專利名稱：從植物肥莢紅豆中提取的活性成分及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從植物肥莢紅豆中提取的活性成分及其應(yīng)用，屬生物醫(yī)藥技術(shù) 領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
金黃色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)隸屬于葡萄球菌屬(Staphylococcus)，是
人類的一種重要病原菌，會(huì)引起多種嚴(yán)重感染。金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常 見的病原菌，會(huì)引起局部化膿感染，也會(huì)引起肺炎、甚至敗血癥、膿毒癥的全身感染。 金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，因而，食品受其污染的機(jī)會(huì)很多。近年來，由該 菌產(chǎn)生的腸毒素引起的食物中毒，占整個(gè)細(xì)菌性食物中毒的比例一直在上升，因此不斷 開發(fā)抑制金黃色葡萄球菌的新抗生素受到重視。肥莢紅豆(Ormosiafordiana)為豆科植物，又名雞冠果、青竹蛇、雞膽豆。具有 清熱解毒，消腫止痛的功效，主治急性熱病，急性肝炎，風(fēng)火牙痛，跌打腫痛等，目前 未有該植物對(duì)金黃色葡萄球菌(S.aureus)有抑制活性的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是從植物肥莢紅豆代謝產(chǎn)物中，篩選出對(duì)人體病原細(xì)菌金黃色葡 萄球菌(S.aureus)具有強(qiáng)抑制作用的活性成分，作為制備醫(yī)用抗生素的應(yīng)用。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的1活性成分的制備a.將肥莢紅豆的枝或葉用水洗干凈后放入烘箱，在60°C溫度下烘烤12小時(shí)；b.將烘干后的肥莢紅豆的枝或葉切碎，放入三角瓶?jī)?nèi)，用100%甲醇浸泡，在 40°C的水浴鍋上提取，第一次浸泡提取的時(shí)間為2小時(shí)，第二次和第三次的時(shí)間分別為4 和8小時(shí)；c.將三次浸提的提取液合并后，在60°C溫度下濃縮后得浸膏；d.將浸膏用甲醇溶解，定容至lOmg/ml，置于冰箱中4°C保存?zhèn)溆谩?、制備試驗(yàn)用的病原細(xì)菌金黃色葡萄球菌(S.aureus)將金黃色葡萄球菌接種于LB液體培養(yǎng)基(牛肉 膏3克，蛋白胨10克，氯化鈉5克，自來水1000ml，pH 7.0-7.2)中，于37°C下培 養(yǎng)24小時(shí)，凍于4°C冰箱中備用。做活性時(shí)將LB固體培養(yǎng)基(牛肉膏3克，蛋白胨 10克，氯化鈉5克，瓊脂18克，自來水1000ml，pH 7.0-7.2)倒入9cm的平板中， 待培養(yǎng)基凝固后，取200 μ L金黃色葡萄球菌菌液用涂布棒涂布均勻備用。3、試驗(yàn)方法濾紙片擴(kuò)散法在無菌操作臺(tái)上用微量注射器將樣品注入紙片(做三個(gè)劑量， lmg/disc，0.5mg/disc，O.lmg/disc)，用電吹風(fēng)將紙片吹干待溶劑揮發(fā)后，置于涂布好病 原菌的LB平板上，37°C下培養(yǎng)24小時(shí)后，觀察抑菌結(jié)果，測(cè)量抑菌圈的大小(含紙片的直徑0.6cm)。同時(shí)在紙片上加入提取過程中使用過的溶劑甲醇作為對(duì)照，同時(shí)還做空白 紙片對(duì)照。整個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取3次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值。將試驗(yàn)獲得的活性浸膏在100°C沸水中加熱30分鐘后，用甲醇溶解制備成濃度 為lOmg/ml的活性成分，用同樣的方法做抑菌試驗(yàn)。本發(fā)明提取的活性成分對(duì)人體病原菌金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抑制作用，能 作為制備抑制人體病原細(xì)菌金黃色葡萄球菌制劑的應(yīng)用，能開發(fā)為新的醫(yī)用抗生素。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例一本實(shí)施例所用的植物肥莢紅豆，采自中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所植物園內(nèi)。肥莢紅豆的葉用自來水洗干凈后放入烘箱，在60°C溫度下烘烤12小時(shí)。將10 克烘干后的葉切碎，放入三角瓶?jī)?nèi)，用IOOml 100%甲醇浸泡，在40°C的水浴鍋上提取。 第一次浸泡提取的時(shí)間為2小時(shí)，第二次和第三次的浸泡提取時(shí)間分別為4小時(shí)和8小 時(shí)。將三次浸提的提取液合并后，在60°C溫度下濃縮得浸膏。該浸膏用甲醇溶解，制備 成濃度為lOmg/ml，用于做活性測(cè)定。同時(shí)做對(duì)照，結(jié)果見表1。表1肥莢紅豆葉的提取物對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌作用
權(quán)利要求
1.一種從植物肥莢紅豆中提取的活性成分，其特征在于從植物肥莢紅豆中提取的活 性成分經(jīng)如下步驟得到a.將肥莢紅豆的枝或葉用水洗干凈后放入烘箱，在60°C溫度下烘烤12小時(shí)；b.將烘干后的肥莢紅豆的枝或葉切碎，放入三角瓶?jī)?nèi)，用100%的甲醇浸泡，在40°C 的水浴鍋上提取，第一次浸泡提取的時(shí)間為2小時(shí)，第二次和第三次的時(shí)間分別為4和8 小時(shí)；C.將三次浸提的提取液合并后，在60°C溫度下濃縮后得浸膏； d.將浸膏用甲醇溶解，定容至lOmg/ml，置于冰箱中4°C保存?zhèn)溆谩?br> 2.權(quán)利要求1所述的從植物肥莢紅豆中提取的活性成分，其特征在于該活性成分對(duì)人 體病原菌金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抑制作用，能作為制備抑制人體病原細(xì)菌金黃色葡 萄球菌制劑的應(yīng)用，能開發(fā)為新的醫(yī)用抗生素。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從植物肥莢紅豆中提取的活性成分及其應(yīng)用，屬生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。從植物肥莢紅豆中提取的活性成分經(jīng)如下步驟得到a.將肥莢紅豆的枝或葉用水洗干凈后放入烘箱，在60℃溫度下烘烤12小時(shí)；b.將烘干后的肥莢紅豆的枝或葉切碎，放入三角瓶?jī)?nèi)，用100％的甲醇浸泡，在40℃的水浴鍋上提取，第一次浸泡提取的時(shí)間為2小時(shí)，第二次和第三次的時(shí)間分別為4和8小時(shí)；c.將三次浸提的提取液合并后，在60℃溫度下濃縮后得浸膏；d.將浸膏用甲醇溶解，定容至10mg/ml，置于冰箱中4℃保存?zhèn)溆谩１景l(fā)明提取的活性成分對(duì)人體病原菌金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抑制作用，能作為制備抑制人體病原細(xì)菌金黃色葡萄球菌制劑的應(yīng)用，能開發(fā)為新的醫(yī)用抗生素。
文檔編號(hào)A61P31/04GK102008540SQ20101055645
公開日2011年4月13日 申請(qǐng)日期2010年11月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月24日
發(fā)明者周薇, 張克勤, 李國(guó)紅 申請(qǐng)人:云南大學(xué)