專利名稱：一種青陽參皂苷的提取方法
技術領域：
本發(fā)明天然產(chǎn)物分離領域，尤其是涉及一種采用酶解和膜分離提取青陽參皂苷方法。
背景技術：
青陽參為蘿摩科隔山消屬植物，彝藥名為肉已勃齊，漢藥名為青陽參、西河參、小白蘞、脫骨參，云南又稱鬧狗藥。分布于云南、貴州、湖南、廣西等地，秋季采根入藥?！兑退幹尽酚涊d益腎強筋、健脾和胃，祛風除濕、解毒、鎮(zhèn)靜、驅(qū)蟲。《滇南本草》記載民間用作壯腰健腎，強筋壯骨?，F(xiàn)代醫(yī)學表明，青陽參主要藥效成分是皂苷類成分，具有平肝補腎，豁痰鎮(zhèn)痙，定癇。用于治療癲癇，頭昏頭痛，眩暈，耳鳴，腰膝酸軟等癥。現(xiàn)有成藥青陽參總苷片臨床主要與苯妥英鈉或苯巴比妥等抗癲癇藥合用治療頑固性癲癇或難治性癲癇，亦可單獨用于治療一般性癲癇。青陽參皂苷主要是三萜皂苷和留體皂苷，水溶性較差?，F(xiàn)有提取青陽參皂苷的工藝有，甲醇提取、氯仿萃取或酸性醇溶液提取，大孔樹脂分離。國內(nèi)藥廠分離純化青陽參皂苷采用甲醇浸提、濃縮除去甲醇后用氯仿萃取，將萃取液濃縮干燥即得產(chǎn)品，其純度最高為60% (可見光分光光度法)。該工藝采用有毒、高成本的氯仿作為溶劑提取青陽參中總皂苷，產(chǎn)品得率低，有機溶劑殘留高、生產(chǎn)成本高。如專利(申請?zhí)?00810068894) “從青陽參中分離提純青陽參總甙的方法”，該專利公開的方法以青陽參為原料，加入甲醇水溶液和鹽酸，回流提取，將提取的溶液調(diào)節(jié)至中性，用硅藻土過濾，濾液進行濃縮，再加水上大孔樹脂柱進行分離，上柱后先水洗至無色，再用低濃度乙醇洗脫除雜，然后用高濃度乙醇洗脫并收集洗脫液，真空濃縮至干，即得高純度的青陽參總甙固體粉末。由于青陽參總苷多為留體皂苷水溶性較差，濃縮液在水中分散較難，容易析出，堵塞大孔樹脂，上柱較難，污染嚴重。還有文獻“青陽參皂苷分離純化工藝及其分散片的研究”，該文獻提取青陽參皂苷工藝路線是數(shù)為料液比為1 10，提取液為含 0. 05molHCL的50%乙醇溶液，于70°C加熱回流提取2h，大孔吸附樹脂DM130吸附，以蒸餾水、30%乙醇、95%乙醇依次洗脫，收集95%乙醇洗脫部位作為青陽參總苷部位。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決技術問題是提供一種操作簡單、污染小的青陽參皂苷的提取方法。為解決上述問題，本發(fā)明的目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)的一種青陽參皂苷的提取方法，其特征在于包含以下步驟1)酶解取青陽參粉碎40-80目，加入2-5%。生物酶自然酶解，制得酶解原料；2)提取把上述酶解原料加入5-10倍量低碳醇溶液微波提取2-3次，提取液加入超濾膜過濾，得濾液；
3)萃取濾液減壓濃縮，濃縮液加入水飽和正丁醇萃取2-3次，收集正丁醇層濃縮回收正丁醇，濃縮液加少許乙醚沉淀；3)柱分離濾出上述沉淀物，加95%乙醇回流溶解，溶解液過氧化鋁活性炭混合短柱，下柱液回收乙醇，減壓干燥得青陽參皂苷。所述步驟1)酶解條件生物酶可選纖維素酶、淀粉酶和果膠酶中的兩種以上的酶，添加量為原料的2-5%。，用pH3-5酸性水溶解與原料拌濕，常溫酶解36-M小時。所述步驟幻中的低碳醇為90-100%甲醇或乙醇溶液，超濾膜為截留分子量 6000-10000的管式復合膜。所述步驟4)中的氧化鋁活為120-200目中性氧化鋁，活性炭為針劑類藥用活性炭，混合比例5-8 1。本發(fā)明優(yōu)勢在于a).發(fā)明采用生物酶酶解，可以破壞植物纖維，切斷皂苷和大分子多糖的鍵合，提高收率。b).發(fā)明采用微波提取，提取時間短，提取效率高，能耗低。c).發(fā)明采用膜分離除雜，屬于物理方法，周期短，產(chǎn)品損失小。d).發(fā)明采用氧化鋁活性炭混合短柱，過柱速度快，比單純的活性炭吸附效果好。f).整個工藝操作簡單，易于放大，無大量廢液產(chǎn)生，利于環(huán)保。下面將結(jié)合具體實施方式
進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例1 取青陽參lkg，粉碎40目，取2g纖維素酶和2g淀粉酶溶于100mlpH4的鹽酸水溶液，加入原料中拌勻，室溫酶解36小時，得酶解原料。酶解原料投入微波提取罐，加入 10L90%甲醇溶液提取30分鐘，提取液濾出，再加10L90%甲醇溶液提取30分鐘，合并兩次濾液，經(jīng)400目濾網(wǎng)過濾，濾液加入截留分子量6000的管式復合膜超濾，壓力控制在5kpa， 收集透過液，濾液減壓濃縮，加適量水得濃縮液150ml。濃縮液加入300ml水飽和正丁醇攪拌均勻，倒入分液漏斗，分層后收集正丁醇層，萃取3次，萃取液濃縮回收正丁醇，濃縮液加少許乙醚沉淀，得沉淀物35g。沉淀物加95%乙醇回流溶解，完全溶解后，過氧化鋁活性炭混合短柱(混合比6 1)，收集下柱液，減壓濃縮干燥得青陽參皂苷類白色粉末21g，含量 89. 7%。實施例2 取青陽參1kg，粉碎60目，取3g纖維素酶和Ig淀粉酶溶于100mlpH5的硫酸水溶液，加入原料中拌勻，室溫酶解M小時，得酶解原料。酶解原料投入微波提取罐，加入 10L90%乙醇溶液提取30分鐘，提取液濾出，再加10L90%乙醇溶液提取30分鐘，合并兩次濾液，經(jīng)500目濾網(wǎng)過濾，濾液加入截留分子量10000的管式復合膜超濾，壓力控制在6kpa， 收集透過液，濾液減壓濃縮，加適量水得濃縮液200ml。濃縮液加入400ml水飽和正丁醇攪拌均勻，倒入分液漏斗，分層后收集正丁醇層，萃取2次，萃取液濃縮回收正丁醇，濃縮液加少許乙醚沉淀，得沉淀物32g。沉淀物加95%乙醇回流溶解，完全溶解后，過氧化鋁活性炭混合短柱(混合比5 1)，收集下柱液，減壓濃縮干燥得青陽參皂苷類白色粉末17. 91g，含量 92. 5%o實施例3 取青陽參1kg，粉碎80目，取Ig淀粉酶和2g果膠酶溶于100mlpH3的鹽酸水溶液， 加入原料中拌勻，室溫酶解36小時，得酶解原料。酶解原料投入微波提取罐，加入10L95% 乙醇溶液提取30分鐘，提取液濾出，再加10L95%乙醇溶液提取30分鐘，合并兩次濾液，經(jīng) 500目濾網(wǎng)過濾，濾液加入截留分子量6000的管式復合膜超濾，壓力控制在5kpa，收集透過液，濾液減壓濃縮，加適量水溶解得濃縮液120ml。濃縮液加入300ml水飽和正丁醇加熱攪拌均勻，倒入分液漏斗，分層后收集正丁醇層，萃取3次，萃取液濃縮回收正丁醇，濃縮液加少許乙醚沉淀，得沉淀物^g。沉淀物加95%乙醇回流溶解，完全溶解后，過氧化鋁活性炭混合短柱(混合比8 1)，收集下柱液，減壓濃縮干燥得青陽參皂苷類白色粉末1.7g，含量 91. 4%。實施例4:取青陽參10kg，粉碎80目，取15g纖維素酶和15g果膠酶酶和lLpH5的鹽酸水溶液，加入原料中拌勻，室溫酶解48小時，得酶解原料。酶解原料投入微波提取罐，加入 100L90%甲醇溶液提取30分鐘，提取液濾出，再加100L90%甲醇溶液提取30分鐘，合并兩次濾液，過500目濾網(wǎng)過濾，濾液加入截留分子量6000的管式復合膜超濾，壓力控制在 6kpa,收集透過液，濾液減壓濃縮，加適量水得濃縮液15L。濃縮液加入3L水飽和正丁醇加熱攪拌均勻，倒入分液漏斗，分層后收集正丁醇層，萃取3次，萃取液濃縮回收正丁醇，濃縮液加少許乙醚沉淀，得沉淀物338g。沉淀物加95%乙醇回流溶解，完全溶解后，過氧化鋁活性炭混合短柱(混合比7 1)，收集下柱液，減壓濃縮干燥得青陽參皂苷類白色粉末223g， 含量88. 1%ο實施例5 取青陽參50kg，粉碎80目，取70g纖維素酶和60g果膠酶酶和5LpH5的鹽酸水溶液，加入原料中拌勻，室溫酶解M小時，得酶解原料。酶解原料投入微波提取罐，加入 400L90%乙醇溶液提取30分鐘，提取液濾出，再加400L90%乙醇溶液提取30分鐘，合并兩次濾液，經(jīng)500目濾網(wǎng)過濾，濾液加入截留分子量6000的管式復合膜超濾，壓力控制在 6kpa，收集透過液，濾液減壓濃縮，加適量水，得濃縮液7L。濃縮液加入15L水飽和正丁醇加熱攪拌均勻，倒入分液漏斗，分層后收集正丁醇層，萃取2次，萃取液濃縮回收正丁醇，濃縮液加少許乙醚沉淀，得沉淀物16Mg。沉淀物加95%乙醇回流溶解，完全溶解后，過氧化鋁活性炭混合短柱(混合比6 1)，收集下柱液，減壓濃縮干燥得青陽參皂苷類白色粉末 1098g，含量 90. 1% ο
權(quán)利要求
1.一種青陽參皂苷的提取方法，其特征在于包含以下步驟1)酶解取青陽參粉碎至40-80目，加入2-5%。生物酶自然酶解，制得酶解原料；2)提取把上述酶解原料加入5-10倍量低碳醇溶液微波提取2-3次，提取液加入超濾膜過濾，得濾液；3)萃取濾液減壓濃縮，濃縮液加入水飽和正丁醇萃取2-3次，收集正丁醇層濃縮回收正丁醇，濃縮液加少許乙醚沉淀；4)柱分離濾出上述沉淀物，加95%乙醇回流溶解，溶解液過氧化鋁活性炭混合短柱， 下柱液回收乙醇，減壓干燥得青陽參皂苷。
2.如權(quán)利要求1所述青陽參皂苷的提取方法，其特征在于所述步驟1)酶解條件生物酶可選纖維素酶、淀粉酶和果膠酶中的兩種以上的酶，添加量為原料的2-5%。，用pH3-5酸性水溶解和原料拌濕，常溫酶解36-M小時。
3.如權(quán)利要求1所述青陽參皂苷的提取方法，其特征在于所述步驟2)中的低碳醇為 90-100%甲醇或乙醇溶液，超濾膜為截留分子量6000-10000的管式復合膜。
4.如權(quán)利要求1所述青陽參皂苷的提取方法，其特征在于所述步驟4)中的氧化鋁活性炭柱為120-200目中性氧化鋁，活性炭為針劑類藥用活性炭，混合比例5-8 1。
全文摘要
本發(fā)明涉及了一種青陽參皂苷的提取方法，采用生物酶解、膜分離、氧化鋁短柱純化青陽參皂苷，產(chǎn)品收率高，含量高，具體步驟為取青陽參粉碎40-80目，加入2-5‰生物酶自然酶解，得酶解原料，酶解原料加入5-10倍量低碳醇溶液微波提取2-3次，提取液加入超濾膜過濾，濾液減壓濃縮，濃縮液加入水飽和正丁醇萃取2-3次，收集正丁醇層濃縮回收試劑，濃縮液加少許乙醚沉淀，濾出上述沉淀物，加95％乙醇回流溶解，溶解液過氧化鋁活性炭混合短柱，下柱液回收乙醇，減壓干燥得青陽參皂苷。本方法工藝操作簡單，能耗低、污染小，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A61P25/08GK102462718SQ201010549779
公開日2012年5月23日 申請日期2010年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月19日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶, 楊成東 申請人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司