專利名稱：一種桑椹復合提取物的加工方法
一種桑椹復合提取物的加工方法技術領域：
本發(fā)明涉及一種天然產(chǎn)物有效成分的提取分離方法，確切地說是一種桑椹復合提 取物的加工方法。二、背景技術
桑椹為?？坡淙~喬木桑樹(Morus alba L.)的干燥果穗，又名桑實、烏椹、文武實、 黑椹、桑棗、桑椹子等。主要分布于北半球的溫帶地區(qū)并擴展至亞熱帶至熱帶山區(qū)，但除澳 洲和南極洲之外的各大洲均有分布，在中國大部分地區(qū)均產(chǎn)，主產(chǎn)四川南充、合川、涪陵，江 蘇南通、鎮(zhèn)江，浙江嘉興、吳興、桐鄉(xiāng)、余杭，山東臨朐、菏澤，安徽阜陽、蕪湖、蛘埠，遼寧彰 武、綏中、鳳城，河南商丘，許昌，山西太原等地。此外，新疆、云南、陜西、湖南、湖北等地亦 產(chǎn)。
在我國桑椹最早可見于《爾雅》，郭璞云辨，半也，葚與椹同。但作為藥用始載于唐 《新修本草》，列于木部中品，述于桑根白皮項下“桑椹味甘寒、無毒，單食主消渴”。除此以 外桑椹在許多中藥著作中都有記載，如《本草綱目》有“搗汁飲，解酒中毒；釀酒服，利水氣， 消腫”等，另外，桑椹的作用在《本草拾遺》、《滇南本草》、《本草求真》、《隨息居飲食譜》中也 有記載。中醫(yī)認為，桑椹性寒，味甘，功能補肝、益腎、熄風、滋液，主治肝腎虧虛、消渴、便秘、 目暗、耳鳴、關節(jié)不利?，F(xiàn)代醫(yī)學對桑椹進行藥理、藥效毒理測試的結果也表明，桑椹入胃能 補充胃液的缺乏，促進胃液的消化；入腸能促進腸液分泌，增進胃腸蠕動，因而有補益強壯 的功效。早在1993年衛(wèi)生部就已將桑椹列入“既是食品又是藥品”的名單之中了。傳統(tǒng)中 醫(yī)認為桑椹味甘性寒，具生津止渴、補肝益腎、滋陰補血、明目安神、利關節(jié)、祛風濕，解酒 等功效。現(xiàn)代醫(yī)學研究表明桑椹具有調整機體免疫功能，促進造血細胞生長、降糖、降脂、 降血壓、護肝等作用。在臨床上應用很廣，尤其是對老年病和延緩衰老有重要意義。
桑椹具有上述等功效，是因為其含有桑椹紅色素、黃酮類化合物、白藜蘆醇，以及 維生素、脂肪酸、氨基酸類和微量元素等有效成分；而桑椹紅色素、黃酮類化合物和白藜蘆 醇為主要功效成分；桑椹紅色素，既花色甙，為一類天然有色物質，屬多酚類化合物，溶于水 和乙醇，無毒，且具有很強的抗氧化和清除自由基的作用；黃酮類物質，主要是蘆丁和槲皮 素，其中蘆丁含量較高。桑椹中含有的烏發(fā)因子與活性成分黃酮類化合物有關，因此，桑椹 一直被認為具有烏發(fā)明目等功能。白藜蘆醇為植物次生代謝產(chǎn)物，是重要的植物抗毒素，具 有抑制癌細胞、降低血脂、防治心血管疾病等功能，其抗氧化、延緩衰老等作用也比較明顯， 被喻為繼紫杉醇之后的又一新的天然抗癌藥物。
考慮到桑椹紅色素、黃酮、白藜蘆醇具有上述特殊功效，有必要進行提取分離。而 國內對桑椹紅色素、黃酮和白藜蘆醇提取分離研究較多，大多研究方法為桑椹紅色素、桑 椹黃酮主要采用水、乙醇等溶劑進行提取，獲得浸膏，再采用大孔樹脂吸附分離(例如，張 燕忠，王忠華.桑果生理活性成分及其產(chǎn)品開發(fā)研究進展，《食品工業(yè)科技》，2009，30 (11) 314-318 ；劉樹興，楊兆艷，吳娟亭.樹脂法提取桑椹紅色素的研究.《食品科學》，2004， 25(6) :129-133;馬婧，韓偉，胡賢卿.二次正交旋轉組合設計優(yōu)化微波輔助提取桑椹總黃酮的研究.《安徽農(nóng)業(yè)科學》，2010，11 :5877-5878)；而桑葉中白藜蘆醇的提取分離主要采 用有機溶劑浸提、酶法、超臨界C02萃取，微波及超聲波提取等；純化技術有柱層析、高速逆 流色譜和薄層層析等(例如，張初署楊慶利潘麗娟禹山林.白藜蘆醇的提取及分離純化研 究進展，《食品工業(yè)科技》，2008 (8) =289-291)。
經(jīng)由國家知識產(chǎn)權局網(wǎng)站檢索，截至2010年9月30日，與桑椹活性物質提取分離 方法直接相關的授權發(fā)明專利或申請主要有
(1)ZL200710068355.4(《從桑椹中分離制備花色苷單體的方法》)本發(fā)明為一種 從桑椹中分離制備高純度花色苷單體的方法。采用酸化乙醇浸提桑椹中的花色苷；用陽離 子交換樹脂對桑椹乙醇提取物進行初步純化；以逆流色譜技術分離桑椹花色苷粗提物中的 花色苷，其溶劑系統(tǒng)由常溫常壓下處于液態(tài)的正丁醇、乙腈、甲基叔丁基醚(TBME)和三氟 乙酸(TFA)水溶液組成，TBME、乙腈和正丁醇的體積比為1 0. 5 1 1. 25 3. 5，TFA 水溶液的濃度為每升水溶液中含1 10毫升TFA。本發(fā)明使用高速逆流色譜儀(HSCCC)或 低速逆流色譜儀(SRCCC)為分離設備，有效降低了花色苷單體的制備成本。
O)ZL2005100M615. 9(《一種具降血壓作用的桑椹、桑椹汁、桑椹活性提取物及其 制備方法、用途》)本發(fā)明是一種具降壓作用的桑椹，屬食品、保健食品和醫(yī)藥技術領域，具 體為一種桑椹或從桑椹制備的桑椹汁和桑椹活性提取物及其制備方法和用途。
(3)CN101531825A(申請?zhí)?00910074162. 9，《桑椹紅色素提取的工藝》)本發(fā)明 公開了一種桑椹紅色素的提取工藝，包括以下步驟①前加工將桑椹粉碎；②萃取用重 量千分比為1. 5%。 5%。的檸檬酸水溶液在30 50°C，浸泡粉碎的桑椹30 180min，得提 取液；③提純提取液經(jīng)過濾、樹脂吸附、洗脫、濃縮，制得桑椹紅色素。本發(fā)明在較低溫度 下、采用低檸檬酸濃度進行萃取，整個生產(chǎn)過程連續(xù)密閉、環(huán)保，檸檬酸液可以重復使用；并 且采用國內最先進的納濾膜濃縮、真空離心薄膜蒸發(fā)器二次濃縮，制得的桑椹紅色素色價 達150，純度達99. 96%，提取率達89%。
(4)CN101444557A(申請?zhí)?00810306634. 4，《采用超臨界二氧化碳法萃取藥桑椹 總黃酮生產(chǎn)方法》)本發(fā)明涉及藥桑椹的提取方法技術領域，是一種采用超臨界二氧化碳 法萃取藥桑椹總黃酮生產(chǎn)方法，按下述方法進行將干燥的藥桑椹用密閉性好的粉碎機粉 碎為10目至30目的顆粒后裝入萃取料罐中，將萃取料罐置于萃取釜中，密封萃取釜，通入 處于超臨界狀態(tài)的二氧化碳進行萃取，獲得淺黃色固體萃取物。本發(fā)明便于操作及重復，由 于沒有使用任何有機溶劑，僅使用了二氧化碳和無水乙醇。三、發(fā)明內容
本發(fā)明旨在為開發(fā)中藥新藥或保健食品提供高質量的原料-桑椹復合提取物，所 要解決的技術問題是桑椹紅色素、黃酮和白藜蘆醇的同步高效提取與分離。
本發(fā)明的技術方案是以桑椹為原料，包括粉碎、提取、濃縮、萃取、分離和純化，與 現(xiàn)有技術的區(qū)別是粉碎過80-100目篩的桑椹用pH3-5的酸水于50-70°C下攪拌提取至少兩 次，過濾分離，合并提取液，每次提取時向提取釜(罐)中充入釜容積5-10%的CO2氣體進 行保護；將提取液濃縮至原體積的1/2-1/3后用正丁醇萃取至少兩次，分離、合并得到萃取 液；萃取液脫溶后得到淺黃色浸膏粗提物；粗提物用大孔吸附樹脂層析柱分離純化，柱填 料為羅姆哈斯XAD-8樹脂(美國FDA認可的類型)與AB-8大孔樹脂按8 2-6 4的質量比混合的復合填料，依次用去離子水、乙酸乙酯和75-95% (體積百分濃度，下同)乙醇洗 脫，收集乙酸乙酯和75-95%乙醇洗脫液，混合后脫溶、干燥可獲得含量15-30%的桑椹紅 色素、含量25-45 %的桑椹黃酮和含量10-20 %的白藜蘆醇復合提取物。
具體的技術方案是
將桑椹粉碎后，過80-100目篩子；在pH3-5的酸水中進行動態(tài)提取，水溫控制在 50-70°C，并充入5-10% (按照提取罐容積計量)的CO2進行保護；將2次以上的提取濾 液真空濃縮，至原體積的1/2-1/3后，添加正丁醇進行萃取2次；萃取液濃縮，上層析柱，分 離填料為大孔樹脂羅姆哈斯XAD-8與AB-8的復合填料，用去離子水洗脫，再用乙酸乙酯和 75-95%乙醇水洗脫，分別接受乙酸乙酯和乙醇水洗脫流份；兩種流份混合、脫溶、干燥，可 制得含量15-30%桑椹紅色素、25-45%桑椹黃酮、10-20%白藜蘆醇的復合提取物。
具體操作步驟是
(1)首先將桑椹通過粉碎機進行破碎，過80-100目篩子，投入10-20倍體積的 50-70°C、pH為3-5的酸水中，并充入5-10% (以提取罐容積計)的CO2進行保護，動態(tài)攪 拌，轉速60r/min，時間IOOmin左右，提取至少2次；
(2)將提取液合并，真空濃縮至原體積的1/2-1/3，再添加4-6倍體積的正丁醇進 行萃取，萃取至少2次，合并萃取液，濃縮成浸膏，再用3倍體積離子水溶解，用于上柱；
(3)進行大孔樹脂吸附分離，分離介質選自大孔樹脂羅姆哈斯XAD-8與AB-8的復 合填料，流動相選擇水、乙酸乙酯、乙醇水，分別進行洗脫，收集乙酸乙酯、75-95%乙醇洗脫 液；
(4)將收集的乙酸乙酯流份、乙醇水流份混合，真空濃縮、干燥，可制得含量 15-30 %桑椹紅色素、25-45 %桑椹黃酮、10-20 %白藜蘆醇的復合提取物。
備注桑椹紅色素(以花色苷計)含量測定紫外-分光光度法，具體見中國藥典 2005年版一部附錄VA;桑椹黃酮(以蘆丁計)含量測定高效液相色譜法，具體見中國藥典 2005年版一部附錄VI ；白藜蘆醇含量測定高效液相色譜法，具體見中國藥典2005年版一部 附錄VI Do
本發(fā)明為相關企業(yè)提供一種集酸水動態(tài)逆流提取-溶劑萃取-一柱層析組合填料 分離純化的高效提取分離方法，制備含量15-30 %桑椹紅色素、25-45 %桑椹黃酮、10-20 % 白藜蘆醇的復合提取物，收率50%以上。微量惰性(X)2保護的酸熱水可實現(xiàn)桑椹紅色素、黃 酮、白藜蘆醇的同步高效提?。涣鲃酉嗖捎盟?、乙酸乙酯、乙醇等溶劑，綠色、環(huán)保。四具體實施方式
實施例1
1、稱取IOkg桑椹，通過粉碎機進行破碎，過80目篩子，投入16倍體積的60°C、pH =4的水中，并充入7%的(X)2進行保護，動態(tài)攪拌，轉速60r/min，時間IOOmin左右，提取2 次；
2、將提取液合并，真空濃縮至原體積的1/2左右，再添加5倍體積的正丁醇酯進行 萃取，萃取2次，合并萃取液，真空濃縮至干，再用3倍體積去離子水溶解，用于上柱；
3、柱層析分離，分離介質為大孔樹脂羅姆哈斯XAD-8與AB-8的復合填料，兩者按 8 2質量比組合；先用3倍柱體積去離子水洗脫，再用乙酸乙酯洗脫，得洗脫液A ；再用85%乙醇水洗脫，得洗脫液B;
4、將收集到的A、B洗脫液混合，真空濃縮、干燥，可制得含量15-30%桑椹紅色素、 25-45%桑椹黃酮、10-20%白藜蘆醇的復合提取物；三種活性物質的收率都在50%以上。
實施例2
1、稱取IOkg桑椹，通過粉碎機進行破碎，過100目篩子，投入20倍體積的70°C、pH =4. 5的水中，并充入10%的(X)2進行保護，動態(tài)攪拌，轉速60r/min，時間IOOmin左右，提 取2次；
2、將提取液合并，真空濃縮至原體積的1/3左右，再添加6倍體積的正丁醇酯進行 萃取，萃取2次，合并萃取液，真空濃縮至干，再用3倍體積去離子水溶解，用于上柱；
3、柱層析分離，分離介質為大孔樹脂羅姆哈斯XAD-8與AB-8的復合填料，兩者按 7 3質量比組合；先用3倍柱體積去離子水洗脫，再用乙酸乙酯洗脫，得洗脫液A ；再用 90%乙醇水洗脫，得洗脫液B;
4、將收集到的A、B洗脫液混合，真空濃縮、干燥，可制得15-30%桑椹紅色素、 25-45%桑椹黃酮、10-20%白藜蘆醇的復合提取物；三種活性物質的收率都在50%以上。
權利要求
1. 一種桑椹復合提取物的加工方法，以桑椹為起始原料，包括粉碎、提取、濃縮、萃取、 分離和純化，其特征在于所述的提取是將粉碎過80-100目篩的桑椹用PH3-5的酸水于 50-70°C下攪拌提取至少兩次，得到提取液，每次提取時向提取罐中充入罐容積5-10%的 CO2氣體；提取液濃縮至原體積的1/2-1/3后用正丁醇萃取至少兩次，得到萃取液；萃取 液脫溶后得到浸膏狀粗提物，粗提物用大孔吸附樹脂層析柱分離純化，柱填料為羅姆哈斯 XAD-8樹脂與AB-8大孔樹脂按8 2-6 4的質量比混合的復合填料，依次用去離子水、乙 酸乙酯和75-95%乙醇洗脫，收集乙酸乙酯和75-95%乙醇洗脫液，洗脫液混合，真空濃縮、 干燥，得到含量15-30%的桑椹紅色素、25-45%的桑椹黃酮和10-20%的白藜蘆醇復合提 取物。
全文摘要
一種桑椹紅色素、桑椹黃酮和白藜蘆醇復合提取物的加工方法，是一種集惰性CO2保護的酸水動態(tài)高效提取-溶劑萃取-一柱組合填料層析分離的加工方法。用該方法對桑椹進行深加工，制備15-30％桑椹紅色素、25-45％桑椹黃酮、10-20％白藜蘆醇的多種規(guī)格復合提取物，收率50％以上。該加工工藝方法高效、簡便、成本低、易于工業(yè)化生產(chǎn)應用。
文檔編號A61P3/06GK102028757SQ20101052405
公開日2011年4月27日 申請日期2010年10月27日 優(yōu)先權日2010年10月27日
發(fā)明者曹勇, 朱月信, 李文軍, 楊春杰, 楊景生, 馬凱 申請人:安徽濟人藥業(yè)有限公司