專利名稱：天花粉皂苷及其在制備治療缺血性腦血管疾病藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種天花粉的提取方法及其有關(guān)用途，特別是涉及一種天花粉皂苷及 其在制備治療缺血性腦血管疾病藥物中的用途。
背景技術(shù)：
腦血管病是導(dǎo)致人類(lèi)死亡的三大疾病之一，在全球范圍內(nèi)，每年死亡約460萬(wàn)人， 同時(shí)其又存在發(fā)病率高和致殘率高的特點(diǎn)。腦血管疾病分為缺血性和出血性腦血管病。前 者臨床較多見(jiàn)，約占全部腦血管病人的70 80%。由于腦動(dòng)脈硬化等原因，使腦動(dòng)脈管腔 狹窄，血流減少或完全阻塞，腦部血液循環(huán)障礙，腦組織受損而發(fā)生的一系列癥狀。后者多 由長(zhǎng)期高血壓病、腦血管畸形、顱內(nèi)動(dòng)脈瘤等因素所致，約占腦血管病的20 30%左右。由 于顱內(nèi)出血后常壓迫腦組織，血液循環(huán)受阻，病人表現(xiàn)顱內(nèi)壓增高、意識(shí)障礙等癥狀。目前 在治療缺血性腦血管疾病時(shí)主要針對(duì)抗凝治療、溶栓治療、腦保護(hù)劑、降纖治療、鈣離子拮 抗劑治療、抗血小板聚集治療、清除自由基治療等方法。但這些藥物的治療靶點(diǎn)單一，盡管 有一定療效，但迄今為止還沒(méi)有一種特效藥。由于腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制復(fù)雜，涉及到 多系統(tǒng)多環(huán)節(jié)的異常。而中藥含多種有效成分，因此在治療時(shí)可同時(shí)在多層次、多靶點(diǎn)、多 環(huán)節(jié)發(fā)揮作用，且毒副作用小。目前，臨床上用于治療腦血管疾病的常用中藥有銀杏葉提取 物、丹參提取物、三七皂苷等。天花粉為葫蘆科植物栝樓的干燥根，味甘、微苦，味微寒，具有清熱瀉火、生津 止渴、消腫排膿之功效。主要來(lái)自栝樓ijrichosan thes kirilowimax)和雙邊栝樓 Trichosanthes rosthornii Harm)，且栝樓和雙邊栝樓皆為2010版《中國(guó)藥典》收載。但不 局限于南方括樓da miaoshanensis C. Y. Cheng et Yueh )、大子括樓(71· trunca ta C. B. Clarke)、王瓜(7 應(yīng) eroit/然(Ser. ) Maxim)、蛇瓜(Τ. anguinaL.)、日本栝樓(7 kirilowii Maxim Var japonica (Miq.) kitam)、大茍栝樓(71· tricuspidata Lour.)、異株 栝樓(7 /ioica Roxb.)、鳳瓜(7 integrifolia ( Roxb.) kur)等。現(xiàn)代研究表明栝樓 含有多種黃酮類(lèi)、三萜類(lèi)和留醇等化合物，具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、提高耐缺氧能力等作用，而 皂苷具有抗氧化、抗血小板聚集等多種作用，因而在防治心腦血管疾病中發(fā)揮重要藥理作 用。經(jīng)對(duì)天花粉的系統(tǒng)研究發(fā)現(xiàn)，天花粉皂苷為天花粉的有效部位，但至今未見(jiàn)天花粉皂苷 在制備用于治療腦缺血、腦缺血/再灌注、腦梗塞等腦血管疾病藥物中應(yīng)用的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種天花粉皂苷及其在制備治療缺血性腦血管 疾病藥物中的用途。本發(fā)明對(duì)原材料天花粉通過(guò)提取，得到天花粉皂苷有效部分，經(jīng)動(dòng)物實(shí) 驗(yàn)結(jié)果表明，通過(guò)本發(fā)明得到的天花粉皂苷提取物具有顯著延長(zhǎng)小鼠斷頭后呼吸時(shí)間和呼 吸次數(shù)、降低腦水腫、增加腦缺血?jiǎng)游锏纳媛屎脱娱L(zhǎng)生存時(shí)間、減少腦梗塞面積、抑制體 內(nèi)血栓的形成等作用。因而，本發(fā)明得到的天花粉皂苷提取物對(duì)缺血性腦血管疾病具有較好的治療作用。本發(fā)明的技術(shù)方案是
本發(fā)明提供一種天花粉皂苷，所述天花粉皂苷是通過(guò)以下方法提取得到的
a、將原料天花粉進(jìn)行粉碎，粉碎后過(guò)20 60目篩，在粉碎后的天花粉中加入水，水的 加入量為粉碎后天花粉的10 30倍，加入水后采用超聲波提取器進(jìn)行超聲提取，提取時(shí)間 為5 30min，提取次數(shù)為2 4次，將提取液進(jìn)行合并；
b、將步驟a合并得到的提取液采用萃取儀進(jìn)行萃取，萃取后得到上清液，將所得上清 液先通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行分離純化，接著采用硅膠柱層析法進(jìn)一步純化，純化后將其樣 品先采用5 10倍柱體積的水洗脫至澄清，再用4 8倍柱體積的乙醇洗脫，收集乙醇洗 脫液；
C、將步驟b收集的乙醇洗脫液，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行干燥，干燥后得到膏狀天花粉皂 苷，最后將膏狀天花粉皂苷進(jìn)行真空干燥、粉碎，得到粉狀天花粉皂苷。根據(jù)上面所述的天花粉皂苷，步驟a中所述超聲波提取器的頻率為20 40 kHz, 功率為300 800W。根據(jù)上面所述的天花粉皂苷，步驟b中所述采用萃取儀進(jìn)行萃取時(shí)，采用的萃取 溶劑為石油醚、正丁醇、氯仿和乙酸乙酯中的任一種；步驟b中所述采用萃取儀進(jìn)行萃取 時(shí)，采用的萃取溶劑與合并得到的提取液二者之間加入量的體積比例為1 50 :1。根據(jù)上面所述的天花粉皂苷，步驟b中所述萃取儀采用Ninson超聲波萃取儀。根據(jù)上面所述的天花粉皂苷，步驟b中所述大孔吸附樹(shù)脂的型號(hào)為D101，D101B, D201,D301, D3520, AB-8，DM130，X_5， XDA-I, XDA-1B， XDA-7，H_20， Η-30， Η_40，Η_60， HPD-100, HPD-300, HPD-600, NK-2，NKA-2, NK-9 和 WLD 中的任一種；所述大孔吸附樹(shù)脂 與上清液二者之間的體積比例為4 10 :1 ；
所述采用硅膠柱層析法進(jìn)一步純化時(shí)，其硅膠目數(shù)為60 300目；所述采用硅膠柱層 析法進(jìn)一步純化時(shí)采用“氯仿_甲醇_水”三者的混合液作為溶劑進(jìn)行洗脫，洗脫流速為 8 12 ml/min ；所述“氯仿-甲醇-水”三者之間的混合體積比例為50 85 14 40 1 10。根據(jù)上面所述的天花粉皂苷，步驟b中所述采用5 10倍柱體積的水洗脫時(shí)，其 洗脫流速為0. 3 5ml/min ；步驟b中所述用4 8倍柱體積的乙醇洗脫時(shí)，其洗脫流速為 0. 3 5ml/min，乙醇的體積濃度為20 95%。根據(jù)上面所述的天花粉皂苷，步驟c中所述采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行干燥時(shí)，壓力為 0. 01 IMpa，干燥溫度為40 80°C，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的旋轉(zhuǎn)速度為1 120rmp，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥 時(shí)間為2 5小時(shí)；
步驟c中所述將膏狀天花粉皂苷進(jìn)行真空干燥時(shí)，真空度為0. 07 0. 09Mpa,干燥溫度 為50 80°C，干燥時(shí)間為2 4小時(shí)。一種上面所述的天花粉皂苷在制備治療缺血性腦血管疾病藥物中的用途。根據(jù)上面所述的天花粉皂苷在制備治療缺血性腦血管疾病藥物中的用途，所述天 花粉皂苷為天花粉皂苷或天花粉皂苷單體。根據(jù)上面所述的天花粉皂苷在制備治療缺血性腦血管疾病藥物中的用途，所述天 花粉皂苷為石油醚提取物、正丁醇提取物、氯仿提取物或乙酸乙酯提取物。
本發(fā)明的積極有益效果
1、通過(guò)本發(fā)明的技術(shù)方案可從天花粉中提取到天花粉皂苷，并且所提取到的天花粉皂 苷，其純度大于90%。2、本發(fā)明經(jīng)過(guò)大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明從天花粉提取到的天花 粉皂苷具有顯著延長(zhǎng)小鼠斷頭后呼吸時(shí)間和增加呼吸次數(shù)、降低腦含水量、增加腦缺血?jiǎng)?物的生存率和延長(zhǎng)生存時(shí)間、減少腦梗塞面積、改變凝血纖溶系統(tǒng)、保護(hù)腦神經(jīng)元、抑制體 內(nèi)血栓的形成等作用。因而，本發(fā)明從天花粉中提取到的天花粉皂苷對(duì)腦缺血、腦血栓、腦 梗死等缺血性腦血管疾病具有很好的治療作用，對(duì)缺血性腦血管疾病發(fā)生后的神經(jīng)元具有 很好的保護(hù)作用；并且天花粉皂苷毒性低、副作用小，使用安全、質(zhì)量可控(詳見(jiàn)具體實(shí)施方 式中動(dòng)物實(shí)驗(yàn)實(shí)施例)。具體實(shí)施例方式
下面以實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。天花粉皂苷實(shí)施例 實(shí)施例1
本發(fā)明天花粉皂苷，是通過(guò)以下方法提取得到的，其詳細(xì)步驟為
a、將原料天花粉進(jìn)行粉碎，粉碎后過(guò)20 60目篩，在粉碎后的天花粉中加入水，水的 加入量為粉碎后天花粉的20倍，加入水后采用超聲波提取器(所述超聲波提取器的頻率為 30 kHz，功率為400 450W)進(jìn)行超聲提取，提取時(shí)間為15 20min，提取次數(shù)為3次，將提 取液進(jìn)行合并；
b、將步驟a合并得到的提取液采用萃取儀(采用Mnson超聲波萃取儀)進(jìn)行萃取，采 用的萃取溶劑為石油醚，石油醚萃取溶劑與合并得到的提取液二者之間加入量的體積比例 為20 :1，萃取后得到上清液，將所得上清液先通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂(大孔吸附樹(shù)脂的型號(hào)為 D101，大孔吸附樹(shù)脂與上清液二者之間的體積比例為6 :1)進(jìn)行分離純化，接著采用硅膠柱 層析法進(jìn)一步純化(采用硅膠柱層析法進(jìn)行純化時(shí)硅膠目數(shù)為60 300目；采用硅膠柱層 析法進(jìn)行純化時(shí)采用“氯仿-甲醇-水”三者的混合液作為溶劑進(jìn)行洗脫，洗脫流速為IOml/ min ；所述“氯仿-甲醇-水”三者之間的混合體積比例為83 16 1 )，純化后將其樣品先采 用8倍柱體積的水洗脫至澄清(采用8倍柱體積的水洗脫時(shí)，其洗脫流速為1 2ml/min)， 再用6倍柱體積的乙醇洗脫(用6倍柱體積的乙醇洗脫時(shí)，其洗脫流速為2 3ml/min，乙醇 的體積濃度為50 60%)，收集乙醇洗脫液；
c、將步驟b收集的乙醇洗脫液，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行干燥(壓力為0. 6Mpa，干燥溫度 為50°C，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的旋轉(zhuǎn)速度為60rmp，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥時(shí)間為3小時(shí))，干燥后得到膏狀天 花粉皂苷，最后將膏狀天花粉皂苷進(jìn)行真空干燥(真空度為0. 085Mpa，干燥溫度為55°C，干 燥時(shí)間為3小時(shí))、粉碎，得到粉狀天花粉皂苷，其純度大于90%。實(shí)施例2 與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于
步驟a中水的加入量為粉碎后天花粉的10倍，加入水后采用超聲波提取器(所述超聲 波提取器的頻率為20 kHz，功率為300 350W)進(jìn)行超聲提取，提取時(shí)間為5 lOmin，提 取次數(shù)為2次，將提取液進(jìn)行合并；
步驟b中采用的萃取溶劑為正丁醇，正丁醇萃取溶劑與合并得到的提取液二者之間 加入量的體積比例為30 :1，萃取后得到上清液，將所得上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂(大孔吸附樹(shù)脂的型號(hào)為D301，大孔吸附樹(shù)脂與上清液二者之間的體積比例為8 :1)進(jìn)行分離純化， 接著采用硅膠柱層析法進(jìn)一步純化(采用硅膠柱層析法進(jìn)行純化時(shí)硅膠目數(shù)為60 300 目；采用硅膠柱層析法進(jìn)行純化時(shí)采用“氯仿-甲醇-水”三者的混合液作為溶劑進(jìn)行洗脫， 洗脫流速為Sml/min ；所述“氯仿-甲醇-水”三者之間的混合體積比例為76 22 :2)，純化 后將其樣品先采用5倍柱體積的水洗脫至澄清(采用5倍柱體積的水洗脫時(shí)，其洗脫流速為 0. 5 lml/min)，再用4倍柱體積的乙醇洗脫(用4倍柱體積的乙醇洗脫時(shí)，其洗脫流速為 0. 5 lml/min，乙醇的體積濃度為20 30%)，收集乙醇洗脫液；
步驟c中采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行干燥(壓力為0. 5Mpa，干燥溫度為60°C，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的 旋轉(zhuǎn)速度為65rmp，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥時(shí)間為3小時(shí))，最后將膏狀天花粉皂苷進(jìn)行真空干燥(真 空度為0. 07Mpa，干燥溫度為80°C，干燥時(shí)間為3小時(shí))、粉碎，得到粉狀天花粉皂苷，其純度 大于90%。實(shí)施例3 與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于
步驟a中水的加入量為粉碎后天花粉的30倍，加入水后采用超聲波提取器(所述超聲 波提取器的頻率為40 kHz，功率為750 800W)進(jìn)行超聲提取，提取時(shí)間為25 30min，提 取次數(shù)為4次，將提取液進(jìn)行合并；
步驟b中采用的萃取溶劑為氯仿，氯仿萃取溶劑與合并得到的提取液二者之間加入 量的體積比例為40 :1，萃取后得到上清液，將所得上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂(大孔吸附樹(shù) 脂的型號(hào)為AB-8，大孔吸附樹(shù)脂與上清液二者之間的體積比例為4 :1)進(jìn)行分離純化，接著 采用硅膠柱層析法進(jìn)一步純化(采用硅膠柱層析法進(jìn)行純化時(shí)硅膠目數(shù)為60 300目；采 用硅膠柱層析法進(jìn)行純化時(shí)采用“氯仿_甲醇_水”三者的混合液作為溶劑進(jìn)行洗脫，洗脫 流速為12ml/min ；所述“氯仿-甲醇-水”三者之間的混合體積比例為68. 5 27. 5 :4)，純化 后將其樣品先采用10倍柱體積的水洗脫至澄清(采用10倍柱體積的水洗脫時(shí)，其洗脫流速 為4 5ml/min)，再用8倍柱體積的乙醇洗脫(用8倍柱體積的乙醇洗脫時(shí)，其洗脫流速為 4 5ml/min，乙醇的體積濃度為30 40%)，收集乙醇洗脫液；
步驟c中采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行干燥(壓力為IMpa，干燥溫度為40°C，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的旋 轉(zhuǎn)速度為40rmp，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥時(shí)間為5小時(shí))，最后將膏狀天花粉皂苷進(jìn)行真空干燥(真空 度為0. 08Mpa，干燥溫度為60°C，干燥時(shí)間為4小時(shí))、粉碎，得到粉狀天花粉皂苷，其純度大 于 90%ο實(shí)施例4 與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于
步驟a中水的加入量為粉碎后天花粉的15倍，加入水后采用超聲波提取器(所述超聲 波提取器的頻率為25 kHz，功率為400 450W)進(jìn)行超聲提取，提取時(shí)間為10 15min，提 取次數(shù)為3次，將提取液進(jìn)行合并；
步驟b中采用的萃取溶劑為乙酸乙酯，乙酸乙酯萃取溶劑與合并得到的提取液二者 之間加入量的體積比例為10 :1，萃取后得到上清液，將所得上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂(大 孔吸附樹(shù)脂的型號(hào)為XDA-1，大孔吸附樹(shù)脂與上清液二者之間的體積比例為5 :1)進(jìn)行分離 純化，接著采用硅膠柱層析法進(jìn)一步純化(采用硅膠柱層析法進(jìn)行純化時(shí)硅膠目數(shù)為60 300目；采用硅膠柱層析法進(jìn)行純化時(shí)采用“氯仿-甲醇-水”三者的混合液作為溶劑進(jìn)行 洗脫，洗脫流速為llml/min ；所述“氯仿-甲醇-水”三者之間的混合體積比例為65 30 5)，純化后將其樣品先采用6倍柱體積的水洗脫至澄清(采用6倍柱體積的水洗脫時(shí)，其洗脫流速為1 2ml/min)，再用5倍柱體積的乙醇洗脫(用5倍柱體積的乙醇洗脫時(shí)，其洗脫 流速為1 2ml/min，乙醇的體積濃度為70 95%)，收集乙醇洗脫液；
步驟c中采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行干燥(壓力為0. IMpa，干燥溫度為80°C，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的 旋轉(zhuǎn)速度為lOOrmp，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥時(shí)間為2小時(shí))，最后將膏狀天花粉皂苷進(jìn)行真空干燥 (真空度為0. 09Mpa，干燥溫度為50°C，干燥時(shí)間為2小時(shí))、粉碎，得到粉狀天花粉皂苷，其 純度大于90%。實(shí)施例5 與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于
步驟a中水的加入量為粉碎后天花粉的25倍，加入水后采用超聲波提取器(所述超聲 波提取器的頻率為35 kHz，功率為700 750W)進(jìn)行超聲提取，提取時(shí)間為20 25min，提 取次數(shù)為4次，將提取液進(jìn)行合并；
步驟b中采用的萃取溶劑為正丁醇，正丁醇萃取溶劑與合并得到的提取液二者之間 加入量的體積比例為5 :1，萃取后得到上清液，將所得上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂(大孔吸附 樹(shù)脂的型號(hào)為H-30，大孔吸附樹(shù)脂與上清液二者之間的體積比例為6 :1)進(jìn)行分離純化，接 著采用硅膠柱層析法進(jìn)一步純化(采用硅膠柱層析法進(jìn)行純化時(shí)硅膠目數(shù)為60 300目； 采用硅膠柱層析法進(jìn)行純化時(shí)采用“氯仿_甲醇_水”三者的混合液作為溶劑進(jìn)行洗脫，洗 脫流速為9ml/min ；所述“氯仿-甲醇-水”三者之間的混合體積比例為61 33 :6)，純化后 將其樣品先采用7倍柱體積的水洗脫至澄清(采用7倍柱體積的水洗脫時(shí)，其洗脫流速2 3ml/min)，再用6倍柱體積的乙醇洗脫(用6倍柱體積的乙醇洗脫時(shí)，其洗脫流速為2 3ml/min,乙醇的體積濃度為60 70%)，收集乙醇洗脫液；
步驟c中采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行干燥(壓力為0. 8Mpa，干燥溫度為50°C，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的 旋轉(zhuǎn)速度為120rmp，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥時(shí)間為3小時(shí))，最后將膏狀天花粉皂苷進(jìn)行真空干燥 (真空度為0. 09Mpa，干燥溫度為70°C，干燥時(shí)間為3小時(shí))、粉碎，得到粉狀天花粉皂苷，其 純度大于90%。實(shí)施例6 與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于
步驟a中水的加入量為粉碎后天花粉的26倍，加入水后采用超聲波提取器(所述超聲 波提取器的頻率為38 kHz，功率為600 650W)進(jìn)行超聲提取，提取時(shí)間為25 30min，提 取次數(shù)為4次，將提取液進(jìn)行合并；
步驟b中采用的萃取溶劑為氯仿，氯仿萃取溶劑與合并得到的提取液二者之間加入 量的體積比例為50 :1，萃取后得到上清液，將所得上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂(大孔吸附樹(shù) 脂的型號(hào)為HPD-300，大孔吸附樹(shù)脂與上清液二者之間的體積比例為7 :1)進(jìn)行分離純化， 接著采用硅膠柱層析法進(jìn)一步純化(采用硅膠柱層析法進(jìn)行純化時(shí)硅膠目數(shù)為60 300 目；采用硅膠柱層析法進(jìn)行純化時(shí)采用“氯仿-甲醇-水”三者的混合液作為溶劑進(jìn)行洗脫， 洗脫流速為lOml/min ；所述“氯仿-甲醇-水”三者之間的混合體積比例為54 38. 5 7. 5)， 純化后將其樣品先采用9倍柱體積的水洗脫至澄清(采用9倍柱體積的水洗脫時(shí)，其洗脫流 速3 4ml/min)，再用7倍柱體積的乙醇洗脫(用7倍柱體積的乙醇洗脫時(shí)，其洗脫流速為 3 4ml/min，乙醇的體積濃度為70 80%)，收集乙醇洗脫液；
步驟c中采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行干燥(壓力為0. 05Mpa，干燥溫度為80°C，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 的旋轉(zhuǎn)速度為120rmp，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥時(shí)間為5小時(shí))，最后將膏狀天花粉皂苷進(jìn)行真空干燥 (真空度為0. 08Mpa，干燥溫度為70°C，干燥時(shí)間為3小時(shí))、粉碎，得到粉狀天花粉皂苷，其純度大于90%。實(shí)施例7 與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于
步驟a中水的加入量為粉碎后天花粉的18倍，加入水后采用超聲波提取器(所述超聲 波提取器的頻率為28 kHz，功率為500 550W)進(jìn)行超聲提取，提取時(shí)間為20 25min，提 取次數(shù)為3次，將提取液進(jìn)行合并；
步驟b中采用的萃取溶劑為氯仿，氯仿萃取溶劑與合并得到的提取液二者之間加入 量的體積比例為25 :1，萃取后得到上清液，將所得上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂(大孔吸附樹(shù) 脂的型號(hào)為NK-9，大孔吸附樹(shù)脂與上清液二者之間的體積比例為6 :1)進(jìn)行分離純化，接著 采用硅膠柱層析法進(jìn)一步純化，純化后將其樣品先采用8倍柱體積的水洗脫至澄清(采用8 倍柱體積的水洗脫時(shí)，其洗脫流速2 3ml/min)，再用6倍柱體積的乙醇洗脫(用6倍柱體 積的乙醇洗脫時(shí)，其洗脫流速為3 4ml/min，乙醇的體積濃度為80 95%)，收集乙醇洗脫 液；
步驟c中采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行干燥(壓力為0. 3Mpa，干燥溫度為70°C，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的 旋轉(zhuǎn)速度為80rmp，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥時(shí)間為4小時(shí))，最后將膏狀天花粉皂苷進(jìn)行真空干燥(真 空度為0. 08Mpa，干燥溫度為70°C，干燥時(shí)間為3小時(shí))、粉碎，得到粉狀天花粉皂苷，其純度 大于90%。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)實(shí)施例
實(shí)施例1 天花粉皂苷對(duì)小鼠斷頭后呼吸時(shí)間和呼吸次數(shù)的影響
(1)實(shí)驗(yàn)方法選體重20士2g的雄性小鼠45只，隨機(jī)分為3組(η= 15)。對(duì)藥物組 灌服本發(fā)明提取的天花粉皂苷，劑量為40mg/kg，陽(yáng)性對(duì)照組灌服尼莫地平22. 5 mg/kg,空 白對(duì)照組灌服等體積的蒸餾水，每天給藥1次，連續(xù)給藥3天。于末次給藥Ih后斷頭(耳后 2mm處)觀察小鼠自斷頭開(kāi)始到喘息停止的時(shí)間和張嘴次數(shù)。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示
權(quán)利要求
一種天花粉皂苷，其特征在于，所述天花粉皂苷是通過(guò)以下方法提取得到的a、將原料天花粉進(jìn)行粉碎，粉碎后過(guò)20～60目篩，在粉碎后的天花粉中加入水，水的加入量為粉碎后天花粉的10～30倍，加入水后采用超聲波提取器進(jìn)行超聲提取，提取時(shí)間為5～30min，提取次數(shù)為2～4次，將提取液進(jìn)行合并；b、將步驟a合并得到的提取液采用萃取儀進(jìn)行萃取，萃取后得到上清液，將所得上清液先通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行分離純化，接著采用硅膠柱層析法進(jìn)一步純化，純化后將其樣品先采用5～10倍柱體積的水洗脫至澄清，再用4～8倍柱體積的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；c、將步驟b收集的乙醇洗脫液，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行干燥，干燥后得到膏狀天花粉皂苷，最后將膏狀天花粉皂苷進(jìn)行真空干燥、粉碎，得到粉狀天花粉皂苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的天花粉皂苷，其特征在于步驟a中所述超聲波提取器的頻 率為20 40 kHz，功率為300 800W。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的天花粉皂苷，其特征在于步驟b中所述采用萃取儀進(jìn)行萃 取時(shí)，采用的萃取溶劑為石油醚、正丁醇、氯仿和乙酸乙酯中的任一種；步驟b中所述采用 萃取儀進(jìn)行萃取時(shí)，采用的萃取溶劑與合并得到的提取液二者之間加入量的體積比例為 1 50 :1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的天花粉皂苷，其特征在于步驟b中所述萃取儀采用Mnson 超聲波萃取儀。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的天花粉皂苷，其特征在于步驟b中所述大孔吸附樹(shù)脂的型 號(hào)為 D101，D101B，D201, D301, D3520, AB-8，DM130，X_5，XDA-I, XDA-1B，XDA-7，H-20， H-30, H-40, H-60, HPD-100, HPD-300, HPD-600，NK-2，NKA-2，NK-9 和 WLD 中的任一種； 所述大孔吸附樹(shù)脂與上清液二者之間的體積比例為4 10 :1 ；所述采用硅膠柱層析法進(jìn)一步純化時(shí)，其硅膠目數(shù)為60 300目；所述采用硅膠柱層 析法進(jìn)一步純化時(shí)采用“氯仿_甲醇-水”三者的混合液作為溶劑進(jìn)行洗脫，洗脫流速為 8 12 ml/min ；所述“氯仿-甲醇-水”三者之間的混合體積比例為50 85 14 40 1 10。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的天花粉皂苷，其特征在于步驟b中所述采用5 10倍柱體 積的水洗脫時(shí)，其洗脫流速為0. 3 5ml/min ；步驟b中所述用4 8倍柱體積的乙醇洗脫 時(shí)，其洗脫流速為0. 3 5ml/min，乙醇的體積濃度為20 95%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的天花粉皂苷，其特征在于步驟c中所述采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 進(jìn)行干燥時(shí)，壓力為0. 01 IMpa，干燥溫度為40 80°C，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的旋轉(zhuǎn)速度為1 120rmp，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥時(shí)間為2 5小時(shí)；步驟c中所述將膏狀天花粉皂苷進(jìn)行真空干燥時(shí)，真空度為0. 07 0. 09Mpa,干燥溫度 為50 80°C，干燥時(shí)間為2 4小時(shí)。
8.—種權(quán)利要求1所述的天花粉皂苷在制備治療缺血性腦血管疾病藥物中的用途。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的天花粉皂苷在制備治療缺血性腦血管疾病藥物中的用途，其 特征在于所述天花粉皂苷為天花粉皂苷或天花粉皂苷單體。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的天花粉皂苷在制備治療缺血性腦血管疾病藥物中的用途，其 特征在于所述天花粉皂苷為石油醚提取物、正丁醇提取物、氯仿提取物或乙酸乙酯提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種天花粉皂苷及其在制備治療缺血性腦血管疾病藥物中的用途。本發(fā)明天花粉皂苷的提取方法先將原料天花粉粉碎，粉碎后加入水進(jìn)行超聲提取，提取后將其所得提取液進(jìn)行萃取，萃取后將其上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行分離純化，接著采用硅膠柱層析法進(jìn)一步純化，純化后先采用水洗脫至澄清，再用乙醇洗脫，最后將收集的乙醇洗脫液依次采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥、真空干燥，干燥后得到天花粉皂苷。本發(fā)明產(chǎn)品天花粉皂苷具有顯著延長(zhǎng)小鼠斷頭后呼吸時(shí)間和呼吸次數(shù)、降低腦水腫、增加腦缺血?jiǎng)游锏纳媛屎脱娱L(zhǎng)生存時(shí)間、減少腦梗塞面積、抑制體內(nèi)血栓的形成等作用，并且毒副作用小。因而，本發(fā)明得到的天花粉皂苷對(duì)缺血性腦血管疾病具有較好的治療作用。
文檔編號(hào)A61K36/428GK101983637SQ201010537400
公開(kāi)日2011年3月9日 申請(qǐng)日期2010年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月10日
發(fā)明者周巖, 孟麗, 宋琳琳, 陳穎, 黃立勇 申請(qǐng)人:河南科技學(xué)院