專利名稱：胡黃連總苷提取物在制備用于預(yù)防和治療脂肪肝藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及一種胡黃連總苷提取物的用途，具體涉及一種胡黃連總苷提取物在制備用于預(yù)防和/或治療脂肪肝藥物中的用途。
背景技術(shù)：
肝臟是脂肪代謝的重要器官。正常情況下，脂肪重量占肝臟總重量的3% 5%， 正常人每IOOg肝濕重含4 5g脂類，其中磷脂占50 %以上，甘油三酯占20 %，游離脂肪酸占20%，膽固醇約7%，其余為膽固醇脂等。當(dāng)肝細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積超過肝濕重的5%，或組織學(xué)上每單位面積可見1/3以上肝實質(zhì)脂肪化時即稱為脂肪肝。脂肪肝的發(fā)病機制至今尚未完全明確，一般認為肝細胞合成甘油三酯及分泌低密度脂蛋白之間的不平衡是形成脂肪肝的主要原因。脂肪肝是破壞肝功能的頭號殺手，至今仍為歐美等發(fā)達國家肝病致殘和死亡的首要病因，也已成為第一大肝病，患者多達約一億兩千萬，其作為一種世界性的常見病、多發(fā)病，嚴(yán)重危害人類的身心健康和生活質(zhì)量，并影響人們發(fā)揮工作效率。臨床根據(jù)發(fā)病的緩急程度將脂肪肝分為急性和慢性兩大類。急性脂肪肝見于藥物中毒、妊娠晚期、Reye綜合癥等，其臨床表現(xiàn)及預(yù)后類似于急性或亞急性重癥病毒性肝炎， 若治療及時一般不留后遺癥；慢性脂肪肝的形成一般與酒精和代謝綜合征(糖尿病、高脂血癥和肥胖等)有關(guān)，因此又可分為酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝。既往認為脂肪肝僅為良性病變，進展緩慢或不進展。但近年的研究發(fā)現(xiàn)，酒精性脂肪肝患者中脂肪性肝炎的發(fā)病率為約40%，脂肪性肝硬化的發(fā)病率達50%以上；另外， 20%的非酒精性脂肪肝發(fā)展為脂肪性肝纖維化，進而惡化為肝硬化，其中30% 40%的患者死于這些肝相關(guān)性疾病，部分發(fā)生亞急性肝衰竭和肝細胞肝癌。目前，國內(nèi)外尚無專門治療脂肪肝的特效藥物，臨床上多采用降脂類藥物與保肝類藥物聯(lián)合用藥。這些藥物多是針對脂肪肝的某個環(huán)節(jié)或部分的發(fā)病機理起作用，缺乏治療脂肪肝的特異性。有些調(diào)血脂藥雖然對脂肪肝有短期療效，但影響肝功能，使血脂更集中于肝臟進行代謝，增加肝臟負擔(dān)，長期服用具有潛在的肝毒性，反而會加重脂肪肝的病情。 鑒于缺乏治療脂肪肝的特效藥物，因此從中藥中尋找新的脂肪肝治療藥物已經(jīng)成為近年來中藥新藥研究的熱點之一。中藥胡黃連是玄參科(Scrophulariaceae)胡黃連(Picrorhiza scrophulariiflora Pennell)的干燥根莖。對胡黃連的化學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，胡黃連主要含有環(huán)烯醚萜類、酚苷類、有機芳香酸類成分。藥理和臨床研究表明，胡黃連以環(huán)烯醚萜類為主的苷類成分具有明確的保肝、抗肝損傷作用。近年的研究還表明，胡黃連苷II可通過改善肝功能、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、下調(diào)TGF-β 1和I型膠原mRNA以及蛋白表達而抑制肝纖維化的形成。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的在于基于中藥胡黃連總苷提取物來提供一種有效治療脂肪肝的新型藥物。用于實現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下一種胡黃連總苷提取物在制備用于預(yù)防和/或治療脂肪肝或其相關(guān)疾病藥物中的用途，其中所述胡黃連總苷提取物的制備方法包括以下步驟(1)以濃度為0 95% (體積/體積)WC1-C5脂肪醇水溶液提取胡黃連，除去提取液中Wc1-C5脂肪醇后過濾；(2)濾液通過大孔吸附樹脂并以濃度為0 30% (體積/體積)的C1-C5脂肪醇水溶液洗脫，洗脫液棄去；(3)以濃度為40 100% (體積/體積)的C1-C5脂肪醇水溶液洗脫，除去洗脫液中的溶劑。在上述用途中，優(yōu)選地，步驟(1)中采用WC1-C5脂肪醇水溶液的濃度為0 30% (體積/體積)。優(yōu)選地，步驟O)中采用WC1-C5脂肪醇水溶液為0 20% (體積/體積)。優(yōu)選地，步驟(3)中采用的C1-C5脂肪醇水溶液為40 60 % (體積/體積)。在上述用途中，大孔吸附樹脂可以選自苯乙烯、二乙烯苯、丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯型極性或非極性大孔吸附樹脂中的一種或多種。在上述用途中，提取的方法可以選自滲漉、回流和浸泡中的一種或多種，優(yōu)選為滲滴。在上述用途中，按胡黃連總苷提取物的總重量計，所述胡黃連總苷提取物中，胡黃連總苷的含量不低于60% (重量/重量)，胡黃連苷II的含量不低于21% (重量/重量)， 胡黃連苷I的含量不低于13% (重量/重量)。優(yōu)選地，所述胡黃連總苷提取物還包含胡黃連苷III、胡黃連苷IV、6-阿魏酰梓醇和6-異阿魏酰梓醇。在上述用途中，藥物可以為口服劑型或注射劑型?？诜┬涂梢詾槠瑒⑼鑴?、膠囊、顆粒劑或口服液。注射劑型可以為水針劑或粉針劑。在上述用途中，脂肪肝可以為酒精性脂肪肝或非酒精性脂肪肝；也可以為急性脂肪肝或慢性脂肪肝。脂肪肝的相關(guān)疾病具體為脂肪肝引起的肝纖維化。本發(fā)明經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)本發(fā)明的提取方法制得的胡黃連總苷提取物中胡黃連總苷含量高達60% (重量/重量)以上，其中富含環(huán)烯醚萜類等有效成分。采用急、慢性脂肪肝動物模型的研究表明，該胡黃連總苷提取物具有清肝脂、降血脂、降低轉(zhuǎn)氨酶、清除自由基、 抗脂質(zhì)過氧化、增強免疫、保護肝臟的作用。因此，以本發(fā)明的提取方法制備的胡黃連總苷提取物可以制成藥物，用于預(yù)防和/或治療治療酒精性和非酒精性脂肪肝，以及急性脂肪肝或慢性脂肪肝，進而防止肝纖維化的形成。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明至少存在以下有益效果1、本發(fā)明采用水或低醇提取，并采用大孔樹脂法進行純化，得到的總苷提取物的成分及含量與現(xiàn)有技術(shù)不同，本發(fā)明胡黃連總苷提取物中，總苷含量>60% (重量/重量)，胡黃連苷(重量/重量)，胡黃連苷I > 13% (重量/重量)，此外，還含有胡黃連苷III、胡黃連苷IV、6-阿魏酰梓醇和6-異阿魏酰梓醇；現(xiàn)有技術(shù)主要為胡黃連環(huán)烯醚萜總苷提取物，其中，胡黃連苷I和胡黃連苷II HPLC含量總計>20% (重量/重量)；
2、脂肪肝中肝脂大量堆積的成因包括肝脂輸出相對不足和肝脂輸出絕對不足。肝脂輸出相對不足是由進入肝臟的血液中脂肪酸增多或肝臟自身合成脂肪酸增多、加速肝臟合成TG所致，藥效研究中通常采用高脂飼料誘發(fā)的慢性脂肪肝模型；與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明除了選擇上述模型對胡黃連總苷提取物進行藥效研究外，還針對脂肪肝的另一成因， 即肝脂輸出絕對不足，設(shè)計了乙硫氨酸誘發(fā)的急性脂肪肝模型和CCl4誘發(fā)的脂肪肝/肝纖維化模型，分別反映了肝臟VLDL合成、分泌障礙及脂肪肝氧化抑制。根據(jù)脂肪肝發(fā)病的多種成因，設(shè)計了多種動物模型，從而綜合考察了胡黃連總苷提取物對脂肪肝的治療作用。3、本發(fā)明在乙硫氨酸誘發(fā)的小鼠急性脂肪肝模型中，連續(xù)3次灌胃給予胡黃連總苷提取物15、30、60mg/kg ；其他試驗給藥劑量20、40、80mg/kg，胡黃連總苷提取物治療脂肪肝的大鼠的起效劑量為20mg/kg/天，有效劑量范圍為40 80mg/kg/天。4、盡管現(xiàn)有技術(shù)中有將胡黃連提取物用于治療和預(yù)防肝病的報道，但是其中胡黃連提取物的成分和含量與本發(fā)明不同，而且由于肝病的種類很多，不同肝病的形成機理差別很大，對于不同形成機理的肝病需要針對性使用不同的藥物，本發(fā)明通過大量研究發(fā)現(xiàn)， 本發(fā)明制備的特定組成的胡黃連提取物在治療脂肪肝中效果尤佳。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。實施例1將20公斤胡黃連藥材粉碎成粗粉，以60L水浸泡2小時，裝入滲漉筒，以水滲漉， 收集MOL滲漉液，濃縮至相當(dāng)于Ig藥材/mL的濃縮液。通過DlOl大孔吸附樹脂，以水洗去雜質(zhì)，再以60% (體積/體積)乙醇水溶液洗脫，濃縮洗脫液，減壓干燥制得胡黃連總苷提取物2. 8公斤，其中總苷含量達70% (重量/重量)，胡黃連苷II為22.5% (重量/重量)，胡黃連苷I為13. 9% (重量/重量)，此外，還含有胡黃連苷III、胡黃連苷IV、6-阿魏酰梓醇和6-異阿魏酰梓醇。取上述胡黃連總苷提取物1. 2公斤，加淀粉1. 6公斤，微晶纖維素400g，制粒，裝膠囊，每粒含總苷30mg。實施例2 將20公斤胡黃連藥材粉碎成粗粉，以60L的30 % (體積/體積)乙醇水溶液浸泡 12小時，裝入滲漉筒，以30% (體積/體積)乙醇水溶液滲漉，收集MOL滲漉液，濃縮至相當(dāng)于Ig藥材/mL的濃縮液。通過AB-8大孔吸附樹脂，以水洗去雜質(zhì)，再以50% (體積/體積)乙醇水溶液洗脫，濃縮洗脫液，減壓干燥制得胡黃連總苷提取物2. 6公斤，其中總苷含量達75% (重量/重量)，胡黃連苷II為22. 8% (重量/重量)，胡黃連苷I為14. 6% (重量/重量)，此外，還含有胡黃連苷III、胡黃連苷IV、6-阿魏酰梓醇和6-異阿魏酰梓醇。取上述胡黃連總苷提取物1. 1公斤，加淀粉1. 6公斤，微晶纖維素400g，制粒，壓片，每片含總苷30mg。實施例3將20公斤胡黃連藥材粉碎成粗粉，以60L的20% (體積/體積)乙醇水溶液回流 3次，每次2小時，每次80L，合并提取液，濃縮至相當(dāng)于Ig藥材/mL的濃縮液。通過HPD100大孔吸附樹脂，以水及20% (體積/體積)乙醇水溶液洗去雜質(zhì)，再以40% (體積/體積)乙醇水溶液洗脫，濃縮洗脫液，減壓干燥制得胡黃連總苷提取物3公斤，其中總苷含量達60% (重量/重量)。胡黃連苷II為21. 6% (重量/重量)，胡黃連苷I為13. 5% (重量/重量)，此外，還含有胡黃連苷III、胡黃連苷IV、6-阿魏酰梓醇和6-異阿魏酰梓醇。實施例4將20公斤胡黃連藥材粉碎成粗粉，以MOL的10% (體積/體積)乙醇水溶液浸泡M小時，減壓濃縮浸泡液，至Ig藥材/mL。通過NKA大孔吸附樹脂，以10% (體積/體積)乙醇水溶液洗去雜質(zhì)，再以50% (體積/體積)乙醇水溶液洗脫，濃縮洗脫液，減壓干燥制得胡黃連總苷提取物1公斤，其中總苷含量達65% (重量/重量)，胡黃連苷II為21. 9% (重量/重量)，胡黃連苷I為13.7% (重量/重量)，此外，還含有胡黃連苷III、胡黃連苷 IV、6-阿魏酰梓醇和6-異阿魏酰梓醇。試驗例試驗的目的在于驗證胡黃連總苷提取物在預(yù)防和/或治療脂肪肝中的效果。為了證明本發(fā)明的胡黃連總苷提取物的治療效果和安全性，其藥效學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)研究過程及結(jié)果如下一、主要藥效學(xué)試驗1.對乙硫氨酸誘發(fā)的急性脂肪肝模型的影響 ICR小鼠70只，雄性，體重20. 3 士 1. 2 (18. 2 22. 5) g，隨機分為7組，每組10只。 采用乙硫氨酸制備急性脂肪肝模型，乙硫氨酸能抑制肝臟合成載脂蛋白，從而使脂質(zhì)代謝中甘油三酯(TG)運出肝臟出現(xiàn)障礙，導(dǎo)致TG蓄積于肝臟而形成脂肪肝。小鼠禁食過夜后， 除正常對照組灌服蒸餾水外，其余各組灌服DL-乙硫氨酸Q50mg/kg，20mL/kg)造模，Ih后， 正常對照組和模型對照組灌服0. 5% (g/ml) CMC，受試藥組灌服實施例1制備的胡黃連總苷提取物，劑量分別為15、30、60mg/kg/次，陽性藥物組分別灌服強肝顆?；騽P西萊，劑量分別為1700、100mg/kg/次(均相當(dāng)于臨床日用量的3倍)，給藥體積均為10ml/kg。每日給藥2次，共給藥3次。于末次給藥后Ih處死小鼠，摘取肝臟，稱取左葉邊緣200mg，以2ml丙酮-乙醇混合液(體積比=1 1)研磨制備勻漿，抽提脂質(zhì)，離心后，取上清液用比色法測定甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)。結(jié)果如表1所示。
表1胡黃連總苷提取物對肝臟TG、TC的影響(F土 S, η= 10)
權(quán)利要求
1.一種胡黃連總苷提取物在制備用于預(yù)防和/或治療脂肪肝或其相關(guān)疾病藥物中的用途，其中所述胡黃連總苷提取物的制備方法包括以下步驟(1)以濃度為0 95%(體積/體積)WC1-C5脂肪醇水溶液提取胡黃連，除去提取液中的C1-C5脂肪醇后過濾；(2)濾液通過大孔吸附樹脂并以濃度為0 30%(體積/體積)的C1-C5脂肪醇水溶液洗脫，洗脫液棄去；(3)以濃度為40 100%(體積/體積)的C1-C5脂肪醇水溶液洗脫，除去洗脫液中的溶劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述步驟(1)中采用WC1-C5脂肪醇水溶液的濃度為0 30% (體積/體積)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述步驟⑵中采用WC1-C5脂肪醇水溶液為0 20% (體積/體積)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的用途，其特征在于，所述步驟C3)中采用WC1-C5 脂肪醇水溶液為40 60% (體積/體積)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的用途，其特征在于，所述大孔吸附樹脂選自苯乙烯、二乙烯苯、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯型極性或非極性大孔吸附樹脂中的一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的用途，其特征在于，所述提取的方法選自滲漉、 回流和浸泡中的一種或多種，優(yōu)選為滲漉。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項所述的用途，其特征在于，按所述胡黃連總苷提取物的總重量計，所述胡黃連總苷提取物中，胡黃連總苷的含量不低于60% (重量/重量)，胡黃連苷II的含量不低于21% (重量/重量)，胡黃連苷I的含量不低于13% (重量/重量)；優(yōu)選地，所述胡黃連總苷提取物還包含胡黃連苷III、胡黃連苷IV、6-阿魏酰梓醇和 6-異阿魏酰梓醇。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的用途，其特征在于，所述藥物為口服劑型或注射劑型。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，所述口服劑型為片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑或口服液；所述注射劑型為水針劑或粉針劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項所述注射劑型，其特征在于，所述脂肪肝為酒精性脂肪肝或非酒精性脂肪肝，或者所述脂肪肝為急性脂肪肝或慢性脂肪肝；所述脂肪肝的相關(guān)疾病為脂肪肝引起的肝纖維化。
全文摘要
本發(fā)明提供一種胡黃連總苷提取物在制備用于預(yù)防和/或治療脂肪肝或其相關(guān)疾病藥物中的用途，其中所述胡黃連總苷提取物的制備方法包括以下步驟以濃度為0～95％(體積/體積)的C1-C5脂肪醇水溶液提取胡黃連，除去提取液中的C1-C5脂肪醇后過濾；濾液通過大孔吸附樹脂并以濃度為0～30％(體積/體積)的C1-C5脂肪醇水溶液洗脫，洗脫液棄去；以濃度為40～100％(體積/體積)的C1-C5脂肪醇水溶液洗脫，除去洗脫液中的溶劑。本發(fā)明制備的胡黃連總苷提取物可以制成藥物用于預(yù)防和/或治療酒精性和非酒精性脂肪肝，以及急性脂肪肝或慢性脂肪肝，進而防止肝纖維化的形成。
文檔編號A61P1/16GK102462772SQ20101054364
公開日2012年5月23日 申請日期2010年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月15日
發(fā)明者侯文彬, 華潔, 單淇, 周福軍, 張新鑫, 徐旭, 趙專友 申請人:天津藥物研究院