專利名稱：Ct造影功能的樹狀大分子/金-銀合金納米顆粒的制備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬納米顆粒的制備領(lǐng)域，特別是涉及一種具有CT造影功能的樹狀大分子/ 金-銀合金納米顆粒的原位制備方法。
背景技術(shù)：
貴金屬納米顆粒以其獨(dú)特的光學(xué)、電學(xué)、催化及與量子尺寸相關(guān)的特性在許多 領(lǐng)域表現(xiàn)出其潛在的應(yīng)用價(jià)值，引起了研究者們濃厚的研究興趣。其中，金納米顆粒 和銀納米顆粒因具有納米結(jié)構(gòu)的顯著特性而倍受研究者的青睞。Shi X. Y.等[Shi， X. Y. ；Wang, S. H. ；Meshinchi, S. ；Van Antwerp, Μ. Ε. ；Bi, Χ. D. ；Lee, I. H. ；Baker, J. R. Dendrimer-Entrapped Gold Nanoparticles as a Platform for Cancer-Cell Targeting and Imaging [J]. Small 2007，3，1245.]用原位還原法制備 了平均尺寸為 3. 2nm的金納米顆粒。制備得到的金納米顆粒具有良好的生物相容性，可對癌癥細(xì)胞進(jìn)行 有效地靶向和成像。Sutton, Α.等[Sutton，Α. ；Franc, G. ；Kakkar, A. J. Polym. Sci. Pol. Chem. 2009，47，(18)，4482-4493.]證明銀納米顆粒在對氯硝基苯的還原反應(yīng)中具有很高的 催化活性。特別地，金-銀合金納米顆粒因具有獨(dú)特的光學(xué)，催化等特性而受到廣泛的關(guān) 注。Endo, T.等[Endo, T. ；Yoshimura, T. ；Esumi, K. Journal of Colloid and Interface Science 2005,286,602.]發(fā)現(xiàn)金-銀合金納米顆粒對p-硝基酚具有優(yōu)于單質(zhì)金、銀的催化 活性。隨著研究的深入，金、銀納米顆粒及其合金納米顆粒已在化學(xué)催化、生物醫(yī)藥、疾 病診斷、光熱治療、藥物運(yùn)輸及基因轉(zhuǎn)染等領(lǐng)域受到廣泛的應(yīng)用。對這些應(yīng)用而言，制備得 到具有可控光學(xué)特性，良好分散性，可控尺寸及尺寸分布等性質(zhì)的金屬納米顆粒是研究的 熱點(diǎn)和難點(diǎn)。專利申請?zhí)枮镃N200710075684. 1的專利“納米微粒的制造方法”采用添加含 鈣、鎂、鑭、鋇、釔和/或鈰的可溶性鹽作為阻隔劑，乙二胺四乙酸、蘋果酸、葡萄糖和/或蔗 糖作為燃燒劑的方法，以燒結(jié)的手段制備納米微粒。專利“一種合成納米Ag-Ni合金的方 法”(專利申請?zhí)朇N200710011671.8)利用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)為分散劑，采用弱還原 劑胼對金屬離子進(jìn)行還原獲得致密度超過99%的納米晶Ag-Ni合金。采用上述專利報(bào)道的制備方法可以得到具有一定性質(zhì)的合金納米顆粒，然而合金 納米顆粒光學(xué)性質(zhì)及尺寸不能被有效控制。在眾多基于聚合物的金、銀納米顆粒的制備方 法中，以樹狀大分子作為模板和穩(wěn)定劑因具有巨大的優(yōu)勢而受到廣大研究者的關(guān)注。樹狀 大分子是近二十幾年來發(fā)展起來的具有高度支化結(jié)構(gòu)的大分子，它由3個(gè)結(jié)構(gòu)部分組成 中心核、內(nèi)層支化單元、端基支化單元。它擁有精準(zhǔn)的分子結(jié)構(gòu)、分子內(nèi)層存在的空腔，及大 量的官能團(tuán)。目前比較常見的樹狀大分子主要有聚酰胺-胺類樹狀大分子，聚丙烯亞胺類 樹狀大分子，聚酯類樹狀大分子和聚醚類樹狀大分子。 本專利中采用的是聚酰胺-胺(PAMAM)樹狀大分子，這是目前研究最廣泛、最深入 的樹狀大分子之一。自Tomalia于1985年首次用發(fā)散法成功合成以來，聚酰胺-胺樹狀大 分子已實(shí)現(xiàn)了商業(yè)化生產(chǎn)，并在多個(gè)領(lǐng)域獲得廣泛的研究和應(yīng)用。它既具有樹狀大分子的共性，又具有自身的特點(diǎn)。其分子中有大量含N的官能團(tuán)，這些官能團(tuán)以規(guī)則的一層接一層 支化的方式存在，并且其數(shù)量隨分子代數(shù)的增加以幾何級數(shù)的形式增加，高代數(shù)分子呈球 狀、分子本身具有納米級尺寸。相對于線型的聚合物，其結(jié)構(gòu)固定規(guī)整，由中心向外對稱發(fā) 散并高度分支，有著極好的幾何對稱性。聚酰胺_胺樹狀大分子大量的表面基團(tuán)具有可控 性，可通過修飾功能基團(tuán)形成具有生物功能的多功能大分子通過修飾葉酸分子得到具有 靶向癌細(xì)胞的功能，修飾熒光素分子得到可以具有熒光成像功能的分子，修飾盤尼西林形 成高效抗菌產(chǎn)物。貴金屬納米顆粒的一個(gè)重要潛在應(yīng)用就是作為CT成像造影劑。聚酰胺_胺樹狀 大分子的內(nèi)部空腔可對貴金屬納米顆粒進(jìn)行包裹，以獲得穩(wěn)定的具有CT成像功能的復(fù)合 材料。近來的許多研究都表明金納米顆粒具有很高的X-射線衰減強(qiáng)度，表現(xiàn)出優(yōu)于臨床上 基于碘的造影劑(碘海醇)的CT成像功能。在近期發(fā)表的專利“負(fù)載納米金顆粒的樹狀大 分子CT靶向造影劑及其制備方法”(專利申請?zhí)朇N200910198801. 2)中，一種新型的基于 樹狀大分子的金納米顆粒造影劑被制備，金納米顆粒尺寸為1 20nm。該造影劑具有生物 相容性好，體內(nèi)循環(huán)時(shí)間長，穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)，專利“一種CT成像造影劑及其制備方 法”(專利申請?zhí)朇N200910113084.9)也制備了一種含金的CT造影劑。它是由金納米顆 粒和碘海醇組成，其結(jié)構(gòu)為金納米顆粒為核心，外圍包裹碘海醇；其中金納米顆粒的粒徑可 控，粒徑大小為10 500nm。另外，在本課題組近期的研究中證明樹狀大分子穩(wěn)定的銀納 米顆粒(dendrimer-stabilized silver nanoparticles, Ag DSNPs)具有相近于碘海醇的 X-射線衰減特性，但具有明顯優(yōu)于碘海醇的體內(nèi)成像時(shí)間。這也為新型CT造影劑的開發(fā)提 供了良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。大量的研究表明，降低氨基末端的樹狀大分子的表面電荷可以有效地減小其細(xì)胞 毒性。這對樹狀大分子在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用十分重要。檢索國內(nèi)外有關(guān)金-銀合金納米顆粒方面的文獻(xiàn)和專利結(jié)果表明在本發(fā)明完成 之前，還沒有發(fā)現(xiàn)基于樹狀大分子的金-銀合金納米顆粒在CT造影應(yīng)用方面的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種具有CT造影功能的樹狀大分子/金-銀 合金納米顆粒的 原位制備方法，該方法制備的樹狀大分子/金_銀復(fù)合納米顆粒，尺寸分布 較窄，具有良好的分散性，沒有發(fā)生團(tuán)聚現(xiàn)象。X-射線衰減強(qiáng)度測試結(jié)果表明，合金納米顆 粒的X-射線衰減強(qiáng)度呈增長趨勢，逐漸表現(xiàn)出優(yōu)于傳統(tǒng)造影劑碘海醇的CT成像性能。本發(fā)明的一種具有CT造影功能的樹狀大分子/金-銀合金納米顆粒的原位制備 方法，包括(1)稱取末端為胺基的第五代聚酰胺-胺樹狀大分子，配制濃度為9. 7 14. 9mg/ mL的溶液；(2)在上述溶液中加入硝酸銀溶液，再加入氯金酸溶液，攪拌之后再加入硼氫化 鈉溶液，再繼續(xù)攪拌反應(yīng)2-3h ；將反應(yīng)后的溶液進(jìn)行透析，冷凍干燥處理，得到乙酰化前產(chǎn) 品；其中金銀樹狀大分子摩爾比分別為20-50 20-50 1 ；硼氫化鈉摩爾數(shù)為金屬原 子總摩爾數(shù)的3-5倍。所述步驟(2)采用了具有均一結(jié)構(gòu)和大量內(nèi)部空腔的第五代聚酰胺-胺樹狀大分子為模板與穩(wěn)定劑，很好地防止了金屬納米顆粒的聚集。所述步驟(2)中，銀鹽，金鹽幾乎同時(shí)加入溶液中，提供了一種簡便的金-銀合金 納米顆粒的制備方法。所述步驟(2)中的硝酸銀溶液的濃度為70-89mmol/L，氯金酸溶液的濃度為 10-15mg/mL,硼氫化鈉溶液的濃度為700-730mmol/L。所述步驟(2)調(diào)控金銀樹狀大分子的投料比為20 50 1,35 35 1， 50 20 1。所述步驟(2)中的透析采用PBS緩沖液，蒸餾水。取所述步驟(2)透析前的溶液加入三乙胺，攪拌之后加入乙酸酐，繼續(xù)攪拌反應(yīng) 20-48h ；得到乙酰化后產(chǎn)品；其中乙酸酐的摩爾數(shù)為樹狀大分子表面胺基總摩爾數(shù)的5倍 過量；三乙胺的摩爾數(shù)為乙酸酐摩爾數(shù)的120%過量。本方法中采用簡便的乙?；姆椒▉碇泻蜆錉畲蠓肿拥谋砻骐姾?，以提高其生物 相容性。該方法中，通過調(diào)整金銀樹狀大分子的摩爾投料比，可以有效地在一定波長 范圍內(nèi)連續(xù)調(diào)控合金納米顆粒的吸收峰波長。同時(shí)，納米顆粒的尺寸也可以得到調(diào)控。配制活性元素(金/銀、碘)摩爾濃度為0. 05mol/L的樣品，以碘海醇作為對照， 進(jìn)行X-射線衰減強(qiáng)度測試。使用NMR (核磁共振)、UV-Vis (紫外可見光譜)、TEM (透射電子顯微鏡)、CT機(jī)表 征本發(fā)明獲得的具有CT造影功能的樹狀大分子/金-銀合金納米顆粒的結(jié)果分別如下(I)NMR測試結(jié)果NMR圖譜表明樹狀大分子表面基團(tuán)的類型以及數(shù)量。以金銀樹狀大分子摩爾 比為50 20 1為例，參照說明書附圖1。附圖1中出現(xiàn)在1.87ppm處的化學(xué)位移峰為乙 ?；屑谆奶卣鞣?。由此可證明樹狀大分子表面的氨基已通過乙?；饔帽晦D(zhuǎn)化為了乙?；?2) UV-Vis 測試結(jié)果UV-Vis測試結(jié)果表明本發(fā)明中制備得到的 金屬納米顆粒的表面等離子體共振 (SPR)峰均位于400nm和540nm之間。而400nm和540nm分別是純銀和純金納米顆粒的SPR 峰位置。參見說明書附圖2。這表明本發(fā)明中制備得到的為合金納米顆粒。其sra峰的位 置隨著合金納米顆粒中金比例的升高而出現(xiàn)相應(yīng)程度的紅移。所得合金納米顆粒在不同溫 度(4-50°C )和pH(5-8)條件下具有良好的穩(wěn)定性。(3) TEM測試結(jié)果TEM測試結(jié)果顯示了金-銀合金納米顆粒的尺寸及尺寸分布。乙?；暗慕?銀合 金納米顆粒尺寸分為在3. 0-11. Onm之間；乙酰化后合金納米顆粒尺寸分布在4. 7-17. Onm 之間。隨著合金納米顆粒中金含量的提高，其尺寸會發(fā)生一定的程度的減小。同時(shí)，在相同 金銀樹狀大分子摩爾比條件下，經(jīng)過乙?；幚砗蠛辖鸺{米顆粒的尺寸出現(xiàn)一定程度 的增大。(4) CT機(jī)測試結(jié)果CT機(jī)測試結(jié)果表明隨著合金納米顆粒中金含量的提高，合金納米顆粒的X-射線 衰減強(qiáng)度呈上升趨勢，逐漸表現(xiàn)出優(yōu)于碘海醇的X-射線衰減特性。在相同金銀樹狀大分子摩爾比條件下，乙?；蠛辖鸺{米顆粒具有較大的CT衰減值。參見說明書附圖4。以內(nèi)部具有大量空腔和結(jié)構(gòu)精確可控的聚酰胺_胺樹狀大分子為模板和穩(wěn)定劑， 原位還原法制備具有CT造影功能的樹狀大分子/金-銀合金納米顆粒，本發(fā)明涉及了三個(gè) 基本原理(1)充分利用聚酰胺-胺樹狀大分子的內(nèi)部空腔。主要體現(xiàn)在在還原前，其內(nèi)部 空腔可以對Ag+^11(14_進(jìn)行絡(luò)合，防止AgCl沉淀的產(chǎn)生；還原后，可以起到防止合金納米顆 粒團(tuán)聚的作用。(2)采用強(qiáng)還原劑NaBHji金屬離子進(jìn)行快速還原，在樹狀大分子內(nèi)部空腔的約束 下，產(chǎn)生穩(wěn)定的具有一定尺寸的金-銀合金納米顆粒。(3)貴金屬納米顆粒(金，銀)對X-射線有良好的衰減能力。X-射線衰減強(qiáng)度測試結(jié)果表明，隨著合金納米顆粒中金含量的提高，合金納米顆 粒的X-射線衰減強(qiáng)度呈增長趨勢，逐漸表現(xiàn)出優(yōu)于傳統(tǒng)造影劑碘海醇的CT成像性能。有益效果(1)本發(fā)明的制備過程簡單，實(shí)驗(yàn)條件為常溫常壓，易于操作，所采用的制備程序 可用于制備其他單金屬、雙金屬，甚至三金屬納米顆粒，具有很好的使用價(jià)值；(2)本發(fā)明方法制備的金_銀合金納米顆粒，尺寸分布較窄，沒有發(fā)生團(tuán)聚現(xiàn)象， 且具有良好的溶解性，樹狀大分子能有效地穩(wěn)定金_銀合金納米顆粒，不會產(chǎn)生團(tuán)聚和沉 淀；(3)制備得到的合金納米顆粒具有優(yōu)于傳統(tǒng)造影劑碘海醇的CT成像效果，為新型 造影劑的開發(fā)打下了良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。


圖1為本發(fā)明制備的金銀樹狀大分子摩爾比為50 20 1的樹狀大分子/ 金_銀合金納米顆粒乙酰化后的NMR譜圖；圖2為本發(fā)明制備的樹狀大分子/金_銀合金納米顆粒乙酰化前的UV-Vis譜圖；圖3為本發(fā)明制備的金銀樹狀大分子摩爾比為35 35 1的樹狀大分子/ 金_銀合金納米顆粒乙酰化前(a)、后(b)的TEM圖片；圖4為本發(fā)明制備的樹狀大分子/金_銀合金納米顆粒乙?；蟮腦-射線衰減強(qiáng) 度直方圖；1-5分別為金銀樹狀大分子摩爾比為0 70 1,20 50 1,35 35 1， 50 20 1,70 0 1的合金納米顆粒；6為碘海醇；[金-銀、碘]=0. 05mol/L ；
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例 僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人 員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定 的范圍。實(shí)施例1取299. 52mgAgN03，溶于蒸餾水中，磁力震蕩使之充分溶解均勻，配制成濃度為 88. 16mmol/L的透明無色的Ag+鹽溶液20mL。取114. 68mg的NaBH4,溶于蒸餾水/甲醇(水甲醇=2 1，體積比)中，磁力震蕩使之充分溶解均勻，配制成濃度為721. 78mmol/ L的溶液4. 2mL。取第五代聚酰胺-胺樹狀大分子(G5. NH2) 48. 65mg,溶于5mL蒸餾水中，磁 力震蕩使之充分溶解均勻，配制成濃度為9. 73mg/mL的溶液。取AgNO3溶液1. 485mL,加入 到G5.NH2溶液中，攪拌0. 5h。之后，加入NaBH4溶液0. 544mL，攪拌反應(yīng)2h。反應(yīng)結(jié)束后， 取溶液的一半進(jìn)行透析，PBS緩沖液(3次，4L/次)和蒸餾水(3次，4L/次)。然后進(jìn)行冷 凍干燥處理，得到乙酰化前的金銀樹狀大分子摩爾比為0 70 1的樹狀大分子/銀 納米顆粒復(fù)合材料，-20°C保存。對溶液的另一半進(jìn)行乙?；幚?。加入三乙胺173. 6 μ L，攪拌0. 5h。之后，加入 乙酸酐98.2 μ L，攪拌反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，對溶液進(jìn)行透析，PBS緩沖液(3次，4L/次) 和蒸餾水(3次，4L/次)。然后進(jìn)行冷凍干燥處理，得到乙酰化前的金銀樹狀大分子摩 爾比為0 70 1的樹狀大分子/銀納米顆粒復(fù)合材料，-20°C保存。配制活性元素(金/銀、碘)摩爾濃度為0. 05mol/L的樣品，以碘海醇作為對照， 進(jìn)行X-射線衰減強(qiáng)度測試。UV-Vis測試結(jié)果表明譜圖中出現(xiàn)的415nm及400nm左右處的吸收峰為銀納米顆 粒的sra特征峰。這表明體系中成功制備了銀納米顆粒。TEM測試結(jié)果表明制備得到的 銀納米顆粒乙?；昂蟮某叽绶植挤謩e為11.0±3.5nm* 17.0±4.6nm。樹狀大分子/銀 納米顆粒具有良好的分散性，未出現(xiàn)團(tuán)聚現(xiàn)象。X-射線衰減強(qiáng)度測試表明，制備得到的銀納 米顆粒乙?；昂蟮腃T值分別是130HU和123HU。實(shí)施例2取299. 52mgAgN03，溶于蒸餾水中，磁力震蕩使之充分溶解均勻，配制成濃度為 88. 16mmol/L的透明無色的Ag+鹽溶液20mL。取HAuCl450mg，溶于蒸餾水中，磁力震蕩使之 充分溶解均勻，配制成濃度為lOmg/mL的溶液。取114. 68mg的NaBH4，溶于蒸餾水/甲醇 (水甲醇=2 1，體積比)中，磁力震蕩使之充分溶解均勻，配制成濃度為721. 78mmol/ L的溶液4. 2mL。取第五代聚酰胺-胺樹狀大分子(G5. NH2) 50. 35mg,溶于5mL蒸餾水中， 磁力震蕩使之充分溶解均勻，配制成濃度為10. 07mg/mL的溶液。取AgNO3溶液1. 098mL, 加入到G5. NH2溶液 中，緊接著加入HAuCl4溶液1. 595mL,攪拌0. 5h。之后，加入NaBH4溶液 0. 563mL，攪拌反應(yīng)2h。反應(yīng)結(jié)束后，取溶液的一半進(jìn)行透析，PBS緩沖液(3次，4L/次)和 蒸餾水(3次，4L/次)。然后進(jìn)行冷凍干燥處理，得到乙?；暗慕疸y樹狀大分子摩爾 比為20 50 1的樹狀大分子/金-銀合金納米顆粒，_20°C保存。對溶液的另一半進(jìn)行乙?；幚怼＜尤肴野?79. 7 μ L，攪拌0. 5h。之后，加入 乙酸酐101. 7 μ L，攪拌反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，對溶液進(jìn)行透析，PBS緩沖液(3次，4L/次) 和蒸餾水(3次，4L/次)。然后進(jìn)行冷凍干燥處理，得到乙?；蟮慕疸y樹狀大分子摩 爾比為20 50 1的樹狀大分子/金-銀合金納米顆粒，_20°C保存。配制活性元素(金/銀、碘)摩爾濃度為0. 05mol/L的樣品，以碘海醇作為對照， 進(jìn)行X-射線衰減強(qiáng)度測試。UV-Vis測試結(jié)果表明譜圖中出現(xiàn)的吸收峰分別位于445nm和441nm。這表明體 系中成功制備了金-銀合金納米顆粒。TEM測試結(jié)果表明制備得到的金_銀合金納米顆 粒乙?；昂蟮某叽绶植挤謩e為5. O士 1. 4nm和5. 2士 1. Onm。樹狀大分子/金-銀合金納 米顆粒具有良好的分散性，未出現(xiàn)團(tuán)聚現(xiàn)象。X-射線衰減強(qiáng)度測試表明，制備得到的金-銀合金納米顆粒乙?；昂蟮腃T值分別是168HU和184HU，乙?；蟮腃T值有一定的提高。 實(shí)施例3取240.70mg AgNO3,溶于蒸餾水中，磁力震蕩使之充分溶解均勻，配制成濃度為 70. 84mmol/L的透明無色的Ag+鹽溶液20mL。取HAuCl450mg，溶于蒸餾水中，磁力震蕩使 之充分溶解均勻，配制成濃度為lOmg/mL的溶液。取56. 26mg的NaBH4，溶于蒸餾水/甲醇 (水甲醇=2 1，體積比)中，磁力震蕩使之充分溶解均勻，配制成濃度為708. ISmmol/ L的溶液2.1mL。取第五代聚酰胺-胺樹狀大分子(G5.NH2)57. 13mg，溶于5mL蒸餾水中， 磁力震蕩使之充分溶解均勻，配制成濃度為11. 43mg/mL的溶液。取AgNO3溶液1. 090mL, 加入到G5. NH2溶液中，緊接著加入HAuCl4溶液3. 166mL,攪拌0. 5h。之后，加入NaBH4溶液 0. 660mL，攪拌反應(yīng)2h。反應(yīng)結(jié)束后，取溶液的一半進(jìn)行透析，PBS緩沖液(3次，4L/次)和 蒸餾水(3次，4L/次)。然后進(jìn)行冷凍干燥處理，得到乙酰化前的金銀樹狀大分子摩爾 比為35 35 1的樹狀大分子/金-銀合金納米顆粒，_20°C保存。對溶液的另一半進(jìn)行乙?；幚?。加入三乙胺101. 9 μ L，攪拌0. 5h。之后，加入 乙酸酐57.7 μ L，攪拌反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，對溶液進(jìn)行透析，PBS緩沖液(3次，4L/次) 和蒸餾水(3次，4L/次)。然后進(jìn)行冷凍干燥處理，得到乙?；蟮慕疸y樹狀大分子摩 爾比為35 35 1的樹狀大分子/金-銀合金納米顆粒，_20°C保存。配制活性元素(金/銀、碘)摩爾濃度為0. 05mol/L的樣品，以碘海醇作為對照， 進(jìn)行X-射線衰減強(qiáng)度測試。UV-Vis測試結(jié)果表明譜圖中出現(xiàn)的吸收峰分別位于477nm和483nm。這表明體 系中成功制備了金-銀合金納米顆粒。TEM測試結(jié)果表明制備得到的金_銀合金納米顆 粒乙?；昂蟮某叽绶植挤謩e為3. 5 士0. 9nm和3. 9 士0. 9nm。樹狀大分子/金-銀合金納 米顆粒具有良好的分散性，未出現(xiàn)團(tuán)聚現(xiàn)象。X-射線衰減強(qiáng)度測試表明，制備得到的金-銀 合金納米顆粒乙?；昂蟮腃T值分別是203HU和227HU，乙?；蟮腃T值有一定的提高。實(shí)施例4取299. 52mgAgN03，溶于蒸餾水中，磁力震蕩使之充分溶解均勻，配制成濃度為 88. 16mmol/L的透明無色的Ag+鹽溶液20mL。取HAuCl450mg，溶于蒸餾水中，磁力震蕩使之 充分溶解均勻，配制成濃度為lOmg/mL的溶液。取114. 68mg的NaBH4，溶于蒸餾水/甲醇 (水甲醇=2 1，體積比)中，磁力震蕩使之充分溶解均勻，配制成濃度為721. 78mmol/ L的溶液4. 2mL。取第五代聚酰胺-胺樹狀大分子(G5. NH2) 59. 52mg,溶于5mL蒸餾水中， 磁力震蕩使之充分溶解均勻，配制成濃度為11. 90mg/mL的溶液。取AgNO3溶液0. 519mL, 加入到G5. NH2溶液中，緊接著加入HAuCl4溶液4. 712mL,攪拌0. 5h。之后，加入NaBH4溶液 0. 666mL，攪拌反應(yīng)2h。反應(yīng)結(jié)束后，取溶液的一半進(jìn)行透析，PBS緩沖液(3次，4L/次)和 蒸餾水(3次，4L/次)。然后進(jìn)行冷凍干燥處理，得到乙?；暗慕疸y樹狀大分子摩爾 比為50 20 1的樹狀大分子/金-銀合金納米顆粒，_20°C保存。對溶液的另一半進(jìn)行乙?；幚?。加入三乙胺212.4PL，攪拌0.5h。之后，加入 乙酸酐120. 2 μ L，攪拌反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，對溶液進(jìn)行透析，PBS緩沖液(3次，4L/次) 和蒸餾水(3次，4L/次)。然后進(jìn)行冷凍干燥處理，得到乙?；蟮慕疸y樹狀大分子摩 爾比為50 20 1的樹狀大分子/金-銀合金納米顆粒，_20°C保存。配制活性元素(金/銀、碘)摩爾濃度為0. 05mol/L的樣品，以碘海醇作為對照，進(jìn)行X-射線衰減強(qiáng)度測試。UV-Vis測試結(jié)果表明譜圖中出現(xiàn)的吸收峰分別位于493nm和513歷。這表明體 系中成功制備了金-銀合金納米顆粒。TEM測試結(jié)果表明制備得到的金_銀合金納米顆 粒乙?；昂蟮某叽绶植挤謩e為3.6士0.9nm和6. 1 士 1.4nm。樹狀大分子/金-銀合金納 米顆粒具有良好的分散性，未出現(xiàn)團(tuán)聚現(xiàn)象。X-射線衰減強(qiáng)度測試表明，制備得到的金-銀 合金納米顆粒乙?；昂蟮腃T值分別是251HU和278HU，乙?；蟮腃T值有一定的提高。實(shí)施例5取HAuCl450mg，溶于蒸餾水中，磁力震蕩使之充分溶解均勻，配制成濃度為IOmg/ mL的溶液。取114. 68mg的NaBH4,溶于蒸餾水/甲醇(水甲醇=2 1，體積比)中，磁力 震蕩使之充分溶解均勻，配制成濃度為721. 78mmol/L的溶液4. 2mL。取第五代聚酰胺-胺 樹狀大分子(G5. NH2) 74. 65mg，溶于5mL蒸餾水中，磁力震蕩使之充分溶解均勻，配制成濃度 為14. 93mg/mL的溶液。取HAuCl4溶液8. 274mL，加入到G5. NH2溶液中，攪拌0. 5h。之后， 加入NaBH4溶液0. 835mL，攪拌反應(yīng)2h。反應(yīng)結(jié)束后，取溶液的一半進(jìn)行透析，PBS緩沖液(3 次，4L/次)和蒸餾水(3次，4L/次)。然后進(jìn)行冷凍干燥處理，得到乙?；暗慕疸y樹 狀大分子摩爾比為70 0 1的樹狀大分子/金納米顆粒復(fù)合材料，_20°C保存。對溶液的另一半進(jìn)行乙?；幚?。加入三乙胺266.4 4 1^，攪拌0.51!。之后，加入乙酸酐150. 7 μ L，攪拌反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，對溶液進(jìn)行透析，PBS緩沖液(3次，4L/次) 和蒸餾水(3次，4L/次)。然后進(jìn)行冷凍干燥處理，得到乙?；蟮慕疸y樹狀大分子摩 爾比為70 0 1的樹狀大分子/金納米顆粒復(fù)合材料，_20°C保存。配制活性元素(金/銀、碘)摩爾濃度為0. 05mol/L的樣品，以碘海醇作為對照，進(jìn)行X-射線衰減強(qiáng)度測試。UV-Vis測試結(jié)果表明譜圖中出現(xiàn)的498nm及536nm左右處的吸收峰為金納米顆粒的sra特征峰。這表明體系中成功制備了銀納米顆粒。TEM測試結(jié)果表明制備得到的 銀納米顆粒乙?；昂蟮某叽绶植挤謩e為3. 0士0. 7nm和4. 7士 1. Onm。樹狀大分子/金納 米顆粒具有良好的分散性，未出現(xiàn)團(tuán)聚現(xiàn)象。X-射線衰減強(qiáng)度測試表明，制備得到的金納米 顆粒乙?；昂蟮腃T值分別是254HU和32IHU。
權(quán)利要求
一種具有CT造影功能的樹狀大分子/金 銀合金納米顆粒的原位制備方法，包括(1)稱取末端為胺基的第五代聚酰胺 胺樹狀大分子，配制濃度為9.7～14.9mg/mL的溶液；(2)在上述溶液中加入硝酸銀溶液，再加入氯金酸溶液，攪拌之后再加入硼氫化鈉溶液，再繼續(xù)攪拌反應(yīng)2 3h；將反應(yīng)后的溶液進(jìn)行透析，冷凍干燥處理，得到乙酰化前產(chǎn)品；其中金∶銀∶樹狀大分子摩爾比分別為20 50∶20 50∶1；硼氫化鈉摩爾數(shù)為金屬原子總摩爾數(shù)的3 5倍。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有CT造影功能的樹狀大分子/金_銀合金納米顆粒 的原位制備方法，其特征在于所述步驟(2)中的硝酸銀溶液的濃度為70-89mmol/L，氯金 酸溶液的濃度為10_15mg/mL，硼氫化鈉溶液的濃度為700-730mmol/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有CT造影功能的樹狀大分子/金_銀合金納米 顆粒的原位制備方法，其特征在于所述步驟(2)調(diào)控金銀樹狀大分子的投料比為 20 50 1，35 35 1 或 50 20 1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有CT造影功能的樹狀大分子/金_銀合金納米顆粒 的原位制備方法，其特征在于所述步驟(2)中的透析采用PBS緩沖液，蒸餾水。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有CT造影功能的樹狀大分子/金_銀合金納米顆粒 的原位制備方法，其特征在于取所述步驟(2)透析前的溶液加入三乙胺，攪拌之后加入乙 酸酐，繼續(xù)攪拌反應(yīng)20-48h ；得到乙?；螽a(chǎn)品；其中乙酸酐的摩爾數(shù)為樹狀大分子表面 胺基總摩爾數(shù)的5倍過量；三乙胺的摩爾數(shù)為乙酸酐摩爾數(shù)的120%過量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有CT造影功能的樹狀大分子/金-銀合金納米顆粒的原位制備方法，包括(1)稱取末端為胺基的第五代聚酰胺-胺樹狀大分子，配制濃度為9.7～14.9mg/mL的溶液；(2)在上述溶液中加入硝酸銀溶液，再加入氯金酸溶液，攪拌之后再加入硼氫化鈉溶液，再繼續(xù)攪拌反應(yīng)2-3h；將反應(yīng)后的溶液進(jìn)行透析，冷凍干燥處理，得到乙酰化前產(chǎn)品。本發(fā)明方法制備的樹狀大分子/金-銀復(fù)合納米顆粒，尺寸分布較窄，具有良好的分散性，沒有發(fā)生團(tuán)聚現(xiàn)象。X-射線衰減強(qiáng)度測試結(jié)果表明，合金納米顆粒的X-射線衰減強(qiáng)度呈增長趨勢，逐漸表現(xiàn)出優(yōu)于傳統(tǒng)造影劑碘海醇的CT成像性能。
文檔編號A61K49/12GK101987202SQ20101054383
公開日2011年3月23日 申請日期2010年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月15日
發(fā)明者劉輝, 史向陽 申請人:東華大學(xué)