酮類等。其中萘駢二蒽酮類、間苯三酚類和黃酮類被認(rèn)為是 貫葉連翹的主要活性成分。間苯三酚類主要包括貫葉金絲桃素(hyperforin)和加貫葉金 絲桃素(adhyperforin)，貫葉金絲桃素為親脂性成分，對光、熱和氧氣極不穩(wěn)定。已知的貫葉金絲桃素提取方法主要有浸提法與二氧化碳超臨界流體萃取法。浸提 法是目前運(yùn)用最廣泛、成本最低的方法，但其提取時(shí)間較長，提取效率低。二氧化碳超臨界 流體萃取法是目前較為先進(jìn)的提取方法，得到的產(chǎn)品純度也較高，將貫葉連翹用二氧化碳 超臨界流體萃取之后，再用甲醇和正己烷反復(fù)萃取，得到的提取物含有70%的貫葉金絲桃 素，但是二氧化碳超臨界流萃取法的儀器成本太高，產(chǎn)量較低，在國內(nèi)還未普及。傳統(tǒng)的貫葉金絲桃素的提取方法，一般是粉碎干燥生藥，用有機(jī)溶劑浸提。公開號 分別為CN1198097和CN1251999的中國發(fā)明專利公開了德國威廉施瓦布博士有限公司發(fā) 明的含有貫葉金絲桃素的穩(wěn)定提取物，用含水甲醇、含水乙醇、正庚烷作為提取溶劑并在制 備時(shí)加入足夠量的穩(wěn)定劑，如有機(jī)硫醇化物、抗壞血酸及其衍生物，其貫葉金絲桃素含量在 0. 2%或以上，可長期穩(wěn)定。公開號為CN1392130A的中國發(fā)明專利公開了楊得坡等人 發(fā)明的貫葉連翹等植物中提取純化貫葉金絲桃素類成分的方法，純度可達(dá)95%以上。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種利用市售含貫葉金絲桃素3 4%的貫葉連翹粗提物，在低溫 下超聲波輔助萃取制備富含貫葉金絲桃素的貫葉連翹精提取物的方法。一種貫葉連翹精提取物的制備方法，包括以下步驟a)取貫葉連翹粗提物，與乙酸乙酯混合，在冰水浴中進(jìn)行超聲波提取30 60min， 制得提取液；所述的乙酸乙酯的體積用量(ml)為貫葉連翹粗提物質(zhì)量(g)的4 6倍。所述的貫葉連翹粗提物指一般市售貫葉連翹粗提取物，按照國際通用的質(zhì)量控制 標(biāo)準(zhǔn)，其中金絲桃素的含量在0. 3%以上。根據(jù)測定，其中貫葉金絲桃素含量為3 4%。b)將步驟a)所制得的提取液濃縮成含貫葉連翹粗提物0. 5 5g/ml的濃縮液， 用無機(jī)堿調(diào)PH值為8 14后，抽濾，取濾液，用無機(jī)酸調(diào)pH至0 2，用非極性溶劑萃取 3 5次，合并非極性溶劑相，減壓回收得浸膏，0 20°C真空干燥，制得的貫葉連翹提取 物在_20°C避光保存。所述的無機(jī)堿為KOH、NaOH或NaHCO3,所述的無機(jī)酸為HCl、H2SO4或 Η3Ρ04。所述的非極性溶劑為低沸點(diǎn)石油醚，所述的低沸點(diǎn)石油醚的沸點(diǎn)在30 60°C。c)將b)步驟所得貫葉連翹提取物溶解于洗脫劑中進(jìn)行硅膠柱層析，濕法上柱，經(jīng) 濃縮得到貫葉金絲桃素含量為37 57%的貫葉連翹精提取物。所述的洗脫劑為石油醚、正己烷、醇、酯和有機(jī)酸中的一種或幾種的混合物。所述的硅膠為柱層析硅膠H或薄層析硅膠 H0步驟a)中超聲波提取條件優(yōu)選為將用量為5ml/g貫葉連翹粗提物的乙酸乙酯在 冰水浴中避光、密閉提取60分鐘。作為優(yōu)選，步驟b)中先用NaOH調(diào)pH = 8，再用20% HCl調(diào)pH = 2。作為優(yōu)選，c)中硅膠柱層析洗脫劑各組分及其體積比為石油醚乙酸乙酯乙酸 =80 19 1，更優(yōu)選為石油醚乙酸乙酯=10 1。超聲波提取技術(shù)的基本原理是利用超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈振動(dòng)、高的加速度、強(qiáng)烈的 空化效應(yīng)、攪拌作用等，加速藥物成分進(jìn)入溶劑，從而提高提出率，縮短提取時(shí)間，與索氏提 取法相比可免去高溫對提取成分的影響。與常規(guī)浸提法相比，超聲波提取技術(shù)具有提取時(shí) 間短、產(chǎn)率高、無需加熱等優(yōu)點(diǎn)，在這個(gè)領(lǐng)域中具有良好的應(yīng)用前景。經(jīng)高效液相色譜檢測，采用本發(fā)明方法的步驟a)、b)制備得到的貫葉連翹提取物 中貫葉金絲桃素含量為11 18%，該浸膏至少在1個(gè)月保存期間內(nèi)穩(wěn)定，無明顯減少。經(jīng) 藥理實(shí)驗(yàn)證明，該貫葉連翹提取物不僅具有顯著的抗抑郁作用，而且可促進(jìn)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶 能力。該貫葉連翹提取物再經(jīng)硅膠柱層析，得到富含貫葉金絲桃素的貫葉連翹精提取物，其 中貫葉金絲桃素的含量可達(dá)57%。本發(fā)明方法適用于藥理試驗(yàn)所需的小批量制備，比較簡易，可節(jié)省提取時(shí)間和空 間。


圖1為本發(fā)明制備方法的工藝流程圖。
具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實(shí)施例1取貫葉連翹粗提物50g，與250ml乙酸乙酯混合，在冰水浴中進(jìn)行超聲波提取 60min。將上述所得提取液濃縮成含貫葉連翹粗提物0. 5 5g/ml的濃縮液，用NaOH調(diào)pH =8，抽濾，取濾液，用20% HCl調(diào)pH = 2，用150ml低沸點(diǎn)石油醚萃取3 5次，合并石油 醚相，減壓回收得浸膏，0 20°C真空干燥2小時(shí)。將上述提取物溶解于少量洗脫劑進(jìn)行硅 膠柱層析，洗脫劑為石油醚乙酸乙酯乙酸=80 19 1，適量加壓，收集液經(jīng)濃縮得到 富含貫葉金絲桃素的貫葉連翹精提取物，用HPLC檢測，其中貫葉金絲桃素的含量為57%。實(shí)施例2取貫葉連翹粗提物50g，與250ml乙酸乙酯混合，在冰水浴中進(jìn)行超聲波提取 30min。將上述所得提取液濃縮成含貫葉連翹粗提物0. 5 5g/ml的濃縮液，用NaOH調(diào)pH =8，低溫高速離心后取濾液，用20% HCl調(diào)pH = 2，用150ml低沸點(diǎn)石油醚萃取3 5次， 合并石油醚相，減壓回收得浸膏，0 20°C真空干燥2小時(shí)。將上述提取物溶解于少量洗脫 劑進(jìn)行硅膠柱層析，洗脫劑為石油醚乙酸乙酯=10 1，適量加壓，收集液經(jīng)濃縮得到富 含貫葉金絲桃素的精提取物，經(jīng)檢測，其中貫葉金絲桃素的含量為37%。實(shí)施例3
取貫葉連翹粗提物50g，用250ml乙酸乙酯浸提24小時(shí)。將上述所得提取液濃縮 成含貫葉連翹粗提物0. 5 5g/ml的濃縮液，用NaOH調(diào)pH = 8，抽濾，取濾液，用20% HCl 調(diào)pH = 2，用150ml低沸點(diǎn)石油醚萃取3 5次，合并石油醚相，減壓回收得浸膏，0 20°C 真空干燥2小時(shí)。將上述提取物溶解于少量洗脫劑進(jìn)行硅膠柱層析，洗脫劑為石油醚乙 酸乙酯乙酸=80 19 1，適量加壓，收集液濃縮得到富含貫葉金絲桃素的精提取物，經(jīng) 檢測，其中貫葉金絲桃素的含量為36%。實(shí)施例4取貫葉連翹粗提物50g，與250ml乙酸乙酯混合，在冰水浴中進(jìn)行超聲波提取 45min。將上述所得提取液濃縮成含貫葉連翹粗提物0. 5 5g/ml的濃縮液，用NaOH調(diào)pH =8，用20% HCl調(diào)pH = 2，用150ml低沸點(diǎn)石油醚萃取3 5次，合并石油醚相，減壓回收 得浸膏，0 20°C真空干燥2小時(shí)，得到貫葉金絲桃素含量為18%的提取物。實(shí)施例5取貫葉連翹粗提物50g，加入穩(wěn)定劑，與250ml乙酸乙酯混合，在冰水浴中進(jìn)行超 聲波提取45min。將上述所得提取液濃縮成含貫葉連翹粗提物0. 5 5g/ml的濃縮液，用 NaOH調(diào)pH = 8，用20% HCl調(diào)pH = 2，用150ml低沸點(diǎn)石油醚萃取3 5次，合并石油醚 相，減壓回收得浸膏，0 20°C真空干燥2小時(shí)，得到貫葉金絲桃素含量為18%的提取物。實(shí)施例6取貫葉連翹粗提物50g，加入穩(wěn)定劑，與250ml乙醇混合，在冰水浴中進(jìn)行超聲波 提取45min。將上述所得提取液濃縮成含貫葉連翹粗提物0. 5 5g/ml的濃縮液，用NaOH 調(diào)PH = 8，用20% HCl調(diào)pH = 2，用150ml低沸點(diǎn)石油醚萃取3 5次，合并石油醚相，減 壓回收得浸膏，0 20°C真空干燥2小時(shí)，得到貫葉金絲桃素含量為11%的提取物。實(shí)施例7取貫葉連翹粗提物50g，加入穩(wěn)定劑，與250ml丙酮混合，在冰水浴中進(jìn)行超聲波 提取45min。將上述所得提取液濃縮成含貫葉連翹粗提物0. 5 5g/ml的濃縮液，用NaOH 調(diào)PH = 8，用20% HCl調(diào)pH = 2，用150ml低沸點(diǎn)石油醚萃取3 5次，合并石油醚相，減 壓回收得浸膏，0 20°C真空干燥2小時(shí)，得到貫葉金絲桃素含量為14%的提取物。實(shí)施例8取貫葉連翹粗提物50g，與250ml乙酸乙酯混合，在冰水浴中進(jìn)行超聲波提取 45min。將上述所得提取液濃縮成含貫葉連翹粗提物0. 5 5g/ml的濃縮液，用NaOH調(diào)pH =8，用20% HCl調(diào)pH = 2，用150ml普通石油醚萃取3 5次，合并石油醚相，減壓回收得 浸膏，0 20°C真空干燥2小時(shí)，得到貫葉金絲桃素含量為16%的提取物，石油醚有明顯殘
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權(quán)利要求
一種貫葉連翹精提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟a)取市售貫葉連翹粗提物，加乙酸乙酯混合，在冰水浴下進(jìn)行超聲波提取30～60分鐘，制得提取液；所述的乙酸乙酯的用量為4～6ml/g貫葉連翹粗提物；b)將步驟a)制得的提取液濃縮成含貫葉連翹粗提物0.5～5g/ml的濃縮液，用無機(jī)堿調(diào)pH值為8～14后，抽濾，取濾液，用無機(jī)酸調(diào)pH為0～2，用非極性溶劑萃取3～5次，合并非極性溶劑相，減壓回收得浸膏，0～20℃真空干燥，制得的貫葉連翹提取物在 20℃避光保存；c)將步驟b)中所得貫葉連翹提取物溶解于洗脫劑進(jìn)行硅膠柱層析，濕法上柱，濃縮得到富含貫葉金絲桃素的貫葉連翹精提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的貫葉連翹精提取物的制備方法，其特征在于步驟a)中超聲 波提取條件為用乙酸乙酯在冰水浴中避光、密閉提取30 60分鐘，所述的乙酸乙酯的用 量為4 6ml/g貫葉連翹粗提物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的貫葉連翹精提取物的制備方法，其特征在于步驟b)中所述 的無機(jī)堿為KOH、NaOH或NaHCO3。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的貫葉連翹精提取物的制備方法，其特征在于步驟b)中所述 的無機(jī)酸為HCl、H2SO4或H3PO4。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的貫葉連翹精提取物的制備方法，其特征在于步驟b)中先用 NaOH調(diào)pH為8 14，再用鹽酸調(diào)pH為0 2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的貫葉連翹精提取物的制備方法，其特征在于步驟b)中所述 的非極性溶劑為低沸點(diǎn)石油醚。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的貫葉連翹精提取物的制備方法，其特征在于步驟c)中所述 的硅膠為柱層析硅膠H或薄層析硅膠H。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的貫葉連翹精提取物的制備方法，其特征在于步驟c)中所述 的洗脫劑為石油醚、正己烷、醇、酯和有機(jī)酸中的一種或幾種的混合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的貫葉連翹精提取物的制備方法，其特征在于步驟c)中所述 的洗脫劑中各組分及其體積比為石油醚乙酸乙酯乙酸=80 19 1。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的貫葉連翹精提取物的制備方法，其特征在于步驟C)中所 述的洗脫劑中各組分及其體積比為石油醚乙酸乙酯=10 1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備富含貫葉金絲桃素的貫葉連翹精提取物的方法，以市售貫葉連翹粗提物為原料，先在冰水浴中進(jìn)行超聲波提取，再用兩相萃取等初步除雜處理后，得到含11～18％貫葉金絲桃素的提取物，最后經(jīng)硅膠柱層析技術(shù)分離純化，可得到貫葉金絲桃素含量37～57％的精提取物，經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)證明該提取物具有抗抑郁和促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶的作用。本發(fā)明方法簡單易行，適用于藥理試驗(yàn)等所需的小批量制備，可節(jié)省提取時(shí)間和空間。
文檔編號A61K36/185GK101961358SQ201010506239
公開日2011年2月2日 申請日期2010年10月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月13日
發(fā)明者劉健翔, 方吟荃, 李彥, 魏崢曦 申請人:浙江大學(xué)城市學(xué)院