專利名稱：一種葉酸受體靶向型納米金顆粒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及納米金顆粒，特別涉及一種葉酸受體靶向型納米金顆粒及其制備方法。
背景技術(shù)：
納米金顆粒(GNPs)越來(lái)越廣泛地應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究中。納米金顆粒作為 成像試劑具備很多優(yōu)點(diǎn)，相對(duì)于其他物質(zhì)，納米金顆粒自身具有很強(qiáng)的表面等離子共振 (Surface PlasmonResonance, SPR)吸收和散射特性，使其更加有利于用作造影劑應(yīng)用于 醫(yī)學(xué)檢測(cè)。納米金顆粒對(duì)光漂作用不敏感，且表現(xiàn)出良好的生物相容性和無(wú)細(xì)胞毒性。納 米金顆粒廣泛應(yīng)用的另一個(gè)重要原因是其易于進(jìn)行生物修飾，納米金顆粒的表面容易與巰 基、氨基以及二硫化物等進(jìn)行結(jié)合，尤其是通過(guò)形成金硫(Au-S)鍵，可以將多肽、核酸以及 蛋白質(zhì)等生物分子結(jié)合到納米金顆粒表面，對(duì)納米金顆粒的表面進(jìn)行修飾之后，可使納米 金顆粒具有分子靶向功能，將其應(yīng)用于腫瘤的早期診斷。谷胱甘肽(GSH)作為一種天然的小分子三肽，有其特殊的化學(xué)結(jié)構(gòu)，并且具有良 好的水溶性和化學(xué)穩(wěn)定性，可穩(wěn)定地結(jié)合在納米金顆粒的表面，使納米金顆?？蛇M(jìn)行進(jìn)一 步的修飾(Chen W. ,Tu X. , Guo X, Fluorescent gold nanoparticles-based fluorescence sensor for Cu2+ions. Chem. Commun. 2009 :1736-1738.)。葉酸分子可與谷胱甘肽修飾后的 納米金顆粒通過(guò)形成共價(jià)鍵而連接到納米金顆粒的表面，葉酸受體(folate receptors, FR)是細(xì)胞膜中錨在甘油磷酸脂酞肌醇上的單鏈糖蛋白。葉酸受體對(duì)葉酸及其類似物有 高度的親和力，且具有飽和性、可逆性和競(jìng)爭(zhēng)性等基本特點(diǎn)。在腫瘤研究中發(fā)現(xiàn)，大部分腫 瘤細(xì)胞中的葉酸代謝旺盛，腫瘤細(xì)胞表面的葉酸受體明顯高于正常組織細(xì)胞表面的葉酸受 體，基于這一特點(diǎn)，葉酸受體作為腫瘤細(xì)胞的分子靶點(diǎn)受到了廣泛的關(guān)注。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一目的在于提供一種葉酸受體靶向型納米金顆粒。本發(fā)明的第二目的在于提供一種葉酸受體靶向型納米金顆粒的制備方法。所述一種葉酸受體靶向型納米金顆粒的由納米金顆粒、葉酸和谷胱甘肽組成，所 述谷胱甘肽的巰基和納米金顆粒的表面形成金硫(Au-S)鍵，所述谷胱甘肽中的羧基與所 述葉酸的氨基形成酰胺鍵。所述納米金顆粒、葉酸和谷胱甘肽的摩爾比可為1 (1 2) (1 3)。所述一種葉酸受體靶向型納米金顆粒的制備方法包括以下步驟1)將氯金酸溶液和檸檬酸三鈉溶液加入水中得混合溶液，將混合溶液加熱后冷卻 即得溶液A ；2)將谷胱甘肽溶液加入溶液A中，攪拌，透析后得溶液B ；3)往溶液B中加入N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，攪拌混 勻后加入葉酸，再攪拌，透析，即得產(chǎn)物葉酸受體靶向型納米金顆粒。
在步驟1)中，所述氯金酸溶液、檸檬酸三鈉溶液與水的體積比可為1 5 94; 所述氯金酸溶液的質(zhì)量濃度可為1%，所述檸檬酸三鈉溶液的質(zhì)量濃度可為1%，所述加熱 可采用微波加熱，加熱的溫度可為100 120°C，加熱的時(shí)間可為1 lOmin。在步驟2)中，所述谷胱甘肽的濃度可為0. lmol/L，所述谷胱甘肽溶液與溶液A的 體積比可為1 200，攪拌的時(shí)間可為8 16h，透析的時(shí)間可為6 12h。在步驟3)中，所述N-羥基琥珀酰亞胺的濃度可為0. 05mol/L,所述N-羥基琥珀 酰亞胺與溶液B的體積比可為1 400;所述二環(huán)己基碳二亞胺的濃度可為0.05mol/L， 所述二環(huán)己基碳二亞胺與溶液B的體積比可為1 400;所述葉酸與溶液B的體積比可為 1 200 ；再攪拌的時(shí)間可為8 16h，透析的時(shí)間可為12 24h。本發(fā)明所述一種葉酸受體靶向型納米金顆粒能夠特異性識(shí)別表面有高水平葉酸 受體表達(dá)的細(xì)胞，可作為檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的分子探針，在腫瘤細(xì)胞檢測(cè)中具有廣泛的應(yīng)用。本發(fā)明中的葉酸受體靶向型納米金顆粒經(jīng)透射電鏡檢測(cè)，粒徑在13 15nm之間， 為均一的球形結(jié)構(gòu)。經(jīng)過(guò)紅外光譜表征，葉酸分子通過(guò)自身的氨基與谷胱甘肽中的羧基形 成酰胺鍵，結(jié)合在納米金顆粒的表面。經(jīng)過(guò)X射線衍射表征，表明納米金顆粒的表面存在谷 胱甘肽和葉酸。拉曼光譜表明納米金顆粒與谷胱甘肽通過(guò)金硫(Au-S)鍵結(jié)合。MTT實(shí)驗(yàn)表 明葉酸受體靶向型納米金顆粒具有良好的細(xì)胞活性和生物相容性。激光共聚焦掃描得出金 納米顆粒表面的葉酸與HeLa細(xì)胞表面的葉酸受體發(fā)生特異性結(jié)合，并定位于細(xì)胞質(zhì)中，可 以用于腫瘤細(xì)胞的診斷。本發(fā)明中的葉酸受體靶向型納米金顆粒與現(xiàn)有納米金顆粒相比具有許多優(yōu)點(diǎn)1)穩(wěn)定性好，在低于0. 5mol/L的鹽濃度條件下和pH值為3 11之間均能保持著 良好的穩(wěn)定性。2)沒(méi)有明顯的細(xì)胞毒性，所用的谷胱甘肽分子更小，更有利于細(xì)胞對(duì)納米金顆粒 的攝取，具有良好的生物相容性。3)具有良好的葉酸受體靶向性，可作為檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的分子探針，在腫瘤檢測(cè)中 具有廣泛的應(yīng)用。


圖1為葉酸受體靶向型納米金顆粒的透射電鏡圖。在圖1中，標(biāo)尺為lOOnm。圖2為葉酸受體靶向型納米金顆粒的紫外可見(jiàn)吸收光譜圖。在圖2中，橫坐標(biāo)為 波長(zhǎng)(nm)，縱坐標(biāo)為吸光度，曲線1為納米金顆粒，曲線2為葉酸受體靶向型納米金顆粒。圖3為葉酸受體靶向型納米金顆粒的X射線光電子圖譜。橫坐標(biāo)為結(jié)合能(eV)， 縱坐標(biāo)為脈沖計(jì)數(shù)。在圖3中，光電子能譜峰從左到右分別為々114€，52 ，(18，附8以及01s。圖4為金元素的窄譜圖。在圖4中，橫坐標(biāo)為結(jié)合能(eV)，縱坐標(biāo)為脈沖計(jì)數(shù)； Au4f分為Au 4f5/2和Au 4f7/2,結(jié)合能在87. 5eV和84. OeV,分別是由于AuC14_和Au所 決定的。圖5硫元素的窄譜圖。在圖5中，橫坐標(biāo)為結(jié)合能(eV)，縱坐標(biāo)為脈沖計(jì)數(shù)；S2p 譜分為162. IeV和163. 6eV，分別為S-H鍵，Au-S鍵中的結(jié)合能。圖6氮元素的窄譜圖。在圖5中，橫坐標(biāo)為結(jié)合能(eV)，縱坐標(biāo)為脈沖計(jì)數(shù)；Nls 譜能夠被分為2個(gè)峰，分別在398. 85eV和400. 6eV,該結(jié)合能的位置分別代表-NH2和-NHCO中的N。圖7為拉曼光譜。在圖7中，橫坐標(biāo)為拉曼位移(cnT1)，縱坐標(biāo)為強(qiáng)度；曲線a是未經(jīng)修飾的納米金顆粒，曲線b是經(jīng)過(guò)谷胱甘肽修飾的納米金顆粒，曲線c是經(jīng)過(guò)谷胱 甘肽和葉酸受體修飾的納米金顆粒。圖8為不同濃度的葉酸受體靶向型納米金顆粒與HeLa細(xì)胞和正常的成纖維細(xì)胞 共培養(yǎng)24h后的細(xì)胞存活情況統(tǒng)計(jì)圖。在圖8中，橫坐標(biāo)為葉酸受體靶向型納米金顆粒的濃 度(μ g/ml)，縱坐標(biāo)為細(xì)胞存活率(％ ) ;A為HeLa細(xì)胞，B為正常的成纖維細(xì)胞，Control 為未加葉酸受體靶向型納米金顆粒的空白對(duì)照。圖9為相同劑量的經(jīng)過(guò)FITC修飾過(guò)的葉酸受體靶向型納米金顆粒與Hela細(xì)胞和 A549細(xì)胞共培養(yǎng)2h后的激光共聚焦掃描圖。在圖9中，A為Hela細(xì)胞，B為A549細(xì)胞。圖10為葉酸受體靶向型納米金顆粒與HeLa細(xì)胞和A549細(xì)胞共培養(yǎng)2h后在細(xì)胞 內(nèi)的定位分布圖。在圖10中，A為Hela細(xì)胞，其標(biāo)尺為0. 5 μ m，其中C為細(xì)胞核，D為A的 局部放大圖，其標(biāo)尺為100nm，B為A549細(xì)胞，其標(biāo)尺為1 μ m。圖11為葉酸受體靶向型納米金顆粒與葉酸受體高表達(dá)的HeLa細(xì)胞相結(jié)合的檢測(cè) 結(jié)果圖。在圖11中，橫坐標(biāo)為細(xì)胞濃度(個(gè)/ml)，縱坐標(biāo)為吸光度變化值ΔΑ;·為HeLa 細(xì)胞， 為成纖維細(xì)胞，▲為不含細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)液。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1葉酸受體靶向型納米金顆粒的制備1)將94ml超純水、Iml 氯金酸溶液和5ml 1 %的檸檬酸三鈉溶液于室溫下混 勻，放入微波爐中加熱1 lOmin，自然冷卻至室溫，得溶液A，放入4°C冰箱保存。2)取溶液A 10ml，加入100 μ 1 0. lmol/L谷胱甘肽溶液，勻速攪拌過(guò)夜，將混合液 透析6h得溶液B。3)向溶液B中加入50 μ 1 0. 05mol/L的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和50 μ 1 0. 05mol/L的二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，室溫?cái)嚢鑜h，然后加入50 μ 1葉酸，攪拌12h，將混 合液透析12h即得產(chǎn)物葉酸受體靶向型納米金顆粒，其中納米金顆粒、葉酸和谷胱甘肽的 摩爾比為1:1:2。實(shí)施例2Hela細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)按照細(xì)胞培養(yǎng)的常規(guī)方法培養(yǎng)Hela細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)，分別取對(duì)數(shù)生長(zhǎng) 期的Hela細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，用0. 25%胰蛋白酶0. 02% EDTA消化液消化5min，添加PBS 調(diào)整細(xì)胞密度為1. 5X IO6個(gè)/ml，然后分別用PBS進(jìn)行稀釋調(diào)整細(xì)胞量，待檢測(cè)。實(shí)施例3葉酸受體靶向型納米金顆粒的鑒定使用透射電鏡和紫外分外光度計(jì)觀察葉酸受體靶向型納米金顆粒(參見(jiàn)圖1和 2)，可見(jiàn)葉酸受體靶向型納米金顆粒其呈酒紅色，透射電鏡下顆粒呈很規(guī)則的球型結(jié)構(gòu)，粒 徑比較均一，粒徑為20nm左右，分散性良好。葉酸受體靶向型納米金顆粒的X射線光電子圖譜表明(參見(jiàn)圖3 6)納米金顆 粒的表面是有葉酸以及谷胱甘肽存在的。在圖3中，光電子能譜峰從左到右分別為Au 4f， S2p，Cls，Nls以及01s。圖4為金元素的窄譜，Au 4f 5/2和Au 4f 7/2的結(jié)合能在87. 5eV 和84. OeV,分別是由于AuC14_和Au所決定的。圖5為硫元素的窄譜，可分為162. IeV和163. 6eV,分別為S-H鍵，Au-S鍵中的結(jié)合能；圖6為氮元素的窄譜，Nls譜能夠被分為2個(gè) 峰，分別在398. 85eV和400. 6eV,該結(jié)合能的位置分別代表-NH2和-NHCO中的N。拉曼光譜實(shí)驗(yàn)表明，曲線a中納米金顆粒由于沒(méi)有進(jìn)行修飾，其在低頻率區(qū)域表 現(xiàn)出很弱的拉曼吸收情況，幾乎沒(méi)有特征峰，而在249. 9cm-1處有1個(gè)吸收峰，即為Au-Cl鍵 典型的拉曼吸收峰，納米金顆粒為了保持穩(wěn)定性，其表面有1個(gè)靜電雙電子層結(jié)構(gòu)，其中主 要是AuC14_。經(jīng)過(guò)谷胱甘肽修飾的納米金顆粒中在291. 317cm-1處有1個(gè)很強(qiáng)的拉曼吸收 峰，證實(shí)了谷胱甘肽與納米金顆粒通過(guò)Au-S相連接(參見(jiàn)圖7)。將不同濃度的葉酸受體靶向型納米金顆粒與HeLa細(xì)胞和正常的成纖維細(xì)胞共培 養(yǎng)24h，再檢測(cè)細(xì)胞的存活情況(參見(jiàn)圖8)。加入不同濃度的葉酸受體靶向型納米金顆粒 的細(xì)胞存活情況與沒(méi)有加入葉酸受體靶向型納米金顆粒的細(xì)胞存活情況沒(méi)有明顯差別，且 在增大葉酸受體靶向型納米金顆粒濃度后，一定范圍內(nèi)細(xì)胞依然表現(xiàn)出良好的存活率，表 明葉酸受體靶向型納米金顆粒具有良好的細(xì)胞相容性。相同劑量的經(jīng)過(guò)FITC修飾過(guò)的葉酸受體靶向型納米金顆粒與Hela細(xì)胞和A549 細(xì)胞共培養(yǎng)2h，激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞的變化(參見(jiàn)圖9)。從圖9A中可見(jiàn)Hela細(xì) 胞膜表面具有許多綠色熒光物(即為葉酸受體靶向型納米金顆粒)吸附，部分Hela細(xì)胞內(nèi) 也可見(jiàn)綠色熒光物，而作為對(duì)照的圖9B中的A549細(xì)胞膜表面及細(xì)胞內(nèi)基本沒(méi)有出現(xiàn)綠色 熒光物。之所以出現(xiàn)此種現(xiàn)象，是因?yàn)镠ela細(xì)胞中的葉酸受體高表達(dá)，而A549細(xì)胞中的葉 酸受體低表達(dá)。葉酸受體靶向型納米金顆粒能夠與Hela細(xì)胞高表達(dá)的葉酸受體特異性結(jié) 合，并且Hela細(xì)胞表面幾乎完全被熒光物覆蓋，表明了葉酸受體靶向型納米金顆粒與葉酸 受體高表達(dá)的癌細(xì)胞有較高的結(jié)合效率，可以作為該類癌細(xì)胞早期診斷的工具。上述結(jié)果 還表明，被修飾在金納米顆粒表面的葉酸的活性并沒(méi)有受到影響，在與HeLa細(xì)胞孵育時(shí)， 可以特異性地和葉酸受體相結(jié)合，使靶細(xì)胞被金納米顆粒所識(shí)別。證明所制備的葉酸受體 靶向型納米金顆粒對(duì)葉酸受體高表達(dá)的細(xì)胞具有良好的靶向性。將葉酸受體靶向型納米金顆粒與HeLa細(xì)胞和A549細(xì)胞共培養(yǎng)2h后，再在透射電 鏡觀測(cè)葉酸受體靶向型納米金顆粒在細(xì)胞內(nèi)的定位分布情況(參見(jiàn)圖10)。從圖中可以看 出，葉酸受體靶向型納米金顆粒在HeLa細(xì)胞內(nèi)有分布，而在A549細(xì)胞內(nèi)則未能發(fā)現(xiàn)有葉酸 受體靶向型納米金顆粒的分布。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)葉酸受體靶向型納米金顆粒未進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)， 因?yàn)槿~酸受體靶向型納米金顆粒進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)是通過(guò)細(xì)胞表面高表達(dá)的葉酸受體的介導(dǎo)的 吞噬作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)涵體中，這些內(nèi)涵體在溶酶體的作用下釋放出葉酸受體靶向型納 米金顆粒，因此透射電鏡下觀察到的金納米顆粒都處于細(xì)胞質(zhì)中，這從另一角度說(shuō)明葉酸 受體靶向型納米金顆粒對(duì)葉酸受體高表達(dá)的細(xì)胞具有靶向性。葉酸受體靶向型納米金顆粒與葉酸受體高表達(dá)的HeLa細(xì)胞的結(jié)合情況可通過(guò)如 下方法檢測(cè)1)取300 μ 1 10nmol/L的葉酸受體靶向型納米金顆粒溶液置于500 μ 1的離心 管中，向其加入100 μ 1不同濃度的Hela細(xì)胞懸液，輕微震蕩混勻后，在4°C的條件下孵育 30mino2)將這些孵育完成的離心管收集，以轉(zhuǎn)速為IOOOrpm離心5min，收集上清液，用紫 外可見(jiàn)分光光譜來(lái)進(jìn)行表征，記錄不同濃度條件下528nm處的吸光值。對(duì)照組為相同濃度 梯度的成纖維細(xì)胞，空白組為含有葉酸受體靶向型納米金顆粒的無(wú)酚紅DMEM培養(yǎng)基，未加細(xì)胞，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)5次。計(jì)算葉酸受體靶向型納米金顆粒溶液離心后與離心前在528nm 處的吸光度變化值，即ΔΑ = AO-Al (AO =空白組吸光度，Al =離心后上清液的吸光度)。
隨著HeLa細(xì)胞濃度的增加，ΔΑ的值也隨之變大(參見(jiàn)圖11)，表明結(jié)合在細(xì)胞 表面的葉酸受體靶向型納米金顆粒就越多，因此離心后，上清液中的葉酸受體靶向型納米 金顆粒就越少。而葉酸受體低表達(dá)的成纖維細(xì)胞中，隨著濃度的增加，ΔΑ的值并沒(méi)有發(fā) 生太大的變化，這是因?yàn)槿~酸受體靶向型納米金顆粒并不能有效地、穩(wěn)定地吸附在細(xì)胞表 面，不能隨著細(xì)胞的沉降而減少上清液中葉酸受體靶向型納米金顆粒的量，這一結(jié)果跟空 白對(duì)照組相類似，再次說(shuō)明了葉酸受體靶向型納米金顆粒具有特異性識(shí)別葉酸受體高表達(dá) 的癌細(xì)胞的功能。隨著HeLa細(xì)胞檢測(cè)濃度的降低，在細(xì)胞濃度為10 100個(gè)/ml時(shí)，葉 酸受體靶向型納米金顆粒與HeLa細(xì)胞的結(jié)合呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系。其線性方程為A = 1. 0465+0. 0857C, R = O. 9984，其中A為吸光度，C為細(xì)胞濃度，R為相關(guān)系數(shù)。當(dāng)細(xì)胞濃度 為10個(gè)/ml時(shí)，Hela細(xì)胞與成纖維細(xì)胞的變化值經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并沒(méi)有明顯差異，因此，基 于葉酸受體靶向型納米金顆粒系統(tǒng)檢測(cè)癌細(xì)胞的最低限度為100個(gè)/ml，這種較為簡(jiǎn)便的 檢測(cè)方法的檢測(cè)最低限度已經(jīng)接近于文獻(xiàn)所報(bào)道的90個(gè)細(xì)胞。
權(quán)利要求
1.一種葉酸受體靶向型納米金顆粒，其特征在于所述一種葉酸受體靶向型納米金顆粒 的由納米金顆粒、葉酸和谷胱甘肽組成，所述谷胱甘肽的巰基和納米金顆粒的表面形成金 硫鍵，所述谷胱甘肽中的羧基與所述葉酸的氨基形成酰胺鍵。
2.如權(quán)利要求1所述的一種葉酸受體靶向型納米金顆粒，其特征在于所述納米金顆 粒、葉酸和谷胱甘肽的摩爾比為1 (1 2) (1 3)。
3.一種葉酸受體靶向型納米金顆粒的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)將氯金酸溶液和檸檬酸三鈉溶液加入水中得混合溶液，將混合溶液加熱后冷卻即得 溶液A ；2)將谷胱甘肽溶液加入溶液A中，攪拌，透析后得溶液B；3)往溶液B中加入N-羥基琥珀酰亞胺和二環(huán)己基碳二亞胺，攪拌混勻，加入葉酸，再攪 拌，透析，即得產(chǎn)物葉酸受體靶向型納米金顆粒。
4.如權(quán)利要求3所述一種葉酸受體靶向型納米金顆粒的制備方法，其特征在于在步驟 1)中，所述氯金酸溶液、檸檬酸三鈉溶液與水的體積比為1 5 94。
5.如權(quán)利要求3所述一種葉酸受體靶向型納米金顆粒的制備方法，其特征在于在步驟 1)中所述氯金酸溶液的質(zhì)量濃度為1%，所述檸檬酸三鈉溶液的質(zhì)量濃度為1%。
6.如權(quán)利要求3所述一種葉酸受體靶向型納米金顆粒的制備方法，其特征在于在步驟1)中所述加熱采用微波加熱，加熱的溫度可100 120°C，加熱的時(shí)間為1 lOmin。
7.如權(quán)利要求3所述一種葉酸受體靶向型納米金顆粒的制備方法，其特征在于在步驟2)中所述谷胱甘肽的濃度可為O.lmol/L，所述谷胱甘肽溶液與溶液A的體積比為1 200。
8.如權(quán)利要求3所述一種葉酸受體靶向型納米金顆粒的制備方法，其特征在于在步驟 2)中攪拌的時(shí)間為8 16h，透析的時(shí)間為6 12h。
9.如權(quán)利要求3所述一種葉酸受體靶向型納米金顆粒的制備方法，其特征在于在在步 驟3)中所述N-羥基琥珀酰亞胺的濃度為0. 05mol/L,所述N-羥基琥珀酰亞胺與溶液B的 體積比為1 400 ；所述二環(huán)己基碳二亞胺的濃度為0.05mol/L，所述二環(huán)己基碳二亞胺與 溶液B的體積比為1 400;所述葉酸與溶液B的體積比為1 200。
10.如權(quán)利要求3所述一種葉酸受體靶向型納米金顆粒的制備方法，其特征在于在在 步驟3)中再攪拌的時(shí)間為8 16h，透析的時(shí)間為12 24h。
全文摘要
一種葉酸受體靶向型納米金顆粒及其制備方法，涉及納米金顆粒，提供一種葉酸受體靶向型納米金顆粒及其制備方法與應(yīng)用。所述一種葉酸受體靶向型納米金顆粒由谷胱甘肽、納米金顆粒和葉酸組成。制備方法包括將氯金酸溶液和檸檬酸三鈉溶液加入水中混勻，微波爐加熱后冷卻至得溶液A；將谷胱甘肽溶液加入溶液A中，攪拌，透析后得溶液B；往溶液B中加入NHS和DCC，攪拌混勻，加入葉酸，再攪拌，透析，即得產(chǎn)物葉酸受體靶向型納米金顆粒。所述一種葉酸受體靶向型納米金顆粒能夠特異性識(shí)別表面有高水平葉酸受體表達(dá)的細(xì)胞，可作為檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的分子探針，在腫瘤細(xì)胞檢測(cè)中具有廣泛的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K49/18GK102000350SQ201010566939
公開(kāi)日2011年4月6日 申請(qǐng)日期2010年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月30日
發(fā)明者孫莉萍, 張召武, 賈靜, 賴友群, 馬燕燕 申請(qǐng)人:廈門大學(xué)