專利名稱：一種修飾后的短肽及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種修飾后的短肽及其應用。
背景技術：
各種藥物成癮(包括阿片類物質藥物成癮、可卡因類物質藥物成癮、苯丙胺類物質藥物成癮和大麻類成癮等)是一種嚴重的臨床疾病，也是一個重大的社會問題。在我國， 濫用海洛因、苯丙胺類等精神藥物的人群數量逐年攀升，尤其是阿片類物質成癮戒除后的極高復吸率成為臨床治療阿片類物質成癮中目前難以攻克的難題。藥物成癮的學習記憶假說認為藥物成癮是一種畸形記憶，這種畸形記憶的長期性導致了藥物成癮的易復發(fā)性， 體現在成癮者長期戒斷藥物后仍會在藥物本身或者相關線索的誘導下發(fā)生復吸。大量研究證明 Ca2+/鈣調素依賴的蛋白激酶 n(Ca2+/Calmodulin-d印endent protein kinase II， CaMKII)是參與學習記憶過程的重要分子，提示CaMKII可能參與各種精神藥物的成癮。Autocamtide-2是CaMKII的一種高選擇性的肽類底物，合成肽Autocamtide_2 Related Inhibitory Peptide (AIP, ^ ^5^ N-Lys-Lys-Ala-Leu-Arg-Arg-Gln-Glu-Ala-Val-Asp-Ala-Leu-OH)是Autocamtide_2的一種非磷酸化的類似物，因此AIP能夠高效并且特異性的抑制CaMKII。有些短肽類難以透過血腦屏障進入腦內發(fā)揮作用，通過肉豆蔻?；亩嗑劬彼崞?myristoylated polyarginine peptide, MPAP)修飾后，上述短肽類可以較容易透過血腦屏障進入腦內而發(fā)揮其作用。

發(fā)明內容
本發(fā)明的一個目的是提供一種修飾后的短肽。本發(fā)明提供的修飾后的短肽，其為將肉豆蔻酰通過共價鍵連接在氨基酸殘基序列的氨基端得到的短肽；所述肉豆蔻酰的結構式為CH3 (CH2) 12C0 ；所述氨基酸殘基序列如下所示N， -Ala-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Lys-Lys-Ala-Leu-Arg-Arg-Gln-Glu-Al a-Val-Asp-Ala-Leu-C，；所述共價連接為將所述肉豆蔻酰的酰基與所述氨基酸殘基序列中自氨基末端的第1位Ala的氨基連接形成酰胺鍵；所述氨基酸殘基序列中自氨基末端的第1位Ala為氨基直接連接在β-碳原子上的Ala ；所述氨基酸殘基序列的其他氨基酸殘基為氨基直接連接在各自α -碳原子上的氨
基酸殘基。本發(fā)明的另一個目的是提供一種抑制藥物成癮與復吸的產品。本發(fā)明提供的抑制藥物成癮與復吸的產品，其活性成分為所述的修飾后的短肽或修飾后的短肽溶液。
所述產品中，所述修飾后的短肽溶液為將所述修飾后的短肽溶解在生理鹽水中得到的短肽溶液。所述藥物成癮為阿片類物質藥物成癮、可卡因類物質藥物成癮、苯丙胺類物質藥物成癮和/或大麻類物質藥物成癮。所述阿片類物質為嗎啡、可待因、海洛因、哌替啶和/或美沙酮，所述可卡因類物質為可卡因，所述苯丙胺類物質為苯丙胺、甲基苯丙胺和/或搖頭丸，所述大麻類物質為活性成分為四氫大麻酚、大麻二酚和/或大麻酚的制劑。阿片類物質包括天然和合成的各種阿片類物質，具體為從天然來源的阿片中提取的有效成分如嗎啡，可待因等，以及將其有效成分加工獲得的產品如海洛因，還有人工合成具有類似阿片作用的藥物如哌替啶，美沙酮等。所述產品為藥品。上述短肽在制備抑制藥物成癮與復吸的產品中的應用也是本發(fā)明保護的范圍。所述應用中，所述藥物成癮為阿片類物質藥物成癮、可卡因類物質藥物成癮、苯丙胺類物質藥物成癮和/或大麻類成癮。所述阿片類物質為嗎啡、可待因、海洛因、哌替啶和/或美沙酮，所述可卡因類物質為可卡因，所述苯丙胺類物質為苯丙胺、甲基苯丙胺和/或搖頭丸，所述大麻類物質為活性成分為四氫大麻酚、大麻二酚和/或大麻酚的制劑。所述產品為藥物。本發(fā)明的實驗證明本發(fā)明提供的能夠透過血腦屏障的MPAI為將AIP的前端用 MPAP進行修飾得到的，本研究的結果證實了 MPAI能夠有效抑制嗎啡誘導的大鼠自身給藥的重建，并且不影響大鼠的活動性。這一結果對于阿片類藥物成癮的理論研究和臨床防治具有著重要的意義。


圖1為靜脈注射MPAI的大鼠和靜脈注射生理鹽水的大鼠在嗎啡自身給藥行為的獲得，消退和嗎啡誘導的自身給藥行為重建過程中的有效鼻觸和無效鼻觸次數圖2為靜脈注射生理鹽水的大鼠與靜脈注射MPAI的大鼠在自身給藥箱中的活動水平
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。實施例1、預處理MPAI干擾大鼠自身給藥行為的重新建立1、材料體重約300g的約65日齡SD雄性大鼠購自中國軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心。藥品鹽酸嗎啡注射液(鹽酸嗎啡注射液為沈陽第一制藥廠生產，嗎啡濃度為 10mg/ml，使用時根據實驗需要用無菌生理鹽水將其稀釋為所需要的濃度)，MPAI (由吉爾生化(上海)有限公司合成)MPAI為將肉豆蔻酰通過共價鍵連接在氨基酸殘基序列的氨基端得到的短肽，
其中肉豆蔻酰的結構式為CH3(CH2)12CO,氨基酸殘基序列如下所示N， -Ala-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Lys-Lys-Ala-Leu-Arg-Arg-Gln-Glu-Al a-Val-Asp-Ala-Leu-C，；共價連接為將所述肉豆蔻酰的?；c所述氨基酸殘基序列中自氨基末端的第1 位Ala的氨基連接形成酰胺鍵；所述氨基酸殘基序列中自氨基末端的第1位Ala為氨基直接連接在β-碳原子上的Ala ；所述氨基酸殘基序列的其他氨基酸殘基為氨基直接連接在各自α -碳原子上的氨
基酸殘基。大鼠自身給藥裝置(安來軟件科技有限公司)由箱體和控制軟件組成，箱內壁上有左右兩個鼻觸孔，每個鼻觸孔內均有鼻觸燈，箱內壁上方有一籠燈，插入大鼠頸靜脈的插管通過與自身給藥箱內的管系統(tǒng)與外面的藥物泵連接起來，泵啟動會將嗎啡送入大鼠頸靜脈內，所有的輸入輸出信號均與軟件聯系起來，進行實時記錄。2、實驗將體重約300g的約65日齡SD雄性大鼠分為兩組生理鹽水組、MAPI組，每組9
P(1)大鼠嗎啡自身給藥行為的獲得(建立)兩組在相同的條件下，采用同樣的方法實驗，具體方法如下有效鼻觸定義大鼠接觸有效鼻觸孔，為有效鼻觸(可以通過電腦程序設定自身給藥箱內兩個鼻觸孔的任意一個為有效鼻觸孔)；無效鼻觸定義大鼠接觸無效鼻觸孔，為無效鼻觸(設定有效鼻觸孔后，另一個鼻觸孔為無效鼻觸孔)；自身給藥數大鼠在每次3個小時的訓練中通過有效鼻觸得到的嗎啡次數為每次訓練的自身給藥數(因為在不應期內的有效鼻觸不會使大鼠獲得嗎啡，因此給藥次數總是小于或者等于有效鼻觸次數)；每天將18只大鼠放入自身給藥箱訓練一次，在動物暗周期內進行，每次3個小時。 在非不應期內大鼠伸入有效鼻觸孔一次，會得到一次從頸靜脈泵入的嗎啡溶液(嗎啡濃度為lmg/ml)，每次注射劑量設為0. 3mg (嗎啡)/kg (大鼠體重)，有效鼻觸孔可以設定為左右鼻觸孔的任意一個，另一個即為無效鼻觸孔。每次將大鼠放入給藥箱開始訓練時，籠燈亮， 預示著可以給藥。當大鼠有效鼻觸一次后，籠燈滅，有效鼻觸燈亮5s，同時伴隨有不連續(xù)的聲音刺激& (響0.如后停頓0. Is)，這期間頸靜脈給藥一次，給藥后有1 不應期。在不應期里，大鼠伸入有效鼻觸孔不會有嗎啡的注射和聲光刺激。不應期后，籠燈再次亮起，預示可以再次給藥。在任何時期無效鼻觸均不會引起嗎啡注射和聲光刺激。如此循環(huán)到整個訓練時間結束。訓練18天后，統(tǒng)計第18天時大鼠的有效鼻觸次數、無效鼻觸次數和自身給藥數如下，結果采用平均值士標準誤的方式表示生理鹽水組的有效鼻觸次數24. 33士 2. 12 (次/3小時)；MPAI組的有效鼻觸次數22. 22士 1. 76 (次/3小時)；生理鹽水組的無效鼻觸次數7. 44士3. 25 (次/3小時)；MPAI組的無效鼻觸次數3. 89士 1. 38 (次/3小時)；
生理鹽水組的自身給藥數22. 67士2. 18 (次/3小時)；MPAI組的自身給藥數20. 33士 1. 75 (次/3小時)；可以看出，兩組大鼠均獲得穩(wěn)定的自身給藥行為，有效鼻觸次數和自身給藥數遠遠高于無效鼻觸次數。2)大鼠嗎啡自身給藥行為的消退消退訓練的程序與建立時的程序相同，唯一的不同是大鼠在自身給藥箱伸入原先的有效鼻觸孔后不再得到嗎啡注射，消退訓練21天后統(tǒng)計第21天的有效鼻觸次數和無效鼻觸次數如下，結果采用平均值士標準誤的方式表示生理鹽水組的有效鼻觸次數3. 78士 1. 82 (次/3小時)；MPAI組的有效鼻觸次數2. 89士 1. 42 (次/3小時)；生理鹽水組的無效鼻觸次數2. 11 士 1. 40 (次/3小時)；MPAI組的無效鼻觸次數3. 11 士 1. 33 (次/3小時)；可以看出，兩組大鼠的有效鼻觸次數明顯降低，與無效鼻觸數比較沒有顯著差異。3)嗎啡誘導的大鼠自身給藥行為的重新建立在消退訓練完成M小時后，兩組大鼠均腹腔注射嗎啡溶液(5mg嗎啡/kg大鼠體重)，注射完后放入自身給藥箱中，進行大鼠自身給藥行為的重建測試。在腹腔注射嗎啡溶液進行大鼠自身給藥行為的重新建立之前，頸靜脈注射藥物預處理45分鐘。重建行為的測試時間為3小時，測試的程序和消退訓練的程序相同。頸靜脈注射預處理方法如下MPAI組頸靜脈注射160ug MPAI/只大鼠(此時大鼠體重為380g_425g之間， 150ug MPAI/0. 4ml無菌生理鹽水)生理鹽水組頸靜脈注射0. 4ml無菌生理鹽水/只大鼠。實驗結果采用平均值士標準誤的方法表示A 鼻觸實驗生理鹽水組的有效鼻觸次數19. 11 士4. 47 (次/3小時)；MPAI組的有效鼻觸次數5. 44士 1. 67 (次/3小時)；生理鹽水組的無效鼻觸次數1. 44士0. 53 (次/3小時)；MPAI組的無效鼻觸次數1. 22士0. 52 (次/3小時)；將結果作圖，如圖1所示，其中圖Ia為MPAI組大鼠和生理鹽水組大鼠在自身給藥行為的獲得，消退和嗎啡誘導的自身給藥行為重建過程中的有效鼻觸次數，圖Ib為MPAI組大鼠和生理鹽水組大鼠在自身給藥行為的獲得，消退和嗎啡誘導的自身給藥行為重建過程中的無效鼻觸次數，“*”表示生理鹽水組(n = 9)與MPAI組(n = 9)進行組間比較，經方差分析統(tǒng)計P < 0. 05。從圖中看出，靜脈給予MPAI能夠有效降低大鼠在嗎啡誘導的自身給藥重建過程中的有效鼻觸次數(圖la)，而對無效鼻觸數沒有顯著性影響(圖lb)。方差分析的結果顯示兩組鼠在自身給藥行為的獲得和消退時的有效鼻觸次數和無效鼻觸次數均沒有顯著性差異(圖la，b)。B 靜脈注射MPAI組大鼠在自身給藥箱中的活動性的測量每個自身給藥箱中均裝有測量大鼠活動性的八路光路探測系統(tǒng)，可以記錄大鼠從建立、消退到重建的過程中每一天在箱內的活動性，活動性采用大鼠在自身給藥箱內突破八路光路探測系統(tǒng)的總次數為衡量指標，單位為次。統(tǒng)計上述兩組鼠在自身給藥行為重建時的活動性，其中MPAI組的大鼠為8只，生理鹽水組的大鼠為7只，實驗結果采用平均值士標準誤的方式表示。結果如圖2所示，從圖中看出，MPAI組的大鼠活動性為5225. 71 士717. 32 (次/3小時)；生理鹽水組的大鼠活動性為5786. 13士566. 01 (次/3小時)；結果表明MPAI組和生理鹽水組的大鼠在自身給藥行為的重新建立過程中，活動性沒有顯著差異，即靜脈注射MPAI后不影響大鼠的活動性。本研究的結果證實了 MPAI能夠有效抑制嗎啡誘導的大鼠自身給藥行為的重建， 并且不影響大鼠的活動性。
權利要求
1.一種修飾后的短肽，其為將肉豆蔻酰通過共價鍵連接在氨基酸殘基序列的氨基端得到的短肽；所述肉豆蔻酰的結構式為CH3(CH2)12CO,所述氨基酸殘基序列如下所示N， -Ala-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Lys-Lys-Ala-Leu-Arg-Arg-Gln-Glu-Ala-Va I-Asp-Ala-Leu-C'；所述共價連接為將所述肉豆蔻酰的酰基與所述氨基酸殘基序列中自氨基末端的第1 位Ala的氨基連接形成酰胺鍵；所述氨基酸殘基序列中自氨基末端的第1位Ala為氨基直接連接在β-碳原子上的 Ala ；所述氨基酸殘基序列的其他氨基酸殘基為氨基直接連接在各自α -碳原子上的氨基酸殘基。
2.一種抑制藥物成癮與復吸的產品，其活性成分為權利要求1所述修飾后的短肽或修飾后的短肽溶液。
3.根據權利要求2所述的產品，其特征在于所述修飾后的短肽溶液為將所述修飾后的短肽溶解在生理鹽水中得到的短肽溶液。
4.根據權利要求2或3所述的產品，其特征在于所述藥物成癮為阿片類物質藥物成癮、可卡因類物質藥物成癮、苯丙胺類物質藥物成癮和/或大麻類物質藥物成癮。
5.根據權利要求2-4中任一所述的產品，其特征在于所述阿片類物質為嗎啡、可待因、海洛因、哌替啶和/或美沙酮，所述可卡因類物質為可卡因，所述苯丙胺類物質為苯丙胺、甲基苯丙胺和/或搖頭丸，所述大麻類物質為活性成分為四氫大麻酚、大麻二酚和/或大麻酚的制劑。
6.根據權利要求2-5中任一所述的產品，其特征在于所述產品為藥品。
7.權利要求1所述的修飾后的短肽在制備抑制藥物成癮與復吸的產品中的應用。
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于所述藥物成癮為阿片類物質藥物成癮、可卡因類物質藥物成癮、苯丙胺類物質藥物成癮和/或大麻類物質藥物成癮。
9.根據權利要求7或8所述的應用，其特征在于所述阿片類物質為嗎啡、可待因、海洛因、哌替啶和/或美沙酮，所述可卡因類物質為可卡因，所述苯丙胺類物質為苯丙胺、甲基苯丙胺和/或搖頭丸，所述大麻類物質為活性成分為四氫大麻酚、大麻二酚和/或大麻酚的制劑。
10.根據權利要求7-9任一所述的應用，其特征在于所述產品為藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種修飾后的短肽及其應用。本發(fā)明提供的短肽，其為將肉豆蔻酰基團通過共價鍵連接在氨基酸殘基序列的氨基端得到的短肽。本發(fā)明還提供了一種抑制藥物成癮與復吸的產品，其活性成分為所述修飾后的短肽。本發(fā)明的實驗證明MPAI能夠有效抑制嗎啡誘導的大鼠自身給藥的重建，并且不影響大鼠的活動性。這一結果對于阿片類物質(包括天然和合成的各種阿片類物質)成癮的理論研究和臨床防治具有著重要的意義。
文檔編號A61P25/00GK102453080SQ20101051981
公開日2012年5月16日 申請日期2010年10月19日 優(yōu)先權日2010年10月19日
發(fā)明者于龍川, 劉卓 申請人:北京大學