專利名稱：一種水溶性α-葡萄糖苷酶抑制劑的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以真菌子實(shí)體為原料進(jìn)行提取獲得水溶性α -葡萄糖苷酶抑制 劑的方法。
背景技術(shù)：
藥用真菌是一類具有較高藥用價(jià)值的高等真菌，普遍具有抗腫瘤、降血糖、降血 脂、抗病毒和增強(qiáng)免疫力等幾種或多種功效。隨著現(xiàn)代社會(huì)發(fā)展，不良生活和工作方式增多，人口老齡化不斷加劇，近二十年 來，我國(guó)糖尿病的發(fā)病率一直呈迅速上升趨勢(shì)，據(jù)2010年的一份最新科學(xué)報(bào)道，我國(guó)現(xiàn)有 糖尿病患者高達(dá)9400萬人，已取代印度成為全球糖尿病人數(shù)最多的國(guó)家，而且，我國(guó)還有 1.48億尚不構(gòu)成糖尿病診斷的糖代謝異?；颊?糖尿病前期患者)。糖尿病可以導(dǎo)致心臟 病、高血壓、腎衰竭、失明、下肢潰瘍或壞死等多種并發(fā)癥，從而使患者殘疾或死亡，已經(jīng)成 為僅次于腫瘤和心血管疾病的“第三號(hào)殺手"，在我國(guó)僅相關(guān)醫(yī)療費(fèi)用每年就數(shù)以千億計(jì)。糖尿病(diabetes mellitus, DM)是一種因體內(nèi)胰島素絕對(duì)或相對(duì)分泌不足而引 起的碳水化合物、脂肪、蛋白質(zhì)、水、電解質(zhì)紊亂的慢性內(nèi)分泌代謝疾病，與遺傳因素以及多 種環(huán)境因素相關(guān)。其典型表現(xiàn)以多飲、多食、多尿、消瘦這“三多一少”和血糖增高為特征， 屬于中醫(yī)的“消渴”范疇。目前，對(duì)于I型糖尿病的治療，研究方向是開發(fā)給藥方便、有效的胰島素制劑及代 用品。而對(duì)于II型糖尿病的治療，不能單存依靠補(bǔ)充胰島素，還需口服降糖藥如胰島素促 泌劑(如磺酰脲類)、胰島素增敏劑(如噻唑烷二酮類)、葡萄糖代謝增強(qiáng)劑(如雙胍類)和 α -葡萄糖苷酶抑制劑(如目前臨床上已應(yīng)用的阿卡波糖Acarbose、伏格列波糖Voglibose 和米格列醇Miglitol，其主要降糖機(jī)理是對(duì)小腸α-葡糖甘酶起一種競(jìng)爭(zhēng)性、劑量依賴性 的抑制作用，從而阻止不易吸收的多糖化合物轉(zhuǎn)變成易吸收的單糖)。這些化學(xué)降糖類藥物 盡管見效較快，但對(duì)肝、腎等臟器損害較大，某些降血糖藥物可使血糖降至正常范圍以下， 甚至有發(fā)生低血糖的危險(xiǎn)。一般這類抗高血糖藥物僅僅只是降低異常升高的血糖，對(duì)于糖 尿病患者起到治標(biāo)不治本的作用，而純天然提取物一般具有作用溫和、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)， 開發(fā)利用潛力巨大。已有研究表明樺褐孔菌、蟲草、靈芝、姬松茸、灰樹花、黑木耳、猴頭菌、金耳和香菇 等食藥用菌均有一定程度的降血糖功效。其中降血糖作用的成分主要有多糖、皂苷、萜類、 黃酮、生物堿等多種化學(xué)結(jié)構(gòu)類型。樺褐孔菌(Inonotus obliquus (Pers. :Fr. )Pil0t)，是珍稀的大型藥用真，別名白 樺茸，系擔(dān)子菌亞門，層菌綱，非褶菌目，多孔菌科，褐臥孔菌屬藥用真菌，是生長(zhǎng)在寒帶的 木腐菌。主要分布在北半球北緯45° -50°的地區(qū)，如北美(北部)、芬蘭、波蘭、俄羅斯(西 西伯利亞、遠(yuǎn)東部分地區(qū)、勘察加半島)、日本(北海道)、中國(guó)(黑龍江、吉林省長(zhǎng)白山地 區(qū))。生于白樺、銀樺、榆樹、赤楊等活立木的樹皮下或砍伐后樹木的枯干上。16世紀(jì)至今， 俄羅斯、波蘭、芬蘭等國(guó)家民間就廣泛應(yīng)用樺褐孔菌防治各種癌癥(胃癌、肝癌、腸癌等)、心臟病、糖尿病。另外據(jù)報(bào)道樺褐孔菌可以抑制AIDS病毒的繁殖，1955年莫斯科醫(yī)學(xué)院宣 布樺褐孔菌為抗癌物質(zhì)，政府批準(zhǔn)樺褐孔菌可用于醫(yī)藥品開發(fā)；日本的研究人員對(duì)樺褐孔 菌也給予高度評(píng)價(jià)，并應(yīng)用于防治肝癌、艾滋病和0-157大腸桿菌中毒。在樺褐孔菌的降血糖研究方面。1999年日本的Mizimo T等人研究發(fā)現(xiàn)，樺褐孔 菌的菌絲和菌核中的多糖有降低血糖的作用，水溶性和非水溶性多糖對(duì)糖尿病小鼠都有降 血糖作用，活性成分主要是葡聚糖、雜多糖和蛋白復(fù)合物，菌絲多糖并沒有明顯抗酶特 性，但在給小鼠注射樺褐孔菌菌絲和菌核中提純的多糖后其降低血糖作用維持了 3 48h， 作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。2000年，韓國(guó)的Siin Y. S.等人從樺褐孔菌分離到的一個(gè)新 的含內(nèi)酯支鏈的羊毛留醇三萜也具有降血糖作用。2005年，韓國(guó)的Yang B. K.等人研究發(fā) 現(xiàn)相比對(duì)照組，糖尿病小鼠口服樺褐孔菌菌絲體可減少23. 的血糖濃度。2006年，韓國(guó) 的Cha，Jae-Yoimg等人發(fā)現(xiàn)樺褐孔菌發(fā)酵物可降低糖尿病小鼠的血糖水平。Mizimo T等 從樺褐孔菌菌核和菌絲體中提取和部分純化得到含蛋白的多糖。實(shí)驗(yàn)表明可溶和不可溶 性多糖均有降血糖的作用。其有效成分為葡聚糖、雜多糖及它們的蛋白質(zhì)復(fù)合物。另 外，樺褐孔菌發(fā)酵物中的成分不僅能有效控制血糖，而且沒有任何毒性，因此能有效預(yù)防和 治療糖尿病。國(guó)內(nèi)對(duì)樺褐孔菌抗糖尿病的研究較晚，2008年，延邊大學(xué)的張香花等人的研究 表明樺褐孔菌提取物對(duì)鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病大鼠的胰島、肝和腎組織損傷病變有一定 的保護(hù)和修復(fù)作用。2008年，江南大學(xué)的孫軍恩研究發(fā)現(xiàn)樺褐孔菌發(fā)酵菌粉及其多糖提取 物具有良好的降血糖、降血脂和抗氧化能力。而且樺褐孔菌發(fā)酵菌粉及其多糖組分可能降 糖機(jī)理包括修復(fù)糖尿病小鼠受損胰島β細(xì)胞、促進(jìn)胰島素分泌、增加肝糖原含量和提高糖 尿病小鼠抗氧化能力。2009年，天津大學(xué)的盧雪明等人采用用乙醇回流提取、梯度萃取得 樺褐孔菌的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取物，對(duì)其進(jìn)行黃酮和多酚類化合物的含量測(cè) 定，并測(cè)定了總還原力、清除DPPH自由基、抑制肝脂質(zhì)過氧化和抑制α-葡萄糖苷酶活性四 種體外模型對(duì)不同提取物活性的影響，結(jié)果顯示乙酸乙酯和正丁醇提取物所含的黃酮和多 酚類化合物較多且抗氧化和α-糖苷酶活性較好。桑黃Wiellinus linteus，別名火木層孔菌、針裂蹄(裂蹄)孔菌，屬于擔(dān)子菌亞 門，層菌綱，多孔菌目、多孔菌科、針層孔菌屬的藥用真菌。桑黃主要寄生于楊、柳、白樺、櫟、 櫸、桃等闊葉樹的枯立木及樹干上，因其著生樹種不同，分為桑樹桑黃、楊樹桑黃和樺樹桑 黃等品種。國(guó)內(nèi)主要分布于河北、山西、內(nèi)蒙古、吉林、臺(tái)灣、四川、陜西、寧夏、甘肅、青海、云 南、黑龍江、新疆、浙江、河南、廣東等地，國(guó)外主要有韓國(guó)、日本、菲律賓、澳大利亞、北美、中 南美等國(guó)家。桑黃的藥用最早記載于《本草綱目》中。桑黃味微苦，能利五臟、軟堅(jiān)、排毒、止血、 活血等?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》中認(rèn)為桑黃“久服輕身不老延年”?！端幮哉摗酚涊d，桑黃味微苦，性 寒，在我國(guó)傳統(tǒng)中藥中用于治療痢疾、盜汗、血崩、血淋、臍腹?jié)?、脫肛瀉血、帶下、閉經(jīng)?，F(xiàn) 代藥理研究表明桑黃具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、保肝護(hù)肝、抗突變、抗氧化、抗衰老等功能，尤 其在抗腫瘤作用方面作用顯著。已有研究表明桑黃中的活性物質(zhì)主要有多糖、黃酮、留體和 萜類成分。而桑黃在抗糖尿病和降血糖方面的研究報(bào)道較少見，僅見2001年韓國(guó)的Kim D.H.等人用桑黃菌絲體胞外多糖飼喂鏈脲霉素導(dǎo)致的糖尿病大鼠，結(jié)果顯示桑黃多糖能 夠降低血糖，同時(shí)減少總膽固醇、三酰甘油和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶。以及2010年，韓國(guó)的Kim
4H.M.等人采用桑黃菌絲體多糖能抑制自身免疫誘導(dǎo)的非肥胖小鼠糖尿病的發(fā)病率和降低 血糖濃度，發(fā)現(xiàn)機(jī)理主要是通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子表達(dá)起作用。在樺褐孔菌、桑黃兩種菌的抗糖尿病、降血糖和α -糖苷酶抑制劑專利方面。天津大學(xué)的陳海霞和盧雪明可作為α -葡萄糖苷酶抑制劑的樺褐孔菌提取物制 備方法，CN200810152916. 3 ；該專利中樺褐孔菌采用80 %乙醇提取浸膏經(jīng)適量水分散，石 油醚萃取去雜后的乙酸乙酯萃取部分，再經(jīng)濃縮干燥后得到了 α -葡萄糖苷酶抑制活性較 高的部分，該部分400 μ g劑量時(shí)抑制率達(dá)80.5%,半抑制率IC50為103. 9 μ g/mL。廣西的盧昶年，盧照凱桑黃白樺茸的復(fù)合提取物、其制備方法及其制劑， CN200710048738. 5 ；該專利采用桑黃、樺褐孔菌兩者粉碎粉末按一定比例的混合物經(jīng)兩次 熱水提取后的混合液，采用三氯醋酸、堿式醋酸、氫氧化隔和氯仿-異丙醇等去除蛋白和雜 質(zhì)，進(jìn)行濃縮干燥后得到了復(fù)合提取物。該發(fā)明的復(fù)合提取物經(jīng)67名患者服用，發(fā)現(xiàn)制劑 具有降低血糖、抗癌、抗炎、抗氧化、增強(qiáng)免疫力和保護(hù)肝臟等功效。黑龍江的俞文俊一種保健飲料，CN200710072197. X ；該保健飲料由50 90%白 樺茸提取液、5 40%的桑黃提取液、5 15%的刺五加提取液按體積百分比組成。經(jīng)42 位飲用者服用，發(fā)明者認(rèn)為該保健飲料能夠預(yù)防癌癥、糖尿病、高血壓和高血脂等病證。北京的付茂康治療糖尿病的口服藥，CN200710111594. 3 ；該發(fā)明中樺樹茸 20-80、破壁靈芝孢子粉20-80按原料藥重量配比制成。所述靈芝孢子粉是激光破壁孢子 粉，所述樺樹茸是粉碎后的樺樹茸粉。經(jīng)幾位患者服用，發(fā)明者認(rèn)為該混合粉劑能用于治療 心臟病、血壓高、肝炎和肝腹水等疾病。另外在樺褐孔菌多糖提取的發(fā)明專利方面，吉林的崔基成一種樺褐孔菌多 糖提取方法，CN02109803.4。黑龍江的馬宏達(dá)等人一種樺褐孔菌多糖的提取分離方 法” CN200810137490. 4。上述兩專利均未涉及α-糖苷酶抑制活性。在桑黃方面，未發(fā)現(xiàn)有桑黃作為α-糖苷酶抑制劑的專利報(bào)道，在提取物降血糖 方面，上海的楊焱等人一種桑黃提取物及其制備方法，CN200810201798. 0。采用桑黃子實(shí) 體經(jīng)醇提和水提物兩部分混合，經(jīng)小鼠試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該提取物具有明顯的降血糖作用，可用于 制備降血糖藥物。綜上所述，CN200810152916.3、CN200710048738. 5 和 CN200810201798. 0 三個(gè)專 利與本發(fā)明專利相關(guān)度比較高，但是專利CN20081015^16. 3是樺褐孔菌的醇提物，而且 經(jīng)過了石油醚和乙酸乙酯等對(duì)人體有害的有機(jī)溶劑萃取。專利CN200710048738. 5是樺 褐孔菌、桑黃兩種混合藥用真菌的水提物，但同樣在實(shí)例實(shí)施中采用有害的氯仿-異丙 醇等除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，應(yīng)用安全性較低，而且未直接涉及α-糖苷酶抑制功能，專利CN 200810201798. 0是桑黃的醇提物和水提物兩者混合物，且在醇提之后進(jìn)行水提，在功能上 未直接涉及α-糖苷酶抑制功能。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是根據(jù)某些藥用菌療效顯著、毒副作用小的特點(diǎn)，提供一種從樺褐孔菌和 桑黃兩種藥用真菌中提取得到安全性高、α -糖苷酶抑制活性強(qiáng)的水溶性抑制劑的方法，以 期應(yīng)用于相關(guān)的糖尿病人降血糖類醫(yī)藥保健產(chǎn)品。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是
一種水溶性α-葡萄糖苷酶抑制劑的提取方法，所述方法包括以真菌子實(shí)體為 原料，粉碎后加入質(zhì)量為所述子實(shí)體質(zhì)量20 40倍的水，超聲處理(20 50ΚΗζ)20 40 分鐘后，按照100 200U/g子實(shí)體添加量加入高溫α -淀粉酶，升溫至沸騰提取2 4小 時(shí)，離心去渣、取上清液濃縮至原有體積的1/10 1/15(真空濃縮，控制壓強(qiáng)0. OSMpa以 下，溫度45°C 60°C )，加入乙醇(可加入無水乙醇或95%乙醇)至乙醇終濃度為70 80%，醇沉8 M小時(shí)、取沉淀加入質(zhì)量為沉淀質(zhì)量(濕重)100 200倍的蒸餾水復(fù)溶， 然后以10000截留分子量的膜超濾12 M小時(shí)、取濾液濃縮至原有體積的1/40 1/80， 干燥(冷凍干燥、噴霧干燥或真空干燥)，即得所述水溶性α -葡萄糖苷酶抑制劑；所述子 實(shí)體來自樣揭孑L菌(Inonotus obliquus (Pers. Fr.)Pilcit)或桑黃(Phellinus linteus)。 經(jīng)檢測(cè)，按照本發(fā)明方法，樺褐孔菌提取物中樺褐孔菌多糖含量為20 30%，桑黃提取物 中桑黃多糖含量為40 50%，多糖含量可采用苯酚-硫酸法測(cè)定。為使有效成分能夠被充分提取，所述真菌子實(shí)體需粉碎至60 100目。本申請(qǐng)發(fā)明人在多種食藥用菌子實(shí)體對(duì)比和多種工藝探索的前提下，得到了本發(fā) 明方法，本發(fā)明通過超聲前處理，淀粉酶酶解，熱水浸提，乙醇沉淀后復(fù)溶，超濾去雜，噴霧 干燥、冷凍干燥或真空干燥等技術(shù)方法，建立了一種安全性高、活性強(qiáng)的藥用菌α -糖苷酶 抑制的制備方法和工藝。本發(fā)明專利的兩種藥用真菌水溶性α -糖苷酶抑制劑的制備工藝與常規(guī)的食藥 用菌多糖提取工藝有些類似，在制備過程中，除乙醇沉淀外，未使用其它有機(jī)溶劑，但與常 規(guī)多糖提取工藝不同的是提取過程中加入淀粉酶，盡量除去潛在的淀粉類或其它α-糖 苷類物質(zhì)對(duì)α -糖苷酶抑制的影響，另外超聲前處理能破碎原料組織，不僅使酶解作用更 充分，也有利于后續(xù)的有效物質(zhì)提取，此外，使用超濾除去1萬以下的寡糖或低聚糖類及其 它雜質(zhì)。糖苷酶抑制活性實(shí)驗(yàn)在試管中依次加入1. 2mL磷酸鉀緩沖液(0. 067mol/L磷酸 鉀緩沖液，pH = 6. 8),50 μ L谷胱甘肽(lmg. mL—1)，2 μ L α -葡萄糖苷酶(0. 1U. mL—1)和一 定體積的兩種藥用真菌α-糖苷酶抑制劑溶液，37°C保溫10分鐘。加入50 μ L PNPG，再于 37°C保溫10分鐘后，加入IOmL碳酸鈉終止液，在400mn處測(cè)定吸光值。以不加抑制劑作為 空白對(duì)照，以阿卡波糖為陽性對(duì)照。α -葡萄糖苷酶活力單位定義ρΗ6. 8，37°C條件下，每分鐘釋放1 μ moIPNP為一個(gè) 活力單位。抑制劑活力單位定義pH6.8，37°C條件下，使一個(gè)酶活力單位失活為一個(gè)抑制劑
活力單位。樣品對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制率的計(jì)算公式為抑制率(酶活力-抑制劑活 力)/酶活力X100%。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在采用本發(fā)明方法，可獲得具有較好活性的水溶性α -葡萄糖苷酶抑制劑，原料樺 褐孔菌和桑黃是兩種已有較遠(yuǎn)應(yīng)用歷史的藥用真菌，毒副作用較少，而且本發(fā)明采用的工 藝過程不涉及有毒有害步驟，安全性高，十分有利于后續(xù)醫(yī)藥保健食品的開發(fā)。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此實(shí)施例1 樺褐孔菌子實(shí)體一粉碎過篩80目一稱取IOOg —加入3000mL水一超聲(上海生 析超聲儀器有限公司，F(xiàn)S1200PV超聲波處理器，20KHz，360W)處理30分鐘一加入ImL的液 態(tài)高溫α -淀粉酶O萬U. mL—1，棗莊市杰諾生物酶有限公司)，沸水提取池一5400g離心 去渣一上清液真空濃縮(壓強(qiáng)0. OSMpa以下，溫度45°C 60°C，下同)至原有1/15體積一 加入95%乙醇至終濃度80%，醇沉他一沉淀加2000mL蒸餾水復(fù)溶一1萬截留分子量膜 (美國(guó)密里博Millipore公司，labscale TFF系統(tǒng)，PXBO10A50聚醚砜IOKD超濾膜包)超 濾24h—濾液真空濃縮(壓強(qiáng)0. 08Mpa以下，溫度45°C 60°C，下同)至30mL —冷凍干燥 —10. 2g樺褐孔菌水溶性α -糖苷酶抑制劑(多糖含量23. 2 % ) — α -葡萄糖苷酶半抑制 活性 IC50 = 6. 2μ g/mL。實(shí)施例2 樺褐孔菌子實(shí)體一粉碎過篩60目一稱取IOOg —加入3000mL水一超聲(20KHz， 360W)處理30分鐘一加入原料重量0.8mL的液態(tài)高溫α-淀粉酶QRU.mL—1)，沸水 提取池一3800g離心去渣一上清液真空濃縮至原有1/10體積一加入95%乙醇至終濃 度80 %，醇沉他一沉淀加1500mL蒸餾水復(fù)溶一1萬截留分子量膜超濾12h —濾液真 空濃縮至30mL —冷凍干燥一11. 3g樺褐孔菌水溶性α -葡萄糖苷酶抑制劑(多糖含量 21.6% ) - α-葡萄糖苷酶半抑制活性IC5tl = 7. 1 μ g/mL。實(shí)施例3 樺褐孔菌子實(shí)體一粉碎過篩100目一稱取IOOg —加入4000mL水一超聲(20KHz， 360W)處理40分鐘一加入ImL的液態(tài)高溫α -淀粉酶Q萬U. mL—1)，沸水提取4h — 5400g 離心去渣一上清液真空濃縮至原有1/10體積一加入95%乙醇至終濃度80%，醇沉他一沉 淀加3000mL蒸餾水復(fù)溶一1萬截留分子量膜超濾24h —濾液真空濃縮至40mL —冷凍干燥 —11. 6g樺褐孔菌水溶性α-葡萄糖苷酶抑制劑(多糖含量23. 4%) — α _葡萄糖苷酶半 抑制活性 IC5tl = 6. 5μ g/mL。實(shí)施例4 桑黃子實(shí)體一粉碎過篩80目一稱取IOOg —加入3000mL水一超聲QOKHz，360W) 處理30分鐘一加入ImL的液態(tài)高溫α -淀粉酶Q萬U. mL—1)，沸水提取3h — 5400g離心 去渣一上清液真空濃縮至原有1/15體積一加入95%乙醇至終濃度80%，醇沉他一沉淀 加2000mL蒸餾水復(fù)溶一1萬截留分子量膜超濾24h —濾液真空濃縮至30mL —冷凍干燥 —4. 6g桑黃水溶性α -葡萄糖苷酶抑制劑(多糖含量45. 3% ) — α -葡萄糖苷酶半抑制 活性 IC5tl= 14. 5 μ g/mL。實(shí)施例5:桑黃子實(shí)體一粉碎過篩60目一稱取IOOg —加入3000mL水一超聲(20KHz， 360W)處理30分鐘一加入原料重量0. 8mL的液態(tài)高溫α -淀粉酶Q萬U. mL—1)，沸水提取 3h — 3800g離心去渣一上清液真空濃縮至原有1/10體積一加入95%乙醇至終濃度80%， 醇沉他一沉淀加1500mL蒸餾水復(fù)溶一1萬截留分子量膜超濾1 —濾液真空濃縮至 30mL —冷凍干燥一4. 9g桑黃水溶性α -葡萄糖苷酶抑制劑(多糖含量43. 2% ) — α -葡萄糖苷酶半抑制活性IC5tl = 15. 3 μ g/mL。實(shí)施例6 桑黃子實(shí)體一粉碎過篩100目一稱取100g—加入4000mL水一超聲QOKHz，360W) 處理40分鐘一加入ImL的液態(tài)高溫α -淀粉酶Q萬U. mL—1)，沸水提取4h — 5400g離心 去渣一上清液真空濃縮至原有1/10體積一加入95%乙醇至終濃度80%，醇沉他一沉淀 加3000mL蒸餾水復(fù)溶一1萬截留分子量膜超濾24h —濾液真空濃縮至40mL —冷凍干燥 —5. Ig桑黃水溶性α -葡萄糖苷酶抑制劑(多糖含量46. 3% ) — α -葡萄糖苷酶半抑制 活性 IC5tl= 14. 8 μ g/mL。實(shí)施例7 實(shí)例1和實(shí)例4的兩種藥用真菌水溶性α -葡萄糖苷酶抑制劑各50 %質(zhì)量含量混 合，α -葡萄糖苷酶半抑制活性IC5tl = 8. 6 μ g/mL。實(shí)施例8 實(shí)例2和實(shí)例5的兩種藥用真菌水溶性α -葡萄糖苷酶抑制劑各50 %質(zhì)量含量混 合，α -葡萄糖苷酶半抑制活性IC5tl = 9. 4 μ g/mL。實(shí)施例9 實(shí)例3和實(shí)例6的兩種藥用真菌水溶性α -葡萄糖苷酶抑制劑各50 %質(zhì)量含量混 合，α -葡萄糖苷酶半抑制活性IC5tl = 8. 9 μ g/mL。實(shí)施例10 采用實(shí)施例1的制備方法，對(duì)一些食藥用菌子實(shí)體提取物的α-葡萄糖苷酶抑制 活性進(jìn)行了試驗(yàn)比對(duì)。抑制活性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
權(quán)利要求
1.一種水溶性α-葡萄糖苷酶抑制劑的提取方法，所述方法包括以真菌子實(shí)體為原 料，粉碎后加入質(zhì)量為所述子實(shí)體質(zhì)量20 40倍的水，超聲處理20 40分鐘后，按照 100 200U/g子實(shí)體添加量加入高溫α -淀粉酶，升溫至沸騰提取2 4小時(shí)，離心去渣、取 上清液濃縮至原有體積的1/10 1/15，加入乙醇至乙醇終濃度為70 80%，醇沉8 M 小時(shí)、取沉淀加入質(zhì)量為沉淀質(zhì)量100 200倍的蒸餾水復(fù)溶，然后以10000截留分子量的 膜超濾12 24小時(shí)、取濾液濃縮至原有體積的1/40 1/80，干燥，即得所述水溶性α -葡 萄糖苷酶抑制劑；所述子實(shí)體來自樺褐孔菌(Inonotus obliquus (Pers. :Fr. )Pilat)或桑 黃(Phellinus linteus)。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述真菌子實(shí)體粉碎至60 100目。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種水溶性α-葡萄糖苷酶抑制劑的提取方法藥用真菌子實(shí)體(樺褐孔菌，桑黃)→粉碎過篩60～100目→稱取一定量→加入20～40倍重量的水→超聲處理20～40分鐘→加入液態(tài)高溫淀粉酶，沸水提取2～4h→3800g以上離心去渣→上清液真空濃縮至原有體積的1/10～1/15→加入食用級(jí)乙醇至終濃度80％，醇沉8h以上→沉淀加蒸餾水復(fù)溶→1萬截留分子量膜超濾12～24h→濾液真空濃縮→冷凍干燥提取物(藥用真菌水溶性α-葡萄糖苷酶抑制劑)。采用本發(fā)明方法，可獲得具有較好活性的水溶性α-葡萄糖苷酶抑制劑，原料樺褐孔菌和桑黃是兩種已有較遠(yuǎn)應(yīng)用歷史的藥用真菌，毒副作用較少，而且本發(fā)明采用的工藝過程不涉及有毒有害步驟，安全性高，十分有利于后續(xù)醫(yī)藥保健食品的開發(fā)。
文檔編號(hào)A61K36/06GK102106875SQ201010574409
公開日2011年6月29日 申請(qǐng)日期2010年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月6日
發(fā)明者葉幫偉, 孫培龍, 季培軍, 楊開, 顧今 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)