專利名稱：一種黃芩中黃芩素與漢黃芩素同時(shí)定量測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種黃芩質(zhì)量控制方法，具體地，涉及一種黃芩中黃芩素與漢黃芩素 同時(shí)定量測(cè)定方法，屬中藥質(zhì)量控制領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
黃芩是一種常用中藥，為中國(guó)藥典歷版所收載品種，具清熱燥濕、瀉火解毒、止血 安胎之功效。用于濕溫，暑溫，胸悶嘔惡，濕熱痞滿，瀉痢，黃疸，肺熱，咳嗽，高熱，煩咳，血 熱吐衄，癰腫瘡毒，胎動(dòng)不安。黃芩中的有效成分主要有黃芩苷、漢黃芩苷及其苷元等黃酮 類化合物。其中黃芩苷含量最高，可達(dá)18%，中國(guó)藥典一部黃芩項(xiàng)下規(guī)定黃芩苷不得少于 9. 0%，所以不論是藥材還是制劑都是以黃芩苷為指標(biāo)進(jìn)行質(zhì)量控制。但近年來(lái)，有不少文 獻(xiàn)報(bào)道，黃芩中的苷元類，如黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A等具有非常強(qiáng)的抗菌、消炎、解 熱、鎮(zhèn)痛等生物活性，遠(yuǎn)較其苷類的生物活性強(qiáng)，在人體內(nèi)的吸收是苷類的數(shù)倍至數(shù)十倍， 且毒副作用更低。因?yàn)樵邳S芩藥材中苷元類含量低微，無(wú)直接提取價(jià)值，所以引發(fā)了不少酶 解或水解黃芩中的黃芩苷類來(lái)提取其苷元類的提取專利與文章問(wèn)世。但有關(guān)黃芩藥材中 具體含多少可水解黃芩素等苷元類，卻未查閱到一篇有關(guān)其含量測(cè)定的報(bào)道，黃芩藥材中 的黃芩素含量都是由黃芩苷的含量按分子量推算出來(lái)的，推算的理論值是否與真實(shí)含量一 致，是不得而知的。鑒于上述歷史背景情況，為給黃芩中黃芩素和漢黃芩素的充分提取、分離，提供真 實(shí)的基礎(chǔ)含量數(shù)據(jù)，探討簡(jiǎn)便、快捷的黃芩中黃芩素與漢黃芩素同時(shí)定量測(cè)定方法，成為當(dāng) 務(wù)之急。

發(fā)明內(nèi)容
經(jīng)多途徑多因素探討研究，發(fā)明人在適宜溫度下，利用黃芩本身所含的酶，在水溶 液中酶解黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素-7-0- β -吡喃葡萄糖苷、木蝴蝶苷B等化合物，酶解完 成后，加酸性甲醇?xì)琰S芩酶的同時(shí)保持黃芩素的穩(wěn)定性，并使酶解的黃芩苷元類充分溶 解，濾過(guò)，續(xù)濾液作為供試品溶液。以甲醇-0. 1 %磷酸溶液，體積比為51 M 49 46 為流動(dòng)相，275nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，同時(shí)測(cè)定黃芩中的黃芩素與漢黃芩素，方法簡(jiǎn)便、快捷、待測(cè) 成分酶解完全、波峰分離良好。首次為黃芩中黃芩素和漢黃芩素的充分提取、分離，提供了 真實(shí)的基礎(chǔ)含量數(shù)據(jù)。黃芩素的實(shí)測(cè)數(shù)值遠(yuǎn)大于以黃芩苷推算出的黃芩素理論含量數(shù)值。 以此，進(jìn)一步證實(shí)最終測(cè)定的黃芩素是由多種黃芩苷類酶解，以及原藥材中存在的微量游 離體相加而得到的總和，以單一的黃芩苷含量推算出的黃芩素理論含量?jī)H為實(shí)際含量的約 85%左右。通過(guò)方法學(xué)考察，黃芩素的進(jìn)樣量在0. 0992-1. 984 μ g/ml范圍內(nèi)呈良好線 性關(guān)系，見(jiàn)

圖1，回歸方程為Y = 5354. 6Χ-96. 788，r = 0. 99988 ；漢黃芩素進(jìn)樣量在 0. 037488-3. 124 μ g/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，見(jiàn)圖2，回歸方程為=Y = 5854. 6x_29，r = 0.99997。采用加樣回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明黃芩素的平均回收率為96. 45% (n = 9)，RSD為1. 34%，見(jiàn)表1 ；漢黃芩素的平均回收率為97. 86% (η = 9)，RSD為1. 89%，見(jiàn)表2。表1黃芩素回收率測(cè)定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種黃芩中黃芩素與漢黃芩素定量測(cè)定方法，其特征在于(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng) 相甲醇-0. 1 %磷酸溶液，體積比為51 M 49 46 ；檢測(cè)波長(zhǎng)275nm ；柱溫室溫；流 速1. Oml/min ；理論板數(shù)按黃芩素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。(2)對(duì)照品溶液的制備精密稱取黃芩素和漢黃芩素對(duì)照品適量于棕色量瓶中，分別 加甲醇制成每Iml含黃芩素30 35 μ g、漢黃芩素10 8 μ g的溶液，即得。(3)供試品溶液的制備取黃芩藥材中粉0.02g，精密稱定，置于50ml量瓶中，加入 35 55°C水5 8ml，并在相同溫度的水浴中酶解2 2. 5小時(shí)后，取出，加入體積比為 200 1的甲醇-鹽酸的混合液37 35ml，超聲處理20分鐘，取出，放冷，加體積比為 200 1的甲醇-鹽酸的混合液至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。(4)測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀， 測(cè)定，按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算黃芩中黃芩素與漢黃芩素含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于(1)色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇-0.磷酸 溶液，體積比為51 49;檢測(cè)波長(zhǎng)275nm;柱溫室溫；流速1. Oml/min;理論板數(shù)按黃 芩素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。(2)對(duì)照品溶液的制備精密稱取黃芩素和漢黃芩素對(duì)照品適量于棕色量瓶中，分別加 甲醇制成每Iml含黃芩素30 μ g、漢黃芩素8 μ g的溶液，即得。(3)供試品溶液的制備取黃芩藥材中粉0.02g，精密稱定，置于50ml量瓶中，加入35°C 水8ml，并在相同溫度的水浴中酶解2小時(shí)后，取出，加入體積比為200 1的甲醇-鹽酸的 混合液35ml，超聲處理20分鐘，取出，放冷，加體積比為200 1的甲醇-鹽酸的混合液至 刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。(4)測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各ΙΟμΙ，注入液相色譜儀，測(cè) 定黃芩素和漢黃芩素以及供試品溶液的峰面積，并計(jì)算含量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于(1)色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇-0.磷 酸溶液，體積比為52 48 ；檢測(cè)波長(zhǎng)275nm ；柱溫室溫；流速1. Oml/min ；理論板數(shù)按 黃芩素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。(2)對(duì)照品溶液的制備精密稱取黃芩素和漢黃芩素對(duì)照品適量于棕色量瓶中，分別加 甲醇制成每Iml含黃芩素33g、漢黃芩素9 μ g的溶液，即得。(3)供試品溶液的制備取黃芩藥材中粉0.02g，精密稱定，置于50ml量瓶中，加入45°C 水5ml，并在相同溫度的水浴中酶解2小時(shí)后，取出，加入體積比為200 1的甲醇-鹽酸的 混合液37ml，超聲處理20分鐘，取出，放冷，加體積比為200 1的甲醇-鹽酸的混合液至 刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。(4)測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各ΙΟμΙ，注入液相色譜儀，測(cè) 定黃芩素和漢黃芩素以及供試品溶液的峰面積，并計(jì)算含量。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于(1)色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇-0. 磷 酸溶液，體積比為53 47 ；檢測(cè)波長(zhǎng)275nm ；柱溫室溫；流速1. Oml/min ；理論板數(shù)按黃芩素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。(2)對(duì)照品溶液的制備精密稱取黃芩素和漢黃芩素對(duì)照品適量于棕色量瓶中，分別 加甲醇制成每Iml含黃芩素35 μ g、漢黃芩素10 μ g的溶液，即得。(3)供試品溶液的制備取黃芩藥材中粉0.02g，精密稱定，置于50ml量瓶中，加入50°C 水6ml，并在相同溫度的水浴中酶解2. 5小時(shí)后，取出，加入體積比為200 1的甲醇-鹽酸 的混合液36ml，超聲處理20分鐘，取出，放冷，加體積比為200 1的甲醇-鹽酸的混合液 至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。(4)測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測(cè) 定黃芩素和漢黃芩素以及供試品溶液的峰面積，并計(jì)算含量。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于(1)色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇-0.磷酸 溶液，體積比為M 46 ；檢測(cè)波長(zhǎng)275nm ；柱溫室溫；流速1. Oml/min ；理論板數(shù)按黃 芩素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。(2)對(duì)照品溶液的制備精密稱取黃芩素和漢黃芩素對(duì)照品適量于棕色量瓶中，分別加 甲醇制成每Iml含黃芩素30 μ g、漢黃芩素10 μ g的溶液，即得。(3)供試品溶液的制備取黃芩藥材中粉0.02g，精密稱定，置于50ml量瓶中，加入55°C 水7ml，并在相同溫度的水浴中酶解2.5小時(shí)后，取出，加入體積比為200 1的甲醇-鹽酸 的混合液36ml，超聲處理20分鐘，取出，放冷，加體積比為200 1的甲醇-鹽酸的混合液 至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。(4)測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各ΙΟμΙ，注入液相色譜儀，測(cè) 定黃芩素和漢黃芩素以及供試品溶液的峰面積，并計(jì)算含量。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于(1)色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇-0.磷 酸溶液，體積比為討46 ；檢測(cè)波長(zhǎng)275nm ；柱溫室溫；流速1. Oml/min ；理論板數(shù)按 黃芩素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。(2)對(duì)照品溶液的制備精密稱取黃芩素和漢黃芩素對(duì)照品適量于棕色量瓶中，分別 加甲醇制成每Iml含黃芩素35 μ g、漢黃芩素8 μ g的溶液，即得。(3)供試品溶液的制備取黃芩藥材中粉0.02g，精密稱定，置于50ml量瓶中，加入 40°C水8ml，并在相同溫度的水浴中酶解2. 5小時(shí)后，取出，加入體積比為200 1的甲 醇-鹽酸的混合液35ml，超聲處理20分鐘，取出，放冷，加體積比為200 1的甲醇-鹽酸 的混合液至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。(4)測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測(cè) 定黃芩素和漢黃芩素以及供試品溶液的峰面積，并計(jì)算含量。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6所述的測(cè)定方法，其特征在于供試品溶液的濾過(guò)系指先用快速定 量濾紙濾過(guò)，再用0. 45 μ m微孔濾膜濾過(guò)。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種黃芩中黃芩素與漢黃芩素同時(shí)定量測(cè)定方法。本發(fā)明測(cè)定方法在適宜溫度下，利用黃芩本身所含的酶，在水溶液中酶解黃芩苷、漢黃芩苷等苷類化合物，酶解完成后，加酸性甲醇，殺滅黃芩酶的同時(shí)保持黃芩素的穩(wěn)定性，并使酶解的黃芩苷元類充分溶解，濾過(guò)，續(xù)濾液作為樣品溶液。用HPLC法，以甲醇-0.1％磷酸溶液，體積比為51～54∶49～46為流動(dòng)相，275nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，同時(shí)測(cè)定黃芩中的黃芩素與漢黃芩素，方法簡(jiǎn)便、快捷、待測(cè)成分酶解完全、波峰分離良好。黃芩中黃芩素與漢黃芩素同時(shí)定量測(cè)定方法為首次報(bào)道，為該成分的充分提取、分離，提供了真實(shí)的基礎(chǔ)含量數(shù)據(jù)。黃芩素的含量實(shí)測(cè)值大于以黃芩苷和黃芩素分子量推算的理論值。
文檔編號(hào)A61K36/539GK102128889SQ201010588509
公開(kāi)日2011年7月20日 申請(qǐng)日期2010年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月15日
發(fā)明者李曉燕, 趙韶華, 韓桂茹 申請(qǐng)人:李曉燕